马铃薯病毒检测试剂盒应用技术示范推广基地

黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所

国家引进国外智力成果示范推广基地项目

一、申请单位基本情况

1. “ 中心”成员组成情况 职工总人数 30 人 ，中级职称 8 人，高级职称 8 人 其中：硕士 8 人，博士 3 人2. “ 中心”基本工作内容 承担农业部脱毒马铃薯种薯质量监督检验测试中心的任务 承担全国范围内的脱毒马铃薯种薯质量检验、仲裁检验、委

托检验、市场抽检 马铃薯质量检测标准制定与修订 开展技术咨询，业务培训等工作

3. “ 中心”申请项目获奖情况 “ 应用高新技术拓宽马铃薯种质与脱毒种薯的开发研究”获黑

龙江省重大项目获省科技进步三等奖。 2004 年“免疫技术制备马铃薯病毒检测试剂盒”国际合作项目

获黑龙江省农业科技成果一等奖。 2006 年 “马铃薯原原种生产技术”获省农业科技成果一等奖。 2007 年“马铃薯环腐病检测试剂盒的研制”获省农业科技成果

一等奖。 2008 年“马铃薯类病毒检测试剂盒的研制”获省农业科技成果

一等奖。

一、申请单位基本情况

一、申请单位基本情况

4. 标准起草情况国家标准： 2003 年“马铃薯种薯产地检疫规程” 2007 年“脱毒蒜种” 2009 年“马铃薯脱毒种薯” 2009 年“马铃薯种薯真实性和纯度鉴定 -SSR 标记” 行业标准： “ 马铃薯纺锤块茎类病毒检测方法” 地方标准： 8 项

二、马铃薯病毒检测试剂盒的研制情况

1. 引智成果来源 主要来源 国际合作项目：免疫技术制备马铃薯病毒检测试剂盒 辅助项目 2004 年引进国际先进农业科学技术项目：马铃薯病毒检测试剂盒的

引进 2005 年度引进国外技术、管理人才项目：马铃薯病毒检测试剂制备

技术 外派项目：马铃薯种薯标准化质量检测体系 2008 年黑龙江省引智基地项目：马铃薯病毒检测试剂盒应用技术示

范推广基地

二、马铃薯病毒检测试剂盒的研制情况

2. 技术人员的引进与派出情况2.1 技术人员的引进 2001 年 CIP 的 Dr. Salazar 来华指导病毒检测技术 2002 年 CIP 的 Dr.Wobalie 来我实验室参观指导 2005 年 CIP 的 Dr. Salazar 来华指导 PVY 病毒提纯 2008 年 CIP 的 Dr. Salazar 来华指导病毒抗血清标记

二、马铃薯病毒检测试剂盒的研制情况

2.2 技术人员的派出 2004 年 4 月 19 日 -5 月 7 日：“中心”派 2 名科技人员

到 CIP 进行“马铃薯病毒检测 ELISA 试剂盒制备”技术培训。

2006 年 1 月 4 日 -2 月 24 日：“中心”派 2 名技术人员赴 CIP 学习马铃薯病毒检测试剂盒的组装技术。

2007 年 8 月 13 日：省政协主席曹广亮率黑龙江省代表团 7 人一行对 CIP 进行考察。

二、马铃薯病毒检测试剂盒的研制情况

3. 完成马铃薯病毒检测试剂盒的研发 培养了一批高素质的技术人员，目前全年专业从事该项

研究的有 8 人。 环境设施具备、仪器设备齐全。 马铃薯病毒检测试剂盒的制备与组装技术已经成熟。 形成的试剂盒产品国际先进，国内领先。

二、马铃薯病毒检测试剂盒的研制情况

4. 试剂盒推广应用市场分析4.1 优势竞争地位，经济效益显著 国外马铃薯病毒检测试剂盒相当昂贵，平均每个反应 2美元 国内尚无合格的马铃薯病毒检测试剂盒 我“中心”生产的试剂盒有 CIP的技术保证，利用国内的条件、试剂和人力生产的试剂盒成本低，每个反应只有 3.5元

国内目前每年 100万个反应的检测市场 ，用国产试剂盒检测可节省 1000万元，直接经济效益将逾百万。

二、马铃薯病毒检测试剂盒的研制情况

4. 社会效益与经济效益分析

4.2 国内潜在市场需求巨大，社会效益显著 检测的种薯质量有保障，产量会明显提高，同时会延长

种薯的种植年限，每延长种植一年效益递增 10倍。 检测也推进了种薯生产地规范和市场管理的有效实施，将有利于提高中国种薯的国际市场竞争力。

按国际标准，中国马铃薯种薯每年应有 3000万份检测样品，每个样品检 4 种病毒就是 1.2亿个反应，因此市场发展空间非常大。

三、马铃薯病毒检测试剂盒成果转化情况

获奖：免疫技术制备马铃薯病毒检测试剂盒项目，获省农业科技进步奖 一等奖。

申报国家专利：马铃薯 PVX 、 PVY 、 PVS 、 PLRV 病毒诊断试剂制作工艺方法。

获得农业部成果转化项目：马铃薯病毒检测试剂盒成果转化。 科技部立项：马铃薯病毒检测试剂盒中试和推广项目。 深化合作： 2007 年黑龙江省农科院韩贵清院长访问 CIP ，并

