תרביות תאים ורקמה

דר' אלכס בריימן

המחלקה למיקרוביולוגיה ואימונולוגיה

דרישות הקורס

השתתפות בשיעורים.1.

השתתפות במעבדה:2.א. נוכחות בכל המעבדות

ב. הגשת דוחות.

. מבחן.3

בבליוגרפיה

1. Ian Freshney R. 2000. Culture of Animal Cells. 4th ed. Willey-Liss, New York.

2. Jeffrey W Pollard., Joh, M Wallker. 1989. Animal Cell Culture. Methods in molecular biology. Vol.5. Humana Press. Clifton, New Jersey.

תרביות תאים ורקמה

סמסטר א', תשס"ט

מרכז הקורס: דר' אלכס בריימן 08-6477277טל-

E-mail: braiman@bgu.ac.ilhttp://fohs.bgu.ac.il/homes/braiman

הקורס מיועד לסטודנטים שנה ג' ברפואה מעבדתית.

סילבוס

ʤʠʶ ʸ ʤ 'ʱ ʮ ʤʠʶ ʸ ʤʤʠʹ ʥh ʪʩyʠʺ ʺʥ̡ʹʤʁ ʸ ʮ 1 ʠʥʡʮ -ʤʮ̫ ʸ ʺ ʥʩʡʸ ʺ 16.11 16:00-14:00 ʯʮʩʩyʡ .ʠʸ "ʣ 2 ʭʩʩʬʮʩhʠʭʩʠʺ ʺ ʥʩʡʸ ʺ 23.11 16:00-14:00 ʯʮʩʩyʡ .ʠʸ "ʣ 3 ʺ ʩʡʸ ʺ ʡʭʩʠʺ ʬ́ ʤʩʢʥʬʥʩʡ 30.11 16:00-14:00 ʯʮʩʩyʡ .ʠʸ "ʣ 4 ʩʠʺ ʰʩʡʱ ʷʸ ʨʮ 7.12 16:00-14:00 ʯʮʩʩyʡ .ʠʸ "ʣ 5 ʭʩʩʢʥʬʥʩʡʭʩyʥʨ̫ ʴ ʺ ʥʮʩʫʥʩʥʤʩʦ

ʭʩʠʺ ʺ ʩʡʸ ʺ ʡ 14.12 16:00-14:00 ʯʮʩʩyʡ .ʠʸ "ʣ

6 ʭʩyʮ́ ʺ ʥʩʡʸ ʺ 21.12 16:00-14:00 ʸ ʡʢ .ʬy "ʣ 7 ʭʩʩʧʮʁ ʭʩʠʺ ʺ ʥʩʡʸ ʺ 4.1 16:00-14:00 ʷʩʦ.ʮy "ʣ 8 ʭʩʩhʢɦ ʰʸ ʨʭʩyʡʫ̡ 11.1 16:00-14:00 ʯʩʩʨ́ ʰʩʥ .ʩ 'ʴ ʥyʴ 9 ʧʥʮ̋ ʮ̫ ʸ ʥʭʩʠʺ ʺ ʥʩʡʸ ʺ 18.1 16:00-14:00 ʯʬʥʢ.ʧʸ "ʣ

10 ʺ ʥʮʥʣyʡʩʤ 25.1 16:00-14:00 ʸ ʥʣʢʥyʴ .ʠʸ "ʣ 11 ʤʩʢʥʬʥhʫʨʥʩʡʥʭʩʠʺ ʺ ʥʩʡʸ ʺ 1.2 16:00-14:00 ʭʩʩ̫ʬʠ .ʶ ʸ "ʣ 12 ʭʩʩyʡʥ̡ʨʡʰʩʠʺ 8.2 16:00-14:00 ʯʮʩʩyʡ .ʠʸ "ʣ

מעבדות:

הכנת תרביות תאים ראשוניות )פיברובלסטים ראשוניים מעור ומעוברי 1.עכברים(9:00-11:00 2.12ג' 12:00-16:00 1.12ב'

. תרביות תאים ראשוניות מעברים כמו אשכים ושחלות עכברים.29:00-11:00 17.12ד' 9:00-13:00 16.12ג'

. תגובות מיטוגניות ותגובה לגורמי גידול ספציפיים313:00-18:00 30.12ג' 8:00-12:00 25.12ה'

. תאי אב ממוח עצם והכוונת התמיינותם ע"י פקטורי גדילה ספציפיים.49:00-11:00 8.1ה' 13:00-18:00 30.12ג'

. תרבית רקמת מוח.513:00-15:00 2.2ב' 12:00-16:00 26.1ב'

תרביות רקמה 

את תרביות התאים המציאו בהתחלת המאה עשרים

כשיטה לחקר התנהגות של תאים ,(1912, 1907)

אנימליים ללא השפעת מערכות הגוף.

