Anorchidie bilatérale et mutations de SF1

Anorchidie bilatérale et mutations de SF1Anorchidie bilatérale et mutations de SF1

Pascal PhilibertPascal Philibert11, Lin Lin, Lin Lin22, Delphine Zenaty, Delphine Zenaty33, Sylvie Soskin, Sylvie Soskin44, Félicien Mbou, Félicien Mbou55

Juliane LégerJuliane Léger33, Françoise Paris, Françoise Paris1,61,6, John Achermann, John Achermann22 and Charles Sultan and Charles Sultan1,61,6

1: Service d'Hormonologie, Hôpital Lapeyronie, CHU Montpellier, France.1: Service d'Hormonologie, Hôpital Lapeyronie, CHU Montpellier, France.2: Institute of Child Health, University College of London, United Kingdom2: Institute of Child Health, University College of London, United Kingdom3: Service d'Endocrinologie Pédiatrique, Hôpital Robert Debré, AP-HP, Paris, France.3: Service d'Endocrinologie Pédiatrique, Hôpital Robert Debré, AP-HP, Paris, France.4: Service de Pédiatrie I, Unité d'Endocrinologie, Hôpitaux Universitaires de Strasbourg, France.4: Service de Pédiatrie I, Unité d'Endocrinologie, Hôpitaux Universitaires de Strasbourg, France.5: Service de Pédiatrie et Néonatalogie, CHG Lamentin, Martinique, France5: Service de Pédiatrie et Néonatalogie, CHG Lamentin, Martinique, France6: Unité d'Endocrinologie Pédiatrique, Hôpital Arnaud de Villeneuve, CHU Montpellier, France.6: Unité d'Endocrinologie Pédiatrique, Hôpital Arnaud de Villeneuve, CHU Montpellier, France.

Séminaire d'Endocrinologie Pédiatrique – Institut Pasteur – 7 et 8 janvier 2007Séminaire d'Endocrinologie Pédiatrique – Institut Pasteur – 7 et 8 janvier 2007PHILIBERT

1 / 20 000 naissances1 / 20 000 naissances

Définition :Définition :

1. Absence bilatérale de tissu testiculaire chez un enfant XY, à 1. Absence bilatérale de tissu testiculaire chez un enfant XY, à phénotype masculin (+/- micropénis) phénotype masculin (+/- micropénis)

2. Testostérone plasmatique 2. Testostérone plasmatique (Base / HCG) (Base / HCG) AMH AMH FSH FSH

3. Absence de visualisation de tissu testiculaire / Coelio, Chirurgie3. Absence de visualisation de tissu testiculaire / Coelio, Chirurgie

Anorchidie bilatéraleAnorchidie bilatérale

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Etiologies : Etiologies :

1. Causes mécaniques : 1. Causes mécaniques : Torsions,Torsions,Occlusions vaculaires,Occlusions vaculaires,TraumatismesTraumatismes

2. Causes exogènes : perturbateurs endocriniens (?)2. Causes exogènes : perturbateurs endocriniens (?)

3. Causes génétiques 3. Causes génétiques


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Facteurs génétiques étudiés :Facteurs génétiques étudiés :

SRY (Lobaccaro et al. 1993) : Pas de mutationSRY (Lobaccaro et al. 1993) : Pas de mutation

LHX9 (Ottolenghi et al. 2001) : Pas de mutationLHX9 (Ottolenghi et al. 2001) : Pas de mutation

INSL3 / LGR8 (Vinci et al. 2004) : Pas de mutationINSL3 / LGR8 (Vinci et al. 2004) : Pas de mutation


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SF1 dans la formation de la gonadeSF1 dans la formation de la gonade

SF1 : Facteur transcriptionnelSF1 : Facteur transcriptionnel

Régule des gènes-clef de la différenciation sexuelle:Régule des gènes-clef de la différenciation sexuelle:

- AMH- AMH

- Enzymes de la stéroidogenèse- Enzymes de la stéroidogenèse

- INSL3 et LGR8- INSL3 et LGR8

SF1 et anorchidie SF1 et anorchidie

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MatérielsMatériels

1. Etude multicentrique : cohorte de 24 anorchidies bilatérales1. Etude multicentrique : cohorte de 24 anorchidies bilatérales(coordonnée par le Pr Juliane Léger, Hôpital R. Debré)(coordonnée par le Pr Juliane Léger, Hôpital R. Debré)

2. Analyse spécifique : 1 patient anorchidie bilatérale + micropénis2. Analyse spécifique : 1 patient anorchidie bilatérale + micropénis (CHU Montpellier) (CHU Montpellier)

3. Analyse spécifique : 1 patient anorchidie bilatérale + micropénis3. Analyse spécifique : 1 patient anorchidie bilatérale + micropénis (CH Lamentin, Dr Mbou) (CH Lamentin, Dr Mbou)

4. Analyse spécifique : 1 patient anorchidie bilatérale + ambiguité sexuelle4. Analyse spécifique : 1 patient anorchidie bilatérale + ambiguité sexuelle (CH Lamentin, Dr Mbou) (CH Lamentin, Dr Mbou)

PHILIBERT



1-1. Identification de mutation1-1. Identification de mutation1-2. Etude fonctionnelle1-2. Etude fonctionnelle1-3. Trafficking de SF1 muté1-3. Trafficking de SF1 muté1-4. Modelisation de la mutation1-4. Modelisation de la mutation1-5. Discussion1-5. Discussion




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Mutation de SF1 et AnorchidieMutation de SF1 et Anorchidie

Etude multicentrique Française : Etude multicentrique Française :

- 24 enfants anorchidies bilatérales - 24 enfants anorchidies bilatérales

- Analyse de SF1- Analyse de SF1

1 mutation hétérozygote du gene SF1.1 mutation hétérozygote du gene SF1.

L VM L 354__ 355__ 356__

C T G G T G C T GA

1 2 3 4 75 6// //// // // //

Ligand-Binding DomainHinge regionA

BoxZinc

fingers

1 461

V355MPhosphorylation

SUMOylation

ATG Stop

Chr 9 q33G A

A

B

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340 350 360 | | |SF1_Human QAGSLLHSLVLRAQELVLQLLALQLDSF1_MacaqueRhesus QAGSLLHSLVLRAQELVLQLLALQLDSF1_Mus QAGSLLHSLVLRAQELVLQLHALQLDSF1_Rattus QAGSLLHSLVLRAQELVLQLHALQLDSF1_Canis QAGSLLHSLVLRAQELVLQLHALQLDSF1_Chicken QAGSILHSLVLRAQELVLHLHSLQVDSF1_Xenope QAGSTLNNLILRAQELVIFLHSLQVDSF1_Danio QAGVTLSGMIQRGQELVQRLQELQLD

Variant non retrouvé sur 60 ADN ContrôlesVariant non retrouvé sur 60 ADN Contrôles

+

MutationMutation

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Etude Etude In VitroIn Vitro

SF1 - V355M montre une SF1 - V355M montre une diminution de 20 à 40% de diminution de 20 à 40% de sa capacité de sa capacité de transactivation transactivation


* