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Synthesis, characterization and in vitro biological properties of O-methyl free N,N,N-trimethylated chitosan. Rolf J. Verheul a , Maryam Amidi a , Steffen van der Wal a , Elly van Riet b , Wim Jiskoot b , Wim E. Hennink a, *. 老師:陳澄河 教授 學生:陳禹樵. Outline. Introduction Material and methods - PowerPoint PPT Presentation
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Synthesis, characterization and in vitro biological properties of O-methyl free N,N,N-t
rimethylated chitosanRolf J. Verheula, Maryam Amidia, Steffen van der Wala, Elly van Rietb, Wim Jiskootb, Wim E. Hennink a,*
老師:陳澄河 教授學生:陳禹樵
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Outline
• Introduction
• Material and methods
• Results and discussion
• Conclusions
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Introduction
• 近年來, chitosan在生物醫學與藥學領域中受到廣大應用。但是 chitosan 只能溶於酸中,不利使用在 pH7以上的生理環境中。
• 在 chitosan四級氨化反應 (DQ)中,可以獲得主要的氨基團,使易溶於 pH7以上的生理環境。
• 具有一定 DQ程度 N,N,N-Trimethylated chitosan (TMC)具有黏膜黏著劑的特性,使可以打開膜上通道的能力,讓物質順利通過。
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Material and methods
• Chitosan
• N-Methyl-2-pyrrolidone
• Formaldehyde
• Formic acid
• Iodomethane
• NaOH,HCl
• MTT,DMEM,HBSS,FCS,SDS
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Synthesis of dimethylate chitosan10 g Chitosan 30 ml Formic acid
40 ml 37% Formaldehyde
180 ml Distill water
70 ℃ 118 hr
DMC
1 M NaOH
Deionize water
HCl pH 4
Filter,freeze dry
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Synthesis of trimethylate chitosan from DMC(absence of O-mathylation)
250 g DMC 40 ml Deionize water
NaOH pH 11
Water and acetone
50 ml NMP
2 ml Iodomethane
Stirred at 40 ℃
TMC
150 ml ethanol/diethyl
Filter,freeze dry
7
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Effect of reaction time on the DQ of TMC
隨著反應時間的增加,使四級化程度也增加
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1 g Chitosan 2.4 g Sodium iodide
40 ml NMP
6 ml 15 % NaOH
6 ml Methyl iodide
200 ml ethanol/diethyl
TMC(DQ 20 %)
Filter,freeze dry
Synthesis of O-mathylation TMC from chitosan
60 ℃ 20 min 60 min
10
6
3
11
`
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Results and discussionTable 1
Table 2
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TEER test
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TEER test
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Cell viability test
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Cell viability test
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LDH release test
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LDH release test
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Conclusions
• 本研究使用淺顯易懂的方法,合成具有游離 O-methylation 的 TMC,可預防高分子鏈的斷裂。
• 可改變不同反應時間,合成不同四級氨化的 TMC,且在 DQ 值 33%以上 TMC,可成功溶於 pH7 的水中。
• 最後由 TEER、MTT與 LDH測試發現,具有游離 O-methylation的 TMC的測試結果,較好於不具游離 O-methylation的 TMC。
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Thank you for your attention!!
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Caco-2 cell
• 是一株從人類結腸腺癌所分離出來的細胞株,其是以表皮吸附的方式生長,經由適當的培養,此一細胞株可以表現出體外型態學上及功能上的分化,故目前已被廣泛的拿來當作探討 in vitro藥物通透與益生菌或致病菌吸附的實驗 model。