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临床医学五年制

实验诊断学

续 薇 教 授 博士生导师

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第三节

血细胞形态特征

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一、血细胞发育过程中形态演变的一般规律

• 血细胞发育规律（ 1）细胞体积 胞体逐渐由大变小（ 2）细胞质 ①量 ②颜色 ③颗粒（ 3）细胞核 ①大小②染色质③核仁④核膜（ 4）细胞核 /细胞质 由大变小

4红细胞的细胞成熟过程（其他血细胞的成熟过程基本相同）

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细胞体积

细胞质 细胞核 核质比值

量 颜色 颗粒 大小 染色质 核仁 核膜

一般变化

大↓小

少↓多

深蓝 ↓浅蓝、淡红

无↓有

大 规则↓ ↓ 小 不规则

疏松↓

致密

有↓无

不明显 ↓

明显

大↓小

特别变化

巨核小↓大

淋巴变化不大

红系变为桔红色

红系无颗粒

巨核： 小 ↓ 大红系： 核消失

巨核小↓大

血细胞发育一般规律

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二、血细胞的正常形态学特征

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骨髓中各系血细胞形态特征

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三、血细胞的细胞化学染色

•（一）过氧化物酶染色 (POX) （二）苏三黑 B 染色（ SB）•（三）中性粒细胞碱性磷酸酶染色（ NAP) （四）酸性磷酸酶染色 (ACP) （五）特异性酯酶染色 (SE) •（六）非特异性酯酶染色 (NSE)•（七）糖原染色 (PAS)•（八）铁染色

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1 、过氧化物酶染色（ POX）

H2O2 O2

联苯胺 联苯胺蓝 亚硝基铁氰化钠（无色） （胞浆中）

POX（细胞中）

+

原 理

蓝黑色颗粒

（试剂）

（蓝色）

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临床意义

•用于鉴别：急性白血病类型 急性淋巴细胞白血病（阴性） 急性粒细胞白血病 （强阳性） 急性单核细胞白血病（弱阳性或阴性）

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POX染色

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3 、中性粒细胞碱性磷酸酶染色（ NAP）

1. 偶氮偶联法

α萘酚 重氮盐 灰黑色沉淀

NAP（细胞内）

2. 钙钴法

NAP（细胞内）

磷酸钠硝酸钙

硝酸钴

硫化胺

不溶性棕黑色沉淀

（胞浆）

（胞浆）

+

+

原 理

β甘油磷酸钠

α磷酸萘酚钠

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临床意义 •正常人：积分＜ 80 （分）•鉴别慢性粒细胞白血病与类白血病•增高：急性化脓菌感染、类白血病反应、 急性淋巴细胞白血病；再生障碍性贫血。

•减低：急性粒细胞白血病；病毒感染、阵发性睡眠性贫血。

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原 理

α萘酚 重氮染料 不溶性有色沉淀

非特异性酯酶（细胞中）

（试剂） （试剂）

+

（胞浆中）

6 、 α醋酸萘酚酯酶染色（ α-NAE）

α醋酸萘酚

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临床意义

•用于鉴别： 急性单核细胞白血病（强阳性） 急性粒细胞白血病（阴性或弱阳性）

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7 、糖原染色（ PAS ）

原 理

糖原 醛基 + 品红

（胞浆中）（试剂）

过碘酸（试剂）

（细胞中）紫红色化合物

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临床意义

• 用于三种白血病类型鉴别• 急性粒细胞白血病（阴性或弱阳性）• 急性淋巴细胞白血病（阳性）• 急性单核细胞白血病（阳性）

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8、铁染色原 理

铁 铁氰化铁沉淀低铁氰化钾

（普鲁士蓝反应）

铁染色 存在部位

参考值 IDA 非 IDA

( 如感染）

铁粒幼细胞贫血

MDS-RA

细胞外铁细胞内铁

BM 小粒幼红细胞

+~++不定 65%

－<15%

>3~4+正常

>+++

>15%

>+++>15%

环铁 >15%

HCL+ +

（细胞内外）

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临床意义

• 诊断缺铁性贫血• 指导铁剂治疗

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四、细胞免疫分型

（一）检测方法•免疫荧光法•免疫酶染色法： APAAP（碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶）法 PAP（过氧化物酶抗过氧化物酶）法 ABC（亲和素 -生物素 -酶复合物）法

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1 、流式细胞仪计数

• 原理：将标本细胞用荧光标记制备成悬液，使荧光标记的细胞一个个地通过仪器的毛细管，分别辨认细胞形态大小和荧光特征，称为荧光活化细胞分选法。其优势是可快速地对大量细胞进行多参数定量分析。

