LLICENCIATURA: BIOTECNOLOGIA. UAB

CURS: 199912000

ASSIGNATURA: TECNIQUES D'INSTRUMENTACIÓ 1

YTE

PRO

1 TC CNTQUES CROMATOGRAFIC ció. Con

l- 1;romatomafia de repartlment sobre suport nontzontai: cromatomafia en baper i en capa nna.

2romato tografia . , , ,,., . encional.

/ "

1.4-Cromatografia de 5 en gel. de la filtració el iracterístiques de les reines.. Calibració de la columna. ~plicacions. ueterminació del pes moiecuiar. Exemples.

s. Equilibri del bescanvi Aktodes d'elució ' les). Tipus de reina. Apl . Exemples. '

. 1.6-Cromatografia hi :a. Princi giafia h ors que afecten la' ,

interacció. ,Tipus de r )licacion

1.7-~romato~ráfia d'afinitat. Principi de la crornatogifia d'afinitat. Preparació de la fase . l . . ' , I

estacionhia. Vida mitja dels cornplexo6. Mhtodes d'elució per tandes. ~ ~ l i c a c i o ~ s de . S - . 3

.. cromatogafía d'afinitat. ,Exemples. Sistema His-tag. Cromatografia d'hidroxilapatita; . . . .

l . ~ - ~ r o m a t o g r ~ f i ~ Guida d'alta resolució (~PLc). ~on&ents. instnunentació. Caricten'stiaues. , . ~ i ~ u s ' d e fases estacionañes: fase inversa, exclusió pér tarnany, bescanvi ibnic. . , ,

: gasos. :ió. Detc ,plicacic

ostratemes ae ~urificacio ae macromoleculas per tkniques cromatogr~fi~ues. btapes de ació de cada etapa. Exemples.

(UC3.

ipus. C1; icepte ge . .

ió.

na. Fona ments. ( a croma

n gel. C; . . Principi - .

:romatol nus (per

ibnic. n : bescan ) o discc

;rafia de gradent

Principi per esca icacions

ipi de la s. Exem

cromatc ples.

idro fbbi ca. Factl

nts. Instr wnentac xtors. A

, .

'purif -

icació. C

2.1-IIILIUUUGC~Ó. Moviment dels ions en un camp elkctric. El procés electroforetic.'.Suports per a l'electroforesi. T i ~ u s d'electroforesi.

2.2-~1ectrofo;esi per proteines. Suports no restrictius: Immunoelectroforesi. Suports .Tipus d'electroforesi (desnaturalitzant/nativa, contínua~discontínua, SDS-PAGE). Determinació del pes molecular en les diferents electroforesi. Tincions. Transferencia a membrana (Westem). Electroforesi bidimensional: Electroenfoc.

\

2.3-Electroforesi d'Acids nucleics. Mobilitat electroforktica del DNA. Tipus: nativa/desnaturalitzant DNA/RNA, acrilamidalagarosa. Determinació del pes molecular. Tincions. Transferencia a membrana (Southem, Northem). Electroforesi de camp pulsant.,Electroforesi en gradent termic. Electroforesi capil.lar. Electroforesi bidimensional.

niques b 2.4-Exemples de teci asades en l'analisi electroforktica. Determinació de I'estmctura terciaria de les proteines. ~niilisi conformacional de les proteines. Anhlisi de l'homogenitat i

ilisi de 1 fiagments de D' >otprinti

pure d'un

sa d'una DNA ci

prepara rcular. C

ció protc ieis de 'r

:ica. Aní etard. Fc

- NA. TOI

ra dels a nticosso ó antige

5 d'antic ossos. P reparaci

. . .

ó d'antic s. Aspec n-'anticó

tics de 1' oclonals - - .

i. Reacci -. .