כולל (Tissue Culture)השם תרבית רקמה בתוכו:

(.Organ Culture )תרבית איברים. 1

.Cell Culture ) )םתרבית תאי . 2

של תרבית אברים תצביע על מבנה רקמה תלת מימדי     ·

הרקמה ללא פירוק, שכוללת בתוכה כל או חלק מהמבנה ההיסטולוגי

.IN VIVOשל הרקמה במצב

תרבית תאים תצביע על תרבית שמקורה בתאים לעומת זאת,      ·

ע"י פירוק מיכני, אנזימטי או ) שנלקחו מרקמה מקורית ,)כימי

.מתרבית ראשונית, או משורת תאים

HISTOTYPIC CULTURE

מצביע על כך שהתאים )מאותו סוג( עוברים ארגון מחדש כדי ליצור

מבנה תלת ממדי שדומה למבנה של הרקמה.

של התאים בבארות זריעה בצפיפות גבוהה :דבר זה נעשה ע"יפלטר,

של מונוליירים בפלסק או צלחת, פרפוזיה וגידול מוגבר

מעל אגר או מטרקס כמו קולגן.התקבצות בתרחיף

מושגים נוספים בתרבית רקמה:

1.      Monolayer – תאים נדבקים לסובסטרט ובתנאים כאלה הם מתחלקים ונותנים מרבד אחיד.

2.      Anchorage dependent – חייבים להדבק כדי לעבור חלוקה. כל סוגי התאים חוץ מתאי המערכת ההמופוייטית.

מקור תרביות רקמה:

יכולה לתת סוגי תאים רבים בתרביות . רקמה עוברית1ראשוניות.

 

מועילה בכך שנותנת שורות מתמשכות של . רקמת מכרסמים2תאים

ורפרטואר מרשים של גידולים.

היכולת לייסד שורות מתמשכות – . רקמה הומנית3

( מגידולים הומניים עודדה את השימוש Hela cellsשל תאים )

ברקמה הומנית.

כמו כן, היתה דחיפה נוספת כאשר פותחו

לסוגי תאים שונים כמו מצעי גידול חסרי סרום

קרטינוציטים אפיתליאליים ואפיתל ברונכיאלי

ותאי אנדוטל וסקולרי.

- . בעלי חוליות נמוכים וחסרי חוליות, שמרים וצמחים4חוליות נמוכים וחסרי חוליות , שנים רבות התעלמו מבעלי

התחילו להשתמש גם אך לאחרונה בגלל הייחודיות שבהם.בהם

חיפוש אחרי רעלים כנגד מזיקים

וההתפתחות הטכנולוגיה הגנתית הצביעו על חשיבותם של

. תרביות תאים מחרקים ושמרים

חקלאות דגיתיתרה מכך, החשיבות הכלכלית של

גרמה לזירוז מחקרים במחלות דגים. לכן פותחו גם

( .nonmammalian )תרביות תאים ממקור לא יונקים

סוגי תרביות רקמה

:קיימות שלוש שיטות עיקריות להתחלת תרבית

1.                        Organ culture הארכיטקטורה האופינית –

נשמרת לפחות בחלקה בתרבית. in vivoשל הרקמה

הרקמה גדלה במצע נוזלי ובנוכחות גזים

ששומר על המבנה השלישוני.

Organ culture ,שומר על אנטראקציה הסטולוגית -

אחרת הרקמה לא מייצגת.

2.     Primary explant cultureחלק מרקמה זו – גדל על זכוכית או פלסטיק. התאים גדלים לאט,

ובכל ניסוי יש צורך באקספלנטים חדשים ולכן הכימות הינו קשה יותר וכמות התרבית קטנה

יותר.

3.   Monolayer or suspension מתקבלת אחרי – פירוק של הרקמה המקורית לתאים בודדים. זו גם

צורת גידול של שורות תאים

יצירת שורות תאים מתרבית ראשונית מאפשרת:

עליה במספר התאים במשך מספר דורות.                        .1

עליה במספר התאים בעלי כושר חלוקה גבוה.                        .2

עליה בדרגת האחידות באוכלוסית התאים.                        .3 

.קבלת שורת תאים חדשה מלווה בדר"כ בשינויים פינוטיפיים

Explants

Monolayer

Suspension

הגורמים המעורבים בשינויים :in vitroהעיקריים

 . הרבה מהשינויים בהתנהגות התאים בתרבית 1

נובע

מניתוקם מהמבנה התלת מימדי הגיאומטרי וגידולם

.בסובסטרט דו-מימדי

. קיים איבוד של אנטראקציות ספציפיות. 2

מבחינה הסטולוגית התאים מאבדים מהמורפולוגיה שלהם

והופכים להיות עגולים ומתחילים להתחלק.

קיים איבוד של הרבה אנטראקציות הטרוטיפיים של תא-תא.

. איבוד קומפוננטות ספציפיות חשובות בבקרת3

, בעיקר אלו של מערכת in vivoההומיוסטזיס

העצבים והמערכת האנדוקרינית.

ללא מעורבות של פקטורים אלו, המיטבוליזם של התא נעשה

, אך אינו in vivoיותר קבוע בתרבית מאשר

מייצג את הרקמה ממנה הוא בא.