80244048-Cover-Biofar-p3

LAPORAN RESMI

PRAKTIKUM BIOFARMASETIKA

P3

ABSORPSI OBAT SECARA IN VITRO

Asisten Koreksi : Dosen Jaga : Dra. Siti Aminah, SU., Apt.Tgl. Praktikum : Kamis, 21 Oktober 2010Kelas : FSI 2008Golongan : I / 1

Disusun oleh :Kelompok I

Nama NIM TTD

1.Meiroza Susanti 8022 ( )

2.Stevianova H. 8026 ( )

3.Eny Sutanti 8031 ( )

4.Bhisma Akbar P. 8032 ( )

5.Ade Merriem Fadhilla 8035 ()

BAGIAN BIOFARMASETIKAFAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS GADJAH MADAYOGYAKARTA

2010ABSORBSI OBAT SECARA IN VITRO

I. TUJUAN

Menpelajari pengaruh pH terhadap absorpsiobat melalui saluran pencernaan secara in

vitro.

II. DASAR TEORI

Proses absorpsi merupakan dasar penting dalam menentukan aktivitas farmakologis obat.

Kegagalan atau kehilangan obat selama proses absorpsi akan mempengaruhi efek obat dan

menyebabkan kegagalan pengobatan. Obat pada umumnya diabsorpsi dari saluran pencernaan

secara pasif. Pada pemberian secara oral, sebelum obat masuk ke peredaran darah dan

didistribusikan ke seluruh tubuh, terlebih dulu harus mengalami proses absorpsi pada saluran

cerna. Obat pada umumnya diabsorpsi dari saluran pencernaan secara difusi pasif melalui

membran selular. Obat-obat yang ditranspor secara difusi pasif hanyalah yang larut dalam lipid.

Makin baik kelarutannya dalam lipid, maka baik absorpsinya sampai suatu absorpsi optimum

tercapai.

Obat-obat yang digunakan sebagian besar bersifat asam atau basa organik lemah.

Absorpsi obat dipengaruhi derajat ionisasinya pada waktu zat tersebut berhadapan dengan

membran.Membran sel lebih permeabel terhadap bentuk obat yang tidak terionkan daripada

bentuk obat yang terionkan. Derajat ionisasi tergantung pada pH larutan dan pKa obat seperti

terlihat pada persamaan Henderson-Hasselbach sebagai berikut :

Untuk asam lemah :

pH = pKa + log fraksi obat yang terionkan

fraksi obat yang tak terionkan

Untuk basa lemah :

pH = pKa - log fraksi obat yang terionkan

fraksi obat yang tak terionkan

Maka seseorang dapat menentukan jumlah obat relatif secara teoritis dari suatu obat

dalam bentuk tidak terionkan pada berbagai kondisi pH.Untuk obat yang ditranspor secara difusi

pasif, peranan dinding usus hanya sebagai membran difusi. Studi absorpsi in vitro dimaksudkan

untuk memperoleh informasi tentang mekanisme absorpsi suatu bahan obat, tempat terjadinya

absorpsi yang optimal, permeabilitas membran saluran pencernaan terhadap berbagai obat, serta

pengaruh berbagai faktor terhadap absorpsi suatu obat.

Menurut Turner dkk, permeabilitas membran biologi terhadap suatu obat dapat

digambarkan oleh koefisien partisinya dan mempunyai hubungan linear dengan kecepatan

transpor atau kecepatan absorpsinya, yang dinyatakan dengan persamaan sebagai berikut :

Keterangan : = kecepatan transpor obat ke kompartemen dalam (darah)

D = tetapan kecepatan difusi obat melalui membran

A = luas membran yang digunakan untuk berdifusi

P = koefisien partisi obat dalam membran pelarut

= ketebalan membran

Cg = kadar obat dalam kompartemen luar (usus) pada waktu t

Cb = kadar obat dalam kompartemen dalam (darah) pada waktu t

Untuk obat-obat yang strukturnya tertentu dan tempat absorpsinya sudah tertentu pula,

maka kecepatan absorpsinya hanya ditentukan oleh gradien kadar obat diantara kedua

permukaan membran, yang memisahkan lumen saluran pencernaan dengan (plasma) darah,

sehingga persamaan di atas dapat disederhanakan menjadi :

Dengan : dimana Pm disebut permeabilitas membran.

Jika Cb, dapat diabaikan karena Cb << Cg maka persamaan tersebut dapat disederhanakan

menjadi :

= P. Cg

Hasil integrasi persamaan ini adalah :

Q = P. Cg. t

Dengan Q = jumlah obat yang ditranspor dari kompartemen luar ke kompartemen dalam, dalam

selang waktu t.

