ООО РегенексРоссийский Национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. ПироговаОтдел клеточных технологий и регенеративной

медицины

С.Н. БыковскаяТерапия множественного склероза и подавление

реакции отторжения трансплантата (РТПХ) вакцинами регуляторных Т клеток

CD4+CD25+FoxP3+

Описание проблемы• Множественный склероз (МС) представляет собой

аутоиммунное заболевание, которое поражает головной и спинной мозг , что приводит к потере мышечного контроля, зрения, баланса, и чувствительности.

• Множественным склерозом обычно заболевают в возрасте от 20 до 30 лет.

• Стоимость лечения МС в США оценивается в более чем $10 миллиардов ежегодно.

• Стоимость лечения одного больного на протяжении всей длительности заболевания оценивается в $2.2 миллиона.

• Количество больных: 400,000 в США и 2.5 миллиона во всём мире.

• Заболеваемость: 1 на 700 человек• Согласно данным ассоциации «Множественный склероз»

отмечается около 10,000 новых случаев в год http://www.fda.gov/bbs/topics/news/2004/NEW01141.html

Заболевание РС распространено в Европе, Северной Америке, Австралии, и Новой Зеландии. , Хотя МС встречается в Японии, Китае и некоторых других восточных

странах, оно крайне редко на Востоке по сравнению с Западом. Регионы, расположенные к 40 градусам Северной долготы, характеризуются заметно более

высокой заболеваемостью, чем южные страны. Высокая заболеваемость отмечается в европейских странах, особенно в Скандинавии, на Британских островах, на юге Европы

и в Германии. Канада, северные районы США, Новая Зеландия, имеют эквивалентно высокую распространённость. Чрезвычайно высокая заболеваемость РС выявляется в пограничных районах Шотландии (203 на 100.000), Crowsnest Pass in Alberta, в Канаде

(217 на 100,000), самая северная провинция Швеции, (253 на 100,000) и др.

Специфическое лечение отсутствует, применяемая в настоящее время терапия неэффективна и не излечивает заболевание, и только укорачивает длительность периода обострения

Регуляторные Т клетки контролируют иммунный ответ на аутоантигены, предотвращая таким образом развитие аутоиммунных реакций и минимизируя Т клеточную иммунопатологию.

• Строгой регуляторной активностью обладают CD4 T клетки, которые постоянно экспрессируют высокоафинный рецептор, альфа цепь IL-2, CD25, и продукт гена FoxP3, постоянный маркёр Т рег (CD4+CD25+FoxP3+).

• У пациентов с МС выявлен дефицит регуляторных Т клеток CD4+CD25+FoxP3+ У больных снижено не только количество, но и их супрессорная функция

Решение проблемы – лечение Т регуляторными клетками

По нашим данным, количество Т регуляторов в периферической крови больных значительно снижено в стадии обострения и увеличивается в стадии ремиссии

CD+CD25+FOXP3+ %

периферичес кая кров ь

Median 25% -75% Non-Outlier Range

О бос трение Ремис с ия Д оноры-1

0

1

2

3

4

5

6

Обострение ремиссия доноры

C orre lation: r = -,7175

0 1 2 3 4 5 6

EDSS

0,0

0,5

1,0

1,5

2,0

2,5

3,0

3,5

4,0

4,5

5,0

CD

4+C

D25+

Fo

xp

3+

95% confidence

Рассеянный склероз: негативная корреляция между стадией заболевания и (X axis, скоры EDSS) и содержанием в крови больных Т клеток CD4+CD25+FoxP3+ (Y axis)

C orre lation: r = -,6891

-20 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220

длите льность РС

0,0

0,5

1,0

1,5

2,0

2,5

3,0

3,5

4,0

4,5

5,0

CD

4+C

D25+

Fo

xp

3+

95% confidence

Негативная корреляция между количеством регуляторных Т-клеток CD4+CD25+Foxp3+ в периферической крови больных (Y axis) и длительностью РС (X axis, месяцы)

Регуляторные Т клетки CD4+CD25+Foxp3+ играют критическую роль в развитии аутоиммунных заболеваний

