79
http://lemur59.ru/node/9039

Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

  • Upload
    others

  • View
    5

  • Download
    0

Embed Size (px)

Citation preview

Page 1: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

http://lemur59.ru/node/9039

Page 2: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

План лекции:

1. Что такое трансгенные организмы и почему ими пугают население

2. Как получают трансгенные организмы

3. Как их используют

4. Разумные опасения ученых и пути решения проблем

Page 3: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Термин «генетически модифицированные организмы (ГМО)» весьма неудачен, т.к. вся наша еда (кроме обитающей в дикой природе) - это ГМО по отношению к своим диким сородичам (мутанты, гибриды, химеры).

Трансгенные организмы (ТО) – те, которые включили чужеродную ДНК в геном (и в ее составе- «трансгены», т.е. чужеродные гены)

Трансгенные технологии – это подсмотренный в природе метод получения ГМО (метод, основанный на природном горизонтальном переносе генов)

Page 4: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты
Page 5: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Баранов А.С. Ермакова И.В. Цыдендамбаев В.Д.

Общее ухудшение здоровья населения, распространенность аллергическии СМИ вслед за учеными приписывают именно трансгенным организмам (ГМО)

Page 6: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Не учитываются все факторы, увеличивающие генетический груз:

1. Позднее отцовство (см. Лекция 5)

2. Постоянно растущее загрязнение окружающей среды

3. Ядохимикаты в растительном сырье. Наличие антибиотиков и гормонов в животном сырье

4. Добавление консервантов, загустителей, наполнителей, антибиотиков и пр. химии при переработке растительной и животной продукции

Page 7: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Пищевые добавки: красители (Е-100 – 182), консерванты (Е-200 – 299), антиокислители (Е-300 – 399), стабилизаторы и загустители (Е-400 – 499), эмульгаторы (Е-500 – 599), усилители вкуса и аромата (Е-600 – 699), пеногасители (Е-900-Е-999). Они разрешены к использованию в России, но опасны для здоровья человека: могут вызывать злокачественные опухоли (Е-103, Е-105, Е-123, Е-125, Е-126, Е-130, Е-131, Е-142, Е-152, Е-210, Е-211, Е-211, Е-213-217, Е-240, Е-330, Е-447) и заболевания желудочно-кишечного тракта (Е-211-226, Е320-322, Е338-341, Е-407, Е-450, Е-461-466), вызывают аллергию (Е-230, Е-231, Е-232, Е-239, Е-311-313), болезни печени и почек (Е-171-173, Е-320-322).

Page 8: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Может быть, заостряя внимание на потенциальные угрозы от ТО, нас отвлекают от реально

существующих проблем?

Почему так много говорят именно о ТО (ГМО)?

Page 9: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Успех кампании по дискредитации трансгенных технологий базируется на генетической безграмотности населения.

Только половина людей в России как-то информирована о роли генов.

Опрос в Москве 2001 г (профессор Н.К.Янковский):

«Верно ли утверждение что трансгенные организмы (ГМО) вредны, потому что в них есть гены, а обычные полезны, потому что в них генов нет?»

• Да–10%

• Не уверен - 40%

• Нет – 50%

Page 10: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

ДНК есть в любой пище растительного и животного происхождения, даже в переработанной (колбаса, шоколад и пр.). Ее нет разве что в рафинированном растительноммасле и сахарном песке. Однако, откройте пакет и налейте масло в стакан. Уже через час ДНК там можно будет обнаружить. Но не ДНК сахарной свеклы и подсолнечника, а нашу с вами. С частичками отшелущивающейся кожи, с капельками слюны она летает в воздухе, и сейчас мы с вами вдыхаем ДНК наших соседей. Проблема контаминации собственной ДНК –одна из важнейших при работе с останками древних людей. Ее непросто избежать! Тем не менее, постоянно общаясь с нашими сокурсниками, мы не изменились, не приобрели общее с ними лицо.

