8
Seed treatment with b-aminobutyric acid protects Pennisetum glaucum systemically from Sclerospora graminicola S Shailasree, BR Sarosh, NS Vasanthi and HS Shetty* Downy Mildew Research Laboratory, Department of Studies in Applied Botany, Seed Pathology and Biotechnology, University of Mysore, Manasagangotri, Mysore-570 006, Karnataka, India Abstract: b-Aminobutyric acid BABA) treatment of pearl millet [Pennisetum glaucum L) R Br] seeds in¯uenced seedling vigour and protected the seedlings from downy mildew disease caused by the oomycetous biotropic fungus Sclerospora graminicola Sacc) Schroet. Of the different concentrations of BABA tested, viz 25, 50, 75 and 100 mM, seeds treated with 50 mM for 6 h resulted in the maximum of 1428 seedling vigour and showed 23% disease incidence in comparison with the control which recorded a seedling vigour of 1260 and 98% disease incidence ie 75% protection from disease. Seeds treated with BABA when challenged for downy mildew disease using zoospores of S graminicola required 48 h after inducer treatment to develop maximum resistance. Durability of induced resistance was also tested in plants raised from seeds treated with the inducer and identi®ed as resistant, by second challenge inoculation with the downy mildew pathogen at tillers and in¯orescence axes. Reduced disease incidence of only 10 and 12% in these plants, compared with 71 and 76% disease in control plants inoculated at the tillers and in¯orescence axes, respectively, suggested that resistance induced in seeds with BABA remained operative through vegetative and reproductive growth of pearl millet plants. Induction of resistance by seed treatment with BABA enhanced vegetative growth, viz height, fresh weight, leaf area and tillering, and reproductive growth, viz early ¯owering, number of productive ear heads and 1000 seed weight. Studies on induction of resistance in different cultivars of pearl millet with varying resistance reaction to downy mildew indicated that the protection offered by BABA is independent of the nature of cultivars used and not dependent on their constitutive resistance. # 2001 Society of Chemical Industry Keywords: DL-b-aminobutyric acid; induced systemic resistance ISR); seed treatment; pearl millet; Sclerospora graminicola; enhanced growth 1 INTRODUCTION Induced systemic resistance ISR) is the phenomenon by which a plant, without changing its basic genetic constitution, utilizes its own defence mechanism to restrict pathogen development. In recent years, there have been a number of reports on systemic protection of various plant species against bacteria, fungi, viruses and nematodes using biotic and abiotic agents. 1±3 Studies from this department have demonstrated the operation of ISR in pearl millet [Pennisetum glaucum L) R Br] against downy mildew disease caused by the biotropic, oomycetous, obligate patho- gen Sclerospora graminicola Sacc) Schroet by root-dip inoculation of 2-day-old seedlings using a sub-lethal concentration of the downy mildew pathogen. 4,5 Since seedling treatment with sub-lethal concentrations of the pathogen as the inducer is very laborious and not practicable under ®eld conditions, due to a possibility of disease epidemic under favourable environmental conditions, other ways of plant protection have to be found. In several crop plants, induction of resistance by chemical inducers such as salicylic acid SA), 6±8 2,6- dichloroisonicotinic acid INA), 9,10 jasmonic acid 11 and benzothiadiazole BTH) derivatives 12 has been reported. Recently, DL-b-aminobutyric acid BABA), a rare non-protein amino acid identi®ed in the root exudes of tomato plants, 13 has been reported to protect many crop plants, such as tobacco against Peronospora tabacina Adam, 14 cotton against Vertici- lium, 15 tomato against Phytopthora infestans Mont) de Bary and root-knot nematode, 13,16 and pepper against Phytopthora capsici Leonian). 17,18 Pearl millet is an important crop of the semi-arid tropics, since it serves as a staple food for the poorer sections of Asia and Africa. The yield of this crop is affected by the downy (Received 27 March 2001; accepted 17 April 2001) * Correspondence to: HS Shetty, Downy Mildew Research Laboratory, Department of Studies in Applied Botany, Seed Pathology and Biotechnology, University of Mysore, Manasagangotri, Mysore-570 006, Karnataka, India E-mail: [email protected] Contract/grant sponsor: Enhancement of Research Capacity Programme of the Danish International Development Agency (DANIDA ENRECA) Contract/grant sponsor: Indian Council of Agricultural Research, New Delhi, India # 2001 Society of Chemical Industry. Pest Manag Sci 1526±498X/2001/$30.00 721 Pest Management Science Pest Manag Sci 57:721±728 2001) DOI: 10.1002/ps.346

Seed treatment with ?-aminobutyric acid protectsPennisetum glaucum systemically fromSclerospora graminicola

Embed Size (px)

Citation preview

���� � ��� � ���� �� ���� � ��� ')>8("#8(. �(11"��?�> "1!"11(<��!$)-

Seed treatment with �-aminobutyric acidprotects ���������� ����� systemically from ��������� ���������S Shailasree, BR Sarosh, NS Vasanthi and HS Shetty�Downy Mildew Research Laboratory, Department of Studies in Applied Botany, Seed Pathology and Biotechnology, University of Mysore,Manasagangotri, Mysore-570 006, Karnataka, India

(Rec

� CoBioteE-maContENRCont

� (

��������� ���� ������� ���� ������ �������� � ����� ����� ����������� ����� ��� � ���

����� ��������� �������� ��� �� ��� �� ������ ��� ��������� �� � ������ ������� ������ �� ���

���� �� �� �� ��� ������ ��������� ��������� �!���� !��� ��" #� ��� ��������� � ��������� ��

� ���� ������$ ��% &'$ '($ )' ��� *((+$ ����� ������� ��� '(+ � � ,� �������� �� ��� �-�� �

*.&/ �������� ��� �� ��� �� �� &01 ������� ��������� �� � ����� � ��� ��� � ��� � ���� ��� ����

� �������� ��� �� � *&,( ��� 2/1 ������� ��������� �� )'1 �� ����� � �� �������" !���� ������� ���

���� ��� ���������� � � � �� ���� ������� ����� % �� ��� � ��������� ��3����� ./� �����

������� �������� � ����� � �-�� ����������" 4��������� � ������� ���������� �� ��� ������ ��

������ ������ �� ����� ������� ��� ��� ������� ��� ������5�� �� ���������$ �� ��� �� ���������

�� ������ � ��� ��� � �� ���� ���� ��� �� ������� ��� ��� �������� �-��" ������� �������

��������� � ��� *( ��� *&1 �� ����� ������$ � ����� ��� )* ��� ),1 ������� �� � ��� � ������

