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NeuroScience
Hormondiagnostik im Speichel Teil I
www.salivatest.eu
Cortisol
Östradiol
Testosteron
Progesteron
DHEA
NeuroScience
Steroidhormone
Hormon-Diagnostik aus Saliva
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Endokrine Regulation
Hypophysenvorderlappen
Hypophysenhinterlappenn
Hypothalamus
Hypophysenstiel
ACTH
LH, FSH
Nebennieren-rinde
GonadenPlacenta
CortisolDHEA
TestosteronEstradiol, Progesteron
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Cortisol
Testosteron
Estradiol
Progesteron
DHEA
Nebennieren
Männer: Testes, NebennierenFrauen: Ovarien, Nebennieren
Männer: Testes, Nebennieren, FettgewebeFrauen: Ovarien, Placenta,
Nebennieren, Fettgewebe!!!
Männer: Testes, Nebennieren, Gehirn
Frauen: Corpus luteum, Placenta, Nebennieren, Gehirn
Nebennieren 75-90%, Hoden, Ovarien,Gehirn
Steroidhormone: SyntheseorteSteroidhormone: Syntheseorte
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NeuroScience
Hormon-Diagnostik aus Saliva
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NeuroScience
Saliva
Hormon-Diagnostik aus Saliva
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Gl. submandibularis
Glandulae salivariae majores
Wo wird Saliva gebildet?
NeuroScience
Gl. parotidea
Gl. sublingualis
Hormon-Diagnostik aus Saliva
kleine Speicheldrüsen in der Wand der Mundhöhle
Hormon-Diagnostik aus SalivaWie wird Saliva gebildet?
NeuroScience
reflektorische Anregung der Speichelproduktion
NeuroScience
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Blood SalivaSpeichel:Freie Steroide
Blut:Gebunde + freie Steroide
Membran
Membran
Blut – Speichel – TransferBlut – Speichel – TransferWie gelangen Steroidhormone in den Speichel?
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Speichel-Steroid-Bestimmungen• Saliva reflektiert besser die aktiven steroidalen
Hormone im Körper als im Blut oder Urin• Saliva: stabil, da weniger degradierende Enzyme, • Probengewinnung
– nicht-invasiv, stressfrei– mehrfach, jederzeit – überall, ohne Hilfe durch med. Personal– von Problempatienten, Kindern, Senioren– während Belastung oder Ruheperioden ideal für Screening
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Steroide in Blut und Speichel
• Gesamt-Steroide • Modifiziert
durchBindungsproteine • 95 - 98% der Steroide
biologisch inaktiv• Glanduläre Produktion• Analytische Probleme bei
niedrigen Konzentrationen
• Freie Steroid-Fraktion• Unabhängig von
Bindungsproteinen • Biologisch aktive Hormon-
Fraktionen• Zelluläre Verfügbarkeit• Sensitive Bestimmung mit
Lumineszenz-IA
Blut Speichel
Salivatest
störende Faktoren
Präanalytik
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0 0,01 0,019 0,038 0,075 0,156 0,312 0,625 1,25 2,5 %
Blut enthält mehr als die 50fache Konzentration jedes Steroidhormons Kontaminationen von Speichel-Proben mit Blut müssen ausgeschlossen werden
Blutkontamination (2)Blutkontamination (2)
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Dynamik der SteroidsekretionLangzeit-Fluktuation Monatsprofile: Estradiol, Progesteron Tagesprofile: Cortisol (Testosteron, DHEA)
Kurzzeit-Fluktuation Pulsatilität in Perioden von 60 bis 240 Minuten
Testosteron Estradiol Progesteron DHEA
Gewinnung von 3 Proben im Abstand von 30 Minuten Messung eines Aliquots einer Speichel-Mischprobe
Tagesprofil
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Kurzzeit-Fluktuation
Tages-Feinprofil: Frau nach Hysterektomie
1
10
100
1000
10000
100000
26.9.047:12
26.9.049:36
26.9.0412:00
26.9.0414:24
26.9.0416:48
26.9.0419:12
26.9.0421:36
27.9.040:00
27.9.042:24
Tageszeit (Uhr)
Ko
nze
ntr
atio
n. (
pg
/mL
)Cortisol
DHEA
Progesterone
Testosterone
Estradiol
Pulsatilität von Steroidhormonen
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NeuroScience
PräanalytikPräanalytik
Polypropylengefäße verwenden (e.g. SaliCap).
