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AGROBACTERIUM RHIZOGENES VS INDUCCIÓNAUXÍNICA PARA LA RIZOGÉNESIS IN VITRO DE

PROSOPIS CHILENSIS (MOL.) STUNTZAGROBACTERIUM RHIZOGENES VS AUXINIC INDUCTION FOR THE RIZOGENESIS

IN VITRO OF PROSOPIS CHILENSIS (MOL.) STUNTZ

LUIS CARO*, P. MARINANGELI*, N.R. CURVETTO*,** Y L. HERNÁNDEZ*,***

*Departamento de Agronomía, Universidad Nacional del Sur, Bahía Blanca (8000)**CONICET, Bs. Aires (1033) y ***CICBA, La Plata (1900), Argentina. (lcaro@criba.edu.ar)

ISSN 0327-9375

RESUMEN

Se evaluó la efectividad de Agrobacteriumrhizogenes (Ar), cepa LBA 9402, parainducir y eventualmente mejorar la for-mación in vitro de raíces de Prosopischilensis, en presencia o ausencia de áci-do indol-3-butírico (AIB).

Los explantos consistieron en segmen-tos uninodales provenientes de plántulasde un mes de edad criadas in vitro a partirde semillas, los cuales se cultivaron entubos de ensayo que contenían perlita sa-turada con medio basal líquido BroadleavedTree Medium (MB), con sus sales mayo-res reducidas a la mitad de su concentra-ción original a pH 5,8, con un fotoperíodode 16/8 (luz/oscuridad) y a 25 ± 2°C.

Los segmentos fueron distribuidos enseis tratamientos: 1) MB (control); 2)Inmersión en AIB 1’ (3 ppm); 3) MB +AIB (3 ppm); 4) Inoculación con Ar 1’; 5)Inmersión en AIB 1´(3 ppm) + inocula-ción con Ar 1’, y 6) Inoculación con Ar 1’+ MB + AIB (3 ppm).

A los 10 días de cultivo, los explantosfueron transferidos a medio basal fresco

solidificado con agar y libre de auxinas.Los segmentos inoculados con Ar fueronsubcultivados en un MB que conteníancefotaxina (500 ppm). A los 30 días desubcultivo se determinó el porcentaje deenraizamiento, el número de raíces porexplanto, el largo de las raíces y el pesoseco de raíces.

El porcentaje de enraizamiento y elnúmero de raíces primarias por explanto,fue superior en los microvástagos inocu-lados, llegando al 100% cuando ademásse sometieron a la acción del AIB (3 ppm)por inmersión. La inoculación de los seg-mentos produjo un número de raíces porexplanto significativamente mayor y conun peso seco significativamente tambiénmayor en comparación a los segmentosno inoculados.

Los tratamientos con A. rhizogenesresultaron en una mejor respuesta deenraizamiento, pero el tratamiento conAIB en el medio de cultivo sin inocula-ción produjo un buen porcentaje deenraizamiento, con más de dos raíces porexplanto y con buena biomasa de raíces.

48 Luis A. Caro, P.A. Marinangeli, N.R. Curvetto y L.F. Hernández

Palabras clave: ácido indol-3-butírico, Agrobacterium rhizogenes,enraizamiento, Prosopis chilensis

SUMMARY

This work assesses the effectiveness ofAgrobacterium rhizogenes (Ar), LBA9402 strain, to induce and to eventuallyimprove the formation of in vitro roots ofProsopis chilensis, with the presence orabsence of indol-3-butirico acid (AIB).The explants consisted of uninodal seg-ments proceeding from seedlings onemonth old raised in vitro from the seeds.They were cultivated in tubes containingsaturated perlite, with liquid basal envi-ronment Broadleaved Tree Medium (MB),with the major salts reduced to half of theoriginal concentration at 5.7 pH, with a16/8 photo-period (light/darkness) and at25 ± 2°C.

The segments were distributed in six treat-ments: 1) MB (control); 2) 1' immersion inAIB (3 ppm); 3) MB + AIB (3 ppm); 4) inocu-lation with Ar 1'; 5) immersion in AIB 1' (3ppm) + inoculation with Ar 1', and 6) inocu-lation with Ar 1' + MB + AIB (3 ppm). After ten days of culture the explants weretransferred to a fresh basal environmentsolidified with agar and free of auxines.Those segments inoculated with Ar weresub-cultured in an MB containingcefotaxine (500 ppm). After 30 days ofsubculture the rooting percentage, num-ber of roots by explant, length and dryweight of roots were determined. The root-ing percentage and the number of primaryroots per explant was higher in the in-oculated micro-shoots, reaching 100%when the remaining underwent the AIB(3 ppm) action through immersion. The

inoculation of the segments produced anumber of roots per explant significantlyhigher and with a dry weight also signifi-cantly higher compared with those non-inoculated segments.

