Stanbio LiquiColor

AlbminaProcedimiento No. 2085

Para la determinacin colorimtrica cuantitativade albmina en suero o plasma

RESUMEN Y PRINCIPIO1,2.

En 1964, el verde de rromocresol (BCG) fue reportado comotil en la determinacin cuantitativa de albmina srica porBartholomew y Delaney1 y por Rodkey2. Esta tcnica de uninfue publicada nuevamente un ao ms tarde por Rodkey3quien describi un procedimiento colorimtrico inverso deBCG especfico para la albmina a un pH de 7.05 y 615 nm.Al mismo tiempo Watson4 reporto que el BCG era ms sensiblepara la albmina que el anaranjado de metilo o el HABA(cido 2-(4'-hidroxiazo benceno)benzoico), dos compuestostambin utilizados en la cuantificacin de albmina srica porunin coloreada (teida).

Posteriormente Dow-Pinto1 y Miyada et al6 reportaron lalinealidad del mtodo de BCG en 5 g/dL, con interferenciasmnimas por lpidos, hemoglobina y bilirrubina, adems deevidencias de una gran especificidad y sensibilidad as comouna excelente correlacin para los valores de albminaentre la tcnica de BCG y la de electroforesis.

El mtodo presentado es esencialmente el de Dumas,Watson y Biggs7,8 modificado por el uso de citrato en lugardel amortiguador de succinato, un amortiguador de bajaconcentracin y una lectura colorimtrica final a 550 nm enlugar de 630 nm9.

REACTIVOSReactivo de Albmina (lquido)

Contiene verde de bromocresol, 18.8 mg/dL en un reguladorde citratos, pH 4.20.05 a 298 K (25C). Tambin contienesurfactantes.

Estndar de Albmina (6.0 g/dL)Solucin acuosa de albmina bovina fraccin V. Contieneazida de sodio como conservador

Precaucin: Unicamente para uso diagnstico in vitro.Preparacin del reactivo: El reactivo y el estndar estn listospara usarse.

ESTABILIDAD Y ALMACENAMIENTO DEL REACTIVOEl reactivo es estable hasta su fecha de caducidad indicadaen la etiqueta cuando se almacena a 2 - 8C. El Estndar esestable nicamente en refrigeracin (2-8C). Llevar el reactivoy el estndar a temperatura ambiente antes de usarse.

MATERIALES REQUERIDOS PERO NO INCLUIDOS- Espectrofotmetro capaz de leer absorbancias a 550 nm.- Cubetas y tubos de ensayo- Pipetas serolgicas o automticas- Cronmetro

RECOLECCIN Y PREPARACIN DE LA MUESTRALa muestra de eleccin es suero removido cuidadosamentedel cogulo,. El plasma puede ser utilizado a partir de sangrerecolectada ya sea con EDTA o heparina como anticoagu-lantes.

Estabilidad de la muestraLa albmina es estable en suero durante una semana atemperatura ambiente, 1 mes a 2-8C e indefinidamentecuando se congela.

Substancias interferentesEl mtodo de BCG se ha reportado libre de interferenciaspara concentraciones bajas de lpidos, hemoglobina, bilirru-bina (20 mg/dL) y salicilatos (60 mg/dL). Evite la hemlisissevera de la muestra. Muestras altamente lipmicas se puedencorregir mediante el uso de un blanco de suero.

PARMETROS DE PRUEBAAnalizador AutomticoLongitud de onda .. 550 nmTipo de reaccin ... Punto finalDireccin de reaccin .. CrecienteTemperatura de reaccin .... 37CRelacin muestra / reactivo . 1:100Tiempo de equilibrio ..... 3 segundosTiempo de lectura . 4 segundosFase Lag.............. .... 30 segundosLmite de absorbancia del blanco . 0.450 AMxima absorbancia .... 2.000 AValor normal bajo .. 3.8 g/dLValor normal alto ... 5.1 g/dLLinearidad ...... 7.0 g/dLpH 4.2 + 1.0Absorbancia inicial < 0.450Estndar 6.0 mg/dL

Los parmetros antes mencionados deben ser empleadosen la programacin de los analizadores automatizados paraalbmina. Consulte el manual del instrumento para lasinstrucciones de programacin.