Keine Watte oder Röllchen aus Baumwolle verwenden.
Speichelprobe vor dem Zähneputzen oder frühestens 30 min danach sammeln.
Speichelprobe frühestens 30 min nach dem Essen oder Trinken sammeln.
3Speichelproben innerhalb von 60 min sammeln.
Kontaminationen durch Blut vermeiden (auch keine schwach rot gefärbten Proben verwenden).
Speichelproben für die Bestimmung von Steroiden können wie folgt aufbewahrt werden:
minimal 1 Woche bei Raumtemperatur - minimal 2 Wochen bei 2 - 8 °C- längere Zeiträume bei -20 °C
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Frauen Mit normalem Zyklus: 19, 20 oder 21.
Zyklustag
Bei Zyklusunregelmäßigkeiten: 5 Tage vor erwarteter Blutung
Ohne Periode: jeder Tag möglich
Männer jeder Tag möglich
Cortisol und DHEA an beliebigen TagenNeuroScience
Entnahmezeitpunkte
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PräanalytikPräanalytik
Aliquotierung
• Aus den drei Röhrchen erbitte ich eine ALIQUOTIERUNG und nur insgesamt 1 x E2, Prog., Test., DHEA
• Prämeno O • Postmeno O ( 1 Jahr keine Menstruation mehr )• Zufuhr von Hormonen ja O nein O ( Hormoneinnahme in den letzten 4 Wochen )
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NeuroScience
Analytik
Hormon-Diagnostik aus Saliva
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Steroidhormone im Speichel
Freies Cortisol
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0 5 10 150
2
4
6
8
10
12
14
Zeit nach Aufwachen [h]
Corti
sol [
ng/m
L]
Mittlere Aufwachzeit
Langzeit-Fluktuation
Tagesprofil für Cortisol (n=110)
Westermann et al.:, Clin.Lab.2004,50,11-24
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Salivatest
Hormon-Diagnostik aus Saliva
Late-Night-Speichel-Cortisol-Spiegel =
einfacher und zuverlässiger Screening-Test
zur Diagnose eines Cushing-Syndroms
Referenzbereiche für Speichel-Cortisol:
23 Uhr: Normalbereich: < 1 ng/mL Graubereich: 1 - 3 ng/mL Pathologischer Bereich: > 3 ng/mL
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Cortisol-Tagesrhythmus in Abhängigkeit vom Aufwachzeitpunkt
0
2
4
6
8
10
12
14
16
4 6 8 10 12 14 16 18
Time of day [h]
Salivary
Co
rtis
ol [n
g/m
l]
0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0
0
10
20
30
40
peak delay [hours]
nu
mb
er
Zeitintervall nach dem Aufwachen bis zum Erreichen des max. Cortisolpeaks110 gesunde Probanden
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Physischer Stress
0 60 120 180
10
20
30
40
50
Cortisol im Speichel
Ko
nze
ntr
atio
n in
nm
ol/l
Proband 1Proband 2Proband 3
Zeit in Minuten
Proband 1: 53-jähriger untrainierter Mann
Proband 2: 25-jähriger gut trainierter Mann
Proband 3: 35-jähriger gut trainierterRadsportler
B … steigende Belastung
B
Belastung mittels Fahrradergometer
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Physischer Stress (2)
Mittelwert:Mittelwert: Anstieg des Cortisols über 3 h Verfünffachung des Ausgangswertes nach Beendigung des Laufes Abfall 5 h nach Laufende auf den üblichen Durchschnitt
05
101520
253035
4045
8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24
Ko
nze
ntr
atio
n i
n n
g/m
l
Marathon Kontroll-Tag
Lauf
Extreme körperliche Belastung: 18 Marathonläufermodifiziert nach Cook et al. in „Assesment of hormones and Drugs in Saliva in Biobehavioral Research, Hogrefe & Huber, Seattle 1992
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Steroidhormone im Speichel
Freies Testosteron
7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
