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VALIDATION PAR HPLC DE METHODES DE PRELEVEMENT ETD’ANALYSE POUR LA RECHERCHE DE TRACES DE PRINCIPE ACTIF

DANS LE CADRE DE LA VALIDATION DE NETTOYAGE

Jérôme Gout Laboratoire Contrôle Qualité

Maître de stage : Gladys Dubois

Soutenance de stage Master Spécialité ACQ, 3 Juillet 2014

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1 – Présentation du Laboratoire Bailly-Creat2 – Principe de la validation des procédures de

nettoyage 3 – Démarche à suivre dans le cadre de la validation

de nettoyage 4 – Validation de la méthode de prélèvement et de la

méthode d’analyse appliquée dans le cas du méthyldopa

5 – Conclusions, Perspectives

SOMMAIRE

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Présentation du Laboratoire Bailly-Creat

• Fabrication de génériques sous forme sèche : comprimés, comprimés pelliculés et gélules (BPF)

Revendeurs locaux dans 30 pays d’Europe de l’Est, d’Asie et d’Afrique, ONG

Laboratoires pharmaceutiques dans le cadre du façonnage

• 80 personnes (40 production, 9 Laboratoire CQ, 7 Assurance Qualité )

Antiparasitaire, antifongique, antihypertenseur, antalgique

• Clients

Site Bailly-Creat de Vernouillet

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Principe de la validation des procédures de nettoyage

• Etape importante de la démarche qualité d’une entreprise pharmaceutique

• Nettoyage des équipements de fabrication multi-produits Eviter les risques de contamination

• Procédures documentées et validées Méthode de prélèvementMéthode d’analyses

Contamination résiduelle

Constatation visuelle de l’absence de résidus Contamination résiduelle ≤ norme fixée

Procédure de nettoyage validée

3 sessions

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Démarche à suivre dans le cadre de la validation de nettoyage

• Détermination du produit « Worst-Case » pour chaque équipement multi-produits

Méthode de groupages

• Groupage des équipements selon leur identicité : mêmes caractéristiques, même matériau

Toxicité Dose Journalière MaximaleSolubilité

• Utilisation d’une matrice : différents produits fabriqués / différents équipements

Conditions les plus défavorables

• Réduction du nombre de validation sur les produits et équipements

Les produits et les équipements doivent être concernés par la même procédure de nettoyage

•Groupage produit

Worst-Case = Produit B

Equipements 3 et 4 identiques

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Détermination du critère d’acceptation =

Démarche à suivre dans le cadre de la validation de nettoyage

contamination maximale résiduelle acceptable• Critère du millième• Critère des 10 ppm

Choix des méthodes de prélèvement• Prélèvement direct • Prélèvement indirect

• Points présentant un risque de contamination croisée

Points de prélèvements

• Surfaces en contact direct avec le produit

critère d’acceptation = valeur la plus basse obtenue

Choix de la méthode analytique

• Coût, durée, sensibilité • Mode de détection, gamme d’utilisation, produit à analyser

Validation de méthodes

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Validation de la méthode d’analyse

Conditions de la méthode des substances apparentées : Analyse de faible teneur de PA et de ses impuretés• Chaîne HPLC Hitachi ELITE LaChrom• Phase mobile : Tampon pH 3 85V / MeOH 15V • Colonne : Hypersil ODS C18, 25 cm, Particules 5 μm, DI = 4.6 mm• Détection UV : 280 nm ; Volume d’injection : 20 μL • Débit : 1 ml ; Température du four : 20°C • Temps d’analyse : 8 min (Témoins) et 30 min (Prélèvement)

résultats suffisamment fiables et reproductibles

Cas du méthyldopa : traitement de l’hypertension artérielle

• Aucune méthode analytique validée / validation de nettoyage• Très difficile à nettoyer• Critère d’acceptation = 11.43 µg/ml

Démarche à suivre dans le cadre de la validation de nettoyage

HO

CO 2H

OH

NH2

Critères de validation choisis • Spécificité

• Linéarité• Limite de détection (LD)• Limite de quantification (LQ)

Recommandations ICH et SFSTP

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• Spécificité : Aucune interférence du matériel du prélèvement avec le méthyldopa

