7 AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS CON POTENCIAL BIOFERTILIZANTE

[LABORATORIO No 7 AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS CON POTENCIAL BIOFERTILIZANTE] 12 de junio de 2015

LABORATORIO No 7 AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS CON

POTENCIAL BIOFERTILIZANTE

1Porras Mailyn, 2Jaimes Paula, 3Diaz Mayarí.

11610815, 21610811,

RESUMEN

En esta práctica de laboratorio se realizó el aislamiento de microorganismo con potencial

biofertilizante utilizando medios de cultivo específicos para cada grupo microbiano. Se

determinó la presencia de microorganismo en suelo de maíz y la planta de cimarrón. Del

suelo se tomaron 10g del suelo rizosférico y se realizó dilución hasta 10−7, con las

diluciones 10−7 y 10−6 se sembraron en cajas de Petri que contenían agar Ashby, SRSM y

King B. previamente se realizó el protocolo de desinfección de raíces del cimarrón se

cortaron de una medida de 1 cm aproximadamente y se hizo siembre directa en los viales

que contenían medios semisólidos de JNFb, JMV, NFb y LGI-P. Luego con los tallos y

hojas del cimarrón de igual manera fueron desinfectados, y se maceraron en un mortero con

9ml de solución salina a partir de esto se tomó una asada y se inoculo en los viales con los

medios semisólidos de NFb, JNFb y LGI-P.

Palabras clave: Biofertilizante, Aislamiento, suelo rizosférico.


INTRODUCCION

Durante los últimos años la agricultura se ha caracterizado por el uso intensivo de

fertilizantes químicos y plaguicidas para mantener altas producciones, sin tener en cuenta

que se ocasiona destrucción de los agroecosistemas, evidenciado principalmente en la

pérdida de productividad de los suelos, alteración de la calidad de los productos agrícolas,

contaminación del ambiente y problemas de salud en la población (Sánchez, J. (Ed.).

(2007).

Este impacto negativo generó el desarrollo de tecnologías que involucran microorganismos

benéficos y efectivos, los cuales tiene la capacidad de favorecer procesos esenciales para la

nutrición de las plantas (Vessey, 2003).

A pesar de que en la actualidad se ofrecen productos biológicos que han mostrado

beneficios en los rendimientos de producción, es necesario realizar estudios dirigidos hacia

el desarrollo de nuevas formulaciones que permitan que los productos tengan una mejor

estabilidad en almacenamiento y mantengan la actividad al ser aplicados en campo

(Echeverri y Castilla, 2008; Moreno et ál., 2004).

La producción de biofertilizantes requiere la obtención de compuestos que proporcionen

nutrientes para las plantas, tales como nitrógeno, fósforo y potasio entre otros. (Sebiot y

Eumedia (Eds.), 2000).El objetivo de los biofertilizante es complementar y, en su caso,

sustituir a los abonos químicos convencionales de forma que se pueda reducir su empleo,

con el consiguiente beneficio económico y medioambiental. En este sentido, las bacterias

empleadas en formulaciones biofertilizantes favorecen que las plantas absorban por sí

mismas una mayor cantidad de nutrientes que si bien se encuentran de forma natural en la

tierra, en ocasiones no pueden ser asimilados por las plantas al estar en formas insolubles.

Por contra, los abonos químicos convencionales aportan al suelo elementos químicos que,

si bien sirven como fertilizante, pueden acabar contaminando los acuíferos si no son

aportados en las dosis y momentos oportunos. Por otra parte, las bacterias que contienen las

formulaciones biofertilizantes compiten con otros microorganismos del suelo, pudiendo

hacer más difícil la aparición de plagas para los cultivos, minimizando así el uso de

pesticidas. (Rodas, 2006)


La producción de los cultivos y el crecimiento de las plantas están íntimamente

relacionados en muchos aspectos con las actividades microbianas. Considerando estas

asociaciones se han diseñado estrategias para identificar y comprender los microorganismos

y mecanismos involucrados en cultivos de interés agrícola. La microbiología ha jugado un

papel importante en la mejora de la agricultura. Dentro de la gran diversidad y complejidad

de los microorganismos microbianos del suelo, existen múltiples campos de investigación,

en especial en la zona rizosférica y los microorganismos que en ella interaccionan,

produciendo consecuencias a favor o en contra de los cultivos. Las investigaciones en este

campo pretenden mejorar el desarrollo y crecimiento vegetal y por ende incrementar la

productividad agrícola a partir de aquellos microorganismos que presentan los mecanismos

y capacidades requeridas para lograrlo (Rodas, 2006).