Дефицит регуляторных Т клеток в организме больного можно компенсировать. Клетки

предшественники Т регуляторов можно выделить из периферической крови

пациента, вырастить ex vivo и ввести обратно

Благодаря своим супрессорным характеристиками, Т рег клетки становятся привлекательны для адаптивной иммунотерапии при аутоиммунных заболеваниях. Существуют многочисленные исследования в моделях на животных, где показана эффективность применения этих клетокАдаптивно перенесённые T регуляторы• лечат колит (Mottet C. e.a., 2003), • останавливают диабет в начале заболевания (Tang Q e.a., 2004), • подавляют экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (Kohm A.P. e.a.,), • замедляют прогрессию коллаген-индуцированного артрита в эксперимерте (Morgan M.E. e.a., 2005)• предотвращают развитие РТПХ (Cohen J.L. e.a. 2002,) и отторжение трансплантата (Hara M. e.a., 2001).

Индукция CD4+CD25+Foxp3+ T клеточных клонов

Выделение мононуклеарных клеток кровив градиенте плотности

Забор крови больного

Коньюгация CD4+ Т клеток с магнитными шариками

Выделение клеток предшественников в магнитном поле (98-99% )

Индукция Т рег CD4+CD25+Foxp3+ в среде RPMI-1640 с 5% сыворотки больного в присутствии ростовых факторов

Иммунофенотипическийанализ клеток

Подкожная инъекция клеток пациента

Рассеянный склероз: Результаты инъекций полученных ex vivo CD4+CD25+FoxP3+ Tрегуляторов

Боль-ные

Воз-раст

Скоры EDSS,

(перединъекц

ией клеток)

Количество Т регуляторо в

периферичес-кой крови в

перед инъекцией

Количество введённых больному

клеток CD4+CD25+

Foxp3+ x107

Количество Т регуляторов

в периферичес-

кой крови через 2

недели после инъекции

клеток

Скоры EDSS, после инъек-

ции клеток

T.M., 26

2.5 0.7% 355 1.1% 1.5

E.T.,33

2.5 0.7% 400 1.5% 1.0

A.Z., 29

3.0 0.4% 273 1.1 % 2.0

A.C., 37

3.0 0.4% 250 1.4% 1.5

Девочка (1 год) с диагнозом Миелодиспластический синдром, у которой после пересадки костного мозга развилась кожная форма «Реакции трансплантат против хозяина», III cтадия

18 дней после одной инъекции регуляторных Т клеток

Заключение

• Мы не отметили каких-либо различий между количеством выращенных регуляторных Т клеток у больных по сравнению с клетками здоровых доноров

• У пациентов не зарагистрировано каких-либо побочных эффектов после инъекции регуляторных Т клеток

• Клеточная терапия сопровождалась клиническими улучшениями

• Адаптивный перенос T регуляторных клеток может предотвратить обострение и лечить многие воспалительные и аутоиммунные заболевания

• Т регуляторные клетки больного, размноженные ex vivo, могут быть использованы для индукции донор-специфической трансплантации

Применение технологии Regenex при других заболеваниях

• Неспецифический язвенный колит, болезнь Крона• Диабет I типа• Ревматоидный артрит• Псориаз• Болезнь Шёгрена• Аллергические заболевания, бронхиальная астма• Подавление реакции трансплантат против хозяина

(РТПХ)• Подавление отторжения трансплантата при пересадках

почки, сердца, лёгких

Псориаз: динамика кожных изменений после 5 инъекций Т рег клеток в период 3 месяца

Next steps:• International patent (supported by Skolkovo) 2012• Professional business plan development (supported

by Skolkovo) 2012 • Multicenter national (Russia) trial and registration of

technology in Russia (2012 - 2014)• State insurance reimbursement for some categories

of patients (children, disabled) - 2014 • Start providing service in Russia ( beginning 2015) • Going international: FDA application ( depending on

partner)

Basic Business model

• Product: cultivating T reg from patients’ blood ( Regenex central lab)

• Point of service: hospitals and other healthcare providers

• Payers: – State insurance fund– Private insurance companies– Out of pocket