pg/ml Saliva
Tageszeit
0
20
40
60
80
100
120
140
+/- 1
Sta
n da r
d ab w
eic h
u ng
Testosteron im SpeichelTagesprofil (18 Männer)
NeuroSciencewww.IBL-Hamburg.com
Testosteron im SpeichelJahresprofil (35-jährige Männer)
NeuroScience
0
50
100
150
200
10.12.2002 20.03.2003 28.06.2003 06.10.2003 14.01.2004
pg/ml
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18 - 29 years30 - 39 years40 - 49 years50 - 59 years60 - 69 years
20
40
60
80
100
120
Co
nce
ntr
atio
n in
pg
/ml
18 - 29 years30 - 39 years40 - 49 years50 - 59 years60 - 69 years
0
10
20
30
40
50
Co
nce
ntr
atio
n in
pg
/ml
Männer: Konzentration nimmt mit zunehmendem Alter ab Frauen: Konzentration ist 3- bis 5mal niedriger und
weniger abhängig vom Alter
287 Männer 249 Frauen
Geschlecht und Alter
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Mittlere Speichel-Testosteron-Konzentration bei gesunden Männern (Alter: 21 - 50 Jahre) und bei Patienten mit androgener Defizienz (Alter: 22 – 68 Jahre)
Non-Outlier MaxNon-Outlier Min
Median; 90%10%
pg
/ml
-20
20
60
100
140
180
220
healthy androgen deficiency
P=0.0000
Hypogonadismus
Goncharov et al.: Salivary Testosterone Measurement: Diagnostic Significance and Diagnostic Strategy
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Hirsutismus
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
nmol/l µmol/l nmol/l pmol/l pmol/l : 10
Testosteron, Serum DHEA-S, Serum Androstendion, Serum Freies Testosteron,Serum
Freies Testosteron,Speichel
Gesunde Frauen (n = 19) Frauen mit Hirsutismus (n = 50)
Osredkar et al., 1989
Androgen-Konzentrationen bei Frauen
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Physischer Stress
0
20
40
60
80
100
120
8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24
Ko
nze
ntr
atio
n i
n p
g/m
l
Marathon Kontroll-Tag
Speichel-Cortisol
Speichel-Testosteron
Cook et al in „Assesment of hormones and Drugs in Saliva in Biobehavioral Research, Hogrefe & Huber, Seattle 1992Cook et al in „Assesment of hormones and Drugs in Saliva in Biobehavioral Research, Hogrefe & Huber, Seattle 1992
Lauf
05
101520
253035
4045
8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24
Ko
nze
ntr
atio
n i
n n
g/m
l
Marathon Kontroll-Tag
Lauf
18 Marathonläufer (Mittelwert)
Früherer Anstieg der Testosteron- Spiegel im Vergleich zu den Cortisol-Konzentrationen Verdoppelung des Basisniveaus Abfall 1 h nach Ende des Laufes unter Durchschnitt
11. April 2023 www.IBL-Hamburg.com 36
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Co
nc
. in
ng
/ml
0100200300400500600700800900
1000
Co
nc
in
pg
/mL
0
50
100
150
200
250
300
350
Co
nc
. in
pg
/mL Testosteron
aus Speichel
DHEA aus Speichel
Lauf
Lauf
Lauf
Nomalbereich: 30-92
Normalbereich: 99-463
Normalbereich: 0,3-3,3Wenig trainierter Mann(Alter: 52 Jahre) während eines 50-Minuten-Laufes
Physischer StressPhysischer Stress
Cortisol aus Speichel
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Steroidhormone im Speichel
Freies Progesteron
N = 27 Alter:19 – 43 Jahre
Progesteron
NeuroScience
pg/ml Saliva
Tag des Menstruationszyklus
0
50
100
150
200
250
Blutung 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29
zyklusabhängige Veränderungen der Hormonkonzentration im Speichel
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Schwangerschaft
letzte 2 Monate
0
500
1000
1500
2000
2500
Pro
ge
ste
ron
im
Sp
eic
he
l (p
g/m
L)
Entbindung
