Biotecnologia
2013
INTRODUCCION
El presente informe respecto a la produccin de celulasas a
partir del Aspergillus niger por el mtodo de fermentacin sumergida
desarrollado en el laboratorio de Biotecnologa, este mtodo consiste
en el crecimiento y desarrollo del hongo mencionado en forma libre
por medio de un cultivo lquido.
La ventaja del mtodo de fermentacin sumergida es que los
parmetros del proceso de cultivo son controlados son mayor
dificultad ya que se cuenta con un equipo especial para la
realizacin de esta fermentacin. Y as establecer modelos matemticos
que predigan y optimen el proceso fermentativo.
La produccin de celulasas tienen gran importancia en la
industria textilera, la del papel, en formulacin de detergentes y
en la industria de los alimentos, aunque esta tecnologa todava no
es factible econmicamente a la escala que se trabaja, si esta es
poca, pero se tiene expectativas del uso masivo en el futuro para
producir enzimas mediante este mtodo. Por lo cual es presente
trabajo tiene por objetivos lo siguiente:
Utilizar el sistema de fermentacin sumergida para la produccin
de celulasas por Aspergillus niger.
Extraer la enzima celultica del sistema de fermentacin y
utilizara para la hidrolisis de celulosa.
Los Alumnos.
II. Revisin bibliogrfica
2.1. Microorganismos productores de celulasas
Las enzimas celulasas son producidas por una variedad de
bacterias y hongos aerbicos o anaerbicos, mesfilos o termfilos. Sin
embargo, slo algunos de ellos producen enzima celulasa extracelular
capaz de hidrolizar la celulosa. A partir de los hongos aerbicos,
tales como: Trichoderma viride, Trichoderma reesei, Penicillium
pinophilum, Aspergillus niger, Fusarium solani, Talaromyces
emersonii y Trichoderma koningii, se han obtenido los complejos
celulolticos utilizados en la mayora de los estudios (Eriksson
& Wood 1985), debido a que presentan un sistema enzimtico
completo de celulasas capaces de degradar parcial o totalmente la
celulosa en celobiosa y glucosa (Ryu & Mandels 1980).
2.2. Aspergillus niger
Entre los organismos eucariotas que han sido objeto de numerosas
e importantes investigaciones, se encuentra el hongo Aspergilus
nger. Este hongo pertenece al gnero Aspergillus, que fue descrito
por primera vez por Micheli en 1729 en su obra Nova Plantarum
genera, siendo validado por Haller, en sus tratados de 1742 y 1768
y ms tarde, por Link en el ao de 1809. Estos hongos, causan el
deterioro de muchos productos alimenticios (ajo, alimentos para
aves, arvejas, avena, berenjena, bananas, cebolla, harina de trigo,
entre otros). Los productos metablicos de la invasin fngica suelen
ser muy txicos, tanto para el hombre como para otros animales
(Accensi, 2000).
Al comienzo de su crecimiento Aspergillus niger forma colonias
miceliales lanosas blancas o amarillentas; a medida que ste se
desarrolla la superficie micelar se va cubriendo de puntos negros:
son las cabezas aspergiares que pueden llegar a medir hasta 1 mm de
dimetro, stas se encuentran cargadas de esporas negras (Figura 1 y
2). Este hongo es un importante agente productor de cidos orgnicos,
principalmente glucnico, ctrico y oxlico; tambin es utilizado para
la obtencin de enzimas como la glucoamilasa y del 1--galactosidasa,
por lo que es ampliamente cultivado para la produccin industrial de
estos compuestos qumicos
Figura 1.Aspergillus niger Figura 2.Aspergillus niger
2.3. Tipos de celulasas
La accin enzimtica para llevar a cabo la hidrlisis de la
celulosa implica la operacin secuencial y la accin sinergsta de un
grupo de celulasas, que presentan diferentes sitios de enlace,
debido a la naturaleza compleja de la molcula de celulosa (Lee
1997). El sistema de celulasa tpico incluye tres tipos de enzimas:
la endo--1,4-glucanasa (Cx) (1,4--D-glucan glucanohidrolasa
E.C.3.2.1.4), la exo--1,4-glucanasa (C1) (1,4--D-glucan
celobiohidrolasa E.C.3.2.1.91) y la -1,4-glucosidasa (celobiasa)
(Cb) (-D-glucsido glucohidrolasa E.C.3.2.1.21).