�� ������� �� ��� ������� ��� ��� �������� �-��$ ������������$ ��������� ���� ���������� ������� �� �����

��� ���� ������� �������� ��� ��� ���������� ��� ���� ������� �� �� � ����� ����� ������"

6������ � � ���������� �� ���� �������� ��� ���� �������� ���������� �� ��$ ��% ������$ �����

�����$ ���� ���� ��� ���������$ ��� ���� ������� �� ��$ ��% ����� � �����$ ����� � �� ������� ���

����� ��� *((( ���� �����" !������ � ������� � � ���������� �� ��������� ��������� � ����� ����� ���

������� ���������� ������ � � � �� ���� ��������� ���� ��� �� ����� � ������ �� ���� ��

����������� � ��� ������ � ��������� ���� ��� � � ��������� � ����� � ���������� ����������"

� &((* ! ����� � 7������ 6�������

8�� ���� ������������ �� ����� ������ �������� ��������� ������ ���� � �������� ��� � ������� ������������� ����� �������� � ����

1 INTRODUCTION������ �������� ��������� ����� �� ��� ����������

� ����� � ������ ������ �������� ��� ���� �������

������������ ������� ��� ��� ������� ��������� ��

��� ��� �������� �� ��������! �� ����� ��� �� ��� �

�� � ��� � ��� �� ��� �� �� �������� � ��������

�� � ��� ����� ������� ������� ���� ��� ����� � ���

��� ��������� ���� ����� ��� ������ ������!"#$

������ � �� ���� ���� ����� �� � ������� ����

��� ��� ����� �� ��� �� ��� � ������ %�� ����������� ��� � & ' ������� ����� ������ �������

����� � ��� ��� ����� ���������� ������� ������

��� ���������� ��� ���� ������ ��� ��� � �������

���������� �� (�������� ��������� ���� � ��������

������� ����� �� ��� ����� ������ ��������!)�* �����

�������� � ������� ���� �������� ������� ������ ��

��� �������� �� ��� ����� �� � � ��� ��� ��� ���

� �������� ��� +��� ����������� �� �� � ����������

eived 27 March 2001; accepted 17 April 2001�

rrespondence to: HS Shetty, Downy Mildew Research Laboratory,chnology, University of Mysore, Manasagangotri, Mysore-570 006, Kil: [email protected]/grant sponsor: Enhancement of Research Capacity ProgramECA)ract/grant sponsor: Indian Council of Agricultural Research, New Delh

11" ������� �� :������� ����� �! ���� � ��� "*(-#)0.;<(

�� ������� �������� ��� �� � ��� �� � ��������

����������� ���� ���� �� ����� � �������� �� � �� �

����!

�� �� � �� � �� ������� �������� �� ��������� �

�������� ����� � ��� �� ��������� ���� ��,��-#. (�-�

������ ������������� ���� ��/,��0�"1 2������� ����""

��� ��������������� �&34� �� � ��� ��"( ��� ���

��� ���! ��������� ������������ �� ���� �&,&,��

� � � ����� ����� ����� ���� ������+�� �� ��� ���

�5��� �� ������ �������"$ ��� ��� ��� ��� ��

� ����� ���� � �� ������� ��� �� ������ �������

���� ����� ���� ,����") ������ ������� �������������"* ������ ������� ���������� � ���� � �6���� ��

&� � ��� ����7��� ���������"$�"- ��� ����� �������

���������� ������ ���������!"8�". 9�� � ������ �� ��

���� ���� � �� �� ��� ������ �� � ������ ����� �� �� ��

�� � ������ ���� �� ��� ��� � �������� �� ,��� ���

,� ���! 3�� ����� �� ���� � �� �� �������� � ��� �����

Department of Studies in Applied Botany, Seed Pathology andarnataka, India

me of the Danish International Development Agency (DANIDA

i, India

11"<=$1!11 8("

� �������� �� ��

������ �������� � ��� ����! �� ���� ����� &,&,

��� ������+�� �� �� ������� �� ��� �� ��� � ������

������� ����� ������ �������!

2 MATERIALS AND METHODS2.1 Pathogen and host, � ���� ��������� �� ����� ������ �������� ���� ���� �������� � �� ��� � ������ � 4& $ ���

���������� �� ��� ���� ���� � ��� � �������

���������� ��� ��� �� ��� ���������� �5�� ������!

3�� ��������� ��� � ������ ���� � � �� � ��� �� ���

����> .)$ & �)1#*1@�� *")" & �-1#81@�� A "1)��

�81#.1@�� ($ �( & �.1@� ���4&$ �.*#0*@�! 3����

���� � � ������ � ���� ��� ��� �� ������� �������

��� ���������� ���� ��� ����� ������ ��������� ��

��������� �� �� ��������!

2.2 Collection of sporangia and preparation ofinoculum��� �� �� �������� ������ �� ��� � ������ �������

�������� �� ����� ������ �� � ��������� �� ���

� ������ ������ �� ����� ��� ���� �� ��� � ���

������� �� � � ��� ��� ������� ������ � � ���

������ �� � ����� ����� �� ��� ������! B ���

��� ����� �� � ��������� ��� ��5� �� ���� ���

������ �� ������� � ���� ��� �� ������!"0

2.3 Preparation of inducer for seed treatment&,&, ������ :������� :�� �� ����� C�,� ���

������ �� �� ��������� ���� �� �� � ����� ��� ������� ��

������ �� (*� *1� 8* ��� "11�6! ����� �� ��� � ������

� 4& $ �� � � ����� ���� ����� ������� ������ ��

&,&, �� (-��(�°: ���� ��� ��� �� $� � -�!

�������������� �� ����� ����� �� �� �� ���� ��!

2.4 Seedling vigour analysis,��� � ������� ���� &,&, �� � ���� ���� ���� ����

��� ����� �� � ������ �� ����� �� �������� ���� ���

���������� �� (-��(�°:! ����� � ����� ���� ��� ���

��������� ���� �� ��� ���� ������ �� ���� �� �� ��

���� ��! ,��� 8 ����� ��� �� �������� �� �������� ���

��� ����� ������� �� � ��� ��� ��� ��� ��� ����5

��� ���������!(1 B� ���� �� "11 ��������� �� �

���������� �� ��� � ��������!

2.5 Challenge inoculation with ���������

���������

3���������� ��������� ����� � �� &,&, ��� ����

����������� �� ����� ����� �� � ��������� ���� )�"1)

������ �� ���" �� � ��� ���� � ��� �������

������D�!"0 ,��� ()�� ��� ��������� �� � � ����

������� �� �� ���� ���� ��� ���������� ��� � ����

���� ����������!