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Progesteron im Speichel: Normalbereiche
Konzentration Konzentration in pg/mlin pg/ml
WeiblichWeiblich
PrämenopausalPrämenopausal
Follikel- Follikel- phasephase
28 – 8228 – 82
Luteal- Luteal- phasephase
127 – 446127 – 446
PostmenopausalPostmenopausal 18 – 5118 – 51
MännlichMännlich < 51< 51
Abhängigkeit von Geschlecht und Menstruationszyklus
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Steroidhormone im Speichel
Freies Estradiol
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Menstruationszyklus
18 Frauen, 19 – 43 Jahre alt
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
-14 -12 -10 -8 -6 -4 -2 0 2 4 6 8 10 12 14
Tag des Menstruationszyklus
Estr
adio
l (pg
/ml)
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OCP 1st dayOCP 4th day Stim A Stim B Stim C Retrival Preg
0
20
40
60
Saliva 17ß-Estradiol, In Vitro Fertilisation
Con
cent
ratio
n in
pg/
ml
Estradiol aus Speichel Progesteron aus Speichel
OCP 1st dayOCP 4th day Stim A Stim B Stim C Retrieval Pregnancy
0
200
400
600
800
1000
Saliva Progesterone, In Vitro Fertilisation
Con
cent
ratio
n in
pg/
ml
In-vitro-Fertilisation
Stimulations-Protokoll, Ei-Entnahme und Schwangerschaft
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Steroidhormone im Speichel
Freies DHEA
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Geschlecht und Alter
19-29 30-39 40-49 50-59 60-80 Years
100
200
300
400
500
600
DHEA in Saliva of Male, Age Dependence
Co
nce
ntr
atio
n in
pg
/mL
DHEA-Konzentration sinkt bei Männern und Frauen mit zunehmendem Alter
249 Männer
21-39 40-59 60-75 years
0
200
400
600
800
Age Dependence of Saliva DHEA of Females
Co
nce
ntr
atio
n in
pg
/mL
106 Frauen
Salivatest
DHEA (Dehydroepiandrosteron)
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Langzeit-Fluktuation
awaked +30 Min. +45 Min. 9 am 11 am 3 pm 10 pm
500
1000
1500
2000
2500
3000
DHEA in Saliva, Daytime Profile
Concentr
ation in p
g/m
l
Tagesprofile (16 junge, gesunde Probanden)
awaked +30 Min. +45 Min. 9 am 11 am 3 pm 10 pm
2
4
6
8
10
12
14
16
Cortisol in Saliva, Daytime Profile
Concentr
ation in n
g/m
l
Freies Cortisol
Freies DHEA
-Die höchsten DHEA- Konzentrationen werden mit dem Aufwachen gefunden-DHEA und Cortisol zeigen unterschiedliche Morgen-Peaks
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DHEA Test: Normalbereiche
Alter in JahrenAlter in Jahren Konzentrationen in pg/mlKonzentrationen in pg/ml
MännlichMännlich WeiblichWeiblich4 – 94 – 9 0 – 1150 – 115
10 – 1310 – 13 13 – 31213 – 312
14 – 1914 – 19 38 – 72838 – 728
19 – 3019 – 30 154 – 620154 – 620 78 – 78478 – 784
31 – 4031 – 40 139 – 573139 – 573
41 – 5041 – 50 133 – 490133 – 490 80 – 63280 – 632
51 – 6051 – 60 99 – 46299 – 462
61 – 8061 – 80 50 – 18050 – 180 38 – 48738 – 487
Abhängigkeit von Geschlecht und Alter
Wie wird Speichel gewonnen
7.5.08
Qualitätsverbund Komplementärmedizin
Internetmarketing
www.hormon-balance.dewww.hormonrechner.de
www.salivatest.euwww.be-balanced.euwww.partnerarzt.de
www….
Hormonrechner
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Testosteron imSpeichel: Normalbereiche
Alter in Jahren
Konzentration in pg/mlKonzentration in pg/ml
Männlich Weiblich
20 – 29 41,4 – 142,5 5,5 – 49,0
30 – 39 31,8 – 100,4 5,2 – 49,0
40 – 49 30,1 – 97,8 4,5 – 49,0
50 – 59 30,0 – 92,0 3,6 – 49,0
60 – 69 23,2 – 86,9 2,9 – 38,8
Abhängigkeit von Geschlecht und Alter
