1779

 

 فاضالبها آزمايش و برداري نمونه روش

   

اول چاپ

1

مطالب فهرست  

فاضالبها آزمايش و برداري نمونه روش كاربرد دامنه و هدف برداري نمونه

براي عمومي راهنمائيهاي و يادآوريآزمايشها

معلق مواد كل گيري اندازه بيوشيميائي نياز مورد اكسيژن گيري اندازه

بيماريزا باكتريهاي

2

تعالي بسمهپيشگفتار

كه فاضالبها آزمون روشهاي و برداري نمونه استاندارد و شيميائي فرآوردههاي استاندارد فني كميسيون بوسيله

و شيميائي صنايع استاندارد ملي كميته نظر زير فتوشيمي و استاندارد موسسه در استاندارد شورايعالي نظارت تحت

به است گرديده تدوين و تهيه ايران صنعتي تحقيقات تاسيس قانون به الحاقي مواد )) قانون يك ماده استناد

24 مصوب ايران صنعتي تحقيقات و استاندارد موسسه ميگردد منتشر ايران رسمي استاندارد (( بعنوان1349 آذر

. و ملي پيشرفتهاي با هماهنگي و همگامي حفظ براي

و لزوم مواقع در ايران استانداردهاي علوم و صنايع جهاني و گرفت خواهند قرار نظر تجديد مورد معين فواصل در يا

اين تكميل يا اصالح براي كه پيشنهادي گونه هر كميسيون در در نظر تجديد هنگام در برسد استانداردها

. شد خواهد واقع توجه مورد مربوط فني همواره بايد ايران استانداردهاي به مراجعه براي بنابراين

. نمود استفاده آنها نظر تجديد و چاپ آخرين از به توجه با كه است بوده برآن سعي استاندارد اين تهيه در

روشهاي ميان المقدور حتي ايران خاص نيازمنديهاي در متدوال روشهاي و استاندارد و كشور اين در معمول

. شود ايجاد همگامي و هماهنگي ديگر كشورهاي اجراي و موجود مهارتهاي و امكانات بررسي با بنابراين

استاندارد از استفاده با حاضر استاندارد الزم آزمايشهاي: گرديد تهيه زير

1972 سال 4733 شماره هندوستان استاندارد-1

آزمايش و برداري نمونه روشفاضالبها

كاربرد دامنه و - هدف1

3

فاضالبها آزمايش و برداري نمونه روشهاي استاندارد اين . برميگيرد در رابرداري - نمونه2 : برداري نمونه - محل2-1 مورد مشخصي نقطه در فاضالب آزمايش موارديكه در

نخواهد موردي برداري نمونه محل انتخاب باشد نظر محل در فاضالب تركيب از اطالع موارديكه . در داشت نمونه باشد نظر مورد تصفيه تأسيسات از فاضالب خروج

بايد تأسيسات خروجي لوله انتهاي از تخليه محل در. شود برداشت

در فاضالب تركيب تغييرات به بردن پي - هنگاميكه2-2 ( مقدار ) حداكثر اوج مانند مشخص زماني فاصله يا دوره از معيني و كوتاه فواصل در بايد نمونهها باشد الزم تخليه آزمايش و برداشت دقيقه 30 يا 10 يا 5 هر يعني زمان يك در فاضالب كيفيت از آگاهي و مطالعه . براي شود ( يا ساعت 24 ) معموال زماني دوره يك يا عملكرد دوره

نمونهگيري روش از تصفيه تأسيسات روزانه كار دوره يك كردن مخلوط از تركيبي . نمونه شود استفاده بايد تركيبي

از اختياري و معين فواصل در معرف نمونههاي برداشت از يك هر . حجم ميآيد بدست تخليه اصلي كانال از زمان

فاضالب حجم از ثابتي نسبت بايد شده برداشت نمونههاي با بايد شده اختيار زمانهاي . فواصل باشد داشته را

. در باشد مرتبط فاضالب جريان مقدار و ماهيت تغييرات مواد واقعي نسبت كه داشت توجه بايد نمونهها برداشت

در آلود كف ناحيه از نبايد . نمونهگيري بماند محفوظ معلق بايد نمونهها معموال. گيرد صورت كانال كف از يا و سطح

در3

1 بايد . نمونه گردد برداشت جريان بستر كف از فاصله

. نشود وارد آن در هوا كه شود برداشت بنحوي و آرامي به ساعت در يكبار نمونه برداشت موارد بيشتر در

. ميباشد رضايتبخشبرداري نمونه - وسائل2-3 آنها لعاب كه لعابي ظروف يا لعاب با چيني ظروف

برداري نمونه براي را شيشهاي ظروف يا و نباشد شكننده بكار برداري نمونه جهت كه . ظروفي برد بكار ميتوان به محتوي انتقال كه باشد كوچك و گشاد دهان بايد ميرود

4

و رسوب و گيرد صورت بآساني نمونه اصلي ظرف نمونه وسيله . چنانچه نماند بجا آنها كف در باقيمانده

. كرد استفاده آن از ميتوان باشد اختيار در كار خود برداري جمع براي ظروفي تركيبي نمونههاي تهيه مورد - در2-3-1

كليه براي كافي گنجايش كه برد بكار بايد نمونهها آوري. باشد داشته را شده برداشت نمونههاي

يا شيشهاي ظروف از ميتوان تركيبي نمونه تهيه براي . چنانچه كرد استفاده خشك و تميز كافي گنجايش با لعابي

كه شود دقت بايد رود بكار منظور اين براي لعابدار ظروف. باشد نداشته خوردگي ترك يا بريدگي لعاب

برداري نمونه - ظروف2-4 , آزمايش براي الزم نمونه مقدار برداشت از - قبل2-4-1

بحال كامال تركيبي نمونه ظرف دادن تكان با را جامد مواد. آوريد در تعليق

بايد ميشود برداشت آزمايش بمنظور - نمونهايكه2-4-2 شسته نمونه از مقداري با قبال كه سمباده در بطريهاي در

بايد استفاده از قبل نو . بطريهاي شود ريخته است شده مقطر آب با دقت با سپس و شده شسته اسيد بوسيله كليه براي نمونه از ليتر 3 تا 2 حدود . در شود آبكشي

. است كافي آزمايشها از بايد ميرود بكار نهائي نمونه تهيه بمنظور بطريهائيكه

آنها در هوا كمي بسيار مقدار كه شود پر بنحوي نمونه . شود بسته محكم كامال بايد بطري در و بماند باقي

در آنرا شود حمل دوري فاصله به بايد نمونه چنانچه بايد است شده تهيه منظور اين براي كه محكمي محفظه

. داد قرار قائم بطور كامل مشخصات برداري نمونه بطري روي - در2-4-3

نمونه ساعت و تاريخ و برداري نمونه محل مانند نمونه قيد بايد نمونه نوع و برداري نمونه سمت و نام و برداري

. شودنمونه حفظ و - نگاهداري2-5 4 در آن از پس و آوري جمع موقع در بايد - نمونه2-5-1

. شود نگاهداري سانتيگراد درجه كليه در بكاربري قابل كه نمونه حفظ كلي - روش2-5-2

ميشود داده ترجيح كلي . بطور ندارد وجود باشد آزمايشها انجام نمونهگيري از پس بالفاصله نمونه روي آزمايش كه

آنها , نگاهداري نمونهها اغلب حفظ براي راه . بهترين شود

5

عايق بخوبي كه يخ جعبه در سانتيگراد درجه 4 تا 3 در . در است ساعت 24 بمدت يخچال در يا و است شده

براي نمونه حفظ براي شيميائي مواد از موارديكه بطور بايد را مواد , اين ميشود استفاده معين آزمايشهاي

بكار معيني آزمايش براي كه نمونه از قسمتي در جداگانه. شود ريخته ميرود

عمومي راهنمائيهاي و يادآوري- 3آزمايشها براي

مواد از خاصي نوع صورتيكه - در الزم - محلولهاي3-1 آب و خالص شيميائي مواد از ميتوان باشد نشده ذكر

. كرد ( استفاده1728 شماره ) استاندارد مقطر است موادي خالص شيميائي مواد از - منظور1 يادآوري

. نباشد مؤثر آزمايش نتيجه در آنها ناخالصي كه فاضالب معرف ايكه نمونه تهيه كه داشت توجه - بايد3-2

تهيه براي برداري نمونه . روش دارد بسيار اهميت باشد آزمايش نوع چنانچه ولي است آمده 2 بند در نمونه اين

بايد برداري . نمونه كند ايجاب را خاصي برداري نمونه. گيرد انجام است شده داده توضيح كه خاصي روش طبق

معلق مواد كل - اندازهگيري4 روش - خالصه4-1 كوهي پنبه اليه يك روي از كردن صاف بوسيله معلق مواد

. ميآيد بدست گوچ بوته داخل در: الزم - مواد4-2 پنبه از ميتوان را كوهي پنبه - شير كوهي پنبه - شير4-2-1

اين . براي كرد تهيه آب ( در اسيد در) شده شسته كوهي بحال آب در را كوهي پنبه گرم 15 است كافي منظور ريز بسيار ذرات حاوي كوهي پنبه . چنانچه درآورد تعليق شير از را ريز ذرات ميتوان كردن نشين ته عمل با باشد

. كرد جدا آسبست- روش4-3 آسبست شير از ميليمتري 3 اليه يك كامل دقت - با4-3-1

را بوته ابتدا منظور اين . براي بسازيد گوچ بوته ته در شده مخلوط خوب قبال كه آسبست شير از الزم بمقدار ذرات تا بگذاريد دقيقه دو براي آنرا . سپس كنيد پر است

كه خالئي مقدار همان با سپس و شود نشين ته سنگينتر دستگاه به كردن وصل با را بوته ميكنيد صاف را نمونه

6

با را كوهي پنبه اليه و دهيد قرار مكش تأثير تحت مكنده . بوته دهيد شستشو آن ميان از آب مقداري دادن عبور درجه 105-103 اتو در يكساعت مدت براي را شده آماده

دسيكاتور در بوته كردن خنك از پس كرده خشك سانتيگراد. كنيد وزن آنرا

بخوبي كه را نمونه از ليتري ميلي 10 - مقادير4-3-2 صاف مكش تحت شده وزن بوته در است شده داده تكان. كنيد

پنبه اليه نمونه كردن بصاف شروع از - قبل2 يادآوري الزم . همواره كنيد مرطوب آب قطره چند با را كوهي از بكلي بوته اينكه از قبل نمونه بعدي ليتر ميلي ده است

برداشت . براي شود ريخته بوته در شود خالي محلول مانع كه ايباندازه گشاد دهان پيپتهاي بوسيله نمونه

. صاف ميشود پيشنهاد نشود معلق مواد بوسيله گرفتگي كه كنيد تكرار آنقدر ليتر ميلي 10 مقادير به را نمونه كردن

جمع بوته در معلق مواد از گرم ميلي 20 تا 10 حدود در صورت بسختي و كند خيلي كردن صاف عمل اينكه يا شود 3-2 را , باقيمانده كردن صاف عمل اتمام از . بعد گيرد

امالح تا دهيد شستشو مقطر آب از ليتر ميلي 10 با مرتبه را مكش با كردن صاف . عمل شود خارج اليه از محلول

مواد و شده خارج آب قطره آخرين تا دهيد ادامه آنقدر . سپس آيد بنظر خشك كامال اليه روي باقيمانده معلق درجه 105-103 در اتو يك در يكساعت مدت براي را بوته