The treatments with A. rhizogenes re-sulted in a better rooting response, butthe AIB treatment in the culture environ-ment without inoculation produced agood rooting percentage, with more thantwo roots per explant and a good root bio-mass.

Key words: Agrobacteriumrhizogenes, indole-3-butiryc acid,Prosopis chilensis, rooting

INTRODUCCIÓN

La propagación sexual es la vía más co-mún de obtener nuevos ejemplares delAlgarrobo de Chile (Prosopis chilensisMol. Stuntz) en viveros, pero lamentable-mente muchas características forestalesselectas se pierden de este modo.

Se presenta entonces la alternativa desu micropropagación como técnica capazde conservar las características deseablesde individuos “elite”. La micropropagaciónde plantas elite de P. chilensis (Caro et al.,2002) posibilitaría entonces una propa-gación vegetativa con rápida ganancia decaracteres génicos deseables en progra-mas de mejoramiento forestal.

En la micropropagación in vitro deespecies forestales, se ha observado undesarrolllo radical deficiente de losexplantos incidiendo negativamente en laimplantación de las microplantas a cam-po (Martínez Pastur et al.,2000).

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transferir los explantos varias veces a unmedio fresco conteniendo antibiótico(Narasu & Giri, 2000).

El propósito del presente trabajo fuecomparar la efectividad de la cepa LBA9402 de Ar con la correspondiente delácido indol butírico para inducir y even-tualmente mejorar in vitro la formaciónde raíces en vástagos de P. chilensis.

MATERIAL Y MÉTODO

Material vegetalSegmentos uninodales de 1-2 cm de lon-gitud, provenientes de plántulas de unmes de edad crecidas in vitro a partir desemillas, fueron cultivados in vitro du-rante 30 días, en un medio BroadleavedTree Medium (Chalupa, 1983) con losmacronutrientes reducidos a la mitad desu concentración original (BTMm) (Caroet al., 2002). Al cabo de ese período,vástagos conteniendo hojas verdaderasfueron seleccionados, para ser usados enla experiencia de enraizamiento in vitrocon Ar y AIB.

Cultivo de las bacteriasSe cultivó la cepa LBA 9402 de Ar apartir de colonia aislada en medio líquidoYEB con 50 ppm de rifampicina a 27 °Cdurante 12-14 horas hasta obtener unalectura de densidad óptica a 600 nm enel rango de 0,6 y 0,8. La concentraciónbacterial juega un rol importante en laproducción de raíces transformadas, con-centraciones sub-óptimas podrían resul-tar en una más baja habilidad de la bacte-ria para la transformación, y por otraparte, concentraciones elevadas podríanhacer decrecer la capacidad de transfor-

La infección en la base de microestacascultivadas in vitro con Agrobacteriumrhizogenes (Ar), una bacteria Gram (-)común en el suelo y con capacidad deinfectar a vegetales a través de heridas,induciendo abundantes raíces adventicias(“hairy roots”) en el sitio de la infección(Tepfer, 1984; Petit et al., 1986; Narasu &Giri, 2000), puede mejorar el enraiza-miento de especies leñosas recalcitrantespara el enraizado in vitro (Damiano &Monticelli, 1998; Perez-Molphe & Ochoa-Alejo, 1998; Hoshino & Mii, 1998;Gutierrez-Pesce et al., 1998). Utilizandodiferentes cepas de esta bacteria, variosautores han logrado enraizamientosexitosos en especies de Pinus, Larix,Eucalyptus (McAfee et al., 1993; MacRae& Van Staden, 1993).

Las raíces transformadas son ademáscapaces de regenerar plantas transgénicasenteras o clones, viables y genéticamenteestables (Narasu & Giri, 2000). Especiesrecalcitrantes para su transformación pue-den llegar a ser transformadas por induc-ción génica de la bacteria a través de co-cultivo in vitro de Ar y tejidos vegetalescortados (Stachel et al., 1985), aunque lacapacidad para transformación varía deacuerdo a las distintas cepas de Ar (Kumaret al., 1991; Giri et al.,1997).

El medio de cultivo induce signifi-cativamente sobre la formación de “hairyroots” (Narasu & Giri, 2000). Medios conalta concentración salina como ser MS(Murashige & Skoog, 1962) favorecen laformación de hairy roots en algunas plan-tas mientras que, medios de baja concen-tración osmótica tal como BTM (Chalu-pa, 1983), incrementan la multiplicaciónbacterial en el medio siendo necesario

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mación por inhibición competitiva(Kumar et al., 1991).