Page 11: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты
Page 12: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Н.К.Янковский: «С хорошей телячьей отбивной Вы съедаете около миллиона миллиардов генов, в том числе нужных для формирования рогов. Однако рога появляются при этом далеко не у каждого»

Page 13: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Поджелудочная железа выделяет в 12-перстную кишку РНК-азы и ДНК-азы, которые разрушают содержащиеся в пище нуклеиновые к-ты. Затем процесс разрушения

продолжается в кишечнике

ДНК из ТО также безопасна как и любая ДНК, присутствующая в пище и воздухе

кишечн

ик

Page 14: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Получение ТО: 1 этап – генная инженерия - создание генной конструкции, которая содержит трансгены, и введение этой конструкции в векторную молекулу - переносчик ДНК

2 этап – трансформация - перенос векторной молекулы в геном растения или животного с помощью метода, который лучше подходит для данного вида

3 этап - отбор ТО, их изучение

Page 15: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

1 этап. Генная инженерия - технологии выделения генов и манипуляций с ними (технологий получения рекомбинантных ДНК)

(1) - выделение гена с нужной функцией (анализ его структуры, выделение его кодирующей части, удаление ненужных частей)

Регуляторная часть и промотор

Белок-кодирующая часть

ТАТА интрон интрон

(2) - присоединение нужной регуляторной части (ген будет работать в нужном месте и в нужное время)

ТАТА

РНК-

полимеразный

комплекс

Page 16: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Главные инструменты генной инженерии

Эндонуклеазы рестрикции (рестриктазы) режут ДНК

Лигазы (сшивают ДНК)

Рекомбинантная ДНК

Получение рекомбинантной ДНК

Эндонуклеазы рестрикции

http://habrahabr.ru/post/48534/ http://habrahabr.ru/post/48846

Page 17: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Заключительная стадия генноинженерной работы (1-ого этапа):

Встраивание ДНК в векторную молекулу (плазмиду)

(3) встраивание рекомбинантной ДНК (трансгена) в векторную молекулу - переносчик

Вектор - молекула ДНК, способная к включению чужеродной ДНК и к автономной репликации, служащая инструментом для введения генетической информации в клетку

Page 18: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

в) Электропорация ДНК в клетки (протопласты)

Прямой перенос:

а) Микроинъекция ДНК в ядро

Импульсы высокого напряжения → временные поры

б) Биобаллистический метод переноса (пневматическая пушка)

2 этап - перенос векторной молекулы в геном растения или животного (трансформация, трансфекция)

http://www.kkv5.pisem.net/method-tran-obzor.htm

Page 19: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

б) Пневматические пушки (биобаллистический метод трансформации)

Page 20: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

с помощью природных переносчиков генов – бактерий и вирусов

Непрямой перенос

Опухоли растений - результат интеграции в геном растения генов агробактерии (A.tumefaciens). Гены агробактерии найдены в дикорастущих растениях (несколько видов табака, льнянки).

Page 21: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

A. tumefaciens

Ti-плазмида

Т-ДНК Хромосома

Хромосомная ДНК

Т-ДНК

Трансформированная

клетка Корончатый

галл

Агробактерии атакуют растение после поранения. Они переносят свои гены (гены Ti-плазмиды) в геном растения и заставляют растительные клетки работать на себя. Гены бактерии удаляются.

Встраиваются нужные гены

http://bib2011genetik.wikispaces.com/Agrobacterium+tumefaciens

Page 22: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Вирусы также могут интегрировать свои гены в геном хозяина – животного или растения

От 1 до 8% генома человека – вирусного происхождения

Page 23: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Достаточно создать контакт растительных или животных тканей с природными переносчиками, чтобы осуществилась передача чужеродной ДНК

Цветоносы погружают в суспензию агробактерий на 5 – 15 мин

Метод трансформации

растений in planta

Page 24: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

качественно новые продукты,

новые лекарства

новые промышленные технологии

Основные направления использования трансгенных растений:

решение экологических проблем

научные исследования

Page 25: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

1983г-компания Монсанто (Бельгия), Ин-т растение-водства М.Планка (Германия) и группа из Вашингтонского Университета создали 1-ые ТР растения табака и рапса.

1994г. - в США зарегистрировали первое трансгенное растение, предназначенное для употребления непосредственно в пищу, - томаты “Флавр-Савр”

История получения трансгенных растений

1999г. - получены трансгенные растения более 120 видов.