MARTERIALES

Agar Ashby.

Agar SMRS.

Viales de medio semisólido JNFb, JMV, NFb y LGI-P.

Micropipeta y puntas estériles.

Rastrillos.

Material para diluciones seriadas.

Material para desinfección de raíces y tallos.

Incubadoras.

Muestra de suelo de maíz y planta de cimarrón.

METODOLOGIA


Diluciones seriadas en suelo rizosférico.

Siembra directa de raíces.


Macerado de hojas y tallos.


RESULTADOS

Diluciones seriadas en suelo rizosfèrico.

Agar Ashby


0 unidas de formación de colonias en el duplicados de 10−7.

0 107UFC/ml.

0

unidas de formación de colonias en el duplicados de 10−6.

0 106UFC/ml.

Agar King B

Caja 1: 7 colonias


Caja 2: 17 colonias

12x106 UFC/ml

Agar SRSM

Caja 1: 6colonia

Caja 2: 2 colonias

4x107 UFC/ml


Caja 1: 2 colonias

Caja 2: 2 colonias

2x10−6 UFC/ml

Siembra directa de raíces.

En los viales de los diferentes medios se observo en todos en la siembra directa de raíces

formación de biopelìcula y turbidez es decir un cambio de color en los viales JNFb, LGI-p,


NFb y JMV, esto quiere decir que hay presencia de microorganismos diazotròficos en la

raíz de la planta tomada en este caso cimarrón.

Macerado de hojas y tallos.

Al igual que en las raíces, en el macerado de tallo y hojas hubo formación de biopelìcula y

turbidez es decir un cambio de color en los viales LGI-P, JNFb y NFb, esto quiere decir que

hay presencia de microorganismos diazotròficos en la raíz de la planta tomada en este caso

cimarrón.

CONCLUSIONES

Pseudomonas fluorescens, Bacillus circulans y Burkholderia cepacia son bacterias capaces

de solubilizar fosfato cálcico. Estas bacterias han sido descritas por varios autores con alta

capacidad solubilizadora de fosfatos (Curl y Truelove, 1986; Kucey et al., 1989; Kloepper y

Beauchamp, 1992) y de eficiente interacción con las MA (Andrade, 1999; Toro et al.,

1997). Su presencia en los suelos estudiados indicaría la idoneidad de su utilización como

biofertilizantes en los agroecosistemas tropicales de suelos.

Una estrategia para la sostenibilidad de los cultivos es el uso de diazotróficos ya que estos

inoculantes pueden complementar la fertilización de N, aumentar la asimilación de N,

promover el crecimiento y, por lo tanto, disminuir los costos de producción y la


contaminación asociada (Ladha y Reddy, 2003; Choudhury y Kennedy, 2004; Seck et al.,

2012). Encontrados en los viales tanto de las raíces como del macerado de tallo y hojas,

donde hubo tanto formación de película y variación de color la cual nos identificaba que

había microorganismo diazotróficos en el cimarrón, igualmente se encontraban

endógenamente de la planta entre posibles microorganismo estaba A.brasilense,

A.irakense, Bulkholderia sp, Gluconacetobacter sp.

DISCUSIONES

Los resultados obtenidos en las diluciones seriadas de suelo rizosférico en medio Agar

Ashby nos demostraron que no hay presencia de las bacterias del genero Azotobacter sp.