Kurva hubungan jumlah obat yang ditranspor sebagai fungsi waktu akan memberikan garis

linear dengan angka arah K = Pm . Cg dan lag time, yaitu harga perpotongan garis dengan

sumbu t.

Bahan obat yang memiliki lag time kurang dari 15 menit biasanya tidak menimbulkan masalah

pada proses transpor melalui membran biologis.

III. ALAT DAN BAHAN

Alat :

• tabung Crane dan Wilson • alat bedah

• Spektrofotometer • alat gelas

• water bath • pH meter

• neraca analitik

Bahan :

• tikus putih jantan • eter

• cairan lambung buatan tanpa pepsin (pH 1,2) • gas oksigen

• cairan usus buatan tanpa pankreatin (pH 7,5) • alkohol

• larutan NaCl 0,9% b/v • larutan seng sulfat 5%

• asam salisilat • barium hidroksida 0,3 N

IV. CARA KERJA

Penentuan λ maksimum

Pembuatan kurva baku, asam salisilat dalam cairan fisiologis dengan seri kadar 1,5 mg% ; 3 mg

% ; 4,5 mg% ; 7,5 mg% ; 9 mg%

Penentuan absorpsi pada usus halus tikus:

Tikus dipuasakan 20-24 jam, dibunuh dengan eter, tikus dibedah dan diambil ususnya 15 cm di

bawah pilorus dibuang dan 20 cm di bawahnya dipotong untuk percobaan

Usus dibagi 2 sama panjang lalu dibersihkan, bagian anal digunakan sebagai kontrol

Ujung anal dari potongan usus diikat benang lalu usus dibalik hingga bagian mukosa diluar,

kanula dimasukkan ke ujung oral dari usus yang belum terikat

Usus diukur dengan panjang 7 cm yang telah diisi cairan serosal 1,4 ml ( NaCl 0,9 % b/v), lalu

dimasukkan ke dalam tabung yang telah diisi cairan mukosa 75 ml (mengandung asam salisilat)

pada suhu 37°C

Kantong usus untuk kontrol dilakukan dengan cara yang sama, tetapi cairan mukosal tanpa obat

Selama percobaan, seluruh usus terendam dalam cairan mukosal teraliri gas oksigen dengan

kecepatan 100 gelambung/menit

Pada waktu tertentu, tentukan kadar obat dalam cairan serosal. Untuk penentuan ini seluruh

cairan serosal diambil melalui kanula dan segera dicuci dengan larutan fisiologis, kemudian diisi

lagi dengan 1,4 ml larutan fisiologis

Analisis dan evaluasi data

V. HASIL dan PEMBAHASAN

a. Data Percobaan

1. Nama bahan obat : Asam salisilat

2. Cairan serosal : NaCl 0,9 % b/v Volume : 1. 1,4 ml 3. 1,4 ml

: 2. 1,4 ml 4. 1,4 ml

3. Medium cairan serosal: Buffer fosfat pH: 1. 7,5 Volume : 1. 7,5 ml 3. 7,5 ml

2. 1,2 2. 7,5 ml 4. 7,5 ml

4. Berat tikus : 1. 287 gram 2. 234 gram 3. 178 gram 4. 330 gram

5. Panjang usus : 1. 7 cm 2. 7 cm 3. 20 cm 4. 20 cm

6. Pengambilan larutan sampel/kontrol setelah menit ke:

1. 15, 30, 45, 60 menit 3. 15, 30, 45, 60 menit

2. 15, 30, 45, 60 menit 4. 15, 30, 45, 60 menit

7. Data penentuan kadar obat secara spektrofotometris.

Percobaan dilakukan pada λ max = 233 nm

Kurva baku dengan persamaan garis: y = 0,473 x – 0,02267

b. Hasil Percobaan

1. Cairan usus buatan tanpa pankreatin (pH 7,5)

Tikus 1

Jenis larutan Pengenceran Serapan (A)

100 0,230

Sampel100 0,146

100 0,433

100 0,224

Tikus 2


100 0,288

Sampel100 0,269

100 0,205

100 0,256

2. Cairan lambung buatan tanpa pepsin (pH 1,2)

Tikus 3


-0,079

Sampel terkoreksi -0,006

0

0,030

Tikus 4


0,845

Sampel terkoreksi 1,093

0,742

0,981

c. Perhitungan

1. Cairan usus buatan tanpa pankreatin (pH 7,5)

Sampel pada tikus 1

Kurva baku: x =

• Menit ke 15

Kadar Asam salisilat (x) = x 100 = 53,4186 mg%

• Menit ke 30


• Menit ke 45


• Menit ke 60


Jumlah Obat = x 1,4

• Menit ke 15

Jumlah Obat = x 1,4 = 0,7479 mg

• Menit ke 30


• Menit ke 45


• Menit ke 60


Waktu

(menit)