. كنيد خشك سانتيگراد حرارت درجه در آنرا دسيكاتور در بوته كردن خنك از پس

. كنيد وزن آزمايشگاه: - محاسبه4-4

اندازهگيري براي روشهائيكه - كليه روش - خالصه5-1 1 وينكلر اوليه كار دستور براساس ميرود بكار اكسيژن

. است هيدرواكسيد كردن رسوب از است عبارت روش اساس

محلول و منگنز سولفات محلول افزودن از حاصل منگنز . است شده پر نمونه از كه بطري در پتاسيم يدور قليائي

7

منگنز هيدرواكسيد بر بسرعت نمونه در موجود اكسيژن باالتر ظرفيت با منگنز هيدروكسيدهاي تشكيل و كرده اثر بمقدار , يد محلول كردن اسيدي با . سپس ميدهد را

يد . مقدار ميشود آزاد نمونه در موجود اكسيژن معادل استاندارد محلول بوسيله تيتراسيون با شده آزاد

معرف بعنوان نشاسته محلول بردن بكار و تيوسولفات. ميشود اندازهگيري

در موجود مختلف تركيبات و يونها وينكلر روش - در5-2 مواد اين مزاحمت رفع . براي ميكند مزاحمت ايجاد نمونه

. انتخاب است شده داده مناسبي تغييرات وينكلر روش در مزاحم مواد و نمونه ماهيت به بستگي مناسب كار دستور

. دارد: است شده داده زير در روشها بكاربري قابليت مزاحم مواد هيچگونه موارديكه : در وينكلر - روش الف

. ندارد وجود نمونه در موارديكه :( در سديم آزيد ) روش2 آلستربرگ - روش ب

حسب بر نيتريت ليتر در گرم ميلي 0/1 از بيش نمونه در در همچنين و ليتر در ظرفيتي دو آهن گرم ميلي يك و ازت

. در باشد نداشته وجود كننده اكسيد و احيأ مواد نمونه سه آهن يون بيشتر يا ليتر در گرم ميلي 5 مواقعيكه . با ميشود افزوده پتاسيم فلور باشد داشته وجود ظرفيتي گرم ميلي 200 تا 100 غلظت براي روشي فلورو افزودن

. دارد بكاربري قابليت ظرفيتي سه آهن ليتر در :( در پرمنگنات ) روش3 استوارت ريدل - روش پ

. در دارد وجود ظرفيتي دو آهن منحصرا موارديكه ميلي دو از بيش ظرفيتي سه يا ظرفيتي دو آهن صورتيكه

از قبل پتاسيم فلورور باشد داشته وجود ليتر در گرم. ميشود افزوده نمونه كردن اسيدي

, سولفيت موارديكه : در قليائي هيپوكلريت - روش ت وجود هيپوكلريت و آزاد كلر و تيوناتها پلي و تيوسولفات

ميآيد بدست روش اين از نتايجايكه به . هرچند دارد. است كم حدودي تا نتايج زيرا كرد اعتماد نميتوان

وجود آلي مواد موارديكه : در تريو 4 شورت - روش ث اكسيده يدور قليائي محلول PH در بسهولت كه دارد

. ميشود قابل مقدار موارديكه : در زاج بوسيله انعقاد - روش ج

. دارد وجود معلق مواد مالحظه

8

: وينكلر - روش5-3 : الزم محلولهاي و - مواد5-3-1 منگنز سولفات گرم 480- منگنز سولفات - محلول الف

در و كرده حل آب مقداري در را تبلور آب مولكول چهار با رقيق ليتر يك تا و صاف آنرا است تار محلول صورتيكه

يدور شده اسيدي محلول به محلول اين . هنگاميكه كنيد آزاد يد جزئي مقدار از بيش نبايد ميشود افزوده پتاسيم

. كند ) سديم هيدرواكسيد گرم 500- يدور قليائي - محلول ب

ليتر ميلي 500 در ( را پتاسيم هيدرواكسيد گرم 700 يا . محلول شود سرد محلول بگذاريد و كنيد حل آب

يدور گرم 150. باشد كربنات فاقد بايد هيدرواكسيد سرد و جوشيده تازه آب مقداري در جداگانه را پتاسيم

هيدرواكسيد محلول به را محلول . اين كنيد حل شده. كنيد رقيق آب با ليتر يك تا را . مخلوط بيفزائيد سديم

غليظ سولفوريك - اسيد پ - تيوسولفات نرمال 0/025 استاندارد - محلول ت

دي بوسيله مصرف موقع در بار هر را تيوسولفات محلول محلول ليتر ميلي يك. كنيد تيتر استاندارد پتاسيم كرومات

گرم ميلي دهم دو معادل نرمال 0/025 تيوسولفات. است اكسيژن

300-250 سمبادهاي در بطري - در كار - دستور5-3-2 ليتر ميلي 1/5 بدان و برداريد را نمونه محتوي ليتري ميلي

قليائي مخلوط ليتر ميلي 1/5 و منگنز سولفات محلول نوك بطوريكه بيفزائيد جداگانه پتهاي پي با پتاسيم يدور بطري سمباده . در گيرد قرار مايع سطح زير در كامال پيپت

وارد هوا حباب بطوريكه دهيد قرار خود جاي در بدقت را آنرا محتوي بطري چرخاندن و برگرداندن . با نشود بطري نشين ته شده ايجاد رسوب بگذاريد و كنيد مخلوط كامال روي محلول و شد نشين ته رسوب . هنگاميكه شود

را كردن مخلوط شد صاف منگنز هيدرواكسيد رسوب در رسوب شدن نشين ته از پس. كنيد تكرار دوم بار براي

ليتر ميلي 100 حداقل و برداشته بدقت را بطري سمباده . برداريد پت پي بوسيله را رسوب روي شده صاف محلول

پي بوسيله غليظ سولفوريك اسيد ليتر ميلي دو بالفاصله را بطري در دوباره كنيد بطري وارد دهانه كنار از پت

كامال آنرا محتوي بطري چرخاندن و برگرداندن با و بگذاريد

9

محلول در يكنواخت بطور شده آزاد يد تا كنيد مخلوط استاندارد محلول با بالفاصله را محلول . اين شود توزيع

نشاسته محلول ليتر ميلي يك افزودن و سديم تيوسولفات شده كمرنگ محلول زرد رنگ هنگاميكه در معرف بعنوان به مربوط . خطاي كنيد تيتر آبي رنگ شدن زايل تا است

از شده خارج نمونه مقدار و شيميائي مواد محلول افزودن. نميباشد مالحظه قابل بطري

ميلي برحسب محلول اكسيژن - مقدار - محاسبه5-3-3 محلول شده مصرف حجم با است برابر ليتر در گرم

. تيتراسيون در تيوسولفات استاندارد.( سديم ) آزيد آلستربرگ - روش5-4 1-3-5 بخش در شده داده مواد - كليه الزم - مواد5-4-1

, محلول ميشود برده بكار يدور قليائي محلول باستثنأ جايگزين پتاسيم فلورور محلول و سديم آزيد يدور قليائي. ميشود يدور قليائي محلول

آزيد گرم - ده سديم آزيد و سديم يدور - محلول الف به را محلول . اين كنيد حل آب ليتر ميلي 40 در را سديم

و شده تهيه 1-3-5 ب بند طبق كه قليائي يدور محلول ضمن است شده رقيق ليتر ميلي 950 حدود تا آن حجم. بيفزائيد مداوم زدن بهم

دو با پتاسيم فلورور گرم 40- پتاسيم فلورور - محلول ب . كنيد حل آب ليتر ميلي صد در را تبلور آب ملكول

-5 بخش در شده داده كار دستور - از كار - دستور5-4-2 قليائي محلول بجاي كه تفاوت اين با شود پيروي بايد 3-2

, شود استفاده بايد سديم آزيد يدور قليائي محلول از يدور سه آهن يون بيشتر يا ليتر در گرم ميلي 5 مقدار هنگاميكه فلوئور محلول ليتر ميلي . يك باشد موجود ظرفيتي از پس و بيفزائيد نمونه به كردن اسيدي از قبل پتاسيم. كنيد تيتر را نمونه بالفاصله اسيد افزودن

. كنيد - محاسبه3-3-5 بخش - مانند - محاسبه5-4-3 .( پرمنگنات ) روش استوارت ريدل - روش5-5 -3-5) بخش در محلولهائيكه كليه - از الزم - مواد5-5-1

تهيه شرح كه پتاسيم فلوئور و شده داده آن تهيه ( شرح1 بانضمام شده (- داده1-4-5- ب بند ) طبق آن

. شود استفاده بايد ميشود داده زير در محلولهائيكه

10

پرمنگنات گرم 6/3- پتاسيم پرمنگنات - محلول الف بيك آب با آنرا حجم و كرده حل آب مقداري در را پتاسيم

. برسانيد ليتر با پتاسيم اگساالت گرم 2- پتاسيم اگساالت - محلول ب

. كنيد حل آب ليتر ميلي صد در را تبلور آب مولكول يك را نمونه محتوي بطري سمبادهاي - در كار - دستور5-5-2

مقدار ليتري ميلي يك مدرج پيپت يك بوسيله و برداريد زير در دقت با را غليظ سولفوريك اسيد ليتر ميلي 0/7

محلول كافي مقدار . سپس كنيد اضافه مايع سطح تا ( بيافزائيد ليتر ميلي يك حدود ) در پتاسيم پرمنگنات

پايدار دقيقه 5 مدت براي حاصل كمرنگ بنفش رنگ اينكه الزم مقدار از زيادتر پرمنگنات محلول افزايش . از بماند

آن برگرداندن با و گذاشته را بطري . در كنيد خودداري افزايش با دقيقه 5 از . پس كنيد مخلوط را بطري محتوي و پتاسيم اگساالت محلول ليتري ميلي 0/5 مقادير

. فواصل كنيد زايل را پرمنگنات رنگ آن كردن مخلوط دقيقه 5 حدود در بايد اگساالت محلول بار هر افزودن

دنباله, يدور قليائي محلول ليتر ميلي 3 افزايش . با باشد دو يون چنانچه دهيد - ادامه2-3-5 بخش طبق را كار

ليتر در گرم ميلي 10 از بيش ظرفيتي سه آهن يا ظرفيتي محلول ليتر ميلي يك مقدار باشد داشته وجود محلول در

اضافه پرمنگنات افزايش از بعد بالفاصله پتاسيم فلوئور. كنيد

تأخير بدون بايد تيتراسيون محلول كردن اسيدي از پس . شود انجام

. كنيد - محاسبه3-3-5 بخش مانند - محاسبه5-5-3 قليائي هيپوكلريت - روش5-6 در محلولهائيكه كليه - از الزم محلولهاي و - مواد5-6-1

استفاده بايد است شده داده آن تهيه - شرح1-3-5 بخش يدور قليائي محلول از يدور قليائي محلول بجاي ولي شود

( شود مراجعه 1-4-5 الف ) بند كنيد استفاده سديم - آزيد. كنيد تهيه نيز را زير محلولهاي بعالوه

اين تهيه - براي نرمال دو قليائي هيپوكلريت - محلول الف هيدروكسيد نرمال 2/1 محلول داخل از را كلر گاز محلول اين . تيتر دهيد عبور محلول كردن خنك ضمن سديم

تعيين سديم تيوسولفات محلول با يكبار هفتهاي را محلول كافي مقدار آن در و بوده اسيدي محلول . هنگاميكه كنيد

11

حدود در آن ليتر ميلي يك باشد داشته وجود پتاسيم يدور براي سديم تيوسولفات نرمال 0/1 محلول ليتر ميلي 20

