Пренатальна діагностика: про що мовчить нормальний каріотип?

Д.О. Микитенко Л.Я. Пилип

О.И.Соловйов В. Д. Зукін

Харків 2013

Ситуації в перинатальній медицині, де потрібно медико-генетичне

консультування

• Зміни в результатах скринингу

• Наявність хворого члена сім’ї

• Наявність патології при УЗД

Каріотипування

3

46,XY,Yqh+,t(5;19)(q11.1;q12)

БВХ або амніоцентез?

БВХ Переваги Недоліки

БВХ або амніоцентез?

Амніоцентез Переваги Недоліки

БВХ або амніоцентез?

.jpg

В.Х.

Амніоцити

Суть проблеми

Обмежена роздільна здатність стандартного каріотипування (можливість визначення анеуплоїдій та

структурних перебудов із залученням районів хромосом розміром понад 10 Mb) визначає обмежені

діагностичні можливості стандартного цитогенетичного дослідження в пренатальній діагностиці

Товщина комірцевого простору – безсумнівний маркер анеуплоїдій.

А якщо каріотип нормальний?

Збільшення NT + нормальний стандартний каріотип - маркер, асоційований з:

Внутрішньоутробною загибеллю

4991 еуплоїдних плодів зі збільшенням комірцевого простору

У випадках NT > 6,5 мм – 20% вн.утробна

загибель, випадки переривання

вагітності.

Вадами серця

NT = 2,5 – 3,5 мм – 5%

NT = 8,5 мм – 84%

Генетичними синдромами, що не

виявляються за допомогою

стандартного каріотипування

NT – неспецифічний

маркер аномального

розвитку

Bilardo et al. Increased nuchal translucency in euploid fetuses—what should we be telling the parents? // Prenatal Diagnosis. 2010

•

22q11.2 deletion syndrome – наиболее частый микроделеционный синдром (частота от 1:4000 до 1:6000 новорожденных) Фенотипическое проявление разное: от множественных нарушений до асимптоматического 93% случаев возникают de novo; 7% наследуются Наиболее известный пренатальный маркер – конотрункальные аномалии (fetal conotruncal anomaly) или врожденные пороки сердца– показание для исследования микроделеции методом FISH 169 пациенток с нормальным кариотипом плода и аномальными результатами УЗИ

12-летний опыт пренатального определения микроделеции 22q11.2

Bilardo et al. Increased nuchal translucency in euploid fetuses—what should we be telling the parents? // Prenatal Diagnosis. 2010

Bilardo et al. Increased nuchal translucency in euploid fetuses—what should we be telling the parents? // Prenatal Diagnosis. 2010

Наявність вади серця не є обов’язковим свідченням наявності мікроделеції 22q11.2

З метою виключення інших

хромосомних аномалій необхідно

проведення aCGH

3000 пренатальных образцов Исследование с помощью стандартного кариотипирования (АЖ+ВХ) и СГГ (BAC; BlueGnome) В 0,8% случаев стандартный кариотип не позволил определить наличие хромосомных аномалий; из них 0,6% - в группе с низким риском (возраст + обеспокоенность родителей) НО !!!

В 6,3% (6 из 95) пациентов в группе высокого риска (при проведении ультразвукового исследования выявлены аномалии) стандартный кариотип не позволил определить наличие хромосомной аномалии, выявленной методом СГГ

5,5% - микроаномалии, не выявленые при стандартном краиотипипровании

Стандартный кариотип

При условии соответствия стандартам качества (450

дисков на гаплоидный геном, GTG-banding)

Shaffer et al. Experience with microarray-based comparative genomic

hybridization for prenatal diagnosis in over 5000 pregnancies // Prenatal Diagnosis. - 2012

Shaffer et al. Experience with microarray-based comparative genomic hybridization for prenatal diagnosis in over 5000 pregnancies // Prenatal Diagnosis. - 2012

Исследование кариотипа ворсин хориона замерших беременностей ( из 70 исследований в 45 случаях

выявлены анеуплоидии)