Kadar obat (mg

%)

Jumlah obat

(mg)

Jumlah obat

kumulatif (mg)

15 53,4186 0,7479 0,7479

30 35,6596 0,4992 1,2471

45 96,3362 1,3487 2,5958

60 52,1501 0,7301 3,3259

Dari hasil regresi linier antara waktu vs jumlah obat kumulatif didapat nilai:

a = - 0,2915

b = 0,0606

r = 0,9856

Sehingga didapat persamaan garis: y = 0,0606 x – 0,2915

Parameter:

• Ka = b = 0,0606/menit

• Slope = Pm ∙ Cg

Pm = = = 0,00439 cm/menit = 7,3188∙10-4 cm/detik

• Lag time

Pada saat y = 0 → x = 4,8102 menit

Kesimpulan

• Ka = 0,0606/menit

• Pm = 7,3188∙10-4 cm/detik

• Lag time = 4,8102 menit

Sampel pada tikus 2

Kurva baku: x =

• Menit ke 15


• Menit ke 30


• Menit ke 45


• Menit ke 60


Jumlah Obat = x 1,4

• Menit ke 15


• Menit ke 30


• Menit ke 45


• Menit ke 60


Waktu

(menit)

Kadar obat (mg

%)

Jumlah obat

(mg)

Jumlah obat

kumulatif (mg)

15 58,9154 0,9195 0,9195

30 61,4524 0,8603 1,7798

45 48,1332 0,6739 2,4537

60 65,6808 0,8248 3,2785


a = 0,1702

b = 0,0517

r = 0,9990

Sehingga didapat persamaan garis: y = 0,0517 x + 0,1702

Parameter:

• Ka = b = 0,0517/menit


Pm = = = 0,0375 cm/menit = 6,2439∙10-4 cm/detik

• Lag time


Kesimpulan

• Ka = 0,0517/menit

Pm = 6,2439∙10-4 cm/detik


Rata-Rata

• Ka = 0,0562/menit

• Pm = 1,3563∙10-3 cm/detik


2. Cairan lambung buatan tanpa peptin (pH 1,2)

Sampel pada tikus 3

Kurva baku: x =

• Menit ke 15

Kadar Asam salisilat (x) = = 0 mg%

• Menit ke 30

Kadar Asam salisilat (x) = = 0,0352 mg%

• Menit ke 45


• Menit ke 60


Jumlah Obat = x 1,4

• Menit ke 15

Jumlah Obat = x 1,4 = 0 mg

• Menit ke 30

Jumlah Obat = x 1,4 = 4,928 x 410 − mg

• Menit ke 45

Jumlah Obat = x 1,4 = 6,709 x 410 − mg

• Menit ke 60

Jumlah Obat = x 1,4 = 1,5582 x 310 − mg

Waktu

(menit)

Kadar obat (mg

%)

Jumlah obat

(mg)

Jumlah obat

kumulatif (mg)

15 0 0 0

30 0,0352 4,928 x 410 − 4,928 x 410 −

45 0,0479 6,709 x 410 − 1,1637 x

60 0,1113 1,5582 x 310 − 2,7219 x 310 −


a = -1,8842x

b = 7,4303 x

r = 0,9746

Sehingga didapat persamaan garis: y = 7,4303 x x −1,8842x

Parameter:

• Ka = b = 7,4303 x /menit


Pm = = = 5,3843cm/menit = 0,0897cm/detik

• Lag time


Kesimpulan

• Ka = 7,4303 x /menit

Pm = 0,0897cm/detik


Sampel pada tikus 4

Kurva baku: x =

• Menit ke 15


• Menit ke 30


• Menit ke 45


• Menit ke 60


Jumlah Obat = x 1,4

• Menit ke 15


• Menit ke 30


• Menit ke 45


• Menit ke 60


Waktu

(menit)

Kadar obat (mg

%)

Jumlah obat

(mg)

Jumlah obat

kumulatif (mg)

15 1,8344 0,0257 0,0257

30 2,3587 0,0330 0,0587

45 3,2333 0,0453 0,1040

60 2,1219 0,0297 0,1337


a = - 0,0118

b = 2,462∙10-3

r = 0,997

Sehingga didapat persamaan garis: y = 2,462∙10-3x − 0,0118

Parameter:

• Ka = b = 2,462∙10-3/menit


Pm = = = 1,7841∙10-3 cm/menit = 2,9734∙10-5 cm/detik

• Lag time


Kesimpulan

• Ka = 2,462∙10-3/menit

• Pm = 2,9734∙10-5 cm/detik


Rata-Rata

• Ka = 1,2682∙10-3/menit

• Pm = 0,0449 cm/detik


d. Perhitungan Henderson-Hasselbalch

pKa asam salisilat = 3 – log 1,06

• pada pH 7,5

pH = pKa + log fraksi obat terionkan

fraksi obat tak terion

7,5 = (3- log 1,06) + log fraksi obat terionkan


7,5 - 2,97 = log fraksi obat terionkan


fraksi obat terion = 3.388 ∙104


• pada pH 1,2

pH = pKa + log fraksi obat terionkan


1,2 = (3- log 1,06) + log fraksi obat terionkan


1,2 - 2,97 = log fraksi obat terionkan


-1.77 = log fraksi obat terionkan


fraksi obat terion = 1.698 ∙10-2


e. Grafik

VI. ANALISIS DATA

Asam salisilat merupakan obat golongan asam lemah, sehingga berdasarkan teori like

dissolve like maka apabila senyawa ini berada dalam lingkungan asam (pH 1,2), senyawa ini

akan berada dalam bentuk bebas atau molekul. Sedangkan jika asam salisilat berada pada

lingkungan basa (pH 7,5) maka akan berada dalam bentuk terion yang lebih banyak daripada

bentuk bebasnya. Obat akan mudah masuk ke dalam membran apabila berada dalam bentuk

molekul atau tak terionkan.

Pada percobaan ini dihasilkan grafik hubungan kadar dan jumlah obat dengan waktu.

Pada pH 7,5 (tikus 1 dan tikus 2) terlihat bahwa seiring bertambahnya waktu maka kadar dan

jumlah obat di dalam tubuh akan semakin meningkat, dan ketika mencapai titik puncak maka

kadar dan jumlah obat dalam tubuh mulai berkurang. Berkurangnya kadar dan jumlah ini

disebabkan karena obat di dalam tubuh mulai mengalami proses eliminasi. Grafik pada pH 1,2

menunjukkan bahwa tikus 4 mengalami peningkatan kadar dan jumlah obat dalam tubuh dengan

bertambahnya waktu, sedangkan tikus 3 mengalami hal yang sama dengan tikus 1 dan 2. Namun

berdasarkan grafik waktu vs jumlah dan kadar, maka dapat disimpulkan bahwa jumlah dan

kadar obat yang terserap pada pH 7,5 lebih banyak dibandingkan pada pH 1,2. Padahal

berdasarkan teori, jumlah dan kadar obat pada pH 7,5 seharusnya lebih sedikit dibandingkan

pada pH 1,2. Hal ini karena pada pH 7,5 banyak obat yang berada dalam bentuk terionkan

sehingga akan lebih susah dalam melewati membran sel.

Penundaan waktu absorpsi sebelum permulaan absorpsi orde ke satu dikenal dengan lag

time. Semakin kecil nilai lag time akan semakin bagus karena waktu penundaan absorpsi

semakin kecil. Pada percobaan ini dihasilkan nilai lag time pada pH 1,2 lebih kecil dibandingkan

pada pH 7,5. Hal ini menunjukkan bahwa waktu penundaan absorpsi pada pH 7,5 lebih lama.

Nilai permeabilitas membrane (Pm) dan Ka yang baik ialah apabila memiliki nilai yang semakin

besar. Pada percobaan ini nilai Ka pada pH 1,2 lebih kecil dibandingkan pada pH 7,5.

Sedangkan nilai Pm pada pH 1,2 menunjukkan nilai yang lebih besar dibandingkan pada pH 7,5.

Hal ini menunjukaan bahwa pada pH 1,2 memiliki kemampuan absorpsi yang lebih baik

dibandingkan pada pH 7,5 karena semakin besar nilai Pm, maka kemampuan mengabsorpsi obat

akan semakin baik.

VII. PEMBAHASAN

Tujuan dari praktikum kali ini yaitu untuk mempelajari pengaruh pH terhadap absorpsi

obat, yaitu asam salisilat melalui saluran pencernaan secara in vitro. In vitro berarti percobaan

dilakukan diluar tubuh atau pada kondisi laboratorium. Profil pH vs kelarutan memberikan

gambaran dari kelarutan obat pada berbagai pH, yang dapat menunjukkan jika suatu obat

bersifat basa akan larut. Demikian juga sebaliknya obat yang bersifat aam akan larut dalam

media basa.