. دارد الزم نيتراسيون را پتاسيم يدور گرم 17- نرمال پتاسيم يدور - محلول ب

ميلي 100 به آب با آنرا حجم و كرده حل آب مقداري در هيدروكسيد محلول ليتر ميلي يك افزايش با برسانيد ليتر

. كنيد جلوگيري يد شدن آزاد از محلول باين نرمال سديم اسيد قسمت ( يك1+9) سولفوريك - اسيد پ

. بيفزائيد احتياط با آب قسمت 9 به را غليظ سولفوريك گرم 6/3- نرمال يكدهم سديم سولفيت - محلول ت

با سديم سولفيت گرم 12/6 يا و آب بي سديم سولفيت حجم و كرده حل آب مقداري در را تبلور آب مولكول هفت از كمتر محلول غلظت . هنگاميكه برسانيد ليتر بيك آنرا قرار استفاده مورد را محلول باشد اوليه غلظت درصد 80

. ندهيد 3/249: نرمال يكدهم 5 پتاسيم يدات بين - محلول ث

حل آب مقداري در ( راKH(IO3)2 پتاسيم يدات بين گرم آب با نشانه تا ليتري يك ژوژه بالن يك در آنرا حجم و كرده. كنيد رقيق

كار - دستور5-6-2 مقدار و برداشته را نمونه محتوي بطري سمبادهاي در

قليائي هيپوكلريت محلول كافي مقدار يا و ليتر ميلي 0/2 به تيوناتها پلي تيوسولفاتها و سولفيتها كردن اكسيده براي با و گذاشته را بطري سمبادهاي . در كنيد اضافه نمونه

ثانيه 30-20 مدت براي آن چرخاندن و كردن معكوس يدور محلول ليتر ميلي يك. كنيد مخلوط آنرا محتوي ميلي يك افزودن با سپس و ( بيافزائيد1-3-5 ) بند پتاسيم

اسيدي را ( محيط1+9) سولفوريك اسيد محلول بيشتر يا. كنيد مخلوط كامال را شيشه محتوي و كنيد

را شده آزاد يد و بيفزائيد نشاسته محلول ليتر ميلي 0/2 نشاسته معرف مقابل در سديم سولفيت محلول بوسيله ميلي 0/1 مقادير بدفعات و درآوريد تركيبي يد بصورت

رنگ تا بيفزائيد پتاسيم يدات بين نرمال يكدهم محلول ليتر كار . دنباله بماند پايدار و شده ظاهر محيط در كمرنگ آبي سديم - ازيد يدور قليائي محلول ليتر ميلي 3 افزودن با را

. دهيد ( ادامه1-4-5- ) الف بخش طبق. كنيد - محاسبه3-3-5 بخش - مانند - محاسبه5-6-3

12

تريو شورت - روش5-7 در محلولهائيكه كليه - از الزم محلولهاي و - مواد5-7-1

كنيد استفاده است شده داده آن تهيه - شرح1-3-5 بخش - ازيد يدور قليائي محلول از يدور قليائي محلول بجاي ولي

.( شود مراجعه 1-4-5 الف بند ) به كنيد استفاده سديم را نمونه محتوي بطري سمبادهاي - در كار - دستور5-7-2

و منگنز سولفات محلول ليتر ميلي 2 مقدار و برداريد سديم ازيد- يدور قليائي محلول ليتر ميلي 2 سپس

چرخاندن و برگردانيدن با و گذاشته را بطري . در بيافزائيد . كنيد مخلوط آنرا محتوي ثانيه 20 مدت براي بطري

ته از قبل غليظ سولفوريك اسيد ليتر ميلي دو بالفاصله كامال را بطري محتوي و افزوده رسوبات شدن نشين

-5 بخش در بطوريكه را محلول تيتراسيون و كنيد مخلوط. دهيد انجام است شده داده - شرح3-2. كنيد - محاسبه3-3-5 بخش - مانند - محاسبه5-7-3 . زاج بوسيله سازي دلمه - روش5-8 بخش در محلولهائيكه كليه از الزم مواد و - محلولها5-8-1

از همچنين و است شده داده آن - شرح5-3-1 استفاده ميشود داده زير در آنها تهيه شرح محلولهائيكه

. كنيد آلومينيوم مضاعف سولفات گرم 10- زاج - محلول الف به آب با آنرا حجم و كرده حل آب مقداري در را پتاسيم و

. برسانيد ليتر ميلي 100 هيدرواكسيد غليظ - محلول آمونيم هيدرواكسيد- ب

.(d = 0/9) آمونيم سمبادهاي در بطري در را - نمونه كار - دستور5-8-2

در احتياطهائيكه همان و بريزيد ليتري ميلي 1000 تا 500 . ده بنديد بكار نيز روش اين در است الزم قبلي روشهاي

ليتر ميلي دو تا يك سپس و زاج محلول ليتر ميلي با و گذاشته را بطري در بيافزائيد آمونيوم هيدرواكسيد محتوي دقيقه يك بمدت بآرامي آن چرخاندن و برگردانيدن

دقيقه 10 مدت براي را . بطري كنيد مخلوط را بطري. شود نشين ته رسوب تا بماند بگذاريد

يك بوسيله را رسوب روي شده صاف محلول سپس آزمايش ليتري ميلي 300 تا 250 بطري يك در سيفون

. از شود سرريز بطري از محلول تا كنيد منتقل اكسيژن خروجي لوله . نوك كنيد جلوگيري نمونه به هوا ورود

13

اكسيژن اندازهگيري بطري كف نزديكي در را سيفون طبق را كار دنباله مورد برحسب . سپس دهيد قرار

محاسبه را نتيجه و دهيد ادامه 6-5 و 4-5 و 3-5 بخشهاي. كنيد نياز مورد اكسيژن گيريندازه- ا6

بيوشيميائي بيوشيميائي نياز مورد - اكسيژن روش - خالصه6-1

از معيني حجم براي الزم اكسيژن مقدار از است عبارت بوسيله آن در آلي مواد شدن اكسيده براي فاضالب

اندازهگيري . براي مشخص شرايط در ميكروارگانيسمها يا شده رقيق نمونه در محتوي اكسيژن نياز مورد اكسيژن

20 در روز پنج بمدت كشت از پس و كشت از قبل نشده. ميشود اندازهگيري سانتيگراد درجه

حجم به ايسمباده در - بطريهاي نياز مورد - وسائل6-2 آزمايش اين براي باريك گردن با ليتر ميلي 300 تا 250

از قبل را بطريها بيشتر احتياط بمنظور است مناسب و داده شستشو آب و شوينده مواد با كامال بايد آزمايش

مدت در نمونه در هوا جذب و ورود از جلوگيري براي از يا داد قرار آبي حمام در وارونه بايد را بطريها كشت

كرد استفاده آب ريختن براي مخصوص دهانه با بطريهائي.الزم محلولهاي و - مواد6-3 : نرمال يك - تقريبأ سديم هيدرواكسيد - محلول6-3-1 سولفيت گرم 1/5- سديم سولفيت - محلول6-3-2

هر را محلول . اين كنيد حل آب ليتر يك در را آب بي سديم. كنيد تهيه روزانه مصرف براي بار

خوب كيفيت با مقطر - آب كردن رقيق براي - آب6-3-3 شده دميده آن در هوا كه مس خصوصأ فلزات از عاري و

. است مناسب منظور اين براي باشد دي پتاسيك گرم 8/5- فسفات بافر - محلول6-3-4

هيدروژن پتاسيم دي گرم 21/75 و فسفات هيدروژن هيدروژن سديم دي گرم 33/4 و K2HPO4 فسفات در را آمونيوم كلرور گرم 1/7 و 7H2O,Na2HPO4 فسفات

يك به آب با را محلول حجم و كنيد حل آب ليتر ميلي 500. باشد 7/2 بايد محلول اين PH. برسانيد ليتر

14

سولفات گرم 22/5- منيزيم سولفات - محلول6-3-5 و كرده حل آب مقداري در آبرا مولكول هفت با منيزيم

. برسانيد ليتر يك به آب با را محلول حجم كلسيم كلرور گرم 27/5- كلسيم كلرور - محلول6-3-6

آب با را محلول حجم و كرده حل آب مقداري در را آب بي. برسانيد ليتر بيك

با فريك كلرور گرم 0/25- فريك كلرور - محلول6-3-7 كرده حل آب مقداري در را تبلور آب مولكول شش

. برسانيد ليتر بيك آب با را محلول فاضالب شده صاف - مايع كردن بارور براي - مواد6-3-8

درجه 20 در ساعت 36 الي 24 مدت كه خانگي. برد بكار ميتوان باشد گذشته آن نگاهداري از سانتيگراد

: كار - دستور6-4 بوسيله ترتيب به را قليائي يا و اسيدي - نمونههاي6-4-1

مقدار كه كلريدريك اسيد يا و سديم هيدرواكسيد محلول. كنيد خنثي هفت PH تا است شده تعيين قبال آن مصرف

دارد وجود آمين كلر يا و آزاد كلر هائيكه نمونه - در6-4-2 كلر , كلرور نمونه گذاردن راكد ساعت دو از پس چنانچه سولفيت محلول بوسيله بايد نمونه نرفت بين از آمينها با را سولفيت محلول . مقدار شود مواد اين از عاري

و يدور مقداري افزودن و نمونه از معيني حجم گرفتن تعيين نشاسته محلول معرف به نسبت محلول تيتراسيون

به را شده تعيين سولفيت محلول مقدار . سپس كنيد . از بيفزائيد است نياز مورد كه نمونه از معيني مقدار

. كنيد خودداري سولفيت محلول اضافي مقدار افزودن. كنيد بررسي دقيقه بيست از پس محلول در را كلر نبودن

. است زياد سمي مواد مقدار هائيكه نمونه - در6-4-3 با . معهذا دارد اختصاصي اعمال به نياز نمونه كردن آماده بين از را آنها سمي اثر ميتوان نمونه مناسب كردن رقيق

. آيد بدست بيوشيميائي نياز مورد اكسيژن حداكثر تا برد بيوشيميائي نياز مورد اكسيژن مقدار بيشتر بارقت چنانچه تا دارد ادامه آنقدر بايد را كردن رقيق عمال شد بيشتر آمده بدست بيوشيميائي نياز مورد اكسيژن حداكثر مقدار

. نكند تجاور كردن رقيق اثر در مؤثر و كردن رقيق براي آب كيفيت بررسي - براي6-4-4

بيوشيميائي نياز مورد اكسيژن مقدار, كننده بارور بودن بغلظت گلوتاميك اسيد يا و گلوكز استاندارد محلولهاي

15

تهيه كردن رقيق براي آب با كه ليتر در گرم ميلي 300 اين بيوشيميائي اكسيژن . مقدار كنيد تعيين است شده

ليتر در گرم ميلي 10±224 حدود در بايد بترتيب محلولها. آيد بدست ليتر در گرم ميلي 10±217 و درجه 20 حدود در را كردن رقيق براي - آب6-4-5

رقيق براي آب الزم مقدار. كنيد نگاهداري سانتيگراد آن ليتر هر براي و برداريد را آزمايش مورد نمونه كردن : با بيفزائيد زير محلولهاي از ليتر ميلي يك مقدار

كلرور و كلسيم , كلرور منيزيم , سولفات فرفسفات . مقدار كنيد بارور خانگي فاضالب مايع با آنرا سپس فريك كردن رقيق براي آب در كنترلي آزمايش در كه كننده بارور ته فاضالب درصد 1-0/1) بمقداري بايد ميشود برده بكار