2.6 Assessment of disease9����� �� � ��� �� ����� ��� � �� ������ �� �������

��� ��� ���! ��������� �� � ���� �������� ���� ����

��� ��� ��� �� ��� ������� �������� �� ������������

�� ���� ����� �������� ��� ������ � E� ��� �� F! ,� ���

8((

��� �� -1 ����� ������� ��������� ��� ��� ��� �� ���

�� ������� �� ������ ������� �������� �� �����

������ �������!

2.7 �� ���� quantification of ������������������

:������ ������ �� � ��� ���� �� ��� � ������ �����

��� D����+�� ���� ��������� ����� ������� ���� ���� � G���,!(" , ���� ��� ��� �� ��� � ������

� 4&$ ������ ��������� �� ��� ��� � ������� ����������

���� ��� �� � ��� ���������� �� ������ ��� � ����������� ����� �� � ��� ����! ,���� ��� �� ��� ��

�� -1 ���� �� � ����! 3�� ������ �� � ��� �� ����

�����! ?�� � �� �� ��� ����� �� � ������ ��� � ��� ��

��������� ��� ������ %9&�� ����� ����������

�1!"6� �4 8!(�� ����� ���� ��� �.!*� ��� ��"��

8!*��' ��� ���� ����� �� "1111 � ����"! 3�� ����

��� ������ ��� ��2���� �� �� ��� ���� �� 1!$?�

���� �� (.1��! ?�� ��� �� ��� ���� �� �� ����

������� �� � ��� �� ���� ��� ���� ���� ��� ����� �

����� ��� � ��� �� $8°: �� ()� �� ��� ������� �� ���

�� ��� �����! ,��� ������� ��� ����� ���� 9&��

� ������ ����� �� � ���7�� ���� � ��� �� �

����� �&�,� )1� ��� ��"�! 3�� ������� ���� ���

������� ����� ��� "11�� �� ������ � ������ �� 9&�

�">*1111� ��� ����� �� ���� ���� ���� ��� �������

�� (� �� $8°:! 3�� ����� �� � ������ ��� �����

���� 9&� ��� "11�� �� ���������2����� ����� ���

���� ��H �� ������� �� 9&�� ">"1111� ��� ������� ��

���� ����! B�������� �������� �� $8°: �� (�� ���

��� ������� ��� �������� ���� � ���� �� �5�����

���2���� �� ������� �� 9&� ">"11�! B� ��� ������

�������� ��� ���� �� �5��� �1!1*� ��� ��"� ��� ��

��������� ������� �1!)� ��� ��"� �� 9&� �� � ��� ��

��� ����! 3�� ������� ��� ������� ���� $1��� ����

��� �� ���� �"6� ��� ��� ���� �� ������ ��� ���

�� )01�� ���� � �������� G���, ���� ! ,������

� ����� ���� � ������� �� � �� ����� ���������� ���

��������� �5���� ��� ������� �� �� �� ���� ��! 3��

������� ����� �� � ��� ���� �� ��� ������� ���

���� ����� � �� G���, ���� ���� ��� ������ �

� ���!("

2.8 Observation of growth parameters3�� ������ �� ���� � ������� ���� &,&, �� ��� � ����

�� ����� � �� ��� � ������ ������ �� � ������ ��

�������! ��������� ����� � �� ����� � ����� ����

&,&, �*1�6� �� -� �� � � ���������� ���� �� ����

���� ��� ���������� ��� � ������� ����������!

I������� � � ���� �� ����� � ��� �� ������� � ���

������� � � ������� ���� � �� ��� ��� �� ���� ����� �

�� � �������� ���� $1 ���� �� � ���� �� ����� ���� ��

� ���� �� ����� ��������� �� ������ ����� � �� �����

� ����� ���� ��� ��� ��������� ���� �� ��� ����

� ����� �� ����! 3�� � ��� ������� �� ������ �����

� �� ����� � ����� ���� &,&, ��� ��� ��� ���������

���� �� � ���� ����� � �������� ��� ���� ����

������ ����������� ���� �� ������! � � ������ ���

��������� ���� � ���� ��� ������ �� � �������� ������

�� �� � �� �� -*°:! ���� � �� ��� ���� ����� ���� ��

���� � ��� ���8("#8(. �(11"�

������� � ���� ������ � #��� ���� �������� ���

�������� ���� ������� ����� � ("11�! 3�� ��� ��

����� � � ����� �� ��� ��� �� ��� ���� �5�� ��� �����

����� ��� ���� �����! ��� ����� � � ���� �� �����

������ ��� � ������ � ���� ������ �"� ��� ������ ��

��� ����� � ��� J��� ���� �(� ����� ��� ��

� ����� � ����� �� �$� ��� �� � ����� � �� �����

�� ���� �)� ������ ��� �� �� �� ��� �� ���� ��� �*�

"111 ���� ������! 3�������� "11 ������ � �� ��

����� ��� ������ �� � ��� �� ���� �5�� �����!

2.9 Demonstration of systemic nature of inducedresistance and its durability����� �� ������� �� �������� ���� �� � ����������� �� � �� ���� ��� �� ������ ���� � �������!����� ��� ������ �� �� ������ ��3�� ���� �� �5�� ������ �� � ��������>

�� ��� + �� ���� ����� � ������� ��� �� �� � ����

� ������� ��� ��������� ���������� ���� � ��� ����� ��� ������� ������! 9�� � ������ ����� �� ���� �

4& $ �� � �� �� ����� � ������� ���� &,&,

�*1�6 �� -�� ��� �� ������� �� � ����� ����� !

�������������� �� ����� ����� �� �� �� ���� ��! 3��

���� �� ����� ��������� �� � �� �� ��������� �������

����� ���� )�"1) ������ �� ���" �� � ��� ���� ��

����� ��� ���� ���� ���� ��� "� (� $ ��� ) ����� ��

����� ��� ���� �� ������! 3�� ��������� � ���������� ����

�� ���� ���� �� � ���������� ��� � �������

���������� ��� ��� �� �� ������� �5� ������! 3��

�� ������� � �������� ���� �� � &,&, � � �� ��

������ ���� �� ��� ��� ��� �� ��� ��� �� ���

�5�� ������� �� ��� �� -1 ����!

�� ��� ������ ���� ����� �� ��� � ������ ���� � 4& $

�� � �� ������� �� $-� �� ��� ����� ����� ! ?���

��� ��� ����� ��� �� �� ����� � ������� �*1�6

&,&, �� -��! 3���� ��������� �� � � ���������� ����

���� ��� ���������� ��� � ������� ����������!

