Actualitzacions sobre diagnòstic de les Rickettsiosis ...€¦ · Els artròpodes actuen de reservoris i vectors. L’homeés un hoste accidental. Transmissió transovàrica en el

Actualitzacions Rickettsiosis. Març 2015

Societat Catalana de MalaltiesInfeccioses i Microbiologia

Clínica

Actualitzacions sobre diagnòstic de les Rickettsiosis

Isabel SanfeliuMª Mercè Nogueras



Clínica

Classificació i taxonomiaRickèttsies febres tacades patògenesRickettsiosis a EuropaDiagnòsticDiagnòstic molecular



ClínicaRickèttsies: classificació

Ordre

Rickettsiales

Família

Rickettsiaceae

Anaplasmaceae

Gènere

Rickettsia

Orientia

Ehrlichia

Anaplasma

Grup tacades Grup tifus



ClínicaRickèttsies patògenes fins 1984

Rickettsia rickettsii Rickettsia conorii

Rickettsia sibirica

Rickettsia australis



ClínicaTaxonomia

Criteris de seqüència genòmica. Any 2012

•17 espècies patògenes. 6 subespècies

•Més de 40 espècies descrites no patògenes

•23 genomes seqüenciats



Clínica

Genome sequence-based phylogenetic tree of Rickettsia species. This tree was constructed by aligning the 597 orthologous genes of all studied genomes. CMR ,Tick-Borne Rickettsioses around the World October 2013 Volume 26 Number 4

Rickèttsies arbre genòmic



ClínicaRickèttsies a Europa

Tick-Borne Rickettsioses around the World October 2013 Volume 26 Number 4



Clínica

Rickettsia spp. estudiades pel nostre grup

Espècie Malaltia Vector LocalitzacióR. conorii Febre botonosa Rhipicephalus sanguineus Area Mediterrània

R. slovaca TIBOLA/DEBONEL Dermacentor spp. Europa

R. massiliae/Bar29 Innominada Rhipicephalus spp. Europa, Amèrica

R. felis Rickettsiosis transmesa per puces Ctenocephalides felis Mundial

Grup de les febres tacades

Grup del tifus

Espècie Malaltia Vector LocalitzacióR. typhi Tifus murí Ctenocephalides felis

Xenopsylla cheopis Mundial



Clínica

Característiques microbiològiques Rickettsia

Cocbacils gram negatius, aerobis. Petit tamany 0.3-0.5x0.8-2 µm.Paret cel·lular amb ac.muràmic i diaminopimèlic i membranacitoplasmàtica. DNA i RNA i ribosomes.

Multiplicació per fissió binària i s’inhibeixen per antibiòtics. Paràsitsintracel·lulars obligats.

No es tenyeixen be per Gram, sí per Gimenez i Giemsa. Làbils a les condicions ambientals.

Transmissió a través d'artròpodes. Per picades de lespaparres o puces. Els artròpodes actuen de reservorisi vectors. L’home és un hoste accidental.

Transmissió transovàrica en el vector. Distribució dela malaltia determinada per la del vector.



Clínica

Diagnòstic

Criteris clínicsEpidemiològicsHistopatològicsProves de laboratori:

Mètodes directes:Examen directeCultiu

Mètodes indirectes:Tècniques serològiques

PCR:Directe de mostresDe cultiu



Clínica

Examen Directe Es tenyeixen amb: Giemsa, Giménez, IFD amb anticossos

monoclonals específics i marcats amb fluoresceïna.

Cultiu Cultiu cel·lular. Cultiu shell-vial.

Sang total heparinitzada, sèrum, escara, biòpsia lesió, o frotis lesió.

Diagnòstic



Clínica

Es retira el medi S’inoculen 500µl de mostra

Es centrifuga

Es retira l’inòculS'afegeix medi i s’incuba a 37ºC

Cultiu cel·lular ràpid (shell-vial)

Centrifugació de les mostres sobre capes de línies cel·lulars, cèl·lules HELA, VERO, MRC5.



Clínica

Cultiu shell-vial revelat

El sobrenedant, es guarda per inocular-lo en cultiu cel·lular. També per fer PCR.

GiménezIF

Es detecta per tinció IF o per Gimenez.



Clínica

Cultiu shell-vial. Estudi

Ten Years’ Experience of Isolation of Rickettsia spp. from Blood Samples Using the Shell-Vial Cell Culture Assay

MARIELA QUESADA, ISABEL SANFELIU, NEUS CARDEÑOSA,AND FERRAN SEGURASabadell, Barcelona, Spain

Ann. N.Y. Acad. Sci. 1078: 578–581 (2006). New York Academy of Sciences.doi: 10.1196/annals.1374.115

Es va cultivar la sang de 59 pacients amb febre botonosa Mediterranea (FBM) en shell-vial. 5d’elles van ser positives i van ser identificades com R. conorii per PCR -RFLP.



Clínica

Mètodes serològics. IFI

La IFI és la tècnica de referència. Es troba comercialitzada per algunes espècies de

Rickettsia Detecta classes de immunoglobulines IgG, IgM. Cribatge 1/40. Reccions creuades entre diferents espècies

R. conorii Bar 29 R. typhi R. slovaca R. felis

Nº sèrums (%) 23 (10.8) 18 (8.5) 19 (8.9) 12 (5.6) 7 (3.3)

Específics (%) 13 (6.1) 11 (5.1) 15 (7) 8 (3.7) 0

Total 212



Clínica

Suero R.conorii R.massilae/Bar 29 1 1:256 1:256 2 1:512 1:1024 3 1:2048 1:2048 4 1:1024 1:1024 5 1:512 1:1024 6 1:1024 1:2048 7 1:256 1:256 8 1:128 1:256 9 1:2048 1:2048 10 1:256 1:2048 11 - 1:512 12 1:128 1.512 13 - 1:128 14 1.256 1.128 15 1:512 1.2048

Estudi en pacients. Reaccions creuades

Tècniques de immunoblot

Tècniques de cros-absorció



Clínica

Agraïda per la vostra atenció

Documents

Actualitzacions sobre diagnòstic de les Rickettsiosis ...€¦ · Els artròpodes actuen de reservoris i vectors. L’homeés un hoste accidental. Transmissió transovàrica en el