20 در كشت از پس اكسيژن افت كه ( باشد شده نشين گرم ميلي 0/8 تا 0/2 مابين روز 5 بمدت سانتيگراد درجه

. شود ليتر در درصد 25 تا 5 ) معموال شده رقيق نمونه - تعدادي6-4-6

پنج از پس محلول اكسيژن افت كه كنيد تهيه ترتيبي ( به صورتيكه در باشد ليتر در ميليگرم 2 حداقل كشت روز

يك ابتدا است صد به يك از بيش كردن رقيق نسبت و بسازيد ژوژه بالن يك در اوليه نمونه از درصد ده محلول

براي كه را نهائي شده رقيق محلولهاي نمونه اين از. كنيد تهيه ميرود بكار آزمايش

است شده بارور كه را كردن رقيق براي - آب6-4-7 ميلي 500 تا ليتري يك مدرج استوانه بيك سيفون بوسيله

مخلوط كامال كه نمونه از معين . مقدار كنيد منتقل ليتر . بريزيد مدرج استوانه در مايع سطح زير در است شده 1000 نشانه تا كردن رقيق براي آب با را محلول حجم اينكه بدون را محلول ايشيشه ميله با برسانيد ليتري ميلي

محلول و كنيد مخلوط آرامي به شود محلول وارد هوا در بطري دو به سيفون يك بوسيله را شده رقيق

و پركرده كامال را بطريها كنيد منتقل بيشتر يا سمبادهاي غلظت با محلولهاي بگذاريد را بطريها سمباده در بدقت. كنيد تهيه نحو بهمين را كمتر

از پس بطريها از يكي در را محلول اكسيژن اوليه غلظت 5 بخش در مذكور مناسب روشهاي از يكي طبق دقيقه 5

درجه بيست در را ديگر . بطريهاي كنيد گيرياندازه از مناسب بطريق و دهيد كشت روز 5 بمدت سانتيگراد

16

كردن سيفون با همزمان كنيد جلوگيري بطري به هوا ورود سيفون سمباده در بطري دو در را كردن رقيق آب نمونهها

از پس را بطريها از يكي در محلول اكسيژن . مقدار كنيد در روز 5 بمدت را ديگر بطري و بگيريد اندازه دقيقه 15

مقدار روز 5 از . پس دهيد كشت سانتيگراد درجه بيست براي نمونه در و شده رقيق نمونه در محلول اكسيژن. كنيد اندازهگيري را آزمايش تصحيح

: - محاسبه6-5

D1اوليه نمونه در محلول اكسيژن = مقدار . D2از پس شده رقيق نمونه محلول اكسيژن = مقدار

. كشت C1كردن رقيق براي آب در محلول اكسيژن = مقدار

. شده بارور C2كردن رقيق براي آب در محلول اكسيژن = مقدار

كشت از پس شده بارور Fكنترلي نمونه به نمونه در كننده بارور مواد = نسبت

مقدار بر تقسيم D1 در باروري مواد درصد مقدار يعني مورد كه نمونه از كسري P و C1 در باروري مواد درصد

. است گرفته قرار آزمايش ليتر در ميليگرم 0/2 تقريب تا را نتايج - كليه6-5-1

. كنيد گزارشبيماريزا - باكتريهاي7 كليات دارد وجود فاضالبها در عمومأ بيماريزائيكه - باكتريهاي7-1 دسته از عبارتست ميشود بيماريها شيوع باعث و

و ميشود سبب را حصبه بيماري كه 6 سالمونالتيفي پاراتيفوئيدها يا حصبه شبه بيماريهاي كه سالمونالپارتيفيها

ديسانتري يا اسهال مولد كه 7 شيگالها و ميشود موجب را , ميباشد وبا بيماري مولد كه 8 ويبريوكلرا و ميباشد

محيطهاي در كشت با ميتوان را شيگلالها و سالمونال بصورت 10 سلكتيو محيطهاي روي انتقال و 9 آنريشيسمان

17

بيوشيميائي روشهاي با را آنها و آورد بدست خالص كشت. داد تشخيص سرولوژيكي و مرفولوژيكي و با مقايسه با بيماريزا باكتريهاي تعداد باينكه - نظر7-2

است ناچيز بسيار( 11 ) ساپروفيتيك بيماريزا غير باكتريهاي. دارد بسيار اهميت معرف شده تغليظ نمونه تهيه لذا

مطلوبي وسيله فاضالب مسير در پارچه با جذب روش پارچه در شده جذب , موجودات است نمونه تغليظ براي

كردن جدا براي و كرده غذائي آبگوشت يك داخل را غذائي آبگوشت همين از مستقيمأ يا بيماريزا عوامل

تهيه صافي داخل از را آبگوشت اين يا و ميشود استفاده براي را صافي محتوي و كرده رد نرم سيليس گرد از شده . ميدهند قرار استفاده مورد بيماريزا باكتريهاي كردن جدا

ماه در بار چند بايد باكتريولوژي آزمايش و برداري نمونه. شود انجام

نمونه كردن آماده و - برداشت7-3 نياز مورد - مواد7-3-1 *30 ابعاد به جراحي گاز از عبارت كه جاذب - پارچه الف

شده تا فشرده بطور متعددي اليههاي در كه سانتيمتر 15 سنگين براي سنگ تكه چند جاذب پارچه سر . بيك باشد . كنيد وصل كافي طول با نخي آن ديگر بسر و كردن

30 مدت براي و پيچيده بندي بسته كاغذ در را مجموعه مربع سانتيمتر بر كيلوگرم يك فشار با و كالو اتو در دقيقه

. كنيد سترون آنرا گرم 5 و گوشت عصاره گرم - ده غذائي - آبگوشت ب

آب ليتر ميلي 900 در را پيتن گرم ده و سديم كلرور حجم و كرده سرد را . محلول كنيد حل جوشاندن بوسيله

تنظيم 7/5 تا را محلول PH و برسانيد ليتر يك تا آب با آنرا ( آن معادل يا 1 شماره ) واتمن صافي از را . محلول كنيد

. كنيد صاف مايرهاي ارلن در ليتري ميلي 100 بمقادير آنرا سپس

هائي لوله در ليتري ميلي ده بمقادير و ليتري ميلي 150 اتو در را آنها دقيقه 15 مدت براي و كنيد توزيع آزمايش

كنيد سترون مربع سانتيمتر بر كيلوگرم يك فشار در و كالو. ( يا1 شماره ) واتمن صافي - كاغذ صافي - كاغذ پ

10 بقطر قيفهائي در و كنيد تا دار چين بصورت آنرا معادل دهانه روي را صافي كاغذ با . قيف دهيد قرار سانتيمتر

18

بسته كاغذ با را مجموعه . اين دهيد قرار شيشهاي بطري در دقيقه 15 مدت براي را آنها سپس بپيچيد محكم بندي

سترون مربع سانتيمتر بر كيلوگرم يك فشار با و اتوكالو. كنيد

در سيليس گرد گرم - پنج سيليس گرد سوسپانسيون- ت به شيشهاي بطريهاي در و كنيد وارد آب ليتر ميلي هزار

يك فشار با اتوكالو در و بريزيد ليتري ميلي 500 مقادير سترون دقيقه 15 مدت براي مربع سانتيمتر بر كيلوگرم

. كنيد از معيني - حجم ويبروكلرا براي مايع - محيط ث

بطري يك در را آنها و برداشته زير بشرح محلولهائي ليتر ميلي 20 و مطلق الكل ليتر ميلي 0/8 با شده سترون

: كنيد مخلوط آب PH كه درصد دو پيتن محلول از ليتر ميلي 17/6 - مقدار

با كالو اتو در دقيقه 15 مدت براي و تنظيم 8/4 تا آن. است شده سترون مربع سانتيمتر بر كيلوگرم يك فشار

18 كردن حل از كه محلولي از ليتر ميلي 2/4 - مقدار مولكول 7 با منيزيم سولفات گرم 0/66 سديم كلرور گرم قبل بنحو آمده بدست آب ليتر ميلي 100 , در تبلور آب

. است شده سترون بخار با دقيقه 30 بمدت سوكروز درصد 10 محلول يك از ليتر ميلي 4/5 - مقدار

. است شده سترون بخار با دقيقه 30 مدت براي كه آمونيوم بيسموت محلول از ليتر ميلي 0/16 - مقدار

. است شده داده زير در آن تهيه شرح كه سيترات نشانه ليتر ميلي 500 حجم در را ايسمباده در شيشه يك

داخل از را بيسموت سيترات گرم 60 مقدار. كنيد گذاري در آب ليتر ميلي 50 مقدار . سپس كنيد شيشه وارد قيفي

تا بزنيد بهم را مخلوط شيشهاي ميله يك با و بريزيد شيشه ميلي 20 سپس درآيد يكنواختي خمير بصورت سيترات

( حجمي درصد 12/5) آمونيوم هيدرواكسيد محلول ليتر را بطري . در بزنيد هم را مخلوط شيشه ميله با و بيفزائيد سيترات . هنگاميكه دهيد تكان را بطري و بگذاريد

آب ليتري ميلي 500 نشانه تا شد حل كامال بيسموت تهيه نياز مورد باندازه كم بمقدار را محلول . اين بيفزائيد

. كنيددرصد 20 سديم سولفيت ليتر ميلي 2/5 - مقدار

19

مركوريك كلرور درصد يكصدم محلول ليتر 1/6 - مقدار بوسيله را محلول PH بيفزائيد محتوي بطري به

. برسانيد 9/2 به نرمال سديم هيدرواكسيد نمونه يك براي ميشود تهيه محيطيكه - مقدار3 يادآوي

, رعايت تهيه مراحل كليه در كه داشت توجه . بايد است. است الزم محيط ستروني حفظ

: كار - روش7-3-2 مسير در مناسب محل در را جاذب هايپارچه- الف

كردن صاف روش از ) چنانچه دهيد قرار فاضالب جريان بگذاريد ( و است الزم جاذب پارچه عدد سه شود استفاده

بيرون را آنها . سپس بماند مسير در ساعت 48 بمدت گشاد دهان شده سترون جار يك در را يك هر و آورده

از كافي مقدار جارها از يك هر . در دهيد قرار شيشهاي همه كشت محيط بطوريكه بريزيد غذائي آبگوشت محيط بوسيله را جاذب پارچه . سپس برگيرد در را جاذب پارچه

همه و دهيد فشار شده سترون گرد ته شيشهاي ميله يك است شده پارچه جذب آنچه تا بزنيد بهم خوب را محلول

. شود منتشر كشت محيط در يكنواخت بطور است رفته بكار كردن صاف روش - چنانچه ب

سترون صافي يك داخل را سيليس گرد سوسپانسيون گرد از كامل بطور صافي سطح همه بطوريكه بريزيد شده

تهيه فوق بطريق صافي عدد . سه شود پوشيده سيليس. كنيد

آنها در كه را فوق غذائي هايآبگوشت محيط سپس صاف صافيها اين بوسيله دارد وجود جاذب پارچه محتويات

كاغذ از يك , هر كشت محيط كردن صاف از . پس كنيد بيماريزاي عوامل كردن جدا براي نمونه بعنوان را صافيها. بريد بكار مختلف

كاغذ از يكي سالمونالوشيگالها كردن جدا - براي پ ) الف تتراتيونات آبگوشت ليتر ميلي 50 در را فوق صافيها