:ns macromoleculars 1 anticossos en solució. lmrnunoprecipitacic d'antigc

antigens noelectrc lport sbl sobre si 1 .~

(sobre membrana S, N, ,al. ~ii temes enzimhtics

,3.4-~tilització d'anticossos per a la determin: ' sobre talls histolbgics). Anticossos secundari

detecció. Sistemes quimioluminiscents de de

sció de I s. Arnp tecció.

nacromc lificació

~lecules de seny

utilitzat 4.1 -1ntroducció. Tipi S 'bioquímica.

egració.

nents i n stge. Ma ; nucleic de marci lrcatge in vivo. 1 , , de proteihes. . . . . . ,

' 4.3-~etecció de les r&iacilons. Detectors d'ionitzaió. Compl '

Metodes altematius a l'autoradiografia (Phosphoimaging). : centell

d'isbtop 1s radioa 4.4-1 isbta

'roteccic ~ps radio

ctius. Si stemes c uniniscents com altemal 1

DENA DE LA POLIMERASA: PCR.

5.1-Iníroducció. Fonament de la teniica. Especificitat i rendiment. Disseny dels encebadors ,

(programes informhtics). Efecte "plateau". Factors que afecten la PCR. Optimització de la reacció.

5.2 Aplicacions clíniques: diagnosi d'infeccions vínques, detecció de RFLP i malalties hereditanes. Aplicacions legals. Aplicacions en recerca: amplificació de DNA, seqüenciació, mutagenesi, in situ PCR.

6.1 -Dihlisi i filtració molecular. L'equilibri de diilisi. . .

6.2-Tipus de filtres ranes: nitrocelulosa, acetat, fibra de vidre, nylon. Aplicacions.

7-CITOMETRIA DE FLUX

vions. Exemples tometria I de flux. , Instrurr ientació . Aplicac

rnncipi ueis mktodes potenciom~trics. bieciroues rnuicauors rnelaiics. ciecirour nbrana.

.Instruments per a ia medició dels poimiais ue pila. ~piicació de la medicio poienciome ' directa. Aplicacions de les t 1s potenc ques

\

8.3-Aplicacions. Exemples. es. Con( xes. Oxí

< I'

~CIGXS Instrumentales de Anhlisis en Bioquímica. J.M. García-Segura et al. Editc tesis. 1996

nálisis ~nstrurriental,.~.~. Skoog and J.J. Leary. ~ c ~ r a w - ~ i l l . 1994 '

- Íntroducció a la Bio'química Prhcti d T. Plurner. Publicacions Universitat de arcel lona: 1994.

' -T&niques de ~ i o ~ u í m i c a y Biologia Molecular. D. Freifelder Editorial Reverte .1991

. ' -Instru&tos y Técnicas de Bioquii 3. ~ o o p e r Editorial Re\ 84 i , r

, ' , . >

. - l . S , -~ro~atográfia i electro~oresi J.M.'Casas abata: $ al. ~arcel ina hicions UPC 1994 " , , . ,

- ~Electrophoresis, ~ h b j , Thecniquc ~iochemical anc :atiOns. 0~fo;d S'cienci - Publications. 1995.

metres. PHmetr

BIE

~ n a l Sín

ca. Davi .

mica T.(

11 Applic

Manual. Ed Har low, Da' g Harbo :S, a Lab vid Lane New York Cold Sprin, 1988

- Antibody Technology. Eryl Liddell, Ian Weeks Oxford Bios Scientific Publishers 1995

- Radioisotopes in Biology. Edited by R.J. Slater Oxford. IRL Press cop. 1990 ,

- PCR Protocols- Current Methods and Applications. Ed. B. A. White. 1993. Human Press INC,

- PCR Protocols- A Guide to Methods and Applications. Ed. M.A. Imis et al. Academic Press INC, 1990.

-Membrane Filtration. T.D. Brock, Ed. Springer-Verlag New York 1983.

- Flow Cytometry a Practica1 Approach Ed. M.G. Ormerod Oxford IRL Press cop. 1994.