2.4. Preparados celulolticos comerciales
En la actualidad existen disponible numerosos preparados
enzimticos comerciales grado alimenticio que contienen
principalmente actividad celuloltica (endo--1,4-glucanasa
E.C.3.2.1.4, exo--1,4-glucanasa E.C.3.2.1.91, -1,4-glucosidasa
E.C.3.2.1.21). Estos preparados enzimticos son obtenidos de
microorganismos de origen fngico y bacteriano, que principalmente
provienen de los microorganismos Trichoderma sp., Aspergillus nger
y Bacillus subtillis (Bhat 2000). Algunos de estos preparados
enzimticos son: Crystalzyme PML-MX de Valley Research Inc.,
Biocellulase A de Quest Intl., Celluclast 1.5 L de Novo Nordisk,
Econase Ce-S de Enzyme Development Co., Cellulase AP30K de Amano
Enzyme, Stonenzyme Plus, Zymafilt L-300 y Macerex de Enmex S.A. de
C.V., Novozym 342 de Novo Industries, Cellubrix L de Novo Nordisk y
Cellulase de Bio-Cat Inc. Todos son solubles en agua y su
presentacin es en estado lquido, excepto el preparado Cellulase que
es en polvo. As tambin, Crystalzyme PML-MX, Macerex y Cellulase son
preparados enzimticos con actividad mixta porque adems de actividad
celulasa contienen actividad pectinasa y hemicelulasa. Estos
solamente son algunos de los preparados enzimticos comercialmente
disponibles en el mercado, ya que existen muchos de ellos, dado a
la amplia gama de aplicaciones que tienen las celulasas en las
diferentes industrias tales como de alimentos para consumo humano,
alimentos para animales, en textiles y combustibles (Mandels
1985).
2.5. Aplicacin de enzimas sobre la obtencin de componentes
alimenticios
El inters sobre el estudio de la aplicacin de enzimas en la
industria de la extraccin de productos vegetales se ha incrementado
de manera importante en las ltimas dos dcadas, debido a que ha
mostrado ser una herramienta factible facilitando la liberacin de
los componentes de las clulas del tejido adems de liberar el
compuesto extra que se encuentra encerrado dentro de las clulas
incrementando la produccin.
2.6. La influencia de la actividad del agua en el medio
El agua juega diversos papeles en los sistemas biolgicos, ya que
participa directamente en los procesos de solvatacin y difusin de
nutrientes, y en algunos mecanismos de interaccin molecular, adems
de ser un importante componente biolgico estructural. El agua
presenta dos funciones fundamentales Gervais P. y Molin P.
(2003):
A nivel celular es un solvente que provee de nutrientes,
facilita la excrecin de desechos y metabolitos secundarios, adems
de constituir un alto porcentaje de la estructura celular.
A nivel molecular el agua se encuentra unida a otras molculas,
como los polioles, azcares o enzimas, contribuye a mantener el
volumen celular, y estabiliza las estructuras de los biopolmeros,
como las protenas, los nucletidos, y los carbohidratos.
Gutirrez y colaboradores (1995) estudiaron el efecto de la
concentracin de glucosa sobre el crecimiento en A. niger para la
produccin de diversos metabolitos secundarios, analizando la
produccin de cido ctrico y polioles a altas concentraciones de
glucosa (mayores de 300 g/L) en una fermentacin en estado
slido.
Otro metabolito secretado por A. niger es la enzima tanasa,
Cerda y colaboradores (2005) proponen la hiptesis de que para
modificar la produccin de dicha enzima es necesario alterar la
disponibilidad de los nutrientes; por lo que llevaron a cabo un
estudio del efecto de la reduccin y aumento de glucosa en el medio,
teniendo como resultado que bajas concentraciones de glucosa
incrementan la produccin de la enzima intra y extracelular; a altas
concentraciones de glucosa no se ve afectada la produccin de tanasa
intracelular, en cambio la produccin extracelular decrece
notoriamente y bajo estas condiciones concluyen que la difusin del
sustrato en el medio slido puede ser uno de los factores
responsables de la disminucin de la produccin enzimtica.
