A. Uji Proteolitik Secara Kualitatif

Uji Indeks Proteolitik Berdasarkan uji lanjut BNJ (α = 5 %)

Perlakuan PBG1

(X1)

PML

(X2)

PBR1

(X3)

1 1,589 1,206 2,667

2 1,250 1,103 1,366

3 1,594 1,169 1,080

RATA2 1,478b 1,159

a 1,704

c

B. Uji Proteolitik Secara Kuantitatif

Analisis Ragam Uji Aktivitas Protease

Perlakuan PBG1

(X1) PML (X2)

PBR1

(X3)

1 0,0018 0,0013 0,0049 0,00000324 0,00000169 0,00002401

2 0,002 0,0004 0,0049 0,000004 0,00000016 0,00002401

3 0,0004 0,0001 0,0038 0,00000016 0,00000001 0,00001444

RATA2 0,0014 0,0006 0,00453 0,00000247 0,00000062 0,00002082

0,0042 0,0018 0,0136 0,0000074 0,00000186 0,00006246

Nilai kritis

( )( )( ) ( )( )( )

F > F tabel

Sumber Keragaman DB JK KT F hitung Hasil

Perlakuan 2 25 s

Galat 6

Total 8

s = Berbeda Nyata

Uji Lanjut Beda Nyata Jujur (BNJ) 5% Uji Aktivitas Protease

Perlakuan PBG1 (X1) PML (X2) PBR1 (X3)

1 0,0018 0,0013 0,0049

2 0,002 0,0004 0,0049

3 0,0004 0,0001 0,0038

RATA2 0,0014b

0,0006a

0,00453c

0,0042 0,0018 0,0136

Sumber Keragaman DB JK KT F hitung

Perlakuan 2 25

Galat 6

Total 8

BNJ (α=5%) 0,00041

( ) √

√

√

2,447

C. Pembuatan Pereaksi Aktivitas Enzim Metode Bergmeyer dan Grassl

(1983)

Bahan-bahan untuk pereaksi yang digunakan harus bebas dari enzim protease

dan inhibitornya.

1. Natrium hidroksida (1mol/L)

Larutkan 4 g NaOH didalam 100 mL H2O

2. Buffer borat pH 8.0

Larutan A : 12,4 g asam borat didalam 1000 mL H2O

Larutan B : 19,05g boraks di dalam 1000 mL H2O

Campurkan 50mL larutan A dengan 4,9 mL larutan B dan encerkan

sampai 200 mL

3. Asam klorida

Encerkan 9,8 mL HCl pekat (minimal 32%) menjadi 72 mL

4. Larutan buffer-kasein (2% w/v)

Suspensikan 1 g kasein dengan kira-kira 5 mL H2O di dalam gelas piala

100 mL. Tambahkan NaOH (1) dan 30 mL aquades serta aduk

menggunakan pengaduk magnet sampai semua kasein larut. Tambahkan

5 mL buffer borat (2) dan tepatkan pHnya menjadi 8 dengan

menambahkan HCl (3). Sambil menambahkan HCl larutan harus selalu

diaduk agar tidak terjadi endapan kasein. Tepatkan volumenya menjadi

50 mL.

5. Asam klorida (0.05 mol/L)

Larutkan 1 mL HCl (3) dengan 19 mL H2O

6. Larutan tirosin standar (5 mmol/L)

Larutkan 45,3 mg tirosin di dalam 50 mL H2O

7. Kalsium klorida (12 mmol/L)

Larutkan 66,5964 mg CaCl2 di dalam 50 mL H2O

8. Asam trikloroasetat (0,1 mol/L)

Larutkan 16,3 g TCA di dalam 1000 mL H2O

9. Kalsium klorida (2 mmol/L)

Tambahkan 30 mL H2O terhadap 6 mL larutan CaCl2 (7)

10. Natrium karbonat (0,4 mol/L)

Larutkan 42,397 g Na2CO3 di dalam 1 L aquades

11. Folin Ciocalteau

Larutkan 30 mL folin komersil dengan 60 mL H2O

12. Larutan enzim

Tambahkan 0,2 mL larutan (7) terhadap 1 mL enzim yang akan dianalisis.

Stabilitas pereaksi

a. Larutan buffer-kasein harus disiapkan tiap hari

b. Buffer dan tirosin standar harus disimpan pada suhu 4oC dan stabil

selama dua minggu

c. Pereaksi-pereaksi lain dapat disimpan pada suhu kamar dan stabil untuk

waktu yang lebih lama.

D. Gambar Hasil Uji Aktivitas Proteolitik

Gambar 1. Hasil uji proteolitik Isolat Bt PBG1 pada media Skim Milk Agar

Gambar 2. Hasil uji proteolitik Isolat Bt PBR1 pada media Skim Milk Agar

Gambar 3. Hasil uji proteolitik Isolat Bt PML pada media Skim Milk Agar

E. Gambar Uji Fermentasi Karbohidrat dan Hidrolisis CMC

Gambar 4. Hasil uji fermentasi fruktosa (- = tidak terjadi fermentasi ; +A =

terjadi fermentasi menghasilkan asam)

Gambar 5. Hasil uji fermentasi galaktosa (+A = terjadi fermentasi

menghasilkan asam)

Gambar 6. Hasil uji fermentasi glukosa (+A = terjadi fermentasi

menghasilkan asam)

Gambar 7. Hasil uji fermentasi laktosa (+A = terjadi fermentasi

menghasilkan asam ; +G = menghasilkan gas)

Gambar 8. Hasil uji fermentasi sukrosa (+A = terjadi fermentasi

menghasilkan asam)

Gambar 9. Uji hidrolisis CMC (Bt PBG1 = -)

Gambar 10. Uji hidrolisis CMC (Bt PML = +)

Gambar 11. Uji hidrolisis CMC (Bt PBR1 = +)

Gambar 12. Larva Papilio memnon

Gambar 13. Larva Papilio memnon yang mati karena infeksi Bt