Cultivo in vitroLos microvástagos fueron cortados en labase con un escalpelo y distribuidos enseis tratamientos sin desinfección debidoa que provenían de un cultivo aséptico desemillas in vitro. Los tratamientos (T)aplicados fueron:

T2: IBA 3 ppm x 1’MB....................... subcultivo MB

T3: MB + AIB 3 ppm....................... subcultivo MB

T4: Ar x 1’ MB....................... subcultivo MB + cefotaxina

T5: AIB 3 ppm x 1’ + Ar x 1’ — MB....................... subcultivo MB + cefotaxina.

T6: Ar x 1’ MB + AIB 3 ppm....................... subcultivo MB + cefotaxina.

.

En todos los tratamientos los micro-vástagos fueron cultivados en tubos deensayo que contenían perlita saturadacon medio basal BTMm, esterilizado a0,1 MPa durante 20 min, previo ajustedel pH a 5,8 con KOH 0,5N. La soluciónde auxina fue esterilizada con filtrosMillipore‚ de 0,2m. El cultivo se hizo a25 ± 2 °C con un fotoperíodo de 16 h deluz fluorescente blanca (PAR = 70mmol.m-2.s-1).

En T2 y T5 los explantos fueron so-metidos a una inmersión durante 1 min enAIB (3 ppm) previo al cultivo en BTMm.En T3 y T6 se añadió 3 ppm de AIB almedio basal BTMm. En los tres últimostratamientos (T4, T5 y T6) los micro-vástagos fueron inoculados con Ar du-rante 1 min previo al cultivo en mediobasal BTMm.

A los 10 días de cultivo, los MVsfueron subcultivados a medio BTMm soli-dificado con agar (0,7% p/v) libre deauxinas. Los MVs inoculados con Ar fue-ron subcultivados en medio basal BTMmque contenían cefotaxina (500 ppm).

A los 30 días de subcultivo se registróel porcentaje de enraizamiento, el núme-ro de raíces primarias y peso seco deraíces en los MVs enraizados, y la longi-tud de los brotes.

Diseño y análisis estadísticoSe siguió un diseño estadístico completa-mente aleatorizado, con dos repeticionesde 25 microvástagos cada una, según eltratamiento. Sobre los datos obtenidos serealizó un análisis de varianza de dobleentrada y los valores medios de los trata-mientos se separaron usando el ensayo deTukey-Kramer.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

El porcentaje de enraizamiento fuesignificativamente superior en los trata-mientos con Ar en comparación a los queno fueron inoculados (p = 0,03), llegandoal 100% en el tratamiento con Ar e inmer-sión por un minuto en IBA (Tabla 1). Estoúltimo fue similar a la inducción radicularen Simmondsia chinensis informada porBenavides y Radice (1998).

En cuanto al número de raíces prima-rias, se observó un efecto estimulante tantoen los microvástagos inoculados con Arcomo en los tratados con AIB. Si bien, elAIB en el medio de cultivo (T3) produjo unnúmero promedio de raíces por explantosuperior al control, con Ar el número deraíces fue aún mayor (Tabla 1).

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Al comparar en promedio los trata-mientos no inoculados con los inocula-dos, resultó ser significativamente supe-rior el conjunto de los tratamientos conAr en el número promedio de raíces y enel peso seco de las mismas (p < 0,01). Elnúmero de raíces primarias por explantose incrementó por encima de tres al sumi-nistrar IBA en combinación con Ar, enambas modalidades de uso de la auxina(Tabla 1).

No se encontraron diferencias en ellargo de raíces entre los diferentes trata-mientos (p > 0,63) (Tabla 1).

Los microvástagos enraizados mos-traron una mayor elongación promedio alser comparados con vástagos que no pre-sentaban raíces (p < 0,001), 22,78 mm y9,36 mm, respectivamente. No se obser-vó presencia de raíces en explantos nobrotados.

Es importante destacar que si bien lostratamientos con Ar tuvieron una mejorcalidad de enraizamiento, el tratamientocon IBA en el medio de cultivo sin Ar(T3) produjo un buen porcentaje demicrovástagos con raíz (86%), con más

de dos raíces por microvástago y conbuena biomasa (2,6 mg de peso secopromedio). Lo anterior recomendaría laelección de este camino si lo que se pre-tende es la micropropagación. Sin embar-go, la rizogénesis mediada por Ar en P.chilensis sería presumiblemente ventajo-sa si las diferencias en su favor en volu-men y peso radical resultasen a campo enuna mayor supervivencia y crecimiento.

La elección de una u otra víarizogénica, en última instancia, depende-rá del comportamiento de las microplantasa campo, como por ejemplo una mayorsupervivencia y crecimiento.