Absorpsi sistemik suatu obat dari saluran cerna tergantung pada rate limiting step (jika

sediaan obat berbentuk tablet), sifat fisiko-kimia, dan anatomi fisiologi tempat absorpsi. Banyak

hal yang mempengaruhi kecepatan absorpsi, dan umumnya absorpsi obat secara pasif

dipengaruhi oleh derajad ionisasi dimana jika berhadapan dengan membran sel, membran sel

akan lebih permeabel terhadap bentuk obat yang tidak terionkan dibandingkan dengan bemtuk

terionkan karena membran sel terdiri atas lipid dan protein.

Perbedaan pH padad tempat absorpsi dapat mempengaruhi jumlah obat yang diserap oleh

saluran pencernaan. Pada percobaan ini untuk membuktikan hal tersebut, maka asam salisilat

akan ditempatkan pada dua tempat absorpsi yaitu pada pH larutan buffer 1,2 dan 7,5 dimana

pada kondisi pH 1,2 mengggambarkankondisi cairan lambung sedangkan pH larutan buffer 7,5

menggambarkan kondisi cairan intestinal. Cairan lambung buatan ini dibuat tanpa pepsin,

sedangkan cairan intestin yang digunakan tanpa pankreatin. Namun karena keterbatasan waktu

dan alat dalam praktikum ini maka percobaan yang dilakukan hanya percobaan pada pH 7,5

sedangkan data pada pH 1,2 menggunakan data simulasi (data golongan 3, kelompok 1).

Dalam percobaan kali ini, obat yang diujikan adalah asam salisilat dalam larutan buffer

pH 1,2 dan 7,5. Asam salisilat merupakan obat golongan asam lemah. Sehingga berdarkan teori

like dissolves like, dalam buffer asam asam, senyawa tersebut akan berada dalam bentuk bebas

(bentuk molekulnya). Sebaliknya, jika asam salisilat berada dalam lingkungan basa yaitu pada

pH buffer 7,5 maka asam salisilat akan berada dalam bentuk terionkan yang lebih banyak

daripada bentuk molekulnya.

Karena lapisan membran sel banyak tersusun oleh lipid, maka obat yang berada dalam

bentuk molekul akan lebih mudah melewati membran. Sedangkan obat dalam bentuk terionkan

karena bersifat polar akan kesulitan melalui membran sel yang bersifat lipofilik.

Adapun langkah kerja dalam percobaan kali ini adalah sebagai berikut, pertama-tama

menentukan panjang gelombang maksimum yang akan digunakan. Karena pada panjang

gelombang maksimum akan membeikan kepekaan (sensitivitas) yang tinggi, disamping itu juga

untuk memberikan kesalahan yang kecil. Namun, karena keterbatasan alat tidak dilakukan

scanning untuk menentukan panjang gelombang maksimum. Dan panjang gelombang yang

digunakan dalm percobaan ini adalah 237 nm. Selanjutnya membuat kurva baku agar diperoleh

persamaan regresi linear yang diperlukan untuk pencarian kadar obat yang terabsorpsi.

Hewan percobaan yang digunakan dalam percobaan ini adalah tikus karena diperkirakan

memiliki saluran pencernaan yang hampir sama dengan manusia. Disamping itu juga harganya

yang relatif murah dam pemeliharaannya yang lebih mudah dibandingkan hewan percobaan

lainnya. Sebelum digunakan hewan percobaan dipuasakan terlebih dahulu selama 24 jam,

namun tetap diberi minum air masak.

Setelah menimbang bobot tikus, tikus dikorbankan secara kimia menggunakan uap eter

yang ditempatkan dalam lemari asam. Pengorbanan dlakukan secara kimia tidak secara fisik

karena ditakutkan akan meruska organ tikus yang akan digunakan dalam percobaan. Setelah

tikus dikorbankan, perut dibedah menggunakan gunting sepanjang linea mediana dan ususnya

dikeluarkan. Usus yang digunakan adalah 15 cm dibawah pilorus, karena terdapat kelenjar

pankreas dan muara ductus colectivus.Dan juga usus yang berada dekat dengan sfingter pylorus

dikhawatirkan masih dipengaruhi oleh keasaman lambung. Dari 15 cm dibawah sfyngter pylorus

diukur sepanjang 20cm kebawah dan digunakan untuk percobaan.

Bagian usus yang digunakan untuk percobaan tersebut merupakan duodenum.