Page 26: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Получение качественно новых продуктов на основе трансгенных растений:

Замедление созревания, контролируемое созревание (снижение потерь при транспортировке; доступность круглый год)

Улучшение пищевых и технологических свойств (создание полноценной и сбалансированной пищи)

Устойчивость к гербицидам (снижение применения ядохимикатов)

Устойчивость к насекомым-вредителям (полный отказ от использования инсектицидов)

Устойчивость к болезням (высокий урожай, снижение стоимости продукции, снижение применения фунгицидов)

Page 27: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Ген в антисмысловой ориентации блокирует работу собственного гена, кодирующего полигалактуроназу

Трансгенные растения с повышенной лежкостью плодов

Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Полигалактуроназа деполимеризует пектиновые молекулы

пектин не разрушается, т.к. есть дополнительный ген полигалактуроназы в антисмысловой ориентации

сорт “Флавр-Савр”

http://plantsinaction.science.uq.edu

.au/edition1/?q=content/11-7-future-

technologies

Page 28: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

У ТР с блоком синтеза этилена (гормон созревания) плоды хранятся очень долго.

Время созревания можно регулировать, обрабатывая плоды этиленом

Томат, салат, цветочные культуры, дыня

Трансгенные растения с измененными сроками созревания плодов

Page 29: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Трансгенные растения с измененными качествами плодов и семян

Антоциан - мощный антиоксидант с противовоспали-тельными свойствами (борьба с раком, болезн.сердца, ожирением, диабетом, нарушениями зрения, возрастными недугами).

Page 30: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Трансгенные томаты с увеличенным содержанием антоциана

В геноме томата - 2 гена львиного зева, регулирующие синтез антоциана, под промотором, обеспечивающим их экспрессию именно в плодах (из гена – регулятора синтеза этилена томата)

ликопин

антоциан

Butelli et al. 2008. Nature Biotechnology 26, 1301-1308

Page 31: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

http://www.vechnayamolodost.ru/pages/gennajainzhenerija/gendurakacf.html

Рис – основной источник питания большей части населения земли. Из-за недостатка витамина А ежегодно умирает 1 млн детей + 230 млн страдают заболеваниями (ВОЗ)

Доклад ООН, посвященный проблеме голода в ХХІ веке: сегодня 852 млн голодают каждые 7секунд от голода умирает один ребенок >1,2 млрд (= 18% населения мира) живет < чем 1 $ в день

Трансгенные растения с измененными качествами плодов и семян

Page 32: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Получение «золотого» риса – пример метаболической инженерии

гены синтезаβ-каротина

= провитамина А , превращается в витамин А в

организме

обычный

рис

золотой

рис

геранил геранил дифосфат

фитоен

ликопен

β-каротин

фитоенсинтаза (ген psy

из нарцисса (Narcissus

pseudonarcissus)

ген ctr1 из почвенной

бактерии (Erwinia

uredovora)

Гены синтеза каротиноидов повышают содержание каротиноидов – это полезно и человеку и растению

Лутова Л.А., 2010

Page 33: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Золотой рис – сорт, в геном которого введены 2 гена

биосинтеза каротеноидов.

Сейчас в геном золотого риса введен ген ферритина сои,

который восполняет дефицит железа в зерне.

http://www.goldenrice.org/

Page 34: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

У розы нет F3′5′H, флавоноид-гидроксилазы, поэтому нет дельфинидина. Чтобы получить голубую окраску, в геном розы внесли ген синтеза этого фермента из фиалки, а также ген DFR (дигидро-флавонол редуктазы) из ириса.

Katsumoto et al. 2007. Plant Cell Physiol 48 (11):1589-1600.

Путь биосинтеза флавоноидов

Новый сорт (другой пример метаболической инженерии)

Page 35: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Австралийская компания Флориген придумала и запатентовала способ

получения сине-сиреневой окраски цветков тех видов растений, где

дельфинидин не образуется (гвоздики ‘Moonshadow’ и других сортов)

Page 36: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Новые породы атлантического лосося (фирма AquaBounty).

В икринки ввели собственный ген гормона роста под контролем промотора гена антифризного белка бельдюги.

Трансгенные лососи за год выросли в 11 раз (!) крупнее своих обычных родственников

В прудах AquaBounty живут гигантские форели, тиляпии, палтусы и другие рыбы.

Новая порода В отличие от обычного гена, который работает только в теплые месяцы, как у большинства рыб, трансген работает круглый год.

