УМОВИ ВИЯВЛЕННЯ ТА ВИЗНАЧЕННЯ УМОВИ ВИЯВЛЕННЯ ТА ВИЗНАЧЕННЯ ТРАМАДОЛУ В КРОВІ МЕТОДОМ ТРАМАДОЛУ В КРОВІ МЕТОДОМ ВИСОКОЕФЕКТИВНОЇ РІДИННОЇ ВИСОКОЕФЕКТИВНОЇ РІДИННОЇ ХРОМАТОГРАФІЇ В ПРИСУТНОСТІ ХРОМАТОГРАФІЇ В ПРИСУТНОСТІ

НПЗПНПЗП

Львівський національний медичний університет Львівський національний медичний університет імені Данила Галицькогоімені Данила Галицького

Кафедра аналітичної та токсикологічної хіміїКафедра аналітичної та токсикологічної хімії

• Виконала: Ігліцька СофіяВиконала: Ігліцька Софія

• Науковий керівник: Галькевич Ірина Науковий керівник: Галькевич Ірина Йосипівна.Йосипівна.

Актуальність

Трамадол відноситься до фармакологічної групи опіоїдних анальгетиків із змішаним механізмом дії. В хімічному відношенні це (транс-(±)-2-[(Диметиламіно)метил]-1-(3-метоксифеніл)циклогексанолу гідрохлорид.

Трамадол – 4-ий найбільш часто призначуваний анальгетик у світі – використовується для лікування як онкологічного, так і неонкологічного болю в 70 країнах світу.

Частота застосування трамадолу в фармакотерапії болю (%).

44,8

15,9

9,6

8,2 5,4

4,2

4,1 4 3,80 10 20 30 40 50

м'язово-кісткові захворювання Онкологія

Травматологія Нейрогенний біль

Коліки Інше

Післяопераційний період Васкуліти

Мігрень

Найбільш часто використовувані комбінації трамадол + НПЗП

Мета роботи: Розробка методики якісного та Розробка методики якісного та

кількісного визначення трамадолу в кількісного визначення трамадолу в крові в присутності деяких крові в присутності деяких нестероїдних протизапальних засобів, нестероїдних протизапальних засобів, які найчастіше застосовуються в які найчастіше застосовуються в медичній практиці методом медичній практиці методом високоефективної рідинної високоефективної рідинної хроматографії.хроматографії.

Готування модельних проб крові

Модельні проби готували наступним чином: в 5 мл крові вносили стандартний розчин відповідного препарату у фосфатному буферному розчині з рН 7,4

проби струшували до повної гомогенізації.

Концентрація кожного із препаратів становила 10 мкг в розрахунку на 1 мл крові.

Схема ізолювання трамадолу та НПЗП з крові.

В досліджувані проби крові вносили по 1 мг натрію хлориду, 2,5 мл боратного буферного розчину (рН 9,0) і 15 мл суміші гексан/ізоаміловий спирт (99:1).

Суміш струшували протягом 30 хвилин після чого центрифугували (10 хв. при 5000 об/хв).

Органічну фазу відокремлювали і випаровували в потоці азоту при кімнатній температурі.

Сухий залишок розчиняли в 500 мкл ацетонітрилу і використовували для аналізу методом високоефективної рідинної хроматографії.

Ефективність методики ізолювання (ступінь екстракції в %) трамадолу та НПЗП з крові.

89 90 78 81 83 85

68 71

0

20

40

60

80

100

Трамадол 89 90

Целекоксиб 78 81

Мелоксикам 83 85

Диклофенак 68 71

Ізолювання трамадолу та НПЗП з Ізолювання трамадолу та НПЗП з модельних сумішей.модельних сумішей.

Готували проби крові з вмістом трамадолу і Готували проби крові з вмістом трамадолу і перечислених вище нестероїдних препаратів в перечислених вище нестероїдних препаратів в межах концентрацій від 50 до 500 нг/мл , межах концентрацій від 50 до 500 нг/мл , тобто створювали терапевтичний інтервал тобто створювали терапевтичний інтервал концентрацій. концентрацій.

Дослідження проб, отриманих із Дослідження проб, отриманих із

біологічного матеріалу проводили біологічного матеріалу проводили

на високоефективному рідинному на високоефективному рідинному

хроматографі Ахроматографі Аgilentgilent 1100 1100 SeriesSeries..

Очищення шляхом додавання 1 мг натрію хлориду

Екстракція сумішшю гексану з ізоаміловим спиртом

Випаровування органічної фази в потоці азоту, а сухі залишки використовувались для дослідження.

Умови аналізу ВЕРХУмови аналізу ВЕРХ Колонка Zorbax SВ-С18, розмір

частинок сорбенту 1.8 мкм, а самої колонки 4.6x15мм.

Градієнтний режим подачі рухомої фази.

Розчинники: суміш ацетонітрилу та води (95:5) та розчин фосфатної кислоти.

В склад рухомої фази вводили фосфатну кислоту в діапазоні концентрацій від 0,5 М до 1,7 М розчину .

Швидкість рухомої фази 3 мл/хв, об'єм введеної проби 10 мкл.

Детекцію проводили при 215 нм, застосовуючи УФ-детектор.

Вплив фосфатної кислоти на ефективність розділення хроматографічних піків.

При використанні 0,5 М розчину фосфатної кислоти коефіцієнт розділення піків становить 0,25-0,5.

Із збільшенням концентрації фосфатної кислоти в складі рухомої фази (0,75 М; 1 М; 1,25 М; 1,5 М та 1,7 М) покращується роздільна здатність колонки та зростає час аналізу.

Найоптимальніше розділення (коефіцієнт розділення > 2 ) спостерігається при концентрації фосфатної кислоти 1,25 М.

Характер хроматограми суміші трамадолу та НПЗП

1 – диклофенак натрію2 – трамадол

3 – мелоксикам4 - целекоксиб

Сполука Лікарський засіб Час утримування, tR, хв

1 Диклофенак натрію 9,56

2 Трамадол 12,09

3 Мелоксикам 12,58

4 Целекоксиб 20,60

Ідентифікацію досліджуваних препаратів проводили за часом утримування

Висновки

Опрацьовані умови ідентифікації та кількісного визначення трамадолу в крові в присутності НПЗП (мелоксикаму, целекоксибу та диклофенаку) методом ВЕРХ.

Встановлено оптимальну концентрацію фосфатної кислоти в складі рухомої фази для кращого розділення хроматографічних піків.

Найменші кількості препаратів, які визначили в крові, знаходяться в межах від 15 до 500 нг в 1 мл крові, що відповідає їх терапевтичним концентраціям.