AISLAMIENTO DE Enterobacter aerogenes A PARTIR DE UNA MUESTRA DE QUESO

ISOLATION GIVES Enterobacter aerogenes FROM A SAMPLE OF CHEESE

Over Cavadia Angel1, Elizabeht Luna Llorente1, Maria Carolina Ramos Salgado1

RESUMEN

Enterobacter es un género de bacterias Gram negativas facultativamente anaeróbicas de la familia de las Enterobacteriaceae. Muchas de estas bacterias son patógenas y causa de infección oportunista en huéspedes comprometidos, generalmente hospitalizados. Causa preferentemente infección del tracto urinario y del tracto respiratorio. Esta investigación fue realizada con el objetivo de realizar el aislamiento de Enterobacter aerogenes en una muestra de 10g de queso en 90ml de agua de peptona y posterior incubación durante 24 h a 37°C. Se empleó para el aislamiento Medio EMB, Medio McConkey, TSI, KIA, Indol, Voges Proskauer, Motilidad y H2S.

Palabras claves: Enterobacter aerogenes, aislamiento, queso.

ABSTRACT

Enterobacter is a genre of facultatively anaerobic Gram-negative bacteria of the family Enterobacteriaceae. Many of these bacteria are pathogenic and cause opportunistic infection in hosts compromised, usually hospitalized. Preferably cause urinary tract infection and respiratory tract. This research was conducted with the aim of making the isolation of Enterobacter aerogenes in a sample of 10g of cheese in 90ml peptone water and subsequent incubation for 24 h at 37 ° C. Was used for insulation Middle EMB, Middle McConkey, TSI, KIA, Indol, Voges Proskauer, Motility and H2S.

Keywords: Enterobacter aerogenes, isolation, cheese.

INTRODUCCIÓN

Es un miembro de la familia Enterobacteriaceae, la Enterobacter aerogenes es un bacilo Gram negativo (esta bacteria no puede retener un tinte violeta cristalino durante el proceso de tinción Gram. Las bacterias Gram (--) aparecen rosadas o rojas bajo el microscopio). La Enterobacter aerogenes es un bacilo, por lo tanto, bajo el microscopio, luce como un bastón derecho. Como anaerobio facultativo, prefiere los ambientes con poco o nada de oxígeno, tales como las heces, las plantas de desecho y el suelo. Sin embargo, también puede sobrevivir e incluso crecer donde el oxígeno es abundante. En una caja de Petri, la Enterobacter aerogenes forma colonias blancas y redondas que se curvan de forma convexa. El rango óptimo de temperatura de cultivo está entre (30 – 37) °C, y el agar utilizado para sembrar este

microorganismo es el agar MacConkey, el cual contiene sales, tintes, y nutrientes de la leche, este medio es selectivo ya que inhibe Gram (+). Aunque también sean mencionados cultivos en la literatura de este microorganismo en el agar EMB, ya que este medio esta químicamente definido, puesto que es un medio sintético.

Una característica particular de la Enterobacter aerogenes es que es un microorganismo móvil, esto gracias a la presencia de flajelos, los cuales les permite realizar dichos movimientos. Por otra parte la literatura indica que es la Enterobacter aerogenes es un microorganismo patógeno lo que indica que hay presencia de cápsula en él.

1 Estudiante de Ingeniería de Alimentos, IV Semestre, Universidad de Córdoba, Facultad de Ingenierías, Programa de Ingeniería de Alimentos, Berasategui-

Córdoba

MATERIALES

250g de queso, bolsa estéril, balanza analítica, recipiente para macerar, bolsa estéril, 90ml de agua de peptona, pipetas, asas(en punta y redonda), 1 medio McConkey Agar, 1 medio EMB Agar, Mechero, portaobjetos.

Para pruebas bioquímicas: 4 caldos RM-VP, α-naftol al 5%, indicador de rojo de metilo, 2 caldos peptona tripticasa, reactivo de Kovacs, 2 medios SIM, 2 medios TSI, 2 medios KIA, 2 medios LIA.

Para tinciones: Cristal violeta, agua destilada, Lugol, alcohol acetona, safranina de Gram, aceite de inmersión, solución acuosa 1% de cristal violeta, solución acuosa 20% de sulfato de cobre.

METODOLOGÍA

ETAPA N°1: OBTENCIÓN DE LA MATERIA PRIMA

La materia prima fue queso comprado en un local (tienda) ubicada en el corregimiento de Berastegui perteneciente al municipio de Cienega de Oro-Córdoba.

ETAPA N°2: PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

Se tomaron 250g los cuales se cortaron en rodajas finas en tal caso de que cupieran en la bolsa estéril, en la cual duro aproximadamente 3 días para que la flora bacteriana presente en la muestra de alimento (queso) se propagara.