ТАТА Ген гормона роста Рег. р-н от гена бельдюги

ХОЛОД

http://www.sciencedaily.com/releases/2006

/07/060730131856.htm

Page 37: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Трансгенные растения с измененными качествами плодов и семян

1. Изменение состава аминокислот в белке (серо-содержащих – метионина и цистеина* путем введения соответствующих кодонов; генов, кодирующих белки богатые этими а/к; генов, регулирующих синтез)

2. Изменение состава жирных кислот в семенах (увеличение доли полиненасыщенных жирных кислот – олеиновой, незаменимых линолевой и линоленовой)

3. Изменение содержания углеводов (крахмала, сахаров

4. Улучшение вкуса плодов и пр.

* Человек и млекопитающие требуют наличия 8 незаменимых аминокислот в рационе. Белки семян злаков дефицитны по лизину и триптофану, а в белках бобовых — дефицит метионина и цистеина.

Page 38: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Использование трансгенных организмов в производстве лекарственных препаратов

Съедобные вакцины

См. прекрасный обзор: А.А. Турчинович, Е.В. Дейнеко, М.Л., Филипенко, Е.А. Храпов, В.К. Шумный. ТРАНСГЕННЫЕ РАСТЕНИЯ КАК БИОПРОДУЦЕНТЫ БЕЛКОВ МЕДИЦИНСКОГО НАЗНАЧЕНИЯ. Вестник ВОГиС. No28 2004 год

Page 39: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

С 80х годов ХХ века многие белки получают из

трансгенных микроорганизмов. Однако м/о часто не

могут делать сложные белки животных и человека.

Cегодня созданы ТО - продуценты широкого

спектра гормонов, факторов роста и ферментов,

имеющие потенциальное применение в фармакологии

и не уступающие по биологической активности

аналогам, получаемым из других систем экспрессии.

Трансгенные организмы - продуценты фармацевтических белков

Page 40: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты
Page 41: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Трансгенные козы с генами гормона роста человека, лактоферрина, факторов свертываемости крови и др.

Лечение нарушений роста (карликовости): 1 – вытяжки из гипофиза умерших людей (лечение для избранных) или

животных (низкая эффективность) 2 – трансгенные микроорганизмы 3 – молоко трансгенных животных

ЛЕЧЕБНОЕ

МОЛОКО

Page 42: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Защитные свойства лактоферрина уникальны: обладает антибактериальной, антивирусной, антипаразитарной, а также противораковым, антиаллергическим, иммуномоделирующим действиями и радиопротективными свойствами

Российско – Белорусский проект: козы – продуценты лактоферрина женского молока

Page 43: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Использование лишь 10-20 молочных коров позволит полностью удовлетворить потребность населения Германии в инсулине, которая составляет 400 кг в год

ЛЕЧЕБНОЕ

МОЛОКО

Сейчас инсулин продуцируют трансгенные микроорганизмы. Скоро его будут производить

коровы и козы

Page 44: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Трансгенные растения-продуценты вакцин (антигенов)

Page 45: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

p35S TBI-HBS

8/16

p35S TBI-HBS

c/17

p35S pG8

TBI-HBS 8/9

pBin ARS (+) 1 Томаты с ВИЧ,

с. Вентура,

TBI-HSB

Плоды томата с. Вентура +ugt+Kan

регенерант №53, плод в центре дал

+ ответ с анти-HIV антителами

“Золотое яблоко”

Эти поды– вакцина против

двух вирусных инфекций

ВИЧ и гепатит В

Ин-т химической

биологии и

фундаментальной

медицины СО РАН,

Ин-т цитологии и

генетики СО РАН,

Ин-т клинической

иммунологии, НИИ

молеку. биологии

Гос. научного

центра вирусологии

и биотехнологии

«Вектор»

(Новосибирск)

Page 46: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Трансгенные растения как фабрики по производству специальных химических

веществ (стадия разработки)

1. масличные культуры с маслами, для двигателей автомобиля в качестве смазки и топлива

2.получение растений – продуцентов каучука и др.