Una de las grandes ventajas que seaprecian a través de la generación deraíces por Ar es la ausencia de la fase deformación de callos que provoca varia-ción somaclonal. Por otra parte, la pre-sencia de “hairy roots” en P. chilensisposibilitaría además la obtención de indi-viduos con mejor performance de im-plantación y un camino posible para elmejoramiento de la especie a través de laingeniería genética. Es bien sabido quelos programas clásicos de mejoramientogenético forestal, son lentos y tediosos,

Tabla 1: Enraizamiento y principales parámetros morfológicos evaluados en los explantos de P. Chilensisen los diferentes tratamientos. Las letras iguales no muestran diferencias significativas (P=0,05)

Table 1: Rooting and main morphological parameters evaluated in the explants of P. chilensis after thetreatments. Same letters do not show significant differences (P= 0,05)

Tratamientos Enraiz. N° raíces por Largo Peso seco Largo de(%) explanto de raíces (mm) raíces (mg) los brotes (mm)

T1 (control) 42,95 a 0,76 a 60,00 a 3,247 a 17,19 aT2 (IBA 1’) 57,22 a 1,02 a 44,44 a 1,754 a 16,92 aT3 (MB + IBA) 86,00 a 2,20 b 46,45 a 2,593 a 22,08 aT4 (Ar) 84,00 a 2,74 b 43,08 a 3,571 a 18,42 aT5 (Ar + IBA 1’) 100,00 a 3,06 b 44,31 a 4,277 a 21,98 aT6 (Ar + MB + IBA) 95,42 a 3,07 b 43,73 a 4,119 a 22,16 a

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resultando sumamente difícil introducirgenes específicos a través de ciclos decruzamiento de líneas parentales. Ar pue-de ser una alternativa exitosa como rutarápida y directa de introducción y expre-sión de genes específicos (Huang et al.,1991).

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Recibido: 08/2000Aceptado: 10/2000

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RESUMEN

Se realizó un ensayo de genecología deProsopis chilensis en la Estación ForestalINTA Villa Dolores (Córdoba) que in-cluía 17 poblaciones (procedencias) deArgentina y 6 de Chile.

El trabajo tenía los siguientes objeti-vos: 1. Verificar la presencia de un patrónde variación adaptativa de P.chilensis alas características geográficas (latitud,longitud), topográficas (altitud) yclimáticas (precipitaciones) que se insi-nuara en una etapa anterior del proyecto y2. Fijar pautas básicas para la transferen-cia de semillas de una zona a otra.

A fines del invierno del cuarto año dela plantación se efectuaron observacio-nes semanales para detectar el momentode inicio de brotación . Se comprobó lapresencia de un patrón de diferenciacióngenética en función de la latitud, la longi-tud y la altitud de las procedencias. Así,existe una relación directa entre la veloci-dad de brotación (Índice de Brotación -IB) y la longitud, e inversa entre la velo-

ISSN 0327-9375

COMPONENTES DE LA VARIACIÓN ADAPTATIVA ENPROSOPIS CHILENSIS: EL ÍNDICE DE BROTACIÓN

COMPONENTS OF ADAPTIVE VARIATION IN PROSOPIS CHILENSIS: THE BUDBREAK INDEX

CARLOS CARRANZA*, G. VERZINO**, J. DI RIENZO***, M. LEDESMA *Y J. JOSEAU**

* Estación Forestal INTA Villa Dolores , C.C 1, (5870) Villa Dolores, Pcia. de Córdoba** Silvicultura, Facultad de Cs. Agropecuarias, U.N.C., C.C 509, (5000) Córdoba.

*** Estadística y Biometría, Facultad de Cs. Agropecuarias, U.N.C., C.C. 509, (5000) Córdoba.

cidad de brotación y la latitud y altitud delas procedencias. El efecto de latitud yaltitud podría estar relacionado con unaestrategia adaptativa para evitar el dañode heladas tardías. En consecuencia, parala transferencia de semillas entre diferen-tes zonas debiera considerarse la fechaprobable de última helada.

Palabras clave: genecología,transferencia de semillas, proce-dencias, variabilidad

SUMMARY

A genecology study of Prosopis chilensiswas performed in the Estación ForestalINTA Villa Dolores (Prov. de Córdoba),which included 17 populations (prov-enances) from Argentina and 6 popula-tions from Chile.

The project objectives were the follow-ing: 1. To verify the presence of adaptivevariation in Prosopis chilensis related tothe geographic (latitude, longitude), to-

56 Carlos Carranza, G. Verzino, J. Di Rienzo, M. Ledesma y J. Joseau

pographic (altitude) and climatic (pre-cipitation) conditions of the seed source,detected in a previous stage of the projectand 2. To provide guidelines for soundseed transfer.

In order to determine the beginningof shoot elongation, weekly measurementswere done by the end of the winter of theplantation´s fourth year. Genetic differ-entiation among provenances related tothe latitude, longitude and elevation of theseed source was found. There was a di-rect relationship between the beginningof shoot elongation (Bud break Index -BI) and longitude as well as an inverserelationship between the beginning ofshoot elongation and the latitude and al-titude of the provenances. The latitude andaltitude effect could be related to an adap-tive strategy of the species to avoid latefreezing damage. Therefore, in order totransfer seeds from one area to another,occurrence of late freezing events shouldbe taken into consideration.