�������� �� �� ����� ��������� �� � ��������� �����

����� ���� )�"1) ������ �� ���"!(( 3��� ���� �� "� (�

$� ) ��� * ���� �� � ���������� ������ �����

� ������� ��� ��������� ����������! ��������� �� �

��� �� ����� �� ��� �������� �� ����� ������

�������! 3�� � �������� ���� �� � &,&, � �������

Table 1. Effect of seed treatment withdifferent concentrations of �-aminobutyric acid (BABA) on seedlingvigour of pearl millet cv HB 3a,b

������������

� ����

���

������

������

��

������� ��������

��

��

��

���

������ � ��� �� ���� ��� !� $�� �� ��� !�� �� �%� �� �

� ����� ����� �� �� ()�* ����#�

���� � ��� ���8("#8(. �(11"�

� � �� ������� ���� �� ��� ��� ��� �� ��� ��� ��

��� �5�� ������� �� ��� �� -1 ����!

����� "��� ��� ���������9����� ����� � �� ����� � ����� ���� ��� ����� ����

������ ��������� �� + ������������ ���������� �� �

������ �� ���+ � ����������� ��� � ������ �� ������

��������� � ���������������� ���������� �� ����� �

��� ��J� ������� �5�� �� �������>

�������� �� �� ��� ���� ����� � �� ��� ���� ��

��� ����� �(* �� $*�������� ������� ��� ��J� �������

�5�� �$1 �� $-�������� ������� �� ��� ���� ����� �� ���

������ ����� � �� ����� �� ����� ����� �� � �������

��������� ��������� ���� � ��������� ����������

)�"1) ������ �� ���" �� � ��� ����! :��� ��

��������� �� ��� � ������ ������ �� ��� ���� ��� ����

�� � ����� � �� ����� � ����� ���� ��������� ���� ���

�� �� ������ ����������� �� ��� ���� ������! 3�� ������

�� � ���������� ��� � ������� ���������� ���

������� ��������� ��� ��� ��� �� ���� ���� ���!

9� ������� � �������� ��� ��������� �� ��� -1�� ���

�� ����� � ����!

2.10 Statistical procedures,�� ��� �5�� ������� ����� �� � �2����� �� ���

���F� ������� ���� ���� ��6�3�! ���� �� �� ����

����� �� � � ����� ��� �� � ����� ��� �������� ��

� ����� �,/?I,� ��� �� ��� �� ���� � ����� ���

����! 3�� ����� �� � ����� �� �� �����+�����

���� �6�3 ���1!1*�!

3 RESULTS3.1 Effect of seed treatment with BABA on pearlmillet seedling vigour����� �� � � ����� ���� ����� ��� ������� ������� ��

(*� *1� 8* ��� "11�6 �� &,&, �� $ ��� -� ���

�������� �� ��� ����5! �������������� �� �����

����� �� �� �� ���� ��! 3 ������� ���� ������� ��

����� �� (* � *1�6 &,&, �� � ������ �� $ � -� ���

��� ������ ��� �� �������� �� ������� �H@� ���

�������� ��� ����� � �� ��� ���� ��! 6�5���

� �

��� ���������

��

����� ����

���� ���� ����������� ����� ��������� ���������

�� �� ����

�� �� ���� �

�� �� ����

�� � ���� �

�� �� ���� �

�� � ���� �

�� � ���� �

� ��� �

�� � ��� �

�� � �� �

��� " �� ��� ��� ��� �� ���!�� �� ��� !��#

�& !�� � �� �! ����!� �����"� �% �� �! ���� � ��� � �� '����%

��#

8($

Table 3. Effect of seed treatment of pearl millet cultivars with �-aminobutyricacid on downy mildew disease incidence (DMDI) due to challenge inoculationwith Sclerospora graminicola and protection offered

����&�� '�������� ���� &� �� ��������� &� ��

./ ( �� ��� "�� ��� +

/0/0� ��� ��#���

�� / ( �� ��� "�� ��� +

/0/0� �� ��#� �

���� / ( �� ��� "�� ��� +

/0/0� ��� ��# �

� (� / ( �� ��� "�� �� +

/0/0� ��� ��#� �

1 ���23 ( �� ��� "�� ��� +

/0/0� � ��#� �

������ "� �,� �� �%� ��� ������ ������ �� " �� �����

-������� !��� �� % ���������#� )�� � �� �! ����!� �����"� �% �� �! ���� � ��� � �� '����%

� ����� ����#��� ����� �� �� ��%� � �� 4� ��#� �� !) /0/0 ��� ��#

� �������� �� ��

�������� ��� �� ")(. ��� ��� �� �� ����� � �����

���� *1�6 &,&, �� -�� ������� �������� � ��������

��� �� ")"- ��� �� �� ����� � ����� ���� (*�6

&,&, �� -� ����� �� ���� � �������� ��� �� "(-1

�� ��� ���� �� �3��� "�! 4��� � � ����� ������� ��

����� �� 8* ��� "11�6 &,&, � ������� �� $ � -�

����� ��� �� �������� �� ������� ��� ��������

��� �����+������ ���� ���� ���� ���� ������� ��

����� ��� ��� ���� ��!

3.2 Effect of seed treatment with BABA on downymildew disease incidence����� ��� ������� ������ �� &,&,� �� (*� *1� 8* ���

"11�6 ������� �� ����� �� -� ������ � ��� �� ���

�� ����� ������ � ��������� �� ������+�� � �������

��������� �� ������ ��������� ���� � ��� ����!��������� ����� � �� ����� � ����� ���� ��������� ����

�5������ 0.@ ������� ���������! , ������� ����� ��

*1�6 &,&, ������� �� ���� � ������� �� � ���

� ������ ������� �� ����� ������ ������� ����������

�� ($@ �3��� (�� �� � � �������� �� 8*@! &,&, ��

(*�6 ������� ����� ������ �� 8"@ ������� �����

����� ��� � � �������� �� ���� (8@! ����� *1�6 ���

��� ����� ������� ����� �� &,&, ���� ������ ��5��

�� ��������� ��� ���������� ���� ���� ����

������� ����� ��� ��� �� ��� � ��� �5�� ������!