3.получение растительных - продуцентов паутинового шелка

Page 47: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Генетики выделили гены спидроина паука. Эти гены пытаются использовать для получения растений - продуцентов искусственного шелка

Паутина похожа на нейлон по эластичности и вязкости, а по жесткости превосходит сталь. Паучья нить с карандаш может остановить летящий самолет! Если бы паутина имела 1 мм, то могла бы выдержать груз в 200 кг (стальная проволока того же - всего 30–100 кг).

Page 48: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Трансгенные, растения устойчивые к гербицидам и насекомым

С 1 июля 2014 в России разрешенными являются 22 линии трансгенных растений (созданы в США, Франции, Германии, России): • 10 линий кукурузы, • 5 линии сои, • 4 линии картофеля

(2-отеч), • 1 линия риса, • 2 линии сахарной свеклы Все эти линии прошли или проходят испытания

Page 49: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Трансгенные, растения устойчивые к гербицидам

Гербицид РАУНДАП, разработанный на фирме «Монсанто» в 1970 году.

Действующее вещество – глифосат

(N-фосфонометилглицин)

HO-CO-CH2-NH-CH2-PO-(OH)2

Минимально допустимая норма в растениях 0,3

мг/кг, в воде – 0,02 мг/л

Раундап = 360 г/л глифосата Расход – 2 - 4 л/га, т.е.max 0,1 г/м2

Page 50: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

• Глифосат блокирует синтез ароматические а/к тирозин, фенилаланин, триптофан

• Фенилаланин и триптофан являются для человека незаменимыми.

• Поэтому глифосат относится к малотоксичным гербицидам, что подтверждается его полулетальной дозой LD50 ≈ 5 г/кг веса при внутреннем употреблении в экспериментах на крысах и др. организмах.

2,4-Д - ЛД50 0,35–0,60 мг/кг.

Page 51: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

хоризмат

ароматические а/к тирозин, фенилаланин, триптофан

Page 52: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

1. Скрининг бактерий A. tumefaciens на

устойчивость к раундапу

Коллекция штаммов

A. tumefaciens

Питательная среда

с раундапом

Штамм CP4,

устойчивый к

раундапу

2. Поиск и выделение гена

EPSPS из штамма CP4

A.tumefaciens

3. Создание генной кассеты и

вектора, несущего ген CP4 EPSPS

промотор транспортный

пептид

ген

CP4

EPSPS

терминатор

4. Трансформация

растительных клеток

ядро мРНК CP4 EPSPS + CTP хлоропласт

CP4 EPSPS мигрирует в пластиды. Он не

ингибируется глифисатом При обработке поля раундапом

погибают все растения, кроме

генетически модифицированных

Создание генетически модифицированных растений, устойчивых к раундапу

Работа введенных генов в клетке растения Лутова Л.А., 2010

Page 53: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Трансгенные растения, устойчивые к насекомым ("растения –пестициды")

Современные сорта 10 вредителей/ 1растение.

Хим.защита - пестициды – ядохимикаты, маленькие молекулы которых имеют высокую химическую стабильность.

Биологические методы - Bt-токсин - белковый токсин Bacillus thuringensis,используют уже 40 лет.

Нестойкие молекулы белков не накапливаются в природе — быстро распадаются до аминокислот + они более специфичны, т.е. уничтожают только определенных вредителей

Page 54: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Трансгенные растения, устойчивые к насекомым ("растения –пестициды")

Структура Bt-токсина (протоксина) Bacillus thuringensis. Белок 1178 а/к

Попадая в кишечник личинок насекомого, протоксин разрушается под действием ферментов с образованием эндотоксина.

Суспензией бактерии поливали поля, причем неоднократно, т.к. Bt в своем "нативном" виде разрушается на свету.

Page 55: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Гены, контролирующие синтез Bt-токсина (Monsanto, Ciba Seeds)

Обозначения Cry генов Насекомые, на которых оказыва-ется токсическое действие

CryIA(a), CryIA(b), CryIA(c)

CryIB, CryIC, CryID CryII

CryIII

CryIV

CryV

Чешуекрылые

Чешуекрылые

Чешуекрылые, двукрылые

Жесткокрылые

Двукрылые

Чешуекрылые, жесткокрылые

Клонированный ген модифицируют in vitro (укорачивают: 454 – 615 а/к) или синтезируют искусственно его фрагменты (~450 а/к)

Page 56: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Трансгенный картофель: ген работает главным образом в листьях. В клубнях картофеля - следовое кол-во Bt . Чтобы отравиться, одному человеку нужно съесть около 500 кг сырого картофеля за день.