Key words: genecology, seedtransfer, provenance, variability

INTRODUCCIÓN

El Banco Nacional de Germoplasma deProsopis (BNGP), con sede en la Facul-tad de Ciencias Agropecuarias, Universi-dad Nacional de Córdoba, provee semi-llas de distintas especies del género ademandantes de todo el mundo. Prosopischilensis (Mol) Stuntz es una de las másimportantes especies forestales en unaamplia región que se extiende hacia eloeste de la República Argentina, en Chi-le, Perú y Bolivia. Es apreciado por la

calidad de su madera y de sus frutos y porla capacidad de adaptación a distintascondiciones de suelo y clima (Serra, 1997;Erize, 1997a, 1997b).

A pesar de la importancia potencial deP.chilensis para su cultivo en las regionesáridas y semiáridas del mundo con fines deproducción y protección, es escasa la in-formación disponible sobre pautas para latransferencia de semillas, en términos deadaptación (Verzino et al., 1995, 1997,1998). En este sentido, tampoco se dispo-ne de información sobre las otras especiesque componen el género en todo el mundo.

El éxito en la transferencia de semillasde una especie forestal de un lugar a otrodepende fundamentalmente de la estrate-gia de adaptación de la misma al ambiente(Rehfeldt 1979a, 1991, 1994a, 1994b,1995). Las especies se adaptan a variacio-nes espaciales o temporales utilizandodistintas estrategias (Lerner, 1954; Levins,1966). La especialización es una formade adaptación en la que la selección natu-ral altera la frecuencia génica en un am-biente dado para producir una poblacióndiferente. La selección actúa directamen-te sobre el genotipo, que a su vez semanifiesta fenotípicamente. La homeos-tasis, plasticidad fenotípica o flexibibidadgenética, es otro mecanismo utilizado poralgunas especies para adaptarse a un am-plio rango de ambientes. Se produce através de alelos con gran tolerancia am-biental y altos niveles de heterocigosis.Como resultado, un solo genotipo puedeproducir varios fenotipos, de acuerdo alambiente en que se desarrolle, de esaforma la variabilidad genética es alta y seconserva. Rehfeldt (1984) define a estasespecies como generalistas. La especiali-

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zación y la homeostasis son procesos encierta medida antagónicos. Generalmen-te, las especies no son totalmente especia-lizadas o totalmente plásticas, por ejem-plo, las especialistas requieren cierto gradode variabilidad genética para afrontarvariaciones ambientales.

A los efectos de la recolección y trans-ferencia de material germoplásmico deP.chilensis, el BNGP necesita conocer suestrategia de adaptación al ambiente.

En estudios exomorfológicos eisoenzimáticos en poblaciones de P.chilensis y P. flexuosa (Verga, 1995), P.chilensis mostró una diversidad genéticarelativamente estrecha al compararlo conP. flexuosa. Este autor adelantó que si setienen en cuenta algunas característicasexomorfológicas, como los frutos, P.chilensis correspondería a una especieespecializada. Julio et al., (1999) no en-contró correlación entre las característi-cas geográficas y climáticas de las proce-dencias y seis sistemas isoenzimáticos.Los autores concluyeron que la adapta-ción en los algarrobos se producía, proba-blemente, por plasticidad fenotípica y nopor alteración de las frecuencias génicas.

A pesar de su probada utilidad enestudios de genética de poblaciones(Hamrick & Godt, 1989; Julio et al,. 1999)las isoenzimas no resultan apropiadas paraestudiar la variación adaptativa de lasespecies. Los estudios genecológicos, encambio, han mostrado ser adecuados parainvestigar la variabilidad genética de lasespecies en función de la variabilidadambiental (Joyce, 2001).

Mediante estos estudios, Pseudotsugamenziesii var glauca y Pinus contorta

fueron descriptos como especialistas(Rehfeldt, 1979a, 1983a, 1989), Pinusmonticola y Larix occidentalis comogeneralistas (Rehfeldt 1982, 1979b, 1984),mientras que Pinus ponderosa fuedescripto como intermedio (Rehfeldt,1990, 1991).

El crecimiento potencial, la toleranciaa heladas y el ritmo de crecimiento son lasvariables compuestas más frecuentemen-te utilizadas para medir la variaciónadaptativa de las especies (Rehfeldt, 1984;Dietrichson, 1964).