K����+������ �� � ��� ���� �� ��� � ������ ������

���� G���, ��������� �����+���� ������� �� �����

������ �� ������ � ������� � &,&, �� ����� ����

���� ���� �� ������! , ��5��� ������� ����� �� ���� ���� ������ �� "-!0.�� ��" � ��� ������ ���

���� ����� �� ���� �� ������ �3��� (�! �������� ����

(*�6 &,&, ����� ��� ������ �� 0!.-�� ��" � ���

������� ����� � �������� ���� *1� 8* ��� "11�6

&,&, ������ "!-*� "!8( ��� "!8)�� ��" � ��� ������

�� � ��� ����� ������� ���! �������������� ��� �����

�� � �����+���� ��� ��� ��� �� �5�� ������ ���

��������� �����+�� ��� �� ���������!

3.3 Studies on induction of resistance in pearlmillet cultivars����� ��� ��� � ������ ���� � �� �� 4& $� .)$ &� *")"

&� ($ �( & ��� A "1)�� ���� � ���� ��� ��� ��

������������ �� � ��� ���� �� � ��� �� ���� ���

��J���� �� ��������� � ��������� �� ��� ���� � �

���! ����� �� ����� ��� ���� � � �� � ������

Table 2. Effect of seed treatment ofpearl millet cultivar HB 3 with differentconcentrations of �-aminobutyric acid(BABA) on downy mildew disease(DMDI) incidence due to challengeinoculation by Sclerospora graminicolaand protection offered compared withunprotected controla

������������ � ����

���

������� �� �� ��� "�� ����

��

��

��

���

������ "� �,� �� �%� ��� �� ������ � ��� �� ���� ��� !� )�� � �� �! ����!� �����"

����#���#� ������ � ��� �� ���� ��� !

8()

�������� � ���� � ������� ���� *1�6 &,&, ��

-�� ������������������� � ��� ������� �������

� ���������� �� �� ���� ���� ��� ���������� ���

� ������� ����������! :��� �� ��������� �� ������

����� � �� ����� �� ���� � � � ����� ���� ��� ���

��������� ���� ! ������� ��������� �� *1#01@ ���

��� ��� �� ���� �� ������! 3 ������� ���� &,&,

������ � �������� ������ � �� 8*#.(@ �� 4&$

�."@�� .)$& �8.@�� *")" & �8*@�� ($ �( & �8*@�� A

"1)�� �.(@� ���� � � ��������� ���� ��� �����

������ �������� �3��� $�!

3.4 Optimization of time required for resistanceinduction and demonstration of SAR3�� ���� �D� �� �� ��� � �� ��5��� ���������

��� �� ��������� �� ��� �5�� ������>

�� ��� + �� �5�� ������ ��� ����� �� � � ����� ����

&,&, ��� ��������� ���������� �� ��� ���� )�"1)

������ �� ���" �� ��� ��� �����! , ���� ��� �� "� (� $

� ) ���� ��� ���������� ������ ��� �����

� ������� ��� ��������� ����������! 9 �������� ���

� ����� � �� 8.@ �� ��� "���� ���� ��� �� � ��5���

�� 0$@ �� ��� ��� �� ( ����! B ��� ��� ���� �� ���

���� ��� ������ �� � ���� ��� ���� �� � ��������

���� �&�

��

��������� �&�

��

������ ��� ���� �&�

!����" ���� ���� ���� #�����$

� �� + ��#��

�� � �� � �#�� �

� � �� �#�� �

�� � �� �#�� �

�� � �� �#�� �

����� ������ �� " �� ����� -������� �� % ���������#

��� " �� ��� ����� �� ���!�� �� ��� !��#

� �% �� �! ���� � ��� � �� '����% � ����� ����� �� �� ()�*

��� " �� �� ����� �� ���!�� �� ��� !��#

���� � ��� ���8("#8(. �(11"�

Figure 1. Effect of time gap between inducer treatment with �-aminobutyric acid (BABA) and challenge inoculation to root with Sclerosporagraminicola on downy mildew disease incidence in pearl millet.

������� � ���� ������ � #��� ���� �������� ���

���� ��� �� -* ��� -"@ �� ��� $ � ��� )�� ����

������� ��� �B�� "�!

�� ��� ������ �5�� ������ ��������� � ����� �� ���

����� �� ��� ��� ����� �� � �������������������

���� )�"1) ������ �� ���" �� ��� �������� �! �� �����

������� ��� �� ������� �� ������� ��������� ���

� �������� � ��� ���� ������ �� ��� ���� ��� ������

��� ����� � ������� ��� ��������� ����������!

3���� ������ �� � � ������� �� ��� ��� + � ����

����������� ��5��� � �������� �� .(@ ��� ��

�� �� �� ��� ��� �� ������ ��� � � ���� ��� �� ).� ���

���������� ������ ��� ����� � ������� ��� �����

����������������! ��� ���� �� ��� ���� ��� ������ ��

��� ����� � �������� ��� �� ���� �� *"@ �� ��� ��� ��

������ ��� � � *���� ���� ���� �� ��� ���������� �B��

(�! 3�� ��� �� � ���� ��� �� ( ���� ��� ������+�� �� ���

������� ��� �� ��������� �����!

3�� ��������� ������ ��� ���+ ��� �� �

�������� �� ��� �� ����� ����� ������ ������ �����

����� ������� ��������� ���������� �� � ���� �������

� �� ��� ���� �� ����� � �������!

Figure 2. Effect of time gap between inducer treatment with �-aminobutyricacid (BABA) and challenge inoculation to leaf whorl with Sclerosporagraminicola on the downy mildew disease incidence in pearl millet.

���� � ��� ���8("#8(. �(11"�

3.5 Test of durability of induced systemicresistance9�� � ������ ������ � � ���� ���� � ��� �� ��������� �

��5���� � ����� ���� ��� ������ �� ����� �� ���

���5���� � ����� ��� ����� �� ��� ����� ������

�������� � ��� ����! 3�� � ������ �� ��� �� �����

��� � ������ ������ �� � �� � � ������� � �� �����

������ ����� � �� �������� �� ���������� �� �������

�� ������ ��� � ��� �� ������ �� ����� �� ����� � �

(*#$* ��� $1#$- ����� ������� ���� ���� ��������!