Трансгенный картофель разрешен для выращ.и применения в пищу в США, Канаде, Мексике, Японии и Румынии. Два сорта проходят испытания в России в соответствии с требованиями российских законов. В России трансгенный картофель, наблюдения за которым ведутся уже три года, стабильно дает урожай на 50-90% выше контроля.

Page 57: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Сегодня 30% производимой сельхозпродукции уничтожается микроорганизмами, вирусами, грибами и другими вредителями

Page 58: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Анализ результатов многолетнего применения широкого арсенала пестицидов и удобрений говорит о том, что попытки решить проблему повышения продуктивности с/х за счет химизации практически исчерпаны (академик В.С.Шевелуха)

С /х стало одним из наиболее опасных для здоровья видов деятельности. По числу мутагенов оно занимает 2 место после отходов промышленности, опережая по этому показателю бытовую химию, медицину и транспорт (П.Н.Харченко, В.И.Глазко. ДНК-технологии в развитии агробиологии. 2006)

Page 59: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Однако, не менее опасно не бороться с патогенами. Ведь, например, токсины, выделяемые грибами (микотоксины) также относятся к наиболее опасным для здоровья человека веществам.

ВЫХОД – использование ТР -

они уже одним своим существованием способствуют уменьшению на Земле пестицидов:

(1) они эффективно борются с вредными для здоровья патогенными веществами и организмами

(2) позволяют снизить применение ядохимикатов и удобрений

Page 60: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Весь арсенал современных методов обработки общественного мнения используется мощными химическими и фармацевтическими концернами для удержания позиций на рынке пестицидов и лекарств

Page 61: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

За 26 лет употребления трансгенных сои и кукурузы не выявлено ни одного случая негативного воздействия ГМО на человека.

С 2001 по 2013 г под эгидой ЕС проведены масштабные научные исследования воздействия ГМО на организм человека и окружающую среду (1783 научных работ!!!), и никаких опасностей ГМО не выявлено. Однако они не привлекают внимание СМИ.

СМИ интересуют лишь только те «неопровержимые доказательства вреда ГМО», которые имеются у противников ГМО и получены в экспериментах, которые не выдерживают критики.

Page 62: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

http://www.youtube.com/watch?v=coLCm7Z49uE

Сентябрь 2012 г

Page 64: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Мнение генетиков отличается от общественного мнения:

Создание ТО – эффективный способ решения самых насущных проблем – проблем питания, медицины и даже экологии

Нас на Земле в 2005г = 6.5 млрд. В 2050 г на Земле будет 11 млрд.

Невозможность увеличения площадей посева и дальнейшей ядохимизации → необходимость повышения урожайности → альтернатив ТР пока никто не придумал!!!

Page 65: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Трансгенные растения для решения экологических проблем

1.получение растительных биодеградируемых (!) полимеров взамен полимеров из невозобновляемой нефти (утилизация отходов, ресурсосбережение, медицина)

2. создание растений, способных очищать окружающую среду от загрязнений (почву, водоемы)

3. создание растений, способных к выживанию в экстремальных условиях (с-х и дикорастущих)

4. создание растений – тестеров загрязнений

Page 66: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Трансгенные растения могут защитить нас от надвигающейся экологической катастрофы

Решение экологических проблем

Page 67: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Разумные опасения:

1. Изменение микробиоты человека (повышение ее устойчивости к антибиотикам)

2. Горизонтальный перенос ("утечка" генов)

3. Аллергенные свойства экзотических белков

4. Уменьшение биоразнообразия

5. Замолкание генов

Устойчивость к антибиотикам – самый удобный признак для отбора трансгенных растений. Однако, в 2002 г. ЕС запретил использовать гены устойчивости к антибиотикам, поскольку существует потенциальная угроза попадания этих генов в бактерии желудка и кишечника.