En consecuencia, el comportamiento de un microorganismo en
crecimiento es el resultado de la interaccin que se produce entre
ste y el medio ambiente en el reactor, y que en rigor es el
resultado de los llamados efectores intra y extra celulares del
proceso fermentativo. Los efectores internos estn representados por
la dotacin gentica intrnseca del organismo considerado y por sus
mecanismos de regulacin metablica. Por otra parte, los efectores
extra celulares estn representados por las condiciones presentes en
el medio ambiente, es decir, valores de pH, temperatura, la
agitacin, la aireacin, etc. Por lo tanto, stos efectores externos
estn constituidos por las variables de manipulacin fsica que se
fijan o se programan en el curso del proceso de produccin. Estos
ltimos pueden ser modificados por alteraciones del medio ambiente,
mientras que la existencia de un gen, depende de la especie del
microorganismo considerado. Un gen est o no est, slo su expresin
puede modificarse (OEA, 2006).
2.7 Fermentacin.-
El proceso de fermentacin se conoce desde hace tiempo; sin
embargo, cada da se estudian nuevas tcnicas para mejorarlo; ya sea
mediante el mejoramiento del microorganismo (Por ingeniera gentica,
fusin de protoplastos, mutagenesis y otras tcnicas de microbiologa
aplicada) o la seleccin de los medios ptimos, as como el control de
los diversos parmetros que determinan el crecimiento y produccin
del microorganismo. Se conocen varios tipos de fermentacin como
son: Fermentacin sumergida tanto en suspensin como con clulas
inmovilizadas y fermentacin en sustrato slido (Lpez et.al
(2002)).
La primera involucra aquellos procesos que se realizan con los
agentes biolgicos inmersos en la fase acuosa y la fermentacin
sumergida con clulas inmovilizadas es semejante a la anterior,
excepto que los agentes biolgicos estn unidos a soporte insolubles
en agua. Con respecto a la fermentacin en sustrato solido (FSS),
esta se efecta con la utilizacin de materiales insolubles en agua y
con poca agua en el sistema. (Lpez et.al (2002)).
La mayora de los productos obtenidos por va biotecnolgica son
producidos por fermentacin; por ejemplo, los antibiticos, el cido
ctrico, los aminocidos, entre otros. (Lpez et.al (2002)).
2.8 Celulasas
En la actualidad, es ampliamente conocido que el papel es uno de
los productos de mayor uso en la vida del hombre. Se fabrica a
partir de una materia prima renovable: las fibras de celulosa
extradas principalmente de los rboles, pero tambin de otras
especies vegetales, como paja, bagazo de la caa de azcar, bamb,
algodn, lino, entre otros.
Sin embargo, es menos conocido que la celulosa se encuentra
comercialmente disponible en una gran variedad de presentaciones y
se utiliza en las industrias de los detergentes, textil y
alimenticia, entre otras. Esto se debe a la posibilidad de romper
la molcula de fibra celulsica (un polmero) en unidades ms pequeas,
gracias a la accin de algunas enzimas llamadas celulasas
Al estudiar las enzimas celulasas que utilizan naturalmente los
hongos y bacterias para degradar la celulosa, se encontr que la
hidrlisis (degradacin) de este polmero es muy compleja. Por eso, es
necesario investigar las estructuras y funciones de estas enzimas
para conocer con mayor detalle los mecanismos enzimticos
involucrados en la degradacin de la celulosa.
En este sentido, se espera que las herramientas moleculares y
biotecnolgicas permitan mejorar los procesos ya existentes, o bien
encontrar nuevas aplicaciones.
2.8.1 La celulosa: el polisacrido natural ms abundante en la
naturaleza
La celulosa es el principal componente de la pared celular de la
mayor parte de las plantas. Una clula vegetal joven contiene
aproximadamente un 40% de celulosa y la madera un 50 %. El ejemplo
ms representativo lo constituye el algodn que contiene ms de 90% de
celulosa.
Teniendo en cuenta su estructura qumica, se define como un
polisacrido lineal formado por residuos de glucosa unidos por
enlaces beta 1-4 (-1,4). La configuracin , le permite a la celulosa
formar cadenas largas y lineales, las cuales se presentan unidas
entre s por medio de enlaces de puentes de hidrgeno dando lugar a
la formacin de microfibrillas. Estas regiones, conocidas como
regiones cristalinas, son altamente ordenadas y le dan las
caractersticas de insolubilidad, rigidez y resistencia al ataque
enzimtico.
iii. materiales y mtodos
3.1. MATERIALES:
Cultivo esporulado de Aspergillius niger
Matraz Kitasato y Embudo Buchner
Solucin de Tween 80 al 0.01 %
Tubos de prueba
Solucin nutritiva en g/L
Gradillas
Cmara de Neubauer
Succionador
Microscopio compuesto
Espectrofotmetro
Erlenmeyer de 250 mL
Vortex
Placas Petry
Bomba de vaco
Papel filtro
DNS
3.2.- MTODO
a) Preparacin de agar papa dextrosa (PDA) para cultivo de
esporas de Aspergillus niger
Trozar la papa y cocinarla a fuego lento con 800 mL de agua
destilada. Retirar del fuego y filtrar dos veces (con gasa y/o
algodn) la solucin obtenida. Disolver la glucosa y enrasar con agua
destilada hasta los 1000 mL. Agregar y disolver el agar.