PROCEDIMIENTO MANUAL1. Pipetear en cubetas los siguientes volmenes (en mL)

y mezcle bien.Reactivo Estndar Muestra

Blanco (RB) (E) (M)Reactivo 1.0 1.0 1.0

Estndar - 0.01 -Muestra - - 0.01

NOTA: Los volmenes pueden ser incrementados aldoble si el instrumento requiere volmenes mayores a1 mL para realizar la medicin.

Fabricado en EUA por:Stanbio Laboratory

1261 North Main StreetBoerne TX; 78006.

Distribuido en Mxico por:Laboratorios Licon S.A.Viveros del Roco No. 33Col. Viveros de la Loma

C.P. 54080 Tlalnepantla, Edo. de MxicoTel.: (55) 5362-0299Fax: (55) 5362-1792

2. Mezcle el contenido de cada cubeta. El color se desarrollainmediatamente.

3. Ajuste a cero el espectrofotmetro a 550 nm con el reactivo.4. Incube todas las cubetas a 37C o temperatura ambiente

por 30 segundos.5. Inmediatamente lea S y U contra RB a 550 nm antes de

15 minutos.

CONTROL DE CALIDADSe recomienda utilizar en cada serie de ensayos un suerocontrol comercial o un pool de sueros previamente analizadoy dividido en alcuotas congeladas.

RESULTADOSCalcule los resultados usando la siguiente ecuacin:

Correlacin: Se realiz un estudio comparativo de los resul-tados derivados de 20 sueros de pacientes (3.2 a 4.3 g/dL)por el mtodo descrito y por el mtodo directo automatizadode Coulter (sin blanco) resultando un coeficiente de correla-cin de 0.9738Linearidad: Este mtodo tal como se describe es lineal de0 a 7 g/dL.

REFERENCIAS1. Bartholomew RJ., Delaney .AM.: Proc. Australian Assoc

clin Biochem, 1:64 , 1964.2. Rodkey FL: Clin. Chem. 10:606, 1964.3. Rodkey FL: Clin. Chem. 11:478, 1965.4. Watson D., In Advances in Clinical Chemistry vol. 8 Ed.

By Sobota H, Stewart CP. Academic Press, New York,1965. P.237 - 282

5. Dow, Pinto PVC: Clin. Chem. 15: 1006, 1969.6. Miyada DS. Et al: Clin Chem. 18:52, 1972.7. Dumas BT, Biggs HG: In Standard Methods of Clinical

Chemistry Vol. 7 Academic Press New York, 1972.8. Dumas BT, Biggs, HG: In Estndar Methods of Clinical

Chemistry. Vol. 7, Academic Press, New York, 1972, p.175.

9. Stanbio Laboratory Data.10. Young DS et al. Clin. Chem. 21:244D, 1975

donde AM y AE son los valores de absorbancia de la muestray del estndar respectivamente y 6.0 es la concentracin delestndar (g/dL).Cuando se requiere de un blanco de muestra (muestra ictricao hemolizada) marque otro tubo con SB. Adicione1.0 mLde solucin salina normal y 0.01 mL de la muestra de suero,mezcle por inversin, transfiera a la cubeta de reaccin y leala absorbancia contra agua destilada a 550 nm. Utilice estevalor para corregir la muestra como sigue:

Albmina en suero o plasma (g/dL) = x 6.0AMAE

Albmina en suero o plasma (g/dL) = x 6.0AM - ASB

AE

NOTA: Las muestras con valores de albmina mayores a7 g/dL deben diluirse 2 veces (1+1) con solucin salinanormal (cloruro de sodio 8.5 g/L). El anlisis se repite y elresultado se multiplica por 2.

VALORES ESPERADOS3,4

Valores normales: 3.8 a 5.1 g/dL

CARACTERSTICAS5Precisin: Se realizaron pruebas por duplicado (21) en cadauno de 6 pools de sueros (rango 3.2 y 4.3 g/dL) durante unperiodo de 17 das mostrando una desviacin estndar (SD)de 0.07 a 0.12 g/dL.