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

6-8 нед 8-10 нед 10-12 нед 12-14 нед

Ко

ли

че

ст

во

за

ме

рш

их

бе

ре

ме

нн

ос

тей

с

вы

яв

ле

нн

ым

и Х

А,

%

0

2

4

6

8

10

12

14

16

5 7 8 10 13 14 15 16 18 19 20 21 22 половые

хромосомы

3n 4n 10n

Ко

ли

че

ст

во

за

ме

рш

их

бе

рем

ен

но

ст

ей

с

вы

яв

ле

нн

ым

и Х

А,

%

Исследование кариотипа 100 самопроизволных абортов

Gao J., et al. // Molecular Cytogenetics. – July 2012

Метод Уровень детекции хромосомных

аномалий

aCGH 93,4%

Стандартний каріотип 77%

FISH 68,9%

Консультирование пациентов с ПНБ

Кол-во самоабортов Хромосомнаям

аномалия Повторный риск Рекомендации

1 неизвестно 15%

1 Нет 12%

1 Подтверждена 22% PGS?

2 неизвестно 25%

2 Нет 1 24%

2 Нет2 28%

2 Подтверждена 1 34% PGS

2 Подтверждена 2 45% PGS

3 неизвестно 40%

3 Нет 1 46%

3 Нет 2 49%

3 Нет 3 55%

3 Подтверждена 1 51% PGS !

3 Подтверждена 2 58% PGS!!

3 Подтверждена 3 68% PGS!!!

Алгоритм диагностики

21

Каріотипування

Досліджуваний матеріал: -Кордова кров -Ворсини хоріону -амніоцити -Тканина плода

Складні хром.перебудови,

маркерні хромосоми, транслокації

Без патології Патологія каріотипу

Консультування, дослідження

батьків aCGH

FISH

Вад

и р

озв

итк

у

Sagoo G.S. et al. Genet Med. 2009; 11(3):139-46 Siggberg L. et al. Am J Med Genet. 2010; 152A(6): 1398-410 Shaw-Smith C. et al. J Med Genet. 2004; 41: 241-8

Алгоритм пренатальної діагностики

Відсутність мітотичної активності

клітин

22

Вада розвитку серця плода: дефект міжшлуночкової та міжпередсердної перетинок, єдиний артеріальний стовбур Хромосомна патологія виключена.

46,XY,15ps+,22ps+

Допологова діагностика

23

Хромосомна патологія виключена - вагітність збережена, дитина народжена, успішно оперована, живе й розвивається,

46,XY,15ps+,22ps+

Допологова діагностика

Випадок

• Ж. 38 р. Ч 35 р. астенозооспермія Безпліддя ІІ, чоловічий ф-р

24

Уражена дитина перенесла 2 балонізації у Центрі дитячої кардіології та кардіохірургії

2

arr (1-22)x2,(XY)x1,2p16.3(51,314,401-51,510,932)x1

Ch Size Genes Associated pathology

Pathol | CNV

2 (loss) 0,2 Mb 59% (?) | 0%

Клінічні варіанти з аналогічною перебудовою 2p16.3x1

25

Випадок Пренатальна діагностика Биоптат плаценты, 19 нед Вагітність І у 41 рік, МВВР Вагітність ІІ – гіпоплазія носових кісток, мікрогенія, синдром Денді-Уокера

46,XY, + mar.arr 11q23.3q25x3,22q11.1q11.21 x3

FISH: центромерні зонди 13,18,21,X,Y локус-специфічні – 15, 22 Гібридизації вказаних проб на маркерній хромосомі не було Скеровані на aCGH.

Випадок Завмерла вагітність. Каріотип не отримано

arr CGH 15q25.1q26.3 x 1 (24 Mb)

Висновки • Медико-генетичне консультування та обстеження є

невід’ємною частиною медичної допомоги вагітним • У випадку нормального каріотипу плода та

наявності УЗ-ознак вад розвитку, а також у випадку неможливості отримання каріотипу (завмерлі вагітності) доцільним є застосування високоточних методів молекулярно-цитогенетичної діагностики

• Розвиток генетичних технологій дозволяє не лише встановити діагноз на різних етапах онтогенезу , а й розрахувати повторні ризики та забезпечити народження здорових дітей у носіїв генетичних аномалій.

• Інтерпретація результатів генетичних досліджень повинна здійснюватись виключно спеціалістом, обізнаним з тонкощами конкретного дослідження

Дякую за увагу

29

(044) 592 21 78

Клініка репродуктивної медицини

«НАДІЯ»

www.ivf.com.ua

“Our goal is to preserve the past using 21st century technology”

James Dewey Watson