4����� � ������ �� ������ �������� ��������� ���

�������� � ��� � ���������� ����������������� ���

��������� �� ��� ����� � ��� ��� ��J� ������� �5�� ��

������ ����� � �� ����� � ����� ���� *1�6 &,&, ��

-� ��� ������+�� �� ������ �������� � + ���

��������� ����������! :��� ��� ��������� �� ������

� �������� �� ������ �� ��� ���� ��� ���� �� � �����

� �� ����� � ����� ���� ��������� ���� ! :��� �� ������

��� ��� 8" ��� 8-@ ������� ��������� ���� �����

��������������� �� ��� ���� ��� �� �� ���� ����� � ���

��J� ������� �5��� ������� ���! 4��� � � ��� "1#"(@

������� ��������� ��� ���������������� ����������

�� ��� ������ ������ �������� � � ������� ����

&,&, ��� � � ���! 3��� ������ �� ���� � ��������

�� �������� �� .- ��� .) ������� ��� �3��� )�! �����

��� ��� ����� �� ��J� ������� �5�� �� ������ ���

�� ����� � � ���� ������ ��� � �������� ��� ��

��������� ���� ��������� ������ ��� �������� ���

��� ��� � � ��� ��� ������� � ��� �� ����� �

� ���� �� ���� �� ����� ������ �� ����!

3.6 Effect of BABA on vegetative and reproductivegrowth parameters3 ������� ���� &,&, �������� ��� ������� � ���

�� ����� � � ���� �� ����� � �� ��� � ������ ������!

9����� �� � �����+������ ����� �� ��� ������� � �����

���� ��� ���� ���! ,��� $1 ���� �� � ����� ������

������ �� � $)@ ����� � ���� -$@ � ���� � ��� �������

���� ���� �� ������ �3��� *�! 3�� ������ ����� � ��

����� � ����� ���� &,&, ������ �������� ����

����� � ��� � ��� ���� ���� � �� �$)@�� �� ���� ����

���� ���! 3�� ���� ���� �� ����� � � ���� �� �

����� � �� ��� ������ ����� � �� ����� � ����� ����

&,&, ������� ��� ���� �� ��� ��� �� �� ����

�� � �� ����� �$#)�� �� �� J��� ��� �) ���� �� ��� ��

����� �� ���� �*1@�� ���� � ���� �� �� �$$@�� ����

���� ������� ��� ���� ������ �-"@� �3��� -�!

4 DISCUSSION�� ��� �� ���� ���� &,&, �� �� ����� �� �����

������ ��� �������� �� ���� ���� ������� �� � ����

� �����"8 �� �������� ���� �����". � �� � �����

�� ��!$�($ 4��� � � ����� ����������� � ����

� �������� �� ���� ��� �� ���� ����� ������� �� �����

���� ��� ������ � ���� � �� �������� ��5���

� �������� ������� ������� � ��� �� ��������� ��� �

����� ��� ��� �� �� ������������ ����� �� ��� � ��!

3�� ��������� � G���, �� �����+������ ����

������� ������ �� � ��� ���� ������ �� ������

8(*

Table 4. Incidence of downy mildewdue to second-challenge inoculationwith Sclerospora graminicola in pearlmillet plants protected by inducertreatment with �-aminobutyric acid(BABA)

'��������

����� #���

������(���������

���������

�� �� ����

������ ������� �

��

���� #��������

�����&� �� ������� �

��

/0/0 ����� 5� !�% � ���� �� ��

�5������2�������� 6�7������ �� ��

8��������2���������� 5� !�% � ���� ��� +

6�7������ ��� +

������ � ��� �� ���� ��� !��� " �� ��� ����� �� ���!�� �� ��� !��#� )�� � �� �! ����!� �����"� �% �� �! ���� � ��� � �� '����% � ����� ����#��� ����� �� ��

��%� � �� 4� ��#� *"�2�%2��� ��� ��� � �� ���! ��� ���� " �� ����� /0/0 "� '��� ������ ������� " �� �����

-������� !���#� *"�2�%2��� ��� ��� � �� ���! � �� ��� "�� ���� ��� ��������� "� ����� ������ �������

���� � ! �� ���� � ��� � ��4#

� �������� �� ��

� ������� � &,&, ������� ����� ���� ���������

���� � ��� �������� ��� ��� ���+ �� �������� ��

���������! �� ���� ����� ���� � ������� ���� &,&,

������������ � ������� ��� � ������ ������ � �� 8*@

������� ����� ������ ������� ���������!

3�� ��������� � ����� &,&, ���� �� �� �����

�� ��������� ���� � ����� � ��� �������� �� ���

��� ��� ������� �� �� ����� � �������� �� �����

� � ���������� �� ���� ������ ��� ���� �� ���������

��� �������� ���� ���������� ��� ������� � ����

����� �������� ������ �� ��� �� �������� �� ���!()

,����� ������� ��������� �� ���� �� ���� �� ���

����� ������� ���� ��� �� ��� ����� ���� ���<�

� ����� ��������� ���� ������� ��� ��������� �� ���

���� ���� ���� ��� ����� ��� ��7��� ��� ���� ���

���� �����������!". 3�� � ������ �� � ������ �� ���

���� � ���� ���<� �����+� ������ � �� &,&, �� ���

���� ���� ���� �� ��� ������ �� &,&,�.�(* ��� ���

� ����� ����� ���� ���� � ������� ���������������

���������� �� ��������� �������� ��� �� ��

� ������� ���� &,&,� ������ ��� ������� ��� ����

�� ��� ������ � �� ��� ���� �� ��� � ������! ���

������� ��������������� ������� �� ��� �������� ��

��������� � ���� �������� ����������������� ����

������ ��� �/, ��� ��� ��� ���!0�(-

3�� �������� �� ��������� � ��� � ��������

�������� � �������� �� ������ � �� ��������� �������

���� ���� ����� ������ �������� �� ��� �������� ��

�������� �� ������ � ����������� �� &,&, ��� �

Table 5. Effect of seed treatment with �-aminobutyric acid (BABA) on vegetative growthparameters of pearl millet plants cv HB 3a

����������

. ��� ��!�

$��� " ��� ��� �4

(�% " ��� ��� �4�

9� � ��!��

:�!�� �� ��� � ��

������ "� �,� � �

���!�� �� ��� !�� )�� �����"� �% ��� $ ���� � �������

8(-

�������� ��� � �� ��� ��������� �� �� ��! 3���

� ����������� ���� � ������� �� ��� 5���� � ��

��� ����� �� ��� ��� �� ��� ���� �� �������� ��

��������� �� ������ ������ ������� � � ���� �!($ 3��

� ����� ���� ���� ������+�� �� ������� ���� ���� �� ��

).� ������ ����� � ������� ��� ��������� �����

������ �� ��5��� ��������� �� ��� �! ? ��� ��

� � ���� �� ����� ���� ��� ��� ������ ���� ���

�� ����� �D� �� � ����� �� ��� ������ �����

� ������� ��� ��������� ���������� �� ������ � ����

������ ��� ���� ���� ����� �� ��7� �����!"�- 3��

�D� ����� �� �� ��� �� ���� ���� ��� �� ��������

�� ��������� ��� ��� ��� ��� �� ����� ������

������� �������������� ��������4���� ��������� ��� ��

�� ��������� ��� ��� ������ ����������� ���� &,&,

� ������� �� ���� � ����� � � ��� �� �� ����� * ����

��� �D� ��!"8 �� ���� ���� � ���� ��� �� ���� " ���

��� �D� �� ���� &,&, ��� ������� �� � ���� � ����

�� ������� ��� �� � �������� ��J��� ������ �������

���� ����� ���� ���! G� ��� ��� ��)�* �� ���� ��

������ ������� ������ �� � ��� ���� ������+�� � ����

���� �� �� ) ���� ��� � � �� ��� ��������� �������

����� �� ��5��� � �������� �� ��� � ������ ������!