ليتر ميلي 50 در را ديگر صافي كاغذ و كنيد (- وارد7-4-1-. كنيد ( وارد1-4-7- ) ب سلنيت آبگوشت

در را سوم صافي كاغذ وييروكلرا كردن جدا - براي ت مدت براي كنيد ( وارد1-3-7- ) ث وييروكلرا مايع محيط

انكوباتور در سانتيگراد حرارت درجه 37 در ساعت 24 روي بر كشت اين از پالتين حلقه يك . سپس نگاهداريد

بصورت آنرا و (- ببريد1-5-7- ) پ صفرا نمك آگار بشقاب

20

-5-7) بند براساس را كار روش اين و دهيد كشت منتشر. دهيد (- ادامه2شيگالها و - سالمونالها7-4 الزم كشت - محيطهاي7-4-1 90 - به12 مولر و كوفمن تتراتيونات - آبگوشت الف

رعايت با شده سترون غذائي آبگوشت از ليتر ميلي كربنات گرم 5 مداوم همزدن ضمن و 13 آسپتيك شرايط در و است شده درآورده گرد بصورت قبال كه را كلسيم ليتر ميلي . ده كنيد اضافه است شده سترون اتوكالو بخار با قبال كه سديم تيوسولفات درصد 50 محلول محلول از ليتر ميلي . دو بيفزائيد بآن است شده سترون

با آب ليتر ميلي 20 در را پتاسيم يدور گرم 5 يدوره يد ضمن بتدريج يد گرم 4 . مقدار كنيد حل هاون در سائيدن شيشه در را محلول اين بيافزائيد يدور محلول به سائيدن.( كنيد نگهداري ايسمباده در قهوهاي

و درخشان سبز درصد يكدهم آبي محلول از ليتر ميلي يك از گرم يك يا شده استريل گاو صفراي محلول ليتر ميلي 5

10 مقادير به را محيط . اين كنيد اضافه بآن صفرا ملح را محلول . اين كنيد توزيع آزمايش لولههاي در ليتري ميلي تتراتيونات زيرا كرد سترون اتوكالو از تهيه از پس نبايد

. شود تجزيه حرارت اثر در است ممكن و سديم اسيد سلينيت گرم 4- اف سلينيت - آبگوشت ب

سديم دي فسفات گرم 9/5 و الكتوز گرم 4 و پيتن گرم 5 آب ليتر ميلي 1000 در را منوسديك فسفات گرم 0/5 و

حد تا بايد كردن حل موقع . در كنيد حل شده سترون كاهي محلول . اين كرد رعايت را ستروني شرايط ممكن

در با آزمايش لولههاي در ليتري ميلي 10 مقادير به را رنگ معرض در دقيقه 30 مدت براي سپس 1 كنيد توزيع پيچي اتوكالو در نبايد را محيط . اين دهيد قرار درجه 100 بخار رنگ قرمز رسوب جزئي مقدار است ممكن زيرا داد قرار

كشت محيط عمل در رسوب اين ولي شود ايجاد محيط در 7/1 بمقدار شده تهيه محيط PH داشت نخواهد دخالتي

مقدار كه كند ايجاد است ممكن منظور اين رايب باشد. شود داده تغيير جزئي بمقدار شده افزوده فسفات امالح

20 و تروكوالت سديم گرم 5- مكونكي آگار - محيط پ يا و آگار گرد گرم 20 و سديم كلرور گرم 5 و پيتن گرم . بريزيد مقطر آب ليتر ميلي 1000 در را شده رشته آگار

21

آن جامد مواد تا دهيد قرار بخار معرض در را مخلوط اين. شود حل

را محيط PH. كنيد سرد سانتيگراد درجه 50 تا آنرا سپس . در كنيد تنظيم 7/8 تا 7/6 بين ما حرارت درجه اين در

محيط ليتر سه براي مرغ تخم سفيده يك لزوم صورت فشار در دقيقه 15 مدت براي را . محيط كنيد استفاده

. دهيد قرار اتوكالو در مربع سانتيمتر بر كيلوگرم 0/7 يا خوب نوع صافي كاغذ از است گرم حاليكه در را محيط

دارد قرار قيف در كه شده پيچيده گاز در پنبه قطعه يك سانتيگراد درجه 50 در شده صاف محيط PH. كنيد صاف

. برسانيد 7/5 به آزمايشگاه حرارت درجه در با و 7/3 به 3/5 و الكتوز درصد 10 محلول از ليتر ميلي صد سپس الكل در خنثي قرمز درصد دو معرف محلول ليتر ميلتي. بيافزائيد درصد 50 اتيليك

ارلن تعدادي در و كنيد مخلوط بخوبي را محلولها كليه كيلوگرم 0/6 فشار در دقيقه 15 مدت براي و بريزيد ماير

هنگام . در كنيد سترون اتوكالو در مربع سانتيمتر بر قرار بخار حمام در كردن ذوب براي آنرا محيط مصرف

بريزيد پتري بشقابهاي در ليتر ميلي 15-12 بمقادير و دهيد در استفاده از قبل را محيط . سطح ببندد بگذاريد و

. كنيد خشك انكوباتورسيترات كالت دزاكسي آگار - محيط ت ميلي 200 در را گوشت عصاره از گرم 200: پايه آگار

معرف به نسبت را محلول و كنيد حل شعله روي آب ليتر . كنيد قليائي درصد 50 سديم هيدرواكسيد با فتالئين فنل

صاف صافي كاغذ بوسيله و جوشانده را محلول سپس را محلول . حجم كنيد تنظيم 7/3 در را محلول PH. كنيد

. بيافزائيد بآن پيتن گرم 20 و برسانيد ليتر ميلي 200 به گرد يا شده شسته رشته آگار از گرم 90 ديگري ظرف در

بوسيله يكساعت بمدت آب ليتر ميلي 3700 در را آگار آنرا و كنيد صاف را آگار محلول . سپس دهيد حرارت بخار

مخلوط و كرده اضافه پيتن و گوشت عصاره محلول به خنثي قرمز معرف درصد دو محلول از ليتر ميلي . پنج كنيد

و كرده اضافه بآن نيز الكتوز گرم 40 و درصد 50 اتانل در. برسانيد ليتر 4 به آب با را محلول حجم

22

در ليتري ميلي 100 اندازههاي به بدقت را محلول اين 0/3 فشار در دقيقه 10 بمدت و كنيد توزيع بطريها

. كنيد سترون كالو اتو در مربع سانتيمتر بر كيلوگرم گرم 17 و سديم سيترات گرم 17: يك شماره - محلول

) پولكي آمونيم فري سيترات گرم دو و سديم تيوسولفات با شده سترون آب ليتر ميلي 100 در ( را رنگ سبز

. كنيد حل دادن حرارت را سديم كالت دزاكسي گرم 100: دو شماره - محلول

. كنيد حل سترون آب ليتر ميلي 100 در درجه 60 در يكساعت بمدت را دو و يك شماره - محلول

. براي كنيد سترون آبي حمام يك در سانتيگراد حرارت را آگار از ليتر ميلي 100 سيترات كالت دزاكسي آگار تهيه

از ليتر ميلي 5 مقدار و كرده ذوب آبي حمام يك در . بيفزائيد بآن جداگانه پيپت با را دو و يك شماره محلولهاي

بدهيد تكان را محيط محلولها از يك هر كردن اضافه از پس آماده محيط . سپس گيرد انجام كامل بطور اختالط تا

در ليتر ميلي 15 تا 12 بمقدار پتري بشقابهاي در را شده را محيط . سطح ببندد بگذاريد و كنيد توزيع بشقاب هر

. كنيد خشك انكوباتور در استفاده از قبل( وبلر ) ويلسون سولفيت بيسموت آگار - محيط ث پولكي آمونيوم بيسموت سيترات گرم 6: اوليه 14 محلول

. در كنيد حل جوش حال در آب ليتر ميلي 50 در را شكل 600 در را آب بي سديم سولفيت گرم 20 ديگري ظرف و كرده مخلوط را محلول دو . اين كنيد حل آب ليتر ميلي گرم 10 هنگام اين در آيد بجوش تا دهيد حرارت آنرا

. سپس كنيد اضافه محلول به سديم اسيد منو فسفات 50 در كه گلوكز گرم 10 مقدار بآن و كرده سرد را محلول

. بيفزائيد است شده حل آب ليتر ميلي ابگوشت ليتر ميلي 1000 در را آگار گرم 30: پايه آگار

حل دقت با و اتوكالو در يا اجاق روي دادن حرارت با غذائي سانتيگراد درجه 50 تا را محلول ( سپس1-3-7- ) ب كنيد. كنيد تنظيم 7/4 تا 7/6 بين را محلول PH و كنيد سرد

ارلن تعداد در ليتري ميلي 30 هاياندازه در آنرا سپس يك فشار در دقيقه 30 مدت براي و كنيد توزيع ماير

. محيط كنيد سترون كالو اتو در مربع سانتيمتر بر كيلوگرم. كنيد نگاهداري يخچال در را شده سترون

23

را اوليه محلول از ليتر ميلي 20 كشت محيط تهيه براي اضافه ذوب حال در فوق پايه آگار از ليتر ميلي 100 به

فروهشت سولفات محلول ليتر ميلي يك مخلوط باين كنيد. كنيد اضافه درخشان سبز محلول ليتر ميلي نيم و درصد

بگذاريد و بريزيد پتري بشقابهاي در كردن مخلوط از پس كنيد استفاده شده تهيه تازه محيط از االمكان . حتي ببندد

رنگ كه محيطهاي. باشد خشك بايد كشت محيط سطح 1. بريزيد دور نيست سبز به مايل آنها

كه پيتنه آب از ليتر ميلي 90 هر - به قندي - محيطهاي ج يك در سديم كلرور گرم 5 و پيتن گرم 10 كردن حل از

است شده تنظيم 7/5 در آن PH و آمده بدست آب ليتر جهت تخميركه قابل قند درصد 10 محلول ليتر ميلي 10

كه قندها ) اين بيافزائيد است الزم نظر مورد آزمايش و - مانيت - دولسيت الكتوز- ساكاروز گلوكز از عبارتست ويبروكلرا براي را نيوزيتو مانيوتول همچنين ساليسين

از ) كه15 آندراد معرف ليتر ميلي يك ( و برد بكار ميتوان بمقدار نرمال يك سديم هيدرواكسيد محلول كردن اضافه رنگ ظهور بمحض درصد نيم اسيد فوشين محلول به كافي

بمقدار را محيط اين سپس كنيد ( اضافه ميآيد بدست زرد ميليمتري 100*12 آزمايش لولههاي در ليتري ميلي سه بوسيله قبال و ميباشد دورهام تخميري لولههاي داراي كه

مدت براي سانتيمتر بر كيلوگرم 0/7 فشار در و اتوكالو ( براي سانتيگراد درجه 100) بخار معرض در يا دقيقه 20

است شده سترون متوالي روز سه در دقيقه 20 مدت. بريزيد

گرم 1/5 –( 16 سن كريستين ) محيط آز اوره - محيط چ گرم دو و آگار گرم دو و سديم كلرور گرم 5 و پپتن

حل آب ليتر ميلي 1000 در را پتاسيم اسيد منو فسفات در دو قرمز فنول آبي محلول از ليتر ميلي شش و كرده و كنيد تنظيم 6/9 تا 6/8 بين را محيط PH بيافزائيد هزار در سانتيگراد درجه 120 در دقيقه 15 مدت براي آنرا