Verzino et al., (1995) describieron, enuna etapa anterior del presente proyecto,utilizando una componente del crecimien-to potencial (el crecimiento en altura), unefecto significativo (p£0,01) de la longi-tud y la altitud del lugar de cosecha sobreel crecimiento en altura de las plantas alos 197 días de la siembra (R2=0,36). Alos 505 días se observó que la longitud,altitud, latitud y precipitaciones del lugarde origen afectaban la tolerancia a hela-das y la velocidad de crecimiento inicialde las plantas (Verzino et al., 1998). Losresultados del estudio sugerían la presen-cia de un patrón de diferenciaciónadaptativa a cambios macroambientales.Era oportuno, entonces, corroborar di-chos resultados con nuevos estudios quetuvieran en cuenta el ritmo de crecimien-to de las plantas. Para el presente trabajose plantearon los siguientes objetivos: 1.Verificar la presencia de un patrón devariación adaptativa de P. chilensis rela-cionado con las características geográfi-cas (latitud, longitud), topográficas (alti-tud) y climáticas (precipitaciones) de lasprocedencias, que se insinuara en unaetapa anterior del presente proyecto y 2.

58 Carlos Carranza, G. Verzino, J. Di Rienzo, M. Ledesma y J. Joseau

Fijar pautas básicas para la transferenciade semillas de una zona a otra.

MATERIAL Y MÉTODO

Se seleccionaron 17 poblaciones (proce-dencias) de Argentina, cosechadas enCórdoba, La Rioja y Catamarca, en un

rango de 27°30’ a 32°S y elevaciones quevarían entre 430 m s.m. y 1450 m s.m. y6 poblaciones de Chile, entre los 30°39’ y31°09’S y entre 475m s.m. y 900 m s.m.(Figura 1).

La Tabla 1 muestra las procedenciasutilizadas, consignando el número de árbo-

Figura 1. Ubicación de las procedencias incluidas en el ensayoFigure 1. Location of the provenances included in the trial.

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les que componen cada procedencia (mí-nimo de 7 árboles elegidos al azar, distan-ciados por lo menos 100 m entre ellos) y lascaracterísticas geográficas, fisiográficas yclimáticas de las procedencias.

Los parámetros para determinar loslímites de las procedencias, el procedi-miento de obtención de semillas yplantines así como la etapa de plantaciónhasta los 505 días fueron descriptos porVerzino et al., (1995,1998).

El ensayo fue conducido en la Esta-ción Forestal del INTA Villa Dolores(Córdoba), a 31°57’S y, 65°08’O y 529 ms.m. Se utilizó un diseño de parcelas com-

pletamente aleatorizadas con 23 trata-mientos (procedencias) y seis repeticio-nes de 6 plantas por parcela experimental.

A fines del invierno del cuarto año dela plantación (agosto) se realizaron ob-servaciones semanales sobre todos losindividuos del ensayo para detectar elmomento de inicio de brotación. Ade-más, se marcó el primer brote de tresplantas por repetición y se realizaron dosmediciones con diferencia de trece díassobre estos brotes. Las variables registra-das fueron:

• brotación a los 1367, 1373 y 1385 díasde la siembra (3 años y 9 meses aprox.)

Proc Zona N°de Árboles Latitud Sur Longitud Oeste Altitud Precip[m s.m.] [mm]

1 Fiambalá 7 27°41’ 67°37’ 1350 962 Guandacol 13 29°30’ 68°30’ 1350 963 Talampaya 10 29°45’ 67°59’ 1450 1005 Andalgala 11 27°40’ 66°47’ 1120 3086 Astica 9 30°55’ 67°23’ 700 2507 Belén 10 27°32’ 67°06’ 1370 4118 Villa Unión 9 29°18’ 68°14’ 1350 859 Los Talas 10 28°26’ 67°07’ 1000 8310 Conlara 9 31°57’ 65°15’ 520 63111 Tinogasta 9 28°03’ 67°35’ 1300 16312 Chilecito 10 29°20’ 67°30’ 1000 15013 Las Tucumanesas 10 29°20’ 68°06’ 1460 7115 Chancani 10 31°20’ 65°26’ 460 47916 Soto 8 30°51’ 64°57’ 550 50017 Catamarca 9 28°28’ 65°47’ 546 36018 Patquia 9 30°05’ 66°58’ 431 25019 VillaDolores 14 31°57’ 65°08’ 529 55720 Pama (Chile) 8 31°09’ 71°04’ 650 16121 Río Pama(Ch) 26 31°09’ 71°04’ 900 25022 Pama Alto-Bajo (Ch) 10 31°09’ 71°04’ 650 16223 ca. Mt.Patria (Chile) 25 30°39’ 71°58’ 450 17424 Mt. Patria(Ch) 7 30°42’ 70°57’ 475 15025 Agua Chica (Chile) 14 30°42’ 70°57’ 475 150

Tabla 1. Procedencias, número de árboles y características geográficas, fisiográficas y climáticas de laszonas de cosecha

Table 1. Zones, sampled trees per population, geographic, physiographic and climatic conditions of thezones

60 Carlos Carranza, G. Verzino, J. Di Rienzo, M. Ledesma y J. Joseau

• longitud del primer brote a los 1400 y1413 días de la siembra (3 años y 10meses).