Que poseen un complejo enzimático capaz de reducir el nitrógeno del aire a amonio y que

puede ser asimilado por las plantas, (Bhattacharya y Chaudhuri 1993).

El fósforo después del nitrógeno, es el nutriente inorgánico más requerido por plantas y

microorganismos y además, en el suelo es el factor limitante del desarrollo vegetal a pesar

de ser abundante tanto en formas inorgánicas como orgánicas (Alexander 1980). En este

caso al observas que en suelo que se tenía que era de maíz hubo colonias esto quiere decir

que había solubilizadores de potasio y probablemente la planta está en buenas condiciones

a demás que pueden obtener ese fosforo. En este caso aparente hubo crecimiento mínimo

en las dos diluciones sembradas la cual Por lo general, bajos contenidos de fósforo en el

suelo favorecen el establecimiento de la simbiosis micorrízica incrementando la

colonización de las raíces de las plantas y favoreciendo la reproducción de las esporas; por

el contrario, un alto contenido de fósforo en el suelo incide en la disminución de la

simbiosis en las raíces de las plantas (Bowen y Rovira, 1999; Barea, 2001).

En el caso del agar Ashby sembrado no hubo crecimiento de microorganismo que fueran

diazotróficos en ninguna de las dos diluciones sembradas probablemente el suelo no

contenían nitrógeno esta muestra provenía de suelo de maíz.

En estos resultados hubo cierto crecimiento en el agar King B la cual nos puede indicar la

presencia de Pseudomonas sp. Y Bulkholderia sp, esto podría indicar que relacionados con

la producción de metabolitos de naturaleza antibiótica. De hecho, Velázquez et al.


Demostraron que la cepa de Burkholderia sp, puede producir alcaloides quinolisidínicos de

naturaleza antibiótica. También se ha señalado la capacidad que tienen las cepas

de Pseudomonas sp de suprimir patógenos presentes en la rizosfera, a través de la

producción de 2,4 dimetyl-phloroglucinol y pirrolnitrina. En este caso, también podrían

haber influido los sideróforos, si se tiene en cuenta que el medio de cultivo utilizado para el

desarrollo de los bioensayos posee bajo contenido de hierro, lo que favorece la producción

de este tipo de metabolito. señalaron que cepas autóctonas cubanas pertenecientes a las

especies en estudio al crecer en medios de cultivo con concentraciones limitadas de hierro,

tales como el King B y el Sirope fructosa (Sp.), producían sideróforos a partir de las 10

horas de crecimiento de la bacteria.

BIBLIOGRAFIA

Rodas P., A. (2006). La Agricultura y Microorganismos: Una Visión Sustentable para el

Manejo de los Suelos. Extraído el 14 de Septiembre, 2008

http://www.engormix.com/s_articles_view.asp?art=1129&AREA=AGR-417

Sebiot y Eumedia (Eds.) (2000). La Biotecnología Aplicada a la Agricultura. Madrid:

Grupo Mundi-Prensa.

Sánchez, J. (Ed.). (2007). Potencial Biotecnológico de Microorganismos en Ecosistemas

Naturales y Agroecosistemas. Bogotá: Universidad Nacional de Colombia.

Vessey JK. Plant growth promoting rhizobacteria as biofertilizers. Plant Soil. 2003

http://www.engormix.com/s_articles_view.asp?art=1129&AREA=AGR-417


alidov S, Mavrodi O, De La Fuente L, Boronin A, Weller D, Thomashow L, Mavrodi D.

Antagonistic activity among 2,4-diacetylphloroglucinol-producing

fluorescent Pseudomonas spp. FEMS Microb. Letters. 2005

Baldani, V.L., Baldani, J.I., Döbereiner, J., 2000. Inoculation of rice plants with the

endophytic diazotrophs Herbaspirillum seropedicae and Burkholderia spp. Biology and

Fertility of Soils.

Llunch, C. 1992. Biología del nitrógeno. Interacción planta-microorganismo. Ed Madrid:

Rueda.

Documents

7 AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS CON POTENCIAL BIOFERTILIZANTE