درجه 50 حدود تا محلول . هنگاميكه كنيد سترون اتوكالو تا شده سترون گلوكز محلول بآن شد سرد سانتيگراد

100 . سپس بيافزائيد درصد يكدهم نهائي غلظت حصول صاف بوسيله قبال كه اوره درصد 20 محلول ليتر ميلي . بيفزائيد بآن است شده سترون 17 زايتس صافي با كردن

24

كرده توزيع شده سترون آزمايش لولههاي در را محيط اين. ببندد مايل بحالت بگذاريد

3 شامل محيط - اين تحرك آزمون براي كشت - محيط ح كلرور گرم پنج و پپتن گرم 10 و گوشت عصاره گرم

آب ليتر ميلي هزار در شده ذوب آگار گرم 5 تا 4 و سديم . كنيد تنظيم 7/6 تا 7/5 بين بايد را محيط PH. ميباشد لولها از قسمتي حديكه تا كشت هايلوله در را مايع محيط

لوله هالوله اين از يك هر در و كنيد توزيع كند پر را كه كنيد وارد بطوري است باز آن انتهاي دو كه شيشهاي

. نباشند بيرون آگار از سانتيمتر 1/5 از بيش آن انتهاي يك درجه 120 در و دقيقه 15 مدت براي را محيط و هالوله

سرد هنگام محيط . اين كنيد سترون اتوكالو در حرارت با حالت . اين نباشد مايع و داشته نرم حالت بايد شدن. ميآيد بدست شده برده بكار آگار مقدار تغيير

آب شامل محيط - اين اندل آزمون براي كشت - محيط خ كلرور گرم پنج و پپتن گرم 20 كردن حل از كه است پپتنه

محلول و ميآيد بدست آب ليتر ميلي 1000 در سديم به آزمايش لولههاي در را . محيط است PH 7/4 داراي

دقيقه 15 مدت براي و كرده توزيع ليتر ميلي پنج مقادير . كنيد سترون اتوكالو در سانتيگراد حرارت درجه 120 در

كه شده شناخته باكتري نوعي بوسيله بايد مصرفي پپتن. شود آزمايش ميكند توليد اندول

آمينو متيل پارادي گرم 10 مقدار - 18 كواك - معرف د الكل ايزوآميل يا الكل آميل ليتر ميلي 150 در را بنزآلدئيد

هيدروكلريك اسيد ليتر ميلي 50 بآن بتدريج و كرده حل يخچال در و كرده تهيه كم بمقدار را . معرف كنيد اضافه

. كنيد نگاهداري محلول دو به احتياج - رنگآميزي گرم آميزيرنگ - محلول ذ

. ميشود ناميده دو و يك شماره محلولهاي بنام كه دارد درصد 0/5 محلول از است عبارت يك شماره محلول

دو شماره . محلول آب در ويوله متيل يا يوله و كريستال درصد دو و يد درصد يك بغلظت محلولي از است عبارت

كه رنگ ظهور براي سوم . محلول آب در پتاسيم يدور و خنثي قرمز گرم 0/1 بغلظت محلولي از است عبارت

ليتر ميلي 1000 در درصد يك استيك اسيد ليتر ميلي 0/2. آب

25

( مقدار1-3-7- ) ب غذائي آبگوشت - به غذائي - آگار ر هنگام كه بيفزائيد شناسيباكتري مخصوص آگار كافي

. مقدار كند ايجاد سفتي سطح پتري بشقاب در ريختن با بار هر آن مقدار و ميكند تغيير آن نوع با آگار افزودن

معموال مقدار . اين شود تعيين بررسي بايد آگار نوع تغيير آبگوشت در را . آگار ميكند تغيير درصد 3 تا 1/5 مابين درجه 120 در دقيقه 15 بمدت آنرا و كرده حل غذائي

آگار اين . از كنيد سترون اتوكالو در سانتيگراد حرارت. كنيد تهيه مايل محيط هم و ديش پتري هم غذائي

پنج و پپتن گرم 2- وليفسون هوف آزمون براي - محيط ز گرم 3 و پتاسيم اسيد فسفات گرم 3 و سديم كلرور گرم تا را محلول PH. كنيد حل آب ليتر ميلي 1000 در را آگار از ليتر ميلي 15. كنيد صاف را محلول و كرده تنظيم 7/1

و بيافزائيد بآن بلو برموتيمول الكلي درصد 0/2 محلول سترون سانتيگراد درجه 115 در دقيقه 20 مدت براي آنرا آنقدر گلوكز شده سترون محلول از مخلوط باين. كنيد

. برسد درصد يك به محلول نهائي غلظت كه بيافزائيد در ليتر ميلي 4-3 بمقدار و كرده مخلوط آنرا سپس

. كنيد توزيع ميليمتري 12*100 لولههاي گرم 3 - بمقدار آهن ملح قند سه با آگار - محيط س

يك و پپتن گرم 2 و مخمر عصاره گرم 3 و گوشت عصاره دهم دو و سوكروز گرم ده و الكتوز گرم ده و گلوكز گرم سه و سديم كلرور گرم پنج و متبلور 19 فرو سولفات گرم را آگار گرم سي و متبلور 20 سديم تيوسولفات گرم دهم

. باين كنيد حل دادن حرارت با آب ليتر ميلي 1000 در قرمز فنول درصد دهم دو محلول ليتر ميلي 12 مخلوط آزمايش لولههاي در كردن مخلوط از پس و كرده اضافه درجه 115 در دقيقه 20 مدت براي . سپس كنيد توزيع

مايل و عمقي حال در وبگذاريد كنيد سترون سانتيگراد. ببندد

و سديم كلرور گرم 5- آگار سيترات سيمون - محيط ش فسفات گرم يك و متبلور 21 منيزيم سولفات گرم 0/2

گرم 2 و 22 فسفات هيدروژن دي آمونيم گرم يك و پتاسيم ميلي 1000 در را آگار گرم 30 تا 20 و سديم سيترات

دو محلول از ليتر ميلي 40 مخلوط . باين كنيد حل آب ليتر 15 مدت براي بيافزائيد بلو بروموتيمول معرف هزار در

. كنيد سترون سانتيگراد درجه 120 در دقيقه

26

بگذاريد بطوري و كرده توزيع آزمايش هايلوله در سپس بگيرد شكل عمقي هم و مايل بحالت هم كه ببندد ترتيبي به.: كار - دستور7-4-2 آمده بدست جاذب پارچه از ايكه نمونه از ليتر ميلي پنج

پيپت يك بوسيله است شده مخلوط خوب ( و2-3-7 ) الف منتقل تتراتيونات آبگوشت محتوي لوله بيك شده سترون

محتوي لوله بيك را نمونه مقدار همين . همچنين كنيد پالتين حلقه يك بوسيله كنيد منتقل اف سلنيت آبگوشت

دزاكسي آگار سطح در و كرده برداشت نمونه از بزرگ آگار بشقاب روي را ديگر حلقه يك و سيترات كالت

-18 مدت براي را محيطها . كليه دهيد كشت بلر ويلسون . دهيد قرار انكوباتور در حرارت درجه 37 در ساعت 24 سلنيت آبگوشت و تتراتيونات بشقابهاي در كشت از پس

كالت درزاكسي بشقابهاي روي كرده برداشت آن از در سانتيگراد درجه 37 در و داده كشت بلر آگار و ويلسون بشقاب سطح در مجزا كلنيهاي . ايجاد دهيد قرار انكوباتور

پيروي كردن صاف روش از هنگاميكه باشد نظر مد در بايد كاغذ كه سلنيت آبگوشت و تتراتيونات آبگوشت ميشود (-2-3- ) ب آزمونهها در و است شده منتقل آن در صافي

انكوباتور در سانتيگراد درجه 37 در ساعت 24 بمدت را نمونه آنها از پالتيني حلقههاي بوسيله . سپس دهيد قرار

كالت دزاكسي آگار بشقابها روي بر و كرده برداشت. دهيد كشت بلر و ويلسون آگار و سيترات

كشت از پس شيگالها و سالمونالها به مشكوك كلنيهاي تخمير را الكتوز سيترات كالت دزاكسي آگار محيط روي

برجسته غير شفاف , كمرنگ , كوچك گرد ظاهري و نكرده پارا و سالمونالهاتيفي كلنيهاي و دارد شبنم قطر مانند. ميباشند سياه رنگ داراي بلر و ويلسون محيط روي تيفي

روي از را كشت ميتوان بهتر نتيجه آوردن بدست براي . كرد منتقل نيز آگار مكونكي محيط روي بر مايع محيط

را الكتوز نيستند قادر اينكه بعلت شيگالها و سالمونالها رنگ يا بيرنگ كلنيهاي مكونكي محيط روي در كنند تخمير. ميدهد تشكيل گرد و پريده

شب يك از پس فوق جامد محيطهاي روي چنانچه را بشقابها نيامد بدست رؤيت قابل كلنيهاي آنكوباسيون

. دهيد قرار انكوباتور در ديگر ساعت 24 مدت براي

27

انكوباسيون مايع محيطهاي روي بر كشت مورد در الكن اين در چنانچه است كافي كامال ساعت 24-18 مدت براي براي انكوباسيون از بايد نيامد بدست مطلوبي نتيجه مدت بدست مطلوبي نتيجه كه زيرا كرد اجتناب بيشتر مدت

. نميدهد ممكن بتعداد مشكوك كلنيهاي از بررسي - براي ب

بوسيله و ( كنيد بشقاب هر از كلني شش ) حداقل انتخاب روي بر و كرده برداشت شده سترون پالتيني ميله يك

براي و كنيد - منتقل1-3-7- ب لوله در غذائي آبگوشت در سانتيگراد درجه 37 در ساعت 24 تا 18 مدت

براي كشت اين از مدت اين پايان در دهيد قرار انكوباتور براي . همچنين كنيد استفاده رنگآميزي و تحرك آزمايش

حلقه يك نميكنند تخمير را الكتوز كلنيهائيكه خلوص تائيد مكوني بشقاب محيط روي بر را مايع محيط اين از پالتين

درجه 37 در ساعت 24 مدت براي و كنيد منتقل آگار را كشت نتيجه و دهيد قرار انكوباتور در سانتيگراد آگار روي بر محيط اين از كلنيهائي . سپس كنيد مشاهده

درجه 37 در ساعت 24 بمدت و دهيد كشت مورب بدست كشتهاي . سپس دهيد قرار انكوباتور در سانتيگراد

تعيين و سرولوژي آزمايشهاي بوسيله تائيد براي را آمده. كنيد نگاهداري يخچال در نوع

گرم و شكل ميلهاي هستند باكتريهائي شيگالها و سالمونال شماره جدول با باكتريها مشخصه صفات , هنگاميكه منفي

شيگالها و سالمونالها به مشكوك باكتريها كند تطبيق يك. ميباشند

جهت را مورب غذائي آگار كشت هايلوله است - الزم پ چنانچه. داشت ارسال رفرانس آزمايشگاه به تائيد

پارا و تيفي سالمونال تشخيص براي سرولوژي آزمايشهاي . داد انجام است ممكن را هاآزمايش اين باشد مقدور تيفي متكي بايد شيگالها و سالمونالها ديگر انواع شناسائي براي

. بود ذيصالح آزمايشگاه نظر اظهار به كشت از آزمايش اين انجام - براي آز اوره - آزمايش ت

بر و ( برداشته2-4-7- ) ب غذائي آبگوشت ساعته 24 و دهيد ( كشت2-4-7- ) چ محيط مورب سطح تمام روي حرارت درجه 37 در و ساعت 24 تا 18 مدت براي

