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METODO PARA LA VALIDAR TECNICAS VOLUMETRICAS EN 5 FASES
Omar A Valencia Qco, David Gómez Qco,
Programa de Química, Facultad de Ciencias Básicas y Tecnologías, Universidad del Quindío. Avenida Bolívar calle 12 Norte Armenia,
Laboratorio ALISCCA Ltda Cr 13 #15-50 Pereira.
[email protected] [email protected]
Abstract
In this article we suggest a method for the validation of volumetric tactics based on the use of a five (5) steps method, tests made for a single operator, test of unknown samples, test of true samples, identification of the rudeness of the method and collaboration tests.
Resumen
En este artículo se propone la metodología para la validación de técnicas volumétricas por medio de cinco (5) fases, análisis realizados por un operador, análisis de muestras desconocidas preparadas por otro operador, análisis de matrices reales, identificación de robustez y ensayos de colaboración.
Key words: validation, rudeness, accuracy, volumetric method.
INTRODUCCION
Un laboratorio químico analítico debe
tener como propósito principal, la
producción de resultados de calidad
excelentei. Este propósito, solo se puede
lograr mediante el establecimiento de
métodos bien definidos y
apropiadamente documentados y
desarrollados. La validación es la
confirmación por análisis y suministro de
evidencia objetiva de que se cumplen los
requisitos particulares para el uso
especifico de una metodologíaii,iii. Se
logra al determinar atributos del método
como: límite de detección, límite de
cuantificación, reproducibilidad
(precisión), exactitud (porcentaje de
recuperación), incertidumbre, linealidad
(rango dinámico lineal)ivv, etc. Este
articulo propone un método compuesto
de cinco (5) fases que se complementan
entre si para validar con un alto nivel de
complejidad cualquier método de análisis
volumétrico.
PROCEDIMIENTO
Antes de comenzar la FASE 1, se debe
implementar y documentar
apropiadamente las metodologías de las
técnicas a validar, se debe calibrar y
recalibrar el material volumétrico clase
tipo A, la balanza analítica, se deben
revisar los certificados de los patrones
primarios a utilizar durante la validación,
la calidad del agua destilada y/o
desionizada.
FASE 1 CARACTERISTICAS DE UN
OPERADOR
Esta parte del procedimiento de la
validación requiere la determinación del
límite de detección, el sesgo del método,
el error sistemático, y la precisión
obtenida por el único operadorvi. Se usa
en un rango de concentraciones que
debe ser comprendida desde muy bajas
(importante para determinar el limite de
detección inferior) hasta concentraciones
altas preferiblemente ligeramente por
encima del limite establecido en normas
o decretos en caso que exista.
Esta fase se desarrolla analizando
diariamente un (1) lote de muestra
durante 6 días, obteniendo así como
mínimo seis (6) lotes de concentraciones
escogidas. Cada lote debe estar
compuesto por siete (7) repeticiones.
Para la determinación de la precisión del
método se recomienda preparar un único
lote de concentración similar a la
presente en una muestra natural del
analito determinado con el método, Para
el análisis de este lote se debe hacer 20
repeticiones.
Al realizar esta fase, el desarrollo del
método puede verse sometido a
diferentes tipos de error inducido por la
preparación de los lotes o exceso de
confianza del operador al conocer el
volumen a gastar de valorante para cada
lote. Es por esta razón que la siguiente
fase se centra en muestras desconocidas
preparadas por otro operador (el cual
llamaremos operador 2).1*
FASE 2 ANÁLISIS DE MUESTRAS
PREPARADAS POR OTRO
OPERADOR
Esta fase del procedimiento de
validación requiere el análisis de
estándares preparados a diferentes
concentraciones por otro operador,
donde el valor es desconocido por el
analista. Se analiza cada lote
desconocido siguiendo el procedimiento
estándar para el método.
En esta fase se realizan dos (2)
repeticiones de cada lote, (tres (3) en
caso de obtener diferencias marcadas
entre ambas repeticiones). Esta
operación debe realizarse durante seis
(6) días, el operador 2 que preparo los
lotes no puede transmitir las
concentraciones preparadas al operador
principal hasta finalizado el lote seis (6).
1∗ La fase uno ( 1), fase dos (2) y robustez fase cuatro (4) de este articulo se basan en lo propuesto en el standar methods 20th Edition.
En esta fase se eliminan los
inconvenientes presentados en la fase 1
(errores en la preparación de estándares
y exceso de confianza), y se conoce la
certeza que tiene el método por medio
del % de recuperación de estándares.
Sin embargo una matriz real del analito
puede verse afectada por muchos
factores, que pueden alterar o no la
respuesta del método como el resultado,
es por esta razón que la fase tres (3) se
basa en el análisis de matrices reales de
alta y baja concentración del analito
determinado por el método.
FASE TRES (3) ANALISIS DE
MATRICES REALES
En esta fase el operador debe analizar
matrices reales de baja y alta
concentración del analitovii, teniendo en
cuenta los puntos críticos donde el
método elimina interferencias, ya que al
analizar muestras de alta concentración
es posible que estas presenten
alteraciones en el punto final de la
técnica**.