Digunakan bagian duodennum dengan pertimbangan bahwa dibagian tersebutmenunjukkan

absorpsi obat yang paling cepat karena adanya villi dan mikrovilli yang menyebabkan luasnya

permukaan tempat absorpsi. Dalam percobaan usus sepanjang 20 cm tersebut dibagi menjadi 2

bagian sama panjang (@ 10cm) yang nantinya salah satu bagian digunakan untuk sampel

(bagian oral) dan bagian lainnya (bagian anal) digunakan sebagai kontrol. Kemudian

membersihkan usus tersebut dari lipid yang menempel didalam larutan NaCl 0,9% b/v. Usus

juga harus dibersihkan dari sisa makanan yang menempel agar proses absorpsi bisa berjalan

dengan normal. Selama preparasi usus harus selalu direndam dalam larutan NaCl 0,9% b/v.

Selainitu preparasi usus juga tidak boleh terlalu lama untuk menghindari kemungkinan

terjadinya kematian usus.

Selanjutnya ujung anal (bagian bawah) diikat dengan benang dan dengaan hati-hati

dibalik menggunakan batang gelas berdiameter 2mm, sehingga vili usus akan menghadap

keluar. Selanjutnya ujung oral dari usus dihubungkan ke kanula (bagian dari tabung Crane dan

Wilson yang dimodifikasi). Metode ini disebut metode usus terbalik dan digunakan untuk

menggambarkan proses terjadinya absorpsi di dalam slauran pencernaan. Keuntungan dari

metode ini adalah:

• Merupakan metode sedrehana dan reprodusibel

• Dapat membedakan proses absorpsi secara aktif dan pasif

• Dapat dilakukan untuk mengetahui daerah pada usus halus dengan absorpsi

optimal terutam dalam kasus transport aktif

Selama jalannya percobaan bagian usus tersebut tidak boleh bergesekan dengan benda

lain seperti pinset atau dipengang dengan tangan karena apabila usus tersentuh, akan merusak

villi usus yang berada diluar terbut sehinggaakan mempengaruhi proses absorpsi dan hasil yang

didapat akan tidak valid.

Kemudian usus diukur dengan panjang efektif 7 cm dan diisi dengan 1,4ml larutan

serosal yang tersiri dari larutan NaCl 0,9% yang merupakan larutan fisiologis setelah salah satu

ujungnya dikat dengan benang. Fungsi dari penambahan larutan fisologis tersebut dimaksudkan

untuk mengkondisikan usus supaya sama ddengan cairan fisiologis tubuh. Kantong usus yang

telah diisi cairan serosal ini selanjutnya dimasukkan kedalam tabung yang berisi 75 ml cairam

mukosal, yaitu larutan buffer yang mengandung bahan obat yaitu asam slaisilat. Cairan mukosal

yang digunakan untuk percobaan berisi 0,01 M asam salisilat dalam cairan intestin tanpa

pankreatin (pH 7,5). Kadar obat dalam larutan ini adalah 138,5 mg%. Sedangkan untuk kontrol,

usus diperlakukan sama tetapi cairan mukosal tidak mengandung obat. Selanjutnya tabung

diinkubasi pada penangas air dengan suhu 37˚C supaya kondisinya sama dengan suhu tubuh.

Suhu ini harus dikendalikan dan variasi suhu harus dihindari sebab adanya variasi suhu pada

kebanyakan obat dapat mempengaruhi laju kelarutan karena kenaikan suhu dapat meningkatkan

energi kinrtik molekul dan meningkatkan kecepatan difusi. Selama percobaan berlangsung,

seluruh bagian usus dijaga agar dapat terendam seluruhnyadalam cairan mukosal dan selalu

dialiri gas oksigen dengan kecepatan kira-kira 100 gelembung per menit untuk menjaga aktifitas

sel dan untuk menjaga agar sel-sel usus tetap hidup.

Pada menit ke-15, 30, 45 dan 60 dihitung sejak usus diinkubasi, kadar obat dalam cairan

serosal ditentukan dengan spektrofotometer UV. Caranya dengan mengambil cairan serosal pada

waktu-waktu tertentu tersebut melalui kanula menggunakan pipet volume. Kemudian segera

dicuci dengan 1,4 ml NaCl 0,9% sebagai pembilas dan pembilas inni ditambahkan pada cairan

serosal yang telah diambil tadi. Untuk selanjutnya, usus diisi lagi dengan 1,4 ml larutan NACl

0,9% dan diambil pada waktu berikutnya yang telah ditentukan. Kemudian masing-masing

sampel diambil 1ml dan ditambahkan 2 ml larutan ZnSO4 5% serta larutan Ba(OH)2 maka akan

terjadi endapan berwarna putih yang merupakan protein. Adanya protein dalam sampel perlu

dihilangkan karena protein memiliki kromofor yang dapat menyerap sinar UV sehingga

dikhawatirkan akan mempengaruhi nilai absorbansi yang diperoleh. Untuk menyempurnakan

pemisahan protein tersebut, dilakukan sentrifugasi selama 5 menit. Supernatan tersebut

kemudian diambil secara kualitatif dan diukur serapannya dengan menggunakan

spektrofotometer pada panjang gelombang 237 nm.