Con el objeto de inferir la velocidadde brotación de las procedencias se elabo-ró un Índice de Brotación (IB), basado enel índice de velocidad de germinación deTimson (1965), de acuerdo a la siguientefórmula

donde: Bi es el porcentaje de brotación

en la observación i-ésima, Pi es el núme-

ro de intervalos transcurridos desde elinicio de las observaciones hasta la ob-servación i-ésima y “k” es el númerototal de observaciones. Se tomó un inter-valo de 10 días y se consideró al 15 deagosto como fecha de inicio de las obser-vaciones. El cálculo del porcentaje debrotación se obtuvo promediando paracada procedencia los porcentajes de las 6parcelas experimentales.

La Tabla 2 resume las fechas de obser-vación de los brotes y los intervalos transcu-rridos desde el inicio de las observaciones.

Análisis estadísticosA efectos de visualizar la distribución delos datos se implementaron tablas y grá-ficos de estadística descriptiva. Para ana-lizar la posible asociación entre el IB y lalongitud, altitud y latitud de las proceden-cias se utilizó análisis de regresión linealmúltiple. Con el objeto de conocer siexistía diferencia entre las procedencias,en términos de longitud del brote prima-veral, se aplicó análisis de la varianza.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

En la Tabla 3 se pueden observar losvalores de Índice de Brotación (IB) yerrores estándar (SE) calculados para cadaprocedencia; mientras que la Figura 2describe la posición de los IB, ordenadospor procedencia y en relación a su valorpromedio. Es interesante notar que todaslas procedencias transandinas tuvieroníndices de brotación por encima de lamedia (procedencias 20 a 25).

Tabla 2. Fechas de observación de los brotes, díastranscurridos desde la siembra e inter-valos correspondientes

Table 2. Observation dates, days from seedingand intervals from beginning of the trial

Fecha de Días desde Intervalosobservación la siembra transcurridos

desde inicio delas observaciones

15 de agosto (inicio) 1.353 030 de agosto 1.367 1,45 de setiembre 1.373 2,017 de setiembre 1.385 3,1

Tabla 3. Índice de Brotación y error estándar para23 procedencias de Prosopis chilensis

Table 3. Bud break Index and standard error for23 provenances of Prosopis chilensis

PROC IB SE PROC IB SE

1 67.02 8.84 15 41.64 6.372 33.01 6.40 16 22.10 5.463 35.31 6.52 17 26.13 5.445 54.87 7.17 18 63.26 8.096 31.73 6.23 19 23.77 5.717 46.66 6.81 20 48.50 7.548 30.93 5.59 21 52.18 7.629 65.11 8.17 22 64.28 8.7810 23.76 5.18 23 52.15 8.1711 61.56 7.73 24 73.35 9.5812 24.10 5.35 25 73.32 9.1913 29.65 6.05

Para abreviaturas ver texto

61MULTEQUINA 9: 55-64, 2000

La Tabla 4 presenta la estadística descrip-tiva de las variables Longitud del brote enfecha I (1400 días desde la siembra) yLongitud del brote en fecha II (1413 díasdesde la siembra). El análisis de la varianzaaplicado a ambas variables no mostródiferencias significativas (p≤0.05) entrelas procedencias, lo que puede ser atribui-do a una excesiva variabilidad intra-poblacional, cuya ocurrencia ya fue de-tectada en anteriores estudios sobre estaespecie (Verga, 1995; Verzino et al., 1995,1998).

Si bien los ANOVA de las variablesLongitud del brote en fecha I y Longituddel brote en fecha II no arrojaron diferen-cias entre las procedencias, el análisis deregresión lineal múltiple permitió detec-tar una relación altamente significativa(p£0.010), aunque de signo contrario,entre la velocidad de brotación, expresa-da a través del índice de brotación (IB), ylas variables geográficas (latitud y longi-

tud), y significativa (p£0.05) entre la ve-locidad de brotación (IB) y la altitud delas procedencias (Tabla 5). Así, las proce-dencias más occidentales, de localidadesubicadas más al norte y a menor altura,brotarían más tempranamente.

El marcado efecto de la longitud sedebería principalmente a la presencia delas procedencias de origen chileno. Elefecto de latitud y altitud podría estarrelacionado con una estrategia adaptativapara evitar el daño de heladas tardías.