ETAPA N°3: PRE-ENRIQUECIMIENTO DE LA MUESTRA (SELECTIVO)

Se pesaron en balanza analítica 10g de queso, se maceraron y se introdujeron en una bolsa sellable con 90 ml de agua peptonada. Se agito manualmente, luego se llevó a incubar a 37ºC por 24 horas

Fig 1. Pre-enriquecimiento no selectivo (agua peptona y queso macerado)

ETAPA N°4: SIEMBRA EN LOS MEDIOS DE CULTIVO

Se tomaron inóculos del caldo pre-enriquecido (mezcla de agua peptona y queso) con una asa redonda y se sembró por el método francés (con el fin de llevar a cabo el aislamiento) en los medios EMB y McConkey, sometiéndolos a incubación posteriormente a 37°C por 24h.

ETAPA N°5: TINCIONES Y PRUEBAS BIOQUIMICAS

Con los respectivos crecimientos de los microorganismos en los diferentes medios (EMB y McConkey), se realizaron las tinciones correspondientes (Gram y Hiss); luego se realizaron una serie de pruebas bioquímicas he aquí sus principios:

TSI y KIA: Determina la capacidad de la bacteria de atacar un hidrato de carbono especifico, incorporado en un medio de crecimiento básico, con producción o no de gases, junto con la posible formación de H2S.

INDOL: Determina la capacidad que tiene un microorganismo de desdoblar el Indol de la molécula de triptófano (aminoácido), lo cual es logrado por la acción de las enzimas intracelulares denominadas triptofanasas.

MOTILIDAD Y H2S: Se basa en observar la motilidad de un microorganismo, gracias a la baja concentración de agar, lo cual nos indica la presencia de flagelos. Por otro lado se puede determinar si se ha liberado H2S por la

acción enzimático de los aminoácidos que contienen azufre, produciendo una reacción visible de color negro, se usan como indicadores tiosulfato de sodio y sulfato ferroso. Además también se observa en el medio la formación de Indol.

DESCARBOXILASA: Mide la capacidad enzimática de un organismo para descarboxilar un aminoácido para formar una amina, con la consiguiente alcalinidad, también se observa formación de H2S. En este medio (LIA) se evalúa la lisina Descarboxilasa (LD), los microorganismos LD+ transforman la lisina en cadaverina, amina que en medio ácido provoca el viraje del indicador púrpura de bromocresol; los LD- fermentadores de glucosa producirán otro viraje.

VOGES PROSKAUER: Determina la capacidad de algunos microorganismos de obtener un producto final neutro, el acetilmetilcarbinol (acetoina), a partir de la fermentación de la glucosa.

ROJO DE METILO: Comprueba la capacidad de un organismo de producir y mantener estables los productos terminales ácidos de la fermentación de la glucosa, y vencer la capacidad amortiguadora del sistema.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

1) SIEMBRA EN MEDIO EMB Y MEDIO McCONKEY

Fig 2. Crecimiento en Medio EMB

Fig 3. Crecimiento en McConkey

El crecimiento fue evidente en el Medio EMB (fig 2) puesto que crecio con colonias azules, esto según la literatura significa que son fermentadoras de lactosa; en cuanto al medio (fig 3) según la literatura cuando se da crecimiento de colonias transparentes, quiere decir que no son fermentadoras de lactosa cabe aclarar que el crecimiento en el Medio McConkey fue mas escaso que en EMB.

2) TINCIÓN DE GRAM

Fig 4. Coloración de Gram en el Medio EMB (bacteria Gram-negativas)

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Fig 5. Coloración de Gram en el Medio McConkey (bacterias Gram-negativas)

En las respectivas tinciones de Gram a los medios empleados se observo en el Medio EMB (fig 5) presencia de coccos y Streptoccos Gram-negativos. En cuanto al Medio McConkey (fig 6) tambien se observo la misma morfologia de coccos y Streptoccos Gram (--).

3) TINCIÓN DE HISS

Fig 6. Observación microscopica de la tinción de Hiss aplicada al Medio EMB

Fig 7. Observación microscopica de la tinción de Hiss en el Medio McConkey

En las fotografias de las tinciones de Hiss, logramos observar en la fig 7, la observacion en el Medio EMB en la que claramente identificamos que la bacteria se ve de color morado intenso en cuanto a su aro alrededor de ella no se logra identificar en la fotografia; en cuanto a la fig 8, en el Medio McConkey no se observa bacterias ni mucho menos capsulas.

4) PRUEBAS BIOQUIMICAS

TSI

Fig 8. Resultado (A/A) de prueba TSI aplicado al sembrar

en el la colonia extraidad del Medio EMB

Fig 9. Resultado (presencia de H2S) de prueba TSI aplicado a

la colonia sembrada extraida del Medio McConkey

En la fig 9. El resultado de la prueba TSI para EMB fue: fermentación de sacarosa y lactosa en aerobiosis, y fermentacion de glucosa en anaerobiosis. En cuanto a la fig 10. El resultado para McConkey fue: presencia de H2S tanto aerobiosis como en anaerobiosis.