Esterilizar a 121 C por 15 min. Opcionalmente, despus de
esterilizar agregar oxitetraciclina a una concentracin final de 100
ug/mL cuando el medio se ha enfriado.
Esterilizamos los materiales para hacer la respectiva
siembra
Vertemos el agar de papa dextrosa en los de 250 mL y procedemos
a sembrar el Aspergillus niger.
Lo dejamos incubar por 5 das a 30 C.
Realizamos la dilucin, mezclamos en el vortex para tomar una
alcuota y cuantificamos en el microscopio.
C) FERMENTACIN SUMERGIDA
METODOS
Se prepar el medio de cultivo lquido para la fermentacin
sumergida.
Se aadi 60mL del medio de cultivo en frascos de 250 mL e
inocular a cada frasco de fermentacin 3% volumen (v/v) de inoculo
con 1X106 esporas/mL.
Se agito el sustrato lquido para mezclar adecuadamente e incubar
a 30C por 4 a 5 das en un shaker a 175 rpm
D) EXTRACCIN DE LA ENZIMA CELULTICA DE LA FMS
METODOS
Se filtr con Buchner y papel filtro prepesado. Se procur retirar
la mayor cantidad de lquido posible, ya que este contiene la
celulasa.
Se determin el peso de la biomasa despus de secarlo a 80C por
24h
Se conserv el filtrado de la forma ms asptica posible
Se determin la actividad de la celulasa presente en el
filtrado
Como complejo enzimtico, la celulasa contiene actividades de
varias enzimas y se puede medir la actividad global del complejo
mediante la tcnica denominada Actividad sobre papel de
filtro(APF).
Puesto que se utiliza como sustrato 50mg de papel whaman
1(1x6cm). La prueba de APF que se realiz siguiendo el
procedimiento.
d.1 ) Actividad de papel
METODOS
Una vez preparado los tubos que contienen tampn acetato,
reactivo DNS, colocar los tubos en bao de agua durante 5 minutos e
inmediatamente se enfri en bao de agua corriente.
Se agito bien los tubos en bao y luego se llev a leer en el
espectrofotmetro a 540 nm contra blanco de reactivo (BR).
Se calcul la concentracin de glucosa en los tubos BPF, BM Y
utilizando la curva estndar.
d.2) Curva estndar de glucosa
METODOS
Se prepararon los tubos con los reactivos y se coloc en bao de
agua hirviendo durante 5 minutos e inmediatamente se enfri con agua
corriente.
Se mezcl bien todos los tubos y se ley en el espectrofotmetro a
540 nm contra el blanco de reactivo(BR)
Los valores de absorbancia se grafican contra la concentracin de
la glucosa donde es conveniente realizar una regresin lineal.
Los clculos de concentracin de azcar en la determinacin de
actividad enzimtica se realizan con la ecuacin de la regresin
obtenida.
IV. RESULTADOS Y DISCUSIONES
4.1 datos obtenidos en la prctica
Cuadro 4.1 datos de consumo de sustrato, produccin de enzimas y
para la curva estndar de calibracin.
TIEMPO
CONSUMO DE SUSTRATO (S)
PRODUCCIN DE ENZIMAS
CURVA ESTNDAR DE GLUCOSA
BPF
BM
M
CONCENTRACIN DE GLUCOSA
ABSORBANCIA
24
0,260
0,134
0,077
0,169
0,2
0,044
48
0,293
0,187
0,105
0,184
0,4
0,096
72
0,274
0,112
0,094
0,192
0,6
0,157
96
0,228
0,129
0,098
0,180
0,8
0,263
1,0
0,506
Fuente: elaboracin propia.
4.2 Curva estndar de glucosa
Figura 4.1 curva de calibracin
Fuente: elaboracin propia.