آزمايش مثبت . نتيجه دهيد قرار انكوباتور در سانتيگراد از پس قرمز با صورتي به محيط رنگ تغيير با آز اوره

28

بود منفي نتيجه . چنانچه ميشود مشهود انكوباسيون . انواع دهيد ادامه روز چهار حداقل را آنكوباسيون

نتيجه ميشود يافت فاضالبها در معموال كه 23 پروتوس. ميدهد مثبت

فرو بوسيله را آزمايش مورد - گونه تحرك - آزمايش ث محيط در ليتر ميلي 5بعمق پالتين مستقيم ميله يك كردن

از خارج در كشت كه كنيد . دقت دهيد ( كشت1-4-7- ) ح. نشود انجام محيط سطح در شيشهاي لوله

37 در ساعت 24 تا 18 مدت براي را محيط اين سپس متحرك . گونههاي دهيد قرار انكوباتور در سانتيگراد درجه

كرد خواهد رشد شروع محيط مركزي قسمت جوانب در اطراف به لوله در محيط مركزي قسمت از رشد يعني محيط بود منفي اول روز در نتيجه . چنانچه ميكند نفوذ

براي اطاق حرارت در روز 6-4 مدت براي را كشت. نگاهداريد احتمالي تحرك مشاهده

24 كشت از پالتين حلقه - يك اندل ايجاد - آزمايش ج - ) ح محيط داخل ( را2-4-7- ) ب غذائي آبگوشت ساعته

درجه 37 در ساعت 48 مدت براي و دهيد ( كشت7-4-1 ليتر ميلي 0/5 سپس دهيد قرار انكوباتور در سانتيگراد

. رنگ دهيد تكان بآرامي و كرده اضافه بآن 24 كواك معرف. است محيط در اندل ايجاد نشانه قرمز

29

كه شود انجام بايد بترتيبي اعمال اين - كليه4 يادآوري . نشود آلوده آزمايشگاه محيط و كننده آزمايش شخص

يك چربي بدون تميز الم يك روي - در گرم - رنگآميزي چ يك داخل يا و مستقيم بطور مايع كشت محيط از نازك اليه

. كنيد تهيه محدود نازك اليه يك جامد كشت از آب قطره اليه الم كردن سرد و شعله روي الم دادن حركت با سپس

متيل محلول با ثانيه 30 مدت براي را اليه كنيد ثابت را با را . اليه كنيد ( رنگ1-4-7- ) ذ ويوله كريستال يا و ويوله

همان با سپس داده (- شستشو1-4-7- ) ذ يد محلول . بعد بماند ثانيه 30 مدت بگذاريد و بپوشانيد آنرا محلول

تا دهيد شستشو اتانول محلول با آنرا مدت اين گذشت از جاري آب با را الم سپس و آيد بدست محو زمينه اينكه

مدت ( براي1-4-7- ) ذ خنثي قرمز محلول از و بشوئيد قرمز رنگ بردن بكار از پس بريزيد لكه روي بر دقيقه يك

با بررسي براي و داده شستشو آب با را الم خنثي. كنيد خشك ميكرسكپ

روي ساعت 24 مدت براي را - گونه كاتاالز - آزمايش ح يك سپس و دهيد (- كشت1-4-7- ) ر مورب بيسموت آگار

در كشت لوله در هيدروژن پراكسيد محلول از ليتر ميلي اكسيژن شدن . آزاد بريزيد است مورب بصورت حاليكه

وجود نشانه هيدروژن پراكسيد محلول از حبابهائي بصورت. ميباشد كاتاالز

-7- ) ر آگار تازه كشت - از وليفسون هوف - آزمايش خ كنيد (- منتقل1-4-7- ) ز محيط محتوي لوله دو ( در4-1

سترون مايع پارافين از نازكي اليه با بايد لولهها از يكي در روز چهار بمدت را لوله . هر شود پوشانده شده

آنها روزانه و دهيد قرار سانتيگراد درجه 37 در انكوباتور لوله در زرد رنگ ايجاد بوسيله اسيد . تشكيل كنيد مشاهده

اكسيداتيو بصورت گلوكز مصرف نشانه كه پارافين بدون. ميشود مشخص است 25 است تخميري واكنش نشانه لوله دو در اسيد تشكيل

به قادر گونه آنستكه نشانه لولهها از يك هر در اسيد فقدان. نميباشد تخميري اتويا اكسيد بصورت گلوكز مصرف

شده تهيه تازه محلول قطره - چند اكسيداز - آزمايش د درصد 1 محلول مساوي حجمهاي از مخلوطي كه معرف

درصد 1 محلول و درصد 95 اتيليك الكل در آلفانفتول كشت به ميباشد آب در اتيلين متيل 26 كلروپاراآمينودي

30

. ظاهر كنيد اضافه(- 1-4-7- ) ر مورب آگار تهيه تازه مثبت واكنش نشانه دقيقه دو مدت در آبي رنگ شدن. است

- گونه آهن ملح و قند سه با آگار محيط روي - آزمايش ذ مورب سطح روي بر پالتيني ميله يك بوسيله را مشكوك

عمق ( در1-4-7 ) س آهن ملح و قند سه با آگار محيط هفت بمدت آنرا . سپس دهيد كشت مورب سطح و محيط

روزانه را كشت نتيجه داده قرار درجه 37 انكوباتور در روز . پارگي است اسيد ايجاد نشانه رنگ تغيير كنيد مشاهده

شدن سياه و گاز توليد بعلت كشت خط امتداد در محيط. ميباشد سولفوره هيدورژن توليد بعلت محيط

ساعت 24 كشت - از27 پيروريك فنيل اسيد آزمايش- ر (1-4-7- ) ر غذائي آگار روي باكتري از متراكم

تهيه نمك نرمال محلول ليتر ميلي نيم در سوسپانسيوني ) قطر كنيد منتقل گشاد دهان آزمايش لوله بيك آنرا و كنيد ( به باشد سانتيمتر 1/5 حداقل آزمايش لوله

دهم دو محلول از ليتر ميلي 0/5 فوق سوسپانسيون بخوبي آنرا سپس بيفزائيد 28 آالنين - فنيل .الد درصد

حرارت درجه در ساعت سه حداقل آنرا و كرده مخلوط چند . سپس نگاهداريد افقي بطور آزمايشگاه محيط ايجاد بيفزائيد بآن فريك كلرور اشباع نيمه محلول از قطره

ماندن اثر در كه ميباشد مثبت واكنش نشانه تيره سبز رنگ و ميدهد مثبت واكنش پروتوس . گونههاي ميرود بين از

. ميرود بكار كنترل بعنوان-4-7- ) ر غذائي آگار تازه كشت - از سيترات - آزمايش ز

بر را مشكوك گونه مستقيم پالتيني ميله يك ( بوسيله1 دهيد كشت ( مورب1-4-7- ) ش سيترات محيط يك روي

براي درجه 37 انكوباتور در روز چهار مدت آنرا سپس و. كنيد نگاهداري باكتريها رشد

كلنيهاي از پالتين حلقه - يك قند روي بر - آزمايش س در آمده بدست غذائي آبگوشت روي شده كشت مشكوك

(1-4-7 ) ج قندي محيطهاي از يك هر ( به2-4-7- ) ب بند مدت براي را آنها سپس بيفزائيد يك جدول در شده داده داده قرار انكوباتور در سانتيگراد درجه 37 در ساعت 24

. كنيد مالحظه را نتيجه و- ويبروكلر7-5 كشت - محيط7-5-1

31

پنج و پپتن گرم - ده قليائي پپتن آب كشت - محيط الف به را حجم و كرده حل آب مقداري در را سديم كلرور گرم 8/2 در را محلول PH . سپس برسانيد ليتر ميلي هزار

ارلن يا بطريها در ليتري ميلي 50 بمقادير و كنيد تنظيم فشار در دقيقه 30 بمدت و كرده توزيع مناسب مايرهاي

. كنيد سترون اتوكالو در مربع سانتيمتر بر كيلوگرم يك29 ارونسون كشت - محيط ب

شسته رشته يا گرد از گرم 25- پايه غذائي آگار محيط -3-7- ) ب غذائي آبگوشت ليتر ميلي 100 در را آگار شده

درجه 50 تا را محلول . سپس كنيد حل حرارت ( بوسيله1 براي كرده تنظيم 7/2 تا آنرا PH و كرده سرد سانتيگراد

. كنيد سترون بخار جريان با دقيقه 10 مدت كربنات از شده تهيه درصد ده محلول ليتر ميلي بيست

درجه 100 در دقيقه 30 بمدت قبال كه آب بي سديم آگار ليتر ميلي 300 به است شده داده حرارت سانتيگراد

جريان در آنرا دقيقه 30 مدت و بيفزائيد شده ذوب پايه به است گرم هنوز محيط حاليكه . در دهيد قرار بخار

15 و سوكروز درصد 20 محلول ليتر ميلي 15 ترتيب ليتر ميلي 1/2 و گلوكز درصد 20 محلول ليتر ميلي

ليتر ميلي 6 و شده اشباع بازي فوشين الكل محلول ( آب ) در سديم سولفيت از شده تهيه درصد 10 محلول

حرارت سانتيگراد درجه 100 در دقيقه 30 بمدت قبال كه دقيقه 20 بمدت را . مخلوط بيفزائيد است شده داده

در شفاف محلول از مناسب مقدار . سپس كنيد سترون و كرده منتقل شده سترون استريل پتري بشقابهاي

و كنيد نگاهداري تاريكي در را بشقابها . اين ببندد بگذاريد. دهيد قرار استفاده مورد روز سه از پس

گرم 5 و پپتن گرم 10- صفرا نمك آگار - محيط پ توروكالت گرم 5 و سديم كلرور گرم دو و گوشت عصاره . به كنيد حل بخار بوسيله آب ليتر ميلي 100 در را سديم

مخلوط از پس و كرده اضافه آگار گرم 30 فوق محلول با را مخلوط PH . سپس كنيد حل دادن حرارت با كردن

را . مخلوط كنيد تنظيم 8/5 تا سديم هيدرواكسيد محلول به قبال كه جاذب پنبه يا صافي كاغذ بوسيله و كرده خنك

محيط. كنيد , صاف است شده مرطوب آب وسيله سترون مايرهاي ارلن در مناسب مقادير به را شده ساخته

در و اتوكالو بوسيله دقيقه 30 بمدت و كرده توزيع شده

32

. در كنيد سترون مربع سانتيمتر بر كيلوگرم يك فشار در آن توزيع و ذخيره محيط كردن ذوب از لزوم موقع

. بسازيد آماده محيط شده سترون پتري بشقابهاي(1-4-7- ) ذ بند مانند گرم آميزيرنگ براي - محيط ت (1-4-7- ) ح بند مانند تحرك آزمايش براي - محيط ث -7 ) ز بند مانند ليفسون و هوف آزمايش براي - محيط ج

4-1)(1-4-7- ) ج بند مانند قندي - محيطهاي چ - نيز1-5-7- ذ بند ) به هيدروالزآرژنين دي - محيط ح

گرم 5 و باكتريولوژي پپتن گرم 5/9( - شود مراجعه گرم 0/5 30 پيريدوكسال گرم ميلي 5 و گوشت عصاره كرده حل آب ليتر ميلي 1000 در حرارت بوسيله را گلوكز

از ليتر ميلي 5 . سپس كنيد تنظيم 6 تا را محلول PH و ليتر ميلي 2/5 و درصد 0/2 ارغواني برموكروزل محلول محلول اين. بيفزائيد بآن قرمز كرزول درصد 0/2 محلول