KIA

Fig 10. Resultado (A/A) de prueba KIA aplicado a la colonia

sembrada extraida del Medio EMB

Fig 11. Resultado de la prueba KIA aplicado a la colonia

sembrada extraida del Medio McConkey

En la fig 11 en el Medio EMB el resultado fue: fermentación de la lactosa en aerobiosis y fermentación de la glucosa en anaerobiosis. En cuanto a la fig 12, el resultado en el Medio McConkey fue: producción de H2S junto con fermentación de la lactosa en aerobiosis y fermentación de la glucosa en anaerobiosis.

INDOL

Fig 12. Resultado de Indol para colonia sembrada extraida de

Medio McConkey

El resultado de Indol fue (-) negativo para Medio McConkey, es decir, se torno amarillo por el reactivo. (fig 13)

MOTILIDAD Y H2S

Fig 13. Resultado de la prueba de Motilida y H2S para colonia sembrada, extraida de EMB

El resultado fue (+) positivo para EMB de motilida y H2S puesto que hubo migración de la linea de siembra y ennegrecimiento del medio. (fig 14)

DESCARBOXILASA

Fig 14. Resultado de la prueba de la prueba de descarboxilasa

para colonia sembrada proveniente de EMB

El resultado para la prueba de descarboxilasa fue (-) negativo puesto que el medio se observa del mismo color al inicial. (fig 15)

Fig 15. Resultado de prueba de descarboxilasa aplicada a la

colonia sembrada en el medio LIA extraida del Medio

McConkey

El resultado de la fig 16, es (+) positivo puesto que se observa el medio de un color purpura turbio por lo que si hubo descarboxilación de la lisina.

ROJO DE METILO

Fig 16. Resultado de Rojo de metil de la colonia sembrada del

medio EMB

Fig 17. Resultado de Rojo de metilo a la colonia sembrada extraida del medio McConkey

En las figuras 17 y 18 podemos observar los resultados (+) positivos para Rojo de metilo de los medios empleados.

VOGES PROSKAUER

Fig 18. Resultado de la voges proskauer para EMB

Fig 19. Resultado de voges proskauer para McConkey

Tanto en la fig 19 como en la fig 20 no observamos buenas practicas de pruebas por ende los resultados no seran los que esperamos. Aquí intuimos que el resultado el (-) negativo ya que no hay formacion de anillo rojo pero tampoco tenemos en si el resultado (-) negativo puesto que en el literatura de pruebas (guias) nos dice que el resultado (-) se interprenta cuando hay color amarillo por el reactivo.

Los anteriores resultados los hemos condensados en el siguiente cuandro.

Prueba EMB McConkeyTSI A/A H2

SKIA Alc/A H2S y A/AIndol No Negativo

Motilidad y H2S

Positivo PositivoDescarboxilasa Positivo PositivoRojo de metilo Negativo Negativo

Voges proskauer Negativo Negativo

RESULTADOS EXPERIMENTALES

Cuadro N°1

Prueba ResultadoTSI A/AKIA A/A

Indol NegativoMotilidad y H2S PositivoDescarboxilasa PositivoRojo de metilo Negativo

Voges proskauer Positivo

RESULTADOS TEORICOS

Cuadro N° 2.

CONCLUSIÓN

El objetivo principal de este trabajo no fue realizado de forma exitosa ya que la Enterobacter aerogenes aislada de una muestra de queso obtenida en el corregimiento de Berastegui no creció, esto puede afirmarse puesto que al observarse en el microscopio óptico se no se observaron bacilos Gram (--). También existen pruebas bioquímicas realizadas las cules no fuero consecuentes con la literatura tales pruebas fueron:

RECOMENDACIONES

Mantener el área de trabajo desinfectada para evitar la contaminación de diversos microorganismos que pueden modificar las condiciones de crecimiento del microorganismo que desea aislar.

Se debe utilizar los medios de cultivos adecuados para así poder evidenciar si existe o no crecimiento de la bacterias deseada.

Trabajar cuidadosamente para así evitar riegos de accidentes con dichas bacterias.

Utilizar adecuadamente todos los implementos necesarios (bata blanca, guantes de látex, tapa bocas, cubre cabellos) para la realización practica y así evitar la contaminación de los mismos.

BIBLIOGRAFIA

Allen, Koneman, Procop, Schreckenberger Winn y Woods. Diagnostico microbiológico. Texto y Atlas color. Editorial Medica PANAMERICANA, 6da Ed, pág. 738

García, A. 1998. Manual Microbiología Médica. Facultad de Estudios Superiores “ZARAGOSA”, pág. 33.

Negroni. Microbiología Estomatológica. Fundamentos y guía práct ica. Editorial Médica PANAMERICANA, 2da Ed, Pág. 383.