Se observa que al linealizar los datos ledos en el
espectrofotmetro, se tiene los valores de del cuadro 4.1 teniendo
una pendiente positiva, la cual nos indica que a mayor concentracin
de glucosa se percibe una absorbancia mayor cada vez. La ecuacin
que se obtuvo tiene un R2 igual a 0.89, el cual seala que dicha
ecuacin representa significativamente los datos tomados en la
prctica.
Cuadro 4.2 ecuacin de la curva estndar
ecuacin linealizada y=ax+b
a
b
0.5455
-0.1141
Fuente: elaboracin propia.
4.3 Formacin de biomasa (X)
Cuadro 4.3 datos para clculo de biomasa
hora de muestra
placa + papel
placa + papel + muestra seca
biomasa seca
24
73.113
73.124
0.011
48
62.955
62.969
0.014
72
62.623
62.644
0.021
96
69.377
69.458
0.081
Fuente: elaboracin propia.
Segn el mtodo por diferencia de pesos, se obtuvo la biomasa seca
para 60 mL; como podemos observar segn pasa el tiempo (das) esta
biomasa representada por lo producido por el Aspergillus niger (la
celulasa), el cual aumenta segn el tiempo transcurre, esto se puede
observar en la figura 4.2 empero esta representacin no es la ms
adecuada debido a la contaminacin producida en la siembra del
hongo.
Figura 4.2 representacin de la formacin de biomasa en el
tiempo.
Fuente: elaboracin propia.
Tenemos una mayor concentracin de biomasa seca en la muestra de
96 horas de fermentacin sumergida. En los tiempos 48 y 72 horas es
casi similar, por lo que se puede decir que en la muestra de 72
horas se tuvo mayor contaminacin por lo cual no se produjo el
contenido ptimo de celulasas.
4.4 Consumos de sustrato (S)
Cuadro 4.4 datos para clculo del consumo de sustrato
tiempo (h)
absorbancia
factor de dilucin
concentracin sustrato (mg/mL)
24
0.26
10
6.85792851
48
0.293
10
7.46287809
72
0.274
10
7.11457379
96
0.228
10
6.27131072
Fuente: elaboracin propia.
La concentracin de sustrato para cada uno de los tiempos segn
este avanza debe ser menor, ya que conforme se da la produccin de
celulasas el sustrato se vuelve ms pobre, disminuye. Tal
comportamiento lo podemos observar grficamente en la figura
4.3.
Figura 4.3 consumo de sustrato en el tiempo
Fuente: elaboracin propia.
En la figura 4.3 que representa en consumo de sustrato para los
tiempos durante cuatro das, se observa que en el cuarto da (96
horas) se tiene mayor consumo de sustrato (menor concentracin de
sustrato), el cual dice que tal muestra utilizo mayor sustrato para
producir las celulasas, esto se puede verificar con las fotos
tomadas de las muestras en las cuales para el tiempo 92 horas se
produjo en forma adecuada estas enzimas.
4.5 Produccin de celulasa (P)
Cuadro 4.5 resultado de la produccin de las enzimas
TIEMPO
PRODUCCIN DE LA ENZIMA (CELULASA) (U/mL)
24
3,36
48
3,84
72
3,16
96
3,18
Fuente: elaboracin propia.
Figura 4.4 formacin del producto (P)
Fuente: elaboracin propia.
En la prctica realizada la cintica de expresin de celulasas
demostr que a las 48 horas se producan 3,84 UI/mL de actividad AFP.
Por la razn anterior el tiempo de fermentacin seleccionado fue 48
horas, lo cual garantiza la operacin del biorreactor en un punto de
mayor productividad. Lo cual es corroborado por Villena (2003)
menciona que probablemente hay un mecanismo en Aspergillus que
explique este pico inicial de actividad. Aunque generalmente el
incremento en la actividad metablica se ha relacionado con la
densidad celular, los resultados obtenidos en la produccin de
celulasas sugieren que la adsorcin de microorganismos a superficies
genera una respuesta fisiolgica distinta reflejada en la mayor
produccin de celulasas de Aspergillus.
4.6 Resultados totales
Cuadro 4.6 resultado de la biomasa, consumo de sustrato y
produccin de las enzimas
TIEMPO
BIOMASA SECA
CONSUMO DE SUSTRATO
PRODUCCIN DE LA ENZIMA (CELULASA)
24
0.011
6.86
3,36
48
0.014
7.46
3,84
72
0.021
7.11
3,16
96
0.081
6.27
3,18
Fuente: elaboracin propia.