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2 、碱性磷酸酶－抗碱性磷酸酶桥联酶标法 (APAAP)

• 原理：（ 1）特异性第一抗体（鼠抗人）单抗与标 本内的细胞抗原相结合、

（ 2 ）用第二（桥）抗体（兔抗鼠）与细胞抗原结合的第一抗体 结合、

（ 3 ）底物经酶作用、染色、脱水、透明、封片、镜检。

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3 、生物素－亲合素免疫细胞化学技术（ ABC ）

• 原理：（ 1 ）第一抗体为未标记的特异性抗体，能 与待测抗原结合。

（ 2 ）第二抗体为生物素化的桥抗体，能与第一抗体结合。

（ 3 ）第三抗体是结合了过氧化物酶的亲合素复合物（ ABC），

（ 4 ）底物、显色、脱水、透明、封片、镜检。

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CD是淋巴细胞和其他白细胞表达的表面抗 原分化群，即 cluster of differentiation简称， 1993年国际会议统一命名，现已有 CD1-CD78 。

（二）细胞免疫分型的临床应用

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1.识别不同系列的细胞• 髓系： CD33 ， CD34 ， CD13 ， CD14• 淋巴： CD4 ， CD8 ， CD10 ， CD19• 巨核、血小板： CD41 ， CD42• 红细胞：血型糖蛋白 A/B

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2. 识别不同的淋巴细胞：• T 细胞： CD4 ， CD8 ， CD2 ， CD3• B 细胞： CD19 ， CD20 ， CD22

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3. 识别 T 细胞亚群• 全 T 细胞： CD4 ， CD8• TH细胞 : CD4+,CD8- • TS细胞 : CD4-,CD8+• TSI细胞 : 诱导抑制 T 细胞 CD29低密 度表达• THI细胞：诱导辅助 T 细胞 CD29高密度表达

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4. 识别不同分化阶段的细胞•如造血祖细胞标志、 T 、 B 淋巴细胞不同分化阶段

5. 识别不同功能状态的细胞•如记忆 T 细胞，活化 T 细胞

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6. 对不同系列和不同分化阶段的细胞进行分离和研究7. 各种白血病细胞的免疫表型分析8.白血病微小残留病的检测

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（三）急性白血病免疫表型特点

CD19 CD7 CD33 CD13 HLA-DR TdT

B-ALL + – – – + +/ –

T-ALL – + – – –/+ +

AML – –/+ + + + –

1. ALL 与 AML细胞免疫表型特点

注：少数 AML（ <10%） CD7可为阳性；少数 AML（M1型） TdT可为阳性；少数 T-ALL（ <10%）可为 HLA-DR表达。

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2.急性淋巴细胞白血病（ ALL）免疫表型特点 系 列 亚型 主要的蛋白标记 B 系列 早期 B 型 CD19

+ ， CD10-

普通型 CD19+ ， CD10

+

前 B 型 CD19+ ， 胞质链 +

T 系列 B 细胞型 CD19+ ， 胞膜 Ig+

前 T 型 CD7+ ， CD2

-

T 细胞型 CD7+ ， CD2

+

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3. 急性髓细胞白血病的免疫学分类亚 型 典 型 的 蛋 白 标 记 M0 CD 34 ,33 ,13

M1 CD 34,33,13

M2 CD 34,33,15,13

M3 CD 33,13(HLA-Dr 阴性 )

M4 CD 34,33,15,14,13

M5 CD 33,15,14,13

M6 CD 33 血型糖蛋白 M7 CD 33,41,42 ， 61

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五、细胞遗传学分析（一）染色体检查方法

（二）染色体分析

1.染色体命名

2.核型分析及其书写

3.染色体畸变

（三）临床常见白血病的染色体改变

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急性白血病 染色体异常 见于各种亚型 预后价值急性髓细胞白血病 t(8;12) M2 预后较好 t(15;17) M3 同上 inv(16);del(16q) M4E0 同上 + 8 各种亚型 预后不良 +21 M1,M7

+13 双表型 预后不良 5q–,–5, –7 继发性白血病 同上 t(8;16) M5b 同上 t(9;22) M1等 同上 t(4;11) 双表型 同上

急性白血病常见的染色体异常

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急性白血病 染色体异常 见于各种亚型 预后价值急性淋巴细胞白血病 t(4;11) L2 预后不良 t(1;9) L1 预后较好 t(8;14) L3 预后不良 超二倍体 L1 L2 预后较好 t(9;22) 同上 ， 预后较好 t(10;14) T 细胞型

急性白血病常见的染色体异常

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要 点：

• 1 、血细胞发育规律• 2 、正常血细胞形态特征• 3 、常用细胞化学染色的方法及临床意义

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