3�� ����� ���� �� ��� ���� ���� �� �D� �� ��

��������� �� ����� ��� � ��������� �� ��� ��� �

�� ��� ����� ��� ��� ��� ����� ������ ��� � ���

��������� �� ������!

3�� ����� ������� �� ��� �������� �� ��������

��������� �� ����� ��� ��� � ������ ���� � � ����

'��������

������� � ����(������� �

�� � ��#�� � ��

�� �� ����� �#�� � �#�� �� �

� �� ����� �#�� � �#�� �� �

��#�� � ��#�� � ��

�� �4�� �� ����� � �

� � �%� �� ���"�� �� � ��� �� ���� ��� !��� " �� ��� ����� ��

�#

�! ���� � ��� � �� '����% � ����� ����� �� �� ()�* ����#���#

�� �� ������ ���� �4� �������#

���� � ��� ���8("#8(. �(11"�

Table 6. Effect of seed treatment with �-aminobutyric acid (BABA) on reproductive growthparameters of pearl millet cv HB 3 plantsa

����������

'��������

������� � ����(������� �&�

. ��� ��!� ��#�� ��#��� ����

(%� �;� �� ��� 7�"� �� ���<� �� ���

*��� ��!�� �� �������� 4 ��� �� ����� � =�

:�!�� �� � ����

) � � �

/�� � �

:��� �

*��� � ��

9���� �� ��� ��!� �4�� �� ����� �#�� ��# �� ����

> ��� �� ��� ��!� �4�� �� ����� #�� �#��� � �

���� �� " ��� ��� �#�� ��#��� ����

������ "� �,� � �� �� �%� �� ���"�� �� ��� �� � ��� !��� " �� ��� ����� ��

��� !��#� )�� �����"� �% �� �! ���� � ��� � �� '����% � ����� ����� �� �� ()�* ����#���#� $ ���� � ������� �� �� ���� ���� �4� �� ������� �������#

������� � ���� ������ � #��� ���� �������� ���

� ���� ��������� �� ����� ������ ������� ���� ����

��� �� ��� �� ��������� ����� �� ��� ����������� ��

��� ���� � ��� ��� ��������� �� ���� ��������� �

���������! 3���� ����� � � �� �� ������ ���� �����

�� ��� � ������ ������� � ��� ���� * ��� �� ������

���� � � ������� � � ���� �!(8

�������� �� ��������� � &,&, �� ��� � ������ ���

���� ���������� ���� �� ��� ���� �� ��� ������� � ���

�� ����� � � ���� �� ����� �! �� ��� ������ ����

��� �� ����� ������ �� ��� ������ ������� � ���

�������� �� ��������� � ��� ������ ���� � �� ��

���� ������ �� � ������ �� �� ������ ������� ��

��� ���� �� ���� ������� ������ ������� �� ��� ��

� ���� ��� �� �� J��� ���!* ������ ��� ������ �� �

���� �� ������ ��� ����� ���� ��� ��� ������ �

� ������������ ���� � ���� !(.�(0 �������� ��

�������� ��������� � ������� ������ ������� �����

���� �� ��� ���� ��� ��� ��� �� ��� ���� ��� ����

��� ������� ���� ��� �� ����� ��� ����

������ ���� ����� �� �� �� ����� ���� ��!$1�$"

,������ ��� ��������� �� ������ ��� ��� �� �

��� �+��� ��� ���������������� � �������� ���� �� �

���� � ������� ���� &,&, ������� ���� ����������

������� �� ��� ����� ������� �� � ������ �� ��������

���� �� � ������ �� � ��� ����!

ACKNOWLEDGEMENTS3��� �� 7 ��� ��� �� ��� �� �� ��� � �2��� ��

E�������� ,�D� �� ����������F ����� � ������

���� �������� �� �������� ,����� ��� ��� G��

��������� �� ����� �� :������� 9 �� ���� ��,/��

�, G/�G:,�! 3�� ���� � � � � ����� ��

9 ������ I �������� ��9��� ���� ��� 9 ������� ���

�������� 9� �� �� ��� �,/��, G/�G:,� � �2��� ��

�������+� ���������! 3�� +������� ���������� ���� ��

� �� ������ :����� �� ,� ���� �� ����� ��� /��

������ ����� �� ���� � ������� ��7���������!

���� � ��� ���8("#8(. �(11"�

REFERENCES" ����� A,� /����������� C6� L������� 6H� 6����� ,� ������

4 ��� 4�� 6?� �������� ��D� �� ���������! �� � ����

/>".10#"."0 �"00-�!

( 4���� ������� �� ������ ������� ���������> ��� �� ������

������ ���� ���������M ������� ��� �� � ����� ''>88#.)

�"000�!

$ A�� N:� ���� ��� A ��� &������ 4� &���������� ���

����������� ������ �� ���������� �� ������������ ������

��������� �� ���������� � ���� � �� ������ ������! $ ������

����� *./>"(0#")1 �(111�!

) O�� IC� 6�� � 6�� 4�������� :O ��� ������ 4��

������ �������� ��������� � ������ ��� � ������ ������ �������

����� ������ ������� �� �� ���������� ��� ����! ���� ����

*&>)*.#)-( �"00$��!

* O�� IC� 4�������� :O� O��� �O ��� ������ 4�� 9 ��

���������� ������� ��������� �� ����� ������ �����������

��� ����� �������� � ����� �� �5����� ��� ��"�$������������� ��� �� ��� � ������ ��� ������ ������! $ �� � �����

/(>(1$#(10 �"00.�!

