Upload
irina-cornilov
View
228
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
7/25/2019 225429867 Metode de Colorare
1/16
METODE DE COLORARE BACTERIANA
Timpii de efectuare a frotiului bacterian
1.Etalarea ntinderea produsului pe lama, intr-unstrat subtire.
2.Uscarea la temperatura camerei sau la termostat
3.Fixarea fizic sau cimic
!."olorarea propriu zis
7/25/2019 225429867 Metode de Colorare
2/16
#impii de efectuare ai frotiului
1. Etalarea
7/25/2019 225429867 Metode de Colorare
3/16
#impii colora$iei %&'(1. "olorare cu )iolet de *entiana sau cristal )iolet, timp de 1-2 min
2. (ordansare +fixare cu solutie lu*ol 1-2 minute3. palare cu apa demineralizata!. iferentiere cu solutie de alcool-acetona. olutia se toarna tinand
lama in pozitie inclinata +/-10 sec pana cand licidul scurs numai este colorat.
/. palare cu apa demineralizata. &ecolorare cu solutie de fuxina diluata in prealabil 110, timp de
30 sec.. palare cu apa demineralizata4. Uscare5. Examinare la microscop cu obiecti) uscat sau umed
7/25/2019 225429867 Metode de Colorare
4/16
#impii coloratiei %&'(
7/25/2019 225429867 Metode de Colorare
5/16
Mecanisme de actiune ale colorantilor asupraelementeloc componente bacteriene
6ioletul de *entiana coloreaza in )iolet toate celulele bacteriene,fix7ndu-se pe componentele citoplasmatice.
8u*olul permite fixarea colorantului in celul ecolorantul alcool-acetona )a decolora bacteriile %ram ne*ati)e,
care au un perete sarac in peptido*licani, care lasa sa treacadecolorantul ce contine alcool +molecula lipofila. 'cesta )adecolora citoplasma, eliminand )ioletul de *entiana.
impotri)a, in cazul bacteriilor %ram poziti)e, peretele esteimpermeabil pentru alcool, deoarece contine un strat dens depeptodo*licani. 'ceste bacterii )or rm7ne colorate n )iolet
"ontra-colora$ia cu fuxin )a colora n ro9u bacteriile %ramne*ati)e decolorate n etapa anterioar. Fuxina nu are efectasupra bacteriilor %ram poziti)e care rm7n colorate n )iolet
7/25/2019 225429867 Metode de Colorare
6/16
"olora$ia %ram
7/25/2019 225429867 Metode de Colorare
7/16
Examinare microscopica
:acili ubtilis %ram ;Escericia coli %ram -
"oci %ram poziti)i
"oci %ram ne*ati)i
7/25/2019 225429867 Metode de Colorare
8/16
7/25/2019 225429867 Metode de Colorare
9/16
"olora$ia
7/25/2019 225429867 Metode de Colorare
10/16
"oloratia cu albastru metilen
Procedura:1. e realizeaz un frotiu care se fixeaz la cldur 9i
se las s se rceasc.
2. Frotiul se acoper cu solu$ie de albastru de metilen+omolo* al albastrului de orto-toluidin timp de 2-
minute.
3. e spal colorantul iar lama se las s se usuce.
RezultateB Arin aceast metoda *ranula$iilemetacromatice intracelulare se coloreaz nro9u p7n la ne*ru iar restul elementelorcelulare n albastru-pal.
7/25/2019 225429867 Metode de Colorare
11/16
(etoda de colorare
7/25/2019 225429867 Metode de Colorare
12/16
Examinare microscopica
:acilii Coc-coloratia
7/25/2019 225429867 Metode de Colorare
13/16
Sisteme/Scara de cuantificare
Nr de BAAR percamp
Brightf. &IUATLD/W! Sca"e
#$%%%'
Brightf. & ATSSca"e
#$%%%'
("u)r. &IUATLD/W!
Sca"e
#*%%+*,%'
("u)r. & ATSSca"e
#*%%+*,%'
-er)
$+*/%% campuri
$+/$%% campuri
$+/$% campuri$+/$ campi
$%+/$camp
01$%%/$camp
Negati2
Actua"
Actua"
$3*3
3
3
Negati2
Actua"
$3
*33
43
43
Negati2
Actua"
Actua"
Actua"$3
*3
3
Negati2
Actua"
Actua"
$3*3
3
43
(etode de cuantificare a densit$iibacililor alcool-acido rezisten$i
7/25/2019 225429867 Metode de Colorare
14/16
"oloratia (aD-%runald-%iemsa
(etoda foloseste un amestec de coloranti
acizi, bazici si neutri. #impii coloratieiB
5 e acopera frotiul cu solutie (aD-%runald5 e adau*a aceeasi cantitate de apa distilata
neutra5 e amesteca cu a?utorul unei pipete Aasteur5 e asteapta 2 minute5 e )arsa solutia de pe lama
5 e adau*a solutie %iemsa timp de 2/-30minute5 e spala lama cu apa de robinet sub ?et slab5 e usuca frotiul
5 e examineaza la microscop cu imersie
7/25/2019 225429867 Metode de Colorare
15/16
munofluorescen$a
Substan fluorescent !uloare obinut'uramin G 6erde'uramin G-&odamin : %albenportocaliu'cridin Gran*e %albenportocaliu
Contra-coloraie Fond
6ermanganat de p)tasiu
Acridin7 !range
8ar)n 9nchis/Negru
:a";en/p)rt)ca"iu
7/25/2019 225429867 Metode de Colorare
16/16
munofluorescen$a
"olora$ie cu auramin pe fond colorat cu acridin-portocaliu