Cabe acotar que existe correlaciónentre latitud y altitud, derivada de la es-tructura del muestreo, ya que coin-cidentemente, en este ensayo, las proce-dencias de baja latitud provienen, entérminos generales, de las zonas con ma-yor altitud, mientras que las procedenciasde alta latitud provienen de las zonas conmenor altitud. En consecuencia, es posi-ble que el alto nivel de significación de la

Figura 2. Representación del índice de brotación con referencia al valor medio (45.41)Figure 2. Distribution of Bud break Index, by provenance, regarding the mean value (45.41)

Índ

ice

de

Bro

taci

ón

62 Carlos Carranza, G. Verzino, J. Di Rienzo, M. Ledesma y J. Joseau

más significativa, ya que tanto latitudcomo altitud ejercen una importante in-fluencia sobre el Índice de Brotación.

Los resultados de este trabajo corrobo-ran anteriores presentaciones de los auto-res (Verzino et al., 1998) quienes descri-bieron para P. chilensis de 505 días unarelación directa entre longitud y suscepti-bilidad a heladas, e inversa entre esta últi-ma variable y la latitud y altitud de lasprocedencias. El nivel de determinación,R2=0,539, es importante ya que el modeloexplicaría más del 50% de la variabilidadtotal. Un nivel de determinación inferior(R2=0,39) fue enunciado por Rehfeldt(1991) quien incluyó altitud, longitud ylatitud en modelos predictivos del creci-miento de Pinus ponderosa var. ponderosa.

CONCLUSIONES

Los resultados del presente trabajo con-firman la presencia de un patrón de varia-ción adaptativa de la especie en funciónde la longitud, la latitud y, en menormedida, la altitud. Esa diferenciación seve reflejada en su brotación primaveral.En consecuencia, para la transferencia desemillas entre diferentes zonas debieraconsiderarse la fecha probable de heladastardías.

latitud esté enmascarando, en este análi-sis, el efecto de la latitud, cuya significa-ción no aparece tan marcada. En otraspalabras, de haberse considerado ambosfactores por separado, el efecto de lalatitud se hubiera manifestado de forma

Tabla 4. Valores medios y errores estándar paralas dos fechas de medición de creci-miento inicial del brote

Table 4. Mean and standard error for the varia-bles Shoot Length in date I and ShootLength in date II

PROC Long.Fecha I Long.Fecha II

1 12.28 ± 1.76 21.46 ± 1.132 9.83 ± 2.31 21.28 ± 2.813 9.40 ± 1.89 21.22 ± 2.655 14.19 ± 0.79 28.35 ± 1.156 7.30 ± 0.89 16.29 ± 2.437 15.24 ± 1.75 28.89 ± 1.198 10.67 ± 3.88 10.97 ± 4.349 9.06 ± 1.40 18.10 ± 0.8710 11.15 ± 1.03 24.89 ± 1.2911 16.79 ± 2.92 24.75 ± 1.7412 11.30 ± 1.32 19.28 ± 2.7313 8.75 ± 1.65 23.57 ± 1.9315 9.18 ± 0.55 23.63 ± 1.4716 7.47 ± 0.61 17.98 ± 1.1417 7.23 ± 0.85 19.82 ± 1.3018 15.25 ± 1.53 23.86 ± 1.9319 7.06 ± 1.14 18.03 ± 2.0120 9.03 ± 0.72 24.63 ± 2.0121 13.78 ± 1.57 26.25 ± 1.6822 15.36 ± 0.85 28.86 ± 0.9923 11.19 ± 2.22 25.38 ± 2.1524 13.97 ± 0.75 27.56 ± 1.3325 12.74 ± 1.97 26.14 ± 1.65

Tabla 5. Análisis de regresión para índice de brotación en función de altitud, longitud y latitud de laprocedencia

Table 5. Regression analysis where Bud break Index is the dependent variable and latitude, longitude andaltitude of the seed source are the independent variables

Dep Var: IB N: 23 Multiple R: Squared Multiple R: 0.5390Adjusted Squared Multiple R: 0.4663 Standard Error of Estimate: 13.6406

Variable Coefficient Std Error Std Coef T P(2 Tail)

CONSTANT -25.8076 115.7434 0.0000 -0.2230 0.8259 LAT -8.4599 2.7985 -0.6249 -3.0230 0.0070 LONG 5.0639 1.2736 0.6298 3.9769 0.0008 ALT -0.0235 0.0100 -0.6840 -2.3483 0.0298

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AGRADECIMIENTOS

Los autores agradecen al Dr. Dennis Joycepor su valiosa contribución en el diseñodel proyecto, al Prof. Ramón Palacios porla identificación taxonómica de los árbo-les muestreados y a la Secretaría de Cien-cia y Técnica y la Facultad de CienciasAgropecuarias de la Universidad Nacio-nal de Córdoba, al INTA y a CAFPTA porel apoyo económico brindado.

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64 Carlos Carranza, G. Verzino, J. Di Rienzo, M. Ledesma y J. Joseau

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Recibido: 5/2000Aceptado: 11/2000