与 CIP 总裁 Andeson就试剂盒的合作问题签署了备忘录。 试剂盒销售：试剂盒已经推广到全国马铃薯主产区十几个省份，

总量达到 3200套，需要进一步加大推广力度。

四、马铃薯病毒检测试剂盒成果转化推广方式

应用： 2003-2008连续 7 年应用于农业部脱毒种薯质量 安全普查工作中，使用试剂盒 30套。 培训：举办了 8次培训班，共培训来自全国各地的 198

人次 。 2008 年培训范围扩展到 6 个发展中国家。 销售：提供科研单位、种薯生产企业使用试剂盒，产 品质量得到肯定。 服务：受一些企业委托，用病毒试剂盒执行种薯生产 过程质量监督，保证了种薯质量，得到用户认可。

五、示范推广计划

市场策划结合产业特点：以技术培训为载体进一步加强推广试剂盒的力度，技术培训、试用试剂盒作为主要营销手段。

有针对性地选择客户：培训对象锁定试剂盒使用高密群体，如：种薯生产单位、马铃薯质量检测单位和种薯质量监督管理部门。

循序渐进培养市场：推动中国检测体系的建立将使检测试剂水到渠成地得到推广。在各主产区协助建立单位内部检测体系，以点带面拉动整个种薯生产体系与质量检测紧密结合，逐步使质检深入人心，从而也占有了试剂盒市场。

五、示范推广计划具体措施：2010 年：培训 60 人，普查 3 个马铃薯优势省份， 5 个重点企业种薯生产 质量监督，试剂盒推广应用 50套。2011 年：培训 60 人，普查 3 个马铃薯优势省份， 5 个重点企业种薯生产 质量监督，试剂盒推广应用 75套。2012 年：培训 60 人，普查 3 个马铃薯优势省份， 5 个重点企业种薯生产 质量监督，辅助建设质检中心 1 个，试剂盒推广应用 100套。2013 年：培训 60 人，普查 3 个马铃薯优势省份， 5 个重点企业种薯生产 质量监督，辅助建设质检中心 1 个，试剂盒推广应用 100套。2014 年：培训 60 人，普查 3 个马铃薯优势省份， 5 个重点企业种薯 生产质量监督，辅助建设质检中心 1 个，试剂盒推广应用 100套。

六、整个项目实施过程的说明性图片 1.“ 中心”的办公和实验大楼

六、整个项目实施过程的说明性图片2. 技术人员的引进与派出2.1 引进技术

图 1 2001 年 7 月专家来华指导病毒检测技术图 2 CIP Dr.Wobalie 来我实验室参观指导

图 3 2005 年专家来华指导 PVY 病毒提纯 图 4 2008 年专家来华指导病毒抗血清标记

六、整个项目实施过程的说明性图片2.2 派出学习

图 5 2004 年课题组成员在 CIP 学习 图 6 Dr.Salazar 博士专家做报告

图 7 CIP给我方学员颁发培训合格证书图 8 2006 年课题组成员在 CIP 学习

六、整个项目实施过程的说明性图片3. 马铃薯病毒检测试剂盒的制备3.1 病毒提纯

图 9 病毒样品在液氮下冷冻研磨

图 10 密度梯度离心病毒 图 11 提纯后获得的高纯度病毒蛋白

六、整个项目实施过程的说明性图片3.2 免疫家兔制备抗血清

图 12 免疫家兔 图 13 耳静脉取血

图 14 兔血 图 15 粗血清

六、整个项目实施过程的说明性图片3.3 IgG 提取和酶标记

图 16 硫酸铵沉淀病毒 IgG 图 17 磷酸盐透析

图 18 取 1mg/mL IgG 进行标记 图 19 酶标记实验

六、整个项目实施过程的说明性图片

3.4 ELISA 验证试验

图 20 实验设计模型 图 21 DAS-ELISA 测定

六、整个项目实施过程的说明性图片3.5 马铃薯病毒检测试剂盒的组装

图 22 试剂盒缓冲试剂的准备

图 23 病毒抗血清的组装 图 24 马铃薯病毒检测试剂盒

六、整个项目实施过程的说明性图片4 、马铃薯病害检测技术培训班

图 25 2004 年国际马铃薯种薯标准化生产技术学术交流及质量检测技术培训班

六、整个项目实施过程的说明性图片4 、马铃薯病害检测技术培训班

图 26 2005 年荷兰马铃薯种薯质量检测技术培训班结业合影

六、整个项目实施过程的说明性图片4 、马铃薯病害检测技术培训班

图 27 2008 年 7 月 9-16 日马铃薯病害检测技术国内培训班

六、整个项目实施过程的说明性图片4 、马铃薯病害检测技术培训班

图 28 2008 年 9 月 15-28 日马铃薯病害检测技术国际培训班

六、整个项目实施过程的说明性图片5 、马铃薯病毒检测试剂盒的推广应用

图 29 、 2005 年荷兰 NAK公司田检员讲授种薯田间检验技术

六、整个项目实施过程的说明性图片5 、马铃薯病毒检测试剂盒的推广应用

图 30 、 2006 年在内蒙古大雁种薯田开展田间检测

六、整个项目实施过程的说明性图片5 、马铃薯病毒检测试剂盒的推广应用

图 31 、 2008 年在牡丹江商品薯田开展田间检测

谢谢各位专家评委