Figura 4. 5 Variacin de la formacin de biomasa (X), consumo de
sustrato (S) y formacin del producto (P)
Fuente: elaboracin propia.
En la figura 4.5 podemos ver que la formacin de biomasa (X) es
ascendente, ya que a mayor tiempo de fermentacin en las condiciones
adecuadas de sustrato y ambiente se producen mayor cantidad de
enzimas. Sobre el consumo de sustrato (S) podemos observar que
tiene una tendencia descendente, mas no es la ms adecuada ya que se
produjo una contaminacin de las muestras, vemos que para el primer
da es menor que para el segundo y tercero, debiendo haber sido
mayor para ambos casos. En el caso de produccin de enzimas (P)
podemos verificar que no se dio el adecuado desarrollo de las
mismas, puesto que solo se ve un mayor crecimiento en el tiempo de
48 horas, en este comportamiento debi ser en aumento segn los das
pasaban, por lo cual se debe tener mayor cuidado en la siembra del
hongo cuidando de la contaminacin.
v. conclusiones
1. La cuantificacin de biomasa seca en la produccin de celulasas
para los tiempos de 24, 48, 72 y 96 horas fue de 0.011, 0.014,
0.021, 0.081 mg/ cada 60 mL de muestra.
2. El consumo de sustrato (S) obtenido de las muestras de
produccin de celulasas, son 6.86, 7.46, 7.11, 6.27 mg/mL para las
24, 48, 72 y 96 horas respectivamente.
3. Los resultados obtenidos de la formacin de las enzimas
celulasas fueron: para un tiempo de 24, 48, 72 y 96 horas le
corresponde 3,36; 3,84; 3,16 y 3,18 de celulasa expresada en UI/mL.
Como se puede observar en la figura 4.4 la formacin de productos
tiende a subir hasta alcanzar su punto mximo que es 3,84 para luego
descender.
vi. BIBLIOGRAFA
1. Villena, G. (2003). Biopelculas de Aspergillus niger para la
produccin de celulasas: algunos aspectos estructurales y
fisiolgicos. Disponible en:
http://www.scielo.org.pe/pdf/rpb/v10n1/v10n1a09.pdf
2. Agustn Lpez, Mariano Garca Garibay, Rodolfo Quintero Ramrez,
Agustn Lpez-Mungua Canales (2002) Biotecnologa alimentaria,
Editorial Limusa.
3. Villena Gretty K. y Gutirrez-Correa Marcel (2003),
Biopelculas de Aspergillus niger para la produccin de celulasas:
algunos aspectos estructurales y fisiolgicos, Facultad de Ciencias
Biolgicas UNMSM, Laboratorio de Micologa y Biotecnologa,
Universidad Nacional Agraria La Molina, Revista Peruana Biologa
(10) Lima Per
4. Izarra, Myriam L.; Santayana, Mnica L.; Villena, Gretty K.;
Gutirrez-Correa, Marcel (2010), Influencia de la concentracin de
inculo en la produccin de celulasa y xilanasa por Aspergillus
niger, Revista Colombiana de Biotecnologa, vol. XII, nm. 2,
diciembre, 2010, pp. 139-150, Universidad Nacional de Colombia,
Bogot, Colombia.
5. Sanchez gutierrez iraiz (2001)
vii. ANEXOS
Hallando la concentracin de glucosa utilizando la ecuacin de
regresin
BPF
BM
M:
Hallando la concentracin de glucosa
Hallando la actividad enzimtica (APF)
curva de calibracion, glucosa estandar
0.20.40.60.814.3999999999999997E-29.6000000000000002E-20.1570.263000000000000010.50600000000000001
concentracion glucosa (mg/mL)
absorvancia
formacion de biomasa
244872961.099999999999568E-21.4000000000002899E-22.1000000000000796E-28.100000000000307E-2
tiempo (h)
biomasa seca
consumo de sustrato (S)
244872966.85792850595783687.46287809349220947.11457378551787396.2713107241063248
tiempo (h)
concentracion de sustrato
produccion de celulasas
produccion244872963.363.843.163.18
tiempo (h)
U/mL
comportamiento de la produccion de celulasas
X244872961.10000000000000011.42.18.1S244872966.867.467.116.27P244872963.363.843.163.18
tiempo (h)
19
MSc. Norma Gamarra Mendoza