Pada percobaan ini tikus yang digunakan sejumlah 2 ekor, slah satunya sebagai replikasi.

Dari nilai absorbansi yang diperoleh ditentukan kadar obat masing-masing sampel dengan

menggunakan persamaa kurva baku yang telah ada.

Pada percobaan, didapatkan data jumlah obat yang diabsorpsi per total luas usus. Secara

teori, untuk obat asam salisilat, jumlah obat yang diabsorpsi per total luas usus pada pH 1,2

lebih besar daripada jumlah obat yang diabsorpsi pada pH 7,5. Asam salisilat merupakan obat

yang bersifat asam lemah. Untuk obat yang bersifat sebagai elektrolit lemah, contohnya asam

atau basa lemah, laju absorpsi obat ditentukan oleh besarnya ionisasi yang terjadi pada obat

tersebut. Besarnya ionisasi dipengaruhi oleh pKa dan pH medium. Obat agar bisa terabsorbsi

(berdifusi menembus membran lipid menuju pembuluh darah) harus berada dalam bentuk tak

terion. Bagian yang terionisasi memiliki muatan yang menjadikannya lebih mudah larut dalam

air dari pada bagian obat yang tidak terionisasi sehingga obat dalam bentuk terion sulit

menembus membran lipid. Asam salisilat pada pH 7,5 akan berada sebagian besar dalam bentuk

terionisasi atau larut dalam air, sedangkan obat untuk bisa berdifusi melalui membranl lipid

(usus) obat harus berada dalam bentuk bukan ionnya. Sedangkan asam salisilat pada pH 1,2

akan lebih banyak berada dalam bentuk molekulnya sehingga obat lebih mudah berdifusi

melalui membranl usus, sehingga absorpsinya menjadi lebih besar. Secara teoritis dapat dihitung

menggunakan rumus Handerson – Hasselbach untuik mengetahui perbandingan obat yang

terion per obat yang tak terion, setelah di hitung untuk pH 1,2 ternyata di dapat angka 1,68 .10-2

sedangkan untuk pH 7,5 di dapatkan angka 3,388 .104. Jadi secara teoritis obat yang banyak

dalam bentuk molekul adalah pada pH 1,2 diasumsikan adalah organ lambung yang banyak

mengabsorpsi obat. Sedangkan pada praktikum untuk mengetahui jumlah obat yang diabsorpsi

adalah dengan cara mengukur serapan dari obat. Yang terukur sebagai absorbansi dalam

percobaan ini adalah asam salisilat dalam bentuk molekulnya, karena yang diukur adalah cairan

serosal di mana setelah obat terdifusi melalui membran usus.

Dalam percobaan diperoleh jumlah kumulatif obat yang diabsorpsi pada pH 1,2 adalah

2,7219 x 310 − mg untuk tikus 3 dan 0,1337 untuk tikus 4. Sedangkan pada pH 7,5 adalah

3,3259 mg untuk tikus 1, dan 3,2785 mg untuk tikus 2. Dilihat dari nilai Ka (Kecepatan

absorpsi) rata-rata untuk kedua tikus, pada pH 1,2 nilai Ka adalah 1,2682∙10-3/menit, sedangkan

pada pH 7,5 nilai Ka sebesar 0,0562/menit. Berdasarkan hasil tersebut, dapat dilihat bahwa

absorpsi obat asam salisilat pada pH 7,5 lebih besar daripada absorpsi pada pH 1,2. Padahal

secara teori, asam salisilat dalam suasana asam (pH 1,2) memiliki bentuk tak terion lebih banyak

dibandingkan pada pH 7,5. Sehingga, seharusnya absorpsi obat pada pH 1,2 lebih besar

dibandingkan pada pH 7,5. Hasil percobaan menunjukkan penyimpangan terhadap teori tersebut,

yaitu jumlah obat yang terabsorpsi pada pH 1,2 jeuh lebih sedikit. Penyebab penyimpangan ada