M inutes0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30

mAU

-0.8

-0.6

-0.4

-0.2

0.0

0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

1.2

1.4

mAU

-0.8

-0.6

-0.4

-0.2

0.0

0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

1.2

1.4

Méthyldo

pa

1: 280 nm , 4 nmTém oin T3

Nam e

1: 280 nm , 4 nmBlanc Inox 2 ec

1: 280 nm , 4 nm2E I M3-6

•Linéarité : 3 gammes de 5 niveaux encadrant le critère d’acceptation (= 11.43 µg/ml) / 3 jours

•LD & LQ : Approche graphique

LD = 0.012 µg/mlLQ = 0.039 µg/ml

Validation de la méthode d’analyse

0

200000

400000

600000

800000

1000000

1200000

0 5 10 15 20Concentration en m éthyldopa (µg/m l)

Surfa

ce

y = 60197x + 6211, r2 = 0.9995

≥ 0.99

diluant solution standard prélèvements de PA sur inox/Téflon® blancs 1 & 2 écouvillons seuls solution placebo

Tests statistiques (SFSTP 1992) : Conformes

Linéaire de 5.7 µg/ml à 17.1µg/ml ≤ 11.43 µg/ml

SB = 2 x H

hmoy

S/B = 3 LDS/B = 10 LQ

Pics provenant des écouvillons

Pic du méthyldopa

M inutes2.0 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 3.2 3.4 3.6 3.8 4.0 4.2 4.4 4.6 4.8 5.0 5.2 5.4 5.6

mAU

-0.8

-0.6

-0.4

-0.2

0.0

0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

1.2

1.4

1.6

1.8

2.0

mAU

-0.8

-0.6

-0.4

-0.2

0.0

0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

1.2

1.4

1.6

1.8

2.0

Méthyldo

pa

1: 280 nm , 4 nmTém oin T3

Nam e

1: 280 nm , 4 nmBlanc Inox 2 ec

1: 280 nm , 4 nm2E I M3-6 Solution standard

Prélèvement inox / 2 ecBlanc inox / 2 ec

pic à 2.7 min

pic à 2.7 min

Aucun pic interférent au tr du méthyldopa

M inutes3.60 3.65 3.70 3.75 3.80 3.85 3.90 3.95 4.00 4.05 4.10 4.15 4.20 4.25

mAU

-0.01

0.00

0.01

0.02

0.03

0.04

0.05

0.06

0.07

0.08

0.09

0.10

mAU

-0.01

0.00

0.01

0.02

0.03

0.04

0.05

0.06

0.07

0.08

0.09

0.101: 280 nm , 4 nmDilution LD 2

1: 280 nm , 4 nmLQ T1-1 de 6

HLQ

HLD h

9

Essais 3 fois / 3 niveaux de concentration sur plaques d’inox et de Téflon®

Validation de la méthode de prélèvement

Prélèvement direct : 1 ou 2 écouvillonsEquipement de production : inox et Téflon®

• Etude des taux de recouvrement

R(%) =Quantité de résidu déposée

Quantité de résidu retrouvée après échantillonnage x 100 Mode prélèvementMatériau

CV ≤ 10 %

R ≥ 70 %

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Conclusion

Méthode analytique : HPLC / UV méthode des substances apparentées de la MP méthyldopa

Méthode de prélèvement : Ecouvillons imprégnés de HCl 0.01 M

• Spécifique quelque soit le nombre d’écouvillons, la surface utilisée

• LD = 0.012 µg/ml LQ = 0.036 µg/ml < 11.43 µg/ml

• Linéaire sur l’intervalle 5.7 - 17.1 µg/ml

• Validée pour échantillonner des surfaces de Téflon® avec 1 et 2 écouvillons

Phénomène de corrosion à la surface des plaques d’inox

• Non Validée pour échantillonner des surfaces d’inox avec 1 et 2 écouvillons

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Perspectives

• Rédaction d’un protocole d’analyse pour valider les procédures de nettoyage

Laboratoire CQ Développement et Validation de méthodes analytiques

• Rédaction d’une procédure permettant la validation de méthodes d’analyse

• Validation de l’étude des taux de recouvrement sur l’inox

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Remerciements

L’équipe

Le personnel de Bailly-Creat

• Gladys Dubois, responsable CQ•Dominique, Ewelina, Lydia, Nathalie, Sabrina, Sandrine, Abdel, Antoine et Vincent