En esta fase cada matriz equivale a un
(1) lote y debe ser analizada por
duplicado, en total se recomiendan ocho
(8) lotes, cuatro (4) de concentraciones
** La Fase tres (3) se basa en lo propuesto en el Protocolo estandarización métodos analíticos del IDEAM 1999
bajas y cuatro (4) de concentraciones
altas.
En esta fase las observaciones
realizadas por el operador ayudan a
encontrar posibles debilidades en la
técnica. Lo cual hace necesario la fase
cuatro (4) para determinar la robustez de
la técnica, y así conocer como pequeños
cambios en el procedimiento pueden
afectar los resultados.
FASE CUATRO (4) ROBUSTEZ
En esta fase se estudia la capacidad del
procedimiento para permanecer
inafectado por pequeñas, pero
deliberadas variaciones en los
parámetros del método. Estos datos
proporcionaran una indicación de su
fiabilidad durante su uso normal.
Para la realización de esta fase se
recomienda seleccionar los puntos
críticos del procedimiento, estos puntos
comúnmente son: adición de soluciones
buffers, ajustes de pH, cantidad de
indicador adicionada, adición de
eliminadores de interferencias.
Una vez se seleccionan los pasos a
variar se analiza un (1) lote en donde
cada volumen o según sea el caso, será
alterado levemente mientras el resto del
procedimiento permanece constante.
Esta información se analiza por medio de
matrices.
Una robustez apropiadamente conducida
puede probar los pasos del
procedimiento en los cuales el rigor es
crítico, así como los pasos del
procedimiento donde pequeñas
variaciones son permisibles.
Tanto en la fase 1 como 2, el método que
se esta validando se encuentra sujeto a
errores sistemáticos propios del
ambiente de trabajo. En la fase cinco (5)
ensayos de colaboración, se eliminan
estos errores por medio de un operador
externo.
FASE CINCO (5) ENSAYOS DE
COLABORACION
Consiste en analizar muestras de
estándares preparados a diferentes
concentraciones dentro de los límites de
detección hallados en la fase 1, en otros
laboratorios en donde la técnica ya fue
validada. Y conjuntamente analizar
muestras naturales de diferentes rangos
de concentración.
En esta fase cada matriz enviada por el
laboratorio externo es considerada un
lote, a cada lote se le debe realizar dos
(2) repeticiones, (tres (3) en caso de
obtener diferencias marcadas entre
ambas repeticiones). Se deben realizar
un total de 12 lotes en días diferentes,
donde seis (6) lotes deben provenir de
estándares preparados, y (6) deben ser
matrices reales, el operador no debe
conocer cuales lotes son de estándares y
cuales son muestras reales durante los
análisis. Comparando los resultados del
laboratorio externo con los del operador
se determina el porcentaje de
concordancia entre la precisión del
método para estándares preparados y la
precisión del método para matrices
reales.
Con esta ultima fase se conoce la
magnitud de los errores de tipo
sistemático que tienden a propagarse y
afectar la fase uno (1) y la fase dos (2)
de la validación.
DISCUSION DEL METODO
Es imprescindible resaltar la importancia
de realizar la fase 1, la fase 2 y los
ensayos de colaboración. En la fase uno
el analista prepara y analiza los
estándares y esto puede llevar a errores
de varios tipos, dado que
inconscientemente el analista al conocer
la concentración del estándar puede
tender a buscar el valor del volumen que
esta gastando en la valoración perdiendo
así objetividad e imparcialidad en el
análisis. Situación que la fase dos
corrige, ya que cuando otro analista
prepara el estándar y no revela su
concentración hasta que el analista
principal ya ha terminado las
valoraciones, se evita el exceso de
confianza y se recupera la imparcialidad
y objetividad del análisis así como su
capacidad de tomar decisiones. Sin
embargo puede que exista una fuente de
error desconocida por ejemplo un
porcentaje de pureza del estándar menor
al óptimo, con este tipo de situaciones la
fase uno no podría determinar la causa
del problema y la preparación del
estándar por otro analista tampoco. Es
por esto que se realizan ensayos de
colaboración con otros laboratorios,
permitiendo conocer y evaluar el
funcionamiento del método estudiando la
precisión, nivel de sesgo y porcentaje de
concordancia con otros métodos ya
validados.
CONCLUSION
Este articulo propone un método
compuesto de cinco (5) fases que se
complementan entre si para validar con
un alto nivel de complejidad cualquier
método de análisis volumétrico.
RECOMENDACIONES
Se recomienda utilizar este método para
las validaciones de métodos
volumétricos.
AGRADECIMIENTOS
Agradecimientos al Ms Gonzalo
Hernández del laboratorio de aguas de la
Universidad del Quindío.
Agradecimientos a la Unidad operativa
de salud publica seccional Risaralda el
señor Hernando Osorio.
BIBLIOGRAFIA
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v MILLER James N, MILLER Jane C. Estadística y Quimiometría para Química Analítica cuarta edición. Editorial Prentice Hall 2.002 pág. 21-36.
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vii COY Gustavo A. Protocolo de estandarización de métodos analíticos, Instituto de Hidrología, Meteorológica y estudios ambientales Bogotá noviembre de 1999.