beberapa hal diantaranya kurang hati-hati dalam preparasi organ sehingga banyak villi yang

mengalami kerusakan. Hal tersebut menyebabkan absorbsi obat tidak optimum. Penyebab lain

adalah aliran gelembung udara terlalu cepat sehingga efektifitas absorpsi berkurang. Selain itu,

kesalahan juga mungkin terjadi saat sampling. Kemungkinan pencucian tidak sempurna

sehingga masih ada senyawa obat yang tertinggal di dalam rongga usus. Kesalahan-kesalahan

tersebut menyebabkan hasil bias sehingga perlu diminnimalisasi agar diperoleh data yang akurat

dan reliabel.

Berdasarkan slope pada persamaan regresi linear waktu vs jumlah kumulatif obat, maka

dapat ditentukan permeabilitas membran terhadap obat asam salisilat. Secara teoritis, membran

lebih permeabel terhadap obat dalam bentuk tak terion daripada dalam bentuk terion.

Berdasarkan hasil percobaan, harga permeabilitas membran rata-rata untuk sampel pada pH 1,2

adalah 0,0449 cm/detik. Sedangkan untuk sampel pada pH 7,5, permeabilitas membran terhadap

asam salisilat adalah sebesar 1,3563∙10-3 cm/detik. Hasil tersebut sesuai teori karena secara teori

membran lebih permeabel terhadap senyawa dalam bentuk tak terion. Pada pH 1,2, asam

salisilat banyak yang dalam bentuk tak terion sehingga lebih banyak yang dapat menembus

membran usus. Jadi permeabilitas membran pada pH 1,2 lebih besar dari pada pada pH 7,5

maka dapat diasumsikan pada pH 1,2 atau pada organ lambung obat bersifat asam seperti

halnya asam salisilat, maka jumlah yang diabsorpsi lebih besar. Hal ini disebabkan pada pH 1,2

asam salisilat banyak berada pada bentuk tak terionkan/molekulnya sehingga mudah melewati

membran usus.

Pada beberapa kasus, absorpsi obat setelah dosis oral tunggal tidak terjadi dengan segera

sehubungan dengan faktor-faktor fisiologis. Pada percobaan faktor fisiologis yang berpengaruh

adalah pergerakan usus. Penundaan waktu absorpsi sebelum permulaan absorpsi obat orde ke

satu di kenal sebagai lag time. Pada percobaan diperoleh lag time asam salisilat pada pH 1,2

adalah 2,5252 menit dan pada pH 7,5 adalah 4,0512 menit. Bahan obat ytang memiliki lag time

kurang dari 15 menit biasanya tidak menimbulkan masalah pada proses transport melalui

membran biologis. Karena dari percobaan, lag time asam salisilat baik pada pH 1,2 dan pH 7,5

semuanya di bawah 15 menit, maka dapat disimpulkan asam salisilat tidak bermasalah dalam

proses transport melalui membran usus.

VIII. KESIMPULAN

1. Untuk obat yang bersifat asam lemah, secara teori absorbsi pada usus dengan pH asam

berjalan lebih cepat dan lebih banyak serta berlaku sebaliknya. Hasil percobaan

menunjukkan penyimpangan terhadap teori tersebut.

2. Jumlah kumulatif obat yang diabsorpsi pada pH 1,2 adalah 2,7219 x 310 − mg untuk

tikus 3 dan 0,1337 untuk tikus 4. Pada pH 7,5 adalah 3,3259 mg untuk tikus 1, dan

3,2785 mg untuk tikus 2.

3. Membran sel usus lebih permeabel terhadap bentuk obat yang tidak terion daripada

bentuk terionkan. pada pH 1,2 adalah 0,0449 cm/detik. sedangkan pada pH 7,5 adalah

1,3563∙10-3 cm/detik.

4. Asam salisilat tidak bermasalah dalam proses transport melalui membranl usus karena

lag time kurang daari 15 menit yaitu pada pH 1,2 adalah 2,5252 menit dan pada pH 7,5

adalah 4,0512 menit.

IX. DAFTAR PUSTAKA

Anonim, 1995, Farmakope Indonesia ed.IV, DepKes RI, Jakarta

Notari, Robert, 1980, Biopharmaceuitcs and Clinical Pharmacokinetics ed III. Marcel Dekker

Inc : New York.

Shargel, Leon.1988, Biofarmasetika dan Farmakokinetika Terapan ed II, Penerbit Airlangga,

Surabaya. Hal.85-91,146

Documents

80244048-Cover-Biofar-p3