Page 68: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Разработаны специальные системы векторов, позволяющие избавиться от селективного маркера

Селективный маркер

транспозаза ген «интереса» RB

Ds (мобильный элемент)

LB

Т-ДНК в составе векторной плазмиды

Пути решения этой проблемы:

1) ищут и используют другие "не страшные" маркеры

2) вообще не используют маркеры (трудоемко и дорого)

3) используют маркеры, которые затем удаляют из состава Т-ДНК (вводят в состав Т-ДНК мобильные элементы)

Page 69: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Пути решения проблемы горизонтального переноса ("утечки" генов)

1) создают трансгенные растения с мужской стерильностью

2) вводят в состав генной кассеты гены, контролирующие развитие растений, которые сделают неконкурентоспособными дикие растения, получившие трансген в результате переопыления

3) разрабатывают методы трансформации хлоропластной ДНК – это не только способ увеличения синтеза чужеродных белков в растениях, но и предотвращение "утечки", т.к.хлоропласты передаются только через яйцеклетку, а не через пыльцу (нет нежелательного переноса трансгена с пыльцой на другие растения).

Page 70: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Этические проблемы

Насколько сильно исследователь может

вмешиваться в природу, чтобы удовлетворить

своё любопытство и способствовать получению

важных для человечества знаний?

Page 71: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Документ Британской академии мед. наук «Животные, содержащие человеческий материал» (Animals containing human material) - предложения по способам регуляции исследований ТО. Робин Ловелл-Бейдж: «…Мы не хотим, чтобы учёные стали причиной будущих проблем, переступив грань общественно допустимого…». Технологии, которые должны быть безапелляционно запрещены с этической точки зрения – это попытки очеловечивания приматов путём модификации тем или иным образом их мозга, а также смешиванием ДНК эмбрионов. Большая часть исследований по созданию трансгенных мышей с человеческими генами, уже находится под достаточно строгим контролем и не требуют, по мнению авторов документа, более сильного надзора.

Page 72: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Тот, кто владеет генетической информацией, будет владеть миром. Если Россия отстанет в этой гонке, последствия будут тяжелее, чем могли бы быть в случае проигрыша в атомной или космической области (академик К.Г. Скрябин)

http://lenagro.org/stati/1719-shirokoe-ispolzovanie-gmo--svershivshijsya-fakt.html

Page 73: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

С 1 июля 2014 г. вступает в силу Постановление

Правительства Российской Федерации от 23 сентября 2013 г.

№ 839 «О государственной регистрации генно-инженерно-

модифицированных организмов, предназначенных для выпуска

в окружающую среду, а также продукции, полученной с

применением таких организмов или содержащей такие

организмы».

Этим постановлением разрешено сеять генно-

модифицированные культуры. Однако, пройдет еще минимум

2 – 3 года с момента регистрации, прежде, чем будут

оформлены первые разрешения на их посевы.

Page 74: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

1. Л. А. Лутова Биотехнология высших растений: Учебник. Изд. 2-е. СПб.: Изд-во С.-Петерб.

ун-та, 2010. -240 с.

2. П.Н. Харченко, В.И.Глазко. ДНК-технологии в развитии агробиологии. М.:Воскресенье. 2006.

460с.

3. В. Глазко. Кризис аграрной цивилизации и генетически модифицированные организмы

http://www.uhlib.ru/biologija/krizis_agrarnoi_civilizacii_i_geneticheski_modificirovannye_organizmy/in

dex.php )

4. Е.Б. Рукавцова, Я.И. Бурьянов, Н.Я. Шульга, В.А. Быков. Трансгенные растения для

фармакологии. Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии.2006. 2. С. 3-

12 ( http://www.cbio.ru/modules/news/article.php?storyid=2691).

5. А.А. Турчинович, Е.В. Дейнеко, М.Л. Филипенко, Е.А. Храпов, В.К. Шумный. Трансгенные

растения как биопродуценты белков медицинского назначения. Вестник ВОГиС. 2004. 28

(http://www.bionet.nsc.ru/vogis/vestnik.php?f=2004&p=28_1).

6. Ю. Ю. Глеба. Биотехнология растений, 1998. Соросовский образовательный журнал, 6, 1-8.