سترون سانتيگراد درجه 115 در دقيقه 20 مدت براي را محلول به بمقداري 31 ارژنين - هيدروكلرور . ال كنيد

درصد يك معادل محلول در آن نهائي غلظت كه بيفزائيد نهائي غلظت رود بكار 32 اسيد آمينو . ال د . چنانچه شود

تا يك بمقادير را محلول . اين باشد درصد دو بايد محلول 10*67 كوچك آزمايش لولههاي در ليتري ميلي 1/5

سطح استريل مايع پارافين . بوسيله كنيد توزيع ميليمتري به شده سترون مايع پارافين از اليه يك بوسيله را محيط

10 بمدت را آنها . سپس بپوشانيد ميليمتر 5 ضخامت. كنيد سترون حرارت درجه 115 در دقيقه

مانند را محيط - اين33 الز دكربوكسي ليزين - محيط خ . بريد بكار ليزين هيدروكلرور

(1-5-7- ذ بند ) به34 الز دكربوكسي تين ارني - محيط د -5-7- ) ج بند محيط مانند را محيط . ابتدا كنيد مراجعه نيز بكار تين ارني هيدروكلرور از آرژنين بجاي و كنيد ( تهيه1

. بريد دي و الز كربوكسي فعاليت براي ديگر - محيطي ذ

گرم 3 و آن معادل يا 35 باكتروپپتن گرم 5 مقدار هيدروالز ليتر ميلي 1000 در را گلوكز گرم يك و آبجو مخمر عصاره

. كنيد تنظيم 6/7 در را محلول PH. كنيد حل آب برموكرزول درصد 0/2 محلول از ليتر ميلي 10 سپس

در دقيقه 20 بمدت را . مخلوط كنيد اضافه بآن ارغواني

33

از آنقدر محلول . باين كنيد سترون سانتيگراد درجه 115 يا هيدروكلروليزين يا آرژنين هيدروكلرور آمينه اسيدهاي

بيفزائيد است شده آزمايش قبال كه تين هيدروكلرورارني و گرا چپ نمك براي درصد 0/5 محلول نهائي غلظت كه

. در شود گرا راست نمك درصد يك يعني مقدار اين برابر . كنيد تنظيم 6/7 در دوباره را محلول PH لزوم صورت

لولههاي در ليتري ميلي دو مقادير به را محلول اين محيط اين . سطح كنيد توزيع ميليمتري 67*10 آزمايش

بضخامت شده سترون مايع پارافين از اليه يك بوسيله را دقيقه 10 بمدت را لولهها . اين بپوشانيد ميليمتر 5 تقريبي

. كنيد سترون سانتيگراد درجه 115 در كامال نمونه از ليتر ميلي 5 - مقدار آزمون - روش7-5-2

پيپت يك بوسيله ( را2-3-7 ) الف بند شده مخلوط منتقل قليائي پپتن آب محتوي بطري يك در شده سترون

دهيد كشت درجه 37 در ساعت 24-18 بمدت آنرا و كنيد مخلوط كامال نمونه از بزرگ پالتين حلقه يك . همچنين

و دهيد كشت صفرا نمك محتوي پتري بشقاب در را شده در سانتيگراد درجه 37 در ساعت 24-18 مدت براي آنرا

پس قليائي پپتن آب محيط سطح . از دهيد قرار انكوباتور بشقاب در و كرده برداشت بزرگ پالتين حلقه يك كشت از

كشت ارونسون محيط و صفرا نمك آگار محتوي پتري با درجه 37 حرارت در ساعت 24 تا 18 بمدت و دهيد

كلنيهاي ارونسون محيط در. دهيد قرار درانكوباتور قرمز مركز يك با انار دانههاي همرنگ ويبريو به مشكوك

روي . در ميشود ظاهر اطراف در روشن هاله و رنگ , دارد مشخص ظاهري كلنيهاي صفرا نمك آگار محيط

روي بر ويبريوكلرا شده شناخته گونه دادن رشد بوسيله مشخصه صفات كردن مقايسه و صفرا نمك آگار محيط ممكن محيط همين روي بر اشريشيا كلني رشد با كلني. كرد مالحظه است

الم روي آگالتيناسيون بوسيله بايد مشكوك رشدهاي لوله بيك را باقيمانده (- كلنيهاي3-5-7) بند شود آزمايش 6-4 بمدت و كنيد منتقل غذائي آبگوشت محتوي آزمايش داده آزمايشهاي . همچنين دهيد قرار درانكوباتور ساعت

. شود ( انجام2-5-7- ) خ ( تا2-5-7) بند در شده است شده داده زير فهرست بصورت ويبريوها خصوصيات

مرجع آزمايشگاه بيك نهائي تائيد براي گونهها اينكه از قبل

34

فهرست با بايد گونهها خصوصيات . اين شود فرستاده. شود تطبيق شده داده

منفي, گردها گرم - رنگآميزي1 مثبت - تحرك2 مثبت كاتاالز - فعاليت3 مثبت اكسيداز - فعاليت4 تخميركنندگي واكنش ليفسون – هوف - آزمايش5 گاز توليد بدون تخمير گلوكز كشت - محيط6 منفي هيدروالز و آرژنين - فعاليت7 مثبت دكربوكسيالز ليزين - فعاليت8 تين ارني - فعاليت9

دكربوكسيالزمثبت

تخمير بدون اينوزيتول كشت - محيط10 كنندگي تخمير واكنش مانيتول كشت - محيط11

نيز پلويوموناس همچنين و آئروموناس هايگونه . ميدهد نشان ( را6) ( تا1) رديف شده داده خصوصيات

به بايد ويبريوها گونهها اين تشخيص براي ترتيب باين ليزين آئروموناس . گروه نمود توجه زير مشخصات

ميباشد مثبت هيدروكسيالز و آرژنين و منفي دكربوكسيالز . نميكند تخمير را اينوزيتول و ميكند تخمير را مانيتول

اينوزيتول معمول و نميكند تخميري را يليزيوموناس گروه. ميباشد مثبت دكربوكسيالز ليزين ميكند تخمير را

مثبت خواه مشكوك ويريوكلينها همه - الزمست5 يادآوري شده انجام آگلوتيناسيون آزمايش بوسيله كه منفي خواه و

فرستاده دار صالحيت آزمايشگاه بيك تائيد براي است. شود

( انجام2-4-7- ) چ بند طبق گرم آميزيرنگ- الف . شود

( انجام2-4-7- ) ث بند طبق تحرك - آزمايش ب . شود

( انجام2-4-7- ) ح بند طبق كاتاالز - آزمايش پ . شود

( انجام2-4-7- ) د بند طبق اكسيداز - آزمايش ث . شود

35

( انجام2-4-7- ) خ بند طبق ليفسون هوف - آزمايش ج . شود

پالتين حلقه يك : بوسيله قند روي متعدد - آزمايشهاي چ -4-7- ) ج قندي محيطهاي از يك بهر مشكوك كلنيهاي از مدت براي و كنيد منتقل است شده داده 2-5-7 بند ( در1

دهيد قرار انكوباتور در سانتيگراد درجه 26 در ساعت 24. كنيد مالحظه را واكنشها سپس و استفاده - با36 آرژنين هيدروالز دي فعاليت - آزمايش چ

آگار شده كشت تازه محيط از مستقيم پالتين ميله يك از-5-7- ) ح محيط در و كرده ( برداشت1-4-7- ) ر غذائي

قرار انكوباتور در را . محيط كنيد داخل پارافين ( زير1 بررسي روزانه را كشت نتيجه روز چهار مدت تا و داده رنگ زرد ابتدا گلوكز از اسيد ايجاد بعلت محيط. كنيد

رنگ 37 هيدروالسيون دي آرژنين چنانچه سپس و ميشود همان با آزمايش لوله دو . همچنين ميشود بنفش محيط شده شناخته گونه آنها از يكي در و برداشته محيط

ارومونازيا شده شناخته گونه ديگري در و ويبروكلرا . كنيد عمل نمونه همانند و دهيد كشت را سالمونالتيفي

واكنش ( نشانه ) ويبروكلرا اول لوله در زرد رنگ ظهور يا ) ارموناز دوم لوله در بنفش رنگ ظهور و است منفي

. است مثبت واكنش ( نشانه سالمونال را آزمايش - 38 دكربوكسيالزليزين واكنش - آزمايش ح

(1-5-7- ) خ مربوطه محيط بردن بكار - با2-5-8- چ مانند. دهيد انجام

را - آزمايش تين دكربوكسيالزاورني واكنش - آزمايش خ -5-7- ) چ مربوطه محيط بردن بكار ( با2-5-7 ) چ مانند

. دهيد ( انجام1 - براي الم روي ناسيون آگلوتي تسريع - آزمايش7-5-3

قطره يك بوسيله تميز ايشيشه الم يك روي ويبركلرا درصد 0/87 فيزيولوژي ) سرم ايزوتونيك نمك محلول آنتي محلول قطره يك همچنين ( و آب در سديم كلرور ( اوگاواوايماباباتيربالد سرمهاي از ) مخلوطي سرم

برداشت رشد از دهيد قرار هم كنار در پالتين حلقه بوسيله سوسپانسيون ديگر محيط هر يا غذائي آگار از شده

ايزوتونيك نمك محلول قطره يك در و برداشته را غليظي آنتي قطره با را سوسپانسيون اين باالخره و كنيد مخلوط

36

با مثبت . واكنش كنيد مخلوط پالتين ميله بوسيله سرم. ميشود مشخص دقيقه يك تا نيم مدت در دلمه ظهور

غذائي آگار در را گونهها بيشتر اطمينان - براي7-5-4 توجه . بايد داريد ارسال ذيصالح آزمايشگاه به مورب گونههاي از اخيرا كه ذخيره گونههاي كه داشت

شده جدا مورب غذائي آگار روي بر رشد از ويبريوكلرايس درجه 4 در گونهها زيرا كرد نگاهداري يخچال در نبايد است

آگار روي . ويبركلرا بماند زنده نميتواند سانتيگراد حرارت. ميماند زنده بخوبي اطاق حرارت درجه در مورب غذائي

   

  

1-winkler 2 -Alsterberg3 -Stewart-Rideal 4 -theriault-Short 5 -Potassium biniodata solution 6 -Solmonella typhi 7-shigella Species 8 -Vibrio cholerae9 -Enrichment

10-Selective11-Saprophitio12 -s tetrathinate broth'Moller-Kauffman 13 -aceptic 14 -Stock solution 15-Andrades indientor 16 -s medium'Christensen 17 -Seitz filtration 18 -s Reagent'Kovac 19( -7H2O,FeSO4 )20( -5H2O,NaS2O3)21( -6H2O,MgSo4 )22( -NH4H2PO4 )

37

23 -Proteus 24 -s Reagent'Kovac 25 -axidative 26 -Para - aminodimethylaniline 27 -Phenyl pytuic acid 28 -Phenylalanine-dl 29 -s medlum'Aronson 30 -Pyridoxal 31 -l-arginie hydrochloride32 -aminoacid-dl33 -x ylase medium-lysine decarbo 34 -Ornithine decarboxylas 35 -Pepton bactrolgical36 -Arginine dehydrolase aclivity test 37 -dehyrolation 38.-Lysine decarbolase activity test

38

 

ISLAMIC REPUBLIC OF IRAN 

Institute of Standards and Industrial Research of Iran 

ISIRI NUMBER 

1779 

      

 

39