- O������� 4� ��� 3� 4������ :� 6����7� 3� 4� ��� A� L� �

G� C7��� � ��� ����� A� �������� �� �������� ��D� ��

��������� �� ������ � ���������! % � &�� ����������

0&>)$0#)*0 �"00)�!

8 ���������� 6 ��� &���� ������� �� 3 ������� �� � ����

�� ��� �� ���� ��������� ���� ���� ��� ��� �� �������� �� ��

������� ����� � ����� � ������� ����! $ �� � '�� ����

*(,>"--#"8$ �"000�!

. :������4��7� G� ��� �� � ��� &A� G����� �� (�-������� �������

������� ����� ��� �� ������� ���� ���� ��� ��������������� ��

�������� ��������� ��%���� �� ���� ���� �� ������! �� � �����

.2>"8"#"8. �(111�!

0 6�� �5 A9� ,�� H9� ��� 3� ������ A� ��������� ,� ����� A

��� L� � G� �������� �� ��������� �� ���� �� �������

�� (�-������� ������������� ���� ��� ���������� �� %�� ��� �

�������� � ����� �� �� ��������� � ������� � �� � 4�����7�4�

I� �� �9�� O��� � �� � ����� 3�� /���� ������ �� )$(#

)$0 �"00"�!

"1 ������ O,� B ��� ��� �� 6������� 4O� L������ ������� 3�

O������� 4� ��� 4 ��� ����� A� &��������������� ������

��������� �� %��������� � ���� ����� �� ��� �������� ��D� ��

��������� ������ � ��������� �������! �� � $ *(>8"#.(

�"00-�!

"" :���� N� H��� C ���/��� ���3� ����� ��� �������� � ��������

������� ���������� � ���� � ������ �� ������ ��� ������

������ � 2������� ���� ��� 2������� ������ ���� ! ������

������� /0>"1*)#"1-( �"00$�!

8(8

� �������� �� ��

"( 3��� �� ������� � ��� P���� ��� ,� &��������������� ������

��������� �� ������� ���� ��� �� ��J��� ������! $

���������� *.)>$-*#$81 �"000�!

"$ H������ , ��� O���� A� ��J���� �� ���� ��� ��� �5����� ��

J� ������ ���������� ��� ���� �� ���� ���� ����! ������

������� /&>$(1#$(8 �"00(�!

") :���� N� $�������� �� ���� ������ �������� ���������

������� ���� ����� ���� ! ������� ��� �� � ����� ..>(8$#

(.. �"00)�!

"* O���5 �� ,���7� H� B� N� �������7 , ��� &������ 4� ������

��������� �� ���� �������� � ���> � ������� ��� ������������ ��

����� �� ������ � ���� � ������ ��� �� � �� 4�

������ 9G ��� ����� 4�� ���� ����� ,��� � � CO� �� )*"#

)-1 �"00-�!

"- ?7� N� :���� N ��� ������� N� ����� ��� �������� ������

��������� �� ��� ����7��� �������� �� ������ � ����������� ��� �� ����! ������������ /2>""$.#"")$ �"000�!

"8 4��� AO� 4���� &O ��� O�� :4� �������� �� ����� ���

�������� ��������� �� �������������� �������� �� ����� ������

� ����������� ��� �� ����! $ ���������� *.2>"0$#"0.

�"000�!

". :���� N� �� ��� 6 ��� &���� ,� ����� ��� �������� ���� ���

�� &,&, ����$�������� �� ����� ������� ������� �������

�� � ��� ����! (�� $ �� � ����� *('>$*"#$-" �"000�!

"0 �������� O6� )����� � �� ���� �� ��� ��# � �����#� �� ����

������* ������ � + �� ������� L����� 9 ���� 6��� �� $1) ��

�"08-�!

(1 ,�� &�7� ,, ��� ,��� ��� A�� I��� ���� �������� ��

������ ���� � ������� � ��� ��! ���� ��� *0>-$1#-$$ �"08$�!

(" O�� IC� 6�� � 6�� ��������� � ��� ������ 4��

K����+������ �� ���������� ��� ���� �� �������� ������ ��

�� ������ ����� ���� �� ������ ���7�� ������� ���

�����! �� � ����� .&>(*"#(** �"00$�!

(( ����� �� ��� H������� �� , �������� ���������� ������D� ��

8(.

��������� ����� ������ ��������� �� ��� � ������! �� � '��

)&>)(*#)(. �"0.*�!

($ :���� N ��� H��� C� �������� � ����������� �� "):����$�

������� �� ���� �� ������ ������ �� ������� �� ������

��������� ������� ���������� � ���� �! ������� ��� �� � �����

.'>))"#)*- �"00)�!

() A����� &�� ����������� ,?� 4���� � ��� ���� A,�

9 �������� �� )����� ��������� ������� ����� ������ ���

����������� � ���� � ������� ���� :H, ()* 81)� ��

���� ��� �� �������� ��D� �� ���������! ������ ��� '&>-$#-0

�"00.�!

(* 4��J��� G� 9���� �� :6A� &�7 � ��� �� 9��� A,� ������

�������� ��������� �� ����� �� ��� ���������� ���� �������

���� �� ������������� ������ � ������! ������� ��� �� � �����

.,>$10#$(1 �"00*�!

(- C7��� �� 6����6��� &� L� � G ��� ����� A� ,�D� ��

��������� �� %���������! �� � ���� .>-)*#-*- �"00(�!

(8 G�7� �� A� H��� C ��� 6������ G� �������� ��D� �� ���������

�� ���������� � ���� � �� ������ ��� ��� ��� �� ������������

������ � ������! ������� ��� �� � ����� .0>"-"#"8" �"00$�!

(. 3�� � ��� O� A� , ����+�� ������D� �� ������� ��������

��������� �� �� ���� ��� ��� ������ � ���� �� ������!

������������ )'>""(8#""(0 �"0.*�!

(0 3�� �� /������ L� B� ��� � ��� O� A� G������ �� ����

��2������� ���� ���� ����� ���� �� � ���� �� ������ ���

� �������� ������� �� ���� �� ��� +���! ������������

),>0$.#0)" �"0.-�!

$1 P����� H� O������ A� N�� : ���L�� H� �������� �� ��������

��������� �� ���� ������� ���� ������ �:������� �>

:� ����������� � ����� � ������ ������� ���� ��! )��� ���

�� ���� &(>$0"#$0- �"008�!

$" ������ H� ��� O������ AL� 6�5� �� �� ����� � �����

� ������� �������� �� ������� ��������� ���� �� �� �������

���� ���������! )��� �� ���� //>""*.#""-) �"00.�!

���� � ��� ���8("#8(. �(11"