(http://www.pereplet.ru/nauka/Soros/pdf/9806_003.pdf)

7. В.А. Захаренко. Трансгенные растения в системе фитосанитарной оптимизации

растениеводства в России ( http://www.rusbio.biz/ru/zah.shtml)

Рекомендованная литература:

Page 75: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Главные аргументы борцов с ГМО –

•опыты И.В. Ермаковой,

•опыты А. Пуштая (Pusztai),

•опыты Г.Сералини (Séralini )

Ссылки на их работы и комментарии к ним -

ниже

Page 76: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Пуштай (Англия) – картофель с геном лектина подснежника (стерильность крыс). Ставить такой

опыт – это все равно, что кормить пирожками с цианидом (лектин может вызывать агглютинацию,

т.е. слипание эритроцитов)! Его опыт доказывает, что при желании можно создать и вредные ГМО.

Но проще, наверное, цианид калия использовать (сообщение S.W. B. Ewen, Arpad Pusztai. Effect of

diets containing genetically modified potatoes expressing Galanthus nivalis lectin on rat small intestine.

LANCET. 1999• V354, p1353-1354). Сералини (Франция) – кукуруза с геном Bt вызывала опухоли у крыс (публикация в хорошем

журнале: Gilles-Eric Séralini et al. Long term toxicity of a Roundup herbicide and a Roundup-tolerant

genetically modified maize. Food and Chemical Toxicology Volume 50, (11), pp 4221–4231.

http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0278691512005637, НО, см http://afp-

zp.livejournal.com/340581.html, а также

http://trv-science.ru/2013/02/26/gmo-mificheskie-opasnosti/

1. недостаточные выборки

2. рацион крыс неправильный + без ограничений (исключительно кукуруза+раствор гербицида)

3. выбор самих крыс произведен неправильно - альбиносы из линии Спраг-Доули (Sprague-Dawley),

которые очень склонны к образованию опухолей в молочных железах, особенно если их

кормить пищей в неограниченном количестве (до 72% самок и 86% самцов крыс этой линии

практически предрасположены к спонтанному заболеванию раком в возрасте 2 лет).

Page 77: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

•Об опытах И.В.Ермаковой: Выводы биотехнологов

опубликованы в журнале Molecular Plant Breeding и Nature

Biotechnology : «Было бы преждевременно делать какие-

либо научные выводы о якобы проведенном

«исследовании» до тех пор, пока исследование не

рецензировано и опубликовано в заслуживающем доверия

научном журнале. Только в этом случае исследование

будет открытым для научной дискуссии. Научные выводы

должны быть проверены и приняты консенсусом научного

сообщества до того, как будут освещены в печати».

•Это не демонстративная поза научного общества, это

базовый принцип научной дискуссии. Фактически для

научного сообщества эти результаты не существуют.

Page 78: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

О сути экспериментов Ермаковой И.В. можно прочесть:

• http://npo.vo.uz/publ/13-24-0-127 «Речь идет именно о СООБЩЕНИИ, а не о полноценной научной статье.

• И.В. Ермакова широко разрекламировала свой эксперимент в общественно-популярных изданиях и на экологических форумах и съездах, а не опубликовала в каком-либо официальном (рецензируемом) научном издании. На недоумение Критиков по этому поводу она ответила, что её критические материалы блокируются там ГМО-лобби, за которыми мол стоят огромные деньги и финансовые интересы.

• Я же считаю, что и за ГМО-противниками с другой стороны так же стоят «огромные деньги и финансовые интересы» мировых производителей ядохимикатов, которые утрачивают сегодня всё большую и большую часть своих прибылей и наиболее заинтересованы в разжигании ГМО- истерии.

• На сайте И.Ермаковой представлен один опыт» (А.Першин)

См. также http://trv-science.ru/2010/06/22/gmo-i-xomyachki-kaplya-vody-na-raskalennyj-kamen/

http://freakopedia.ru/wiki/Ермакова_Ирина_Владимировна

Page 79: Слайд 1 - Биологический факультет МГУ им.М.В ... · 2014-04-04 · Фрагмент цепи макромолекулы пектиновой кислоты

Gilles-Eric Séralini et al. Long term toxicity of a Roundup herbicide and a

Roundup-tolerant genetically modified maize. Food and Chemical

Toxicology Volume 50, (11), pp 4221–4231

http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0278691512005637

Snell C., Bernheim A., Berge J.-B., Kuntz M., Pascal G., Paris A., Ricroch

A.E. Assessment of the health impact of GM plant diets in long-term

and multigenerational animal feeding trials: A literature review

(2012) Food and Chemical Toxicology, 50 (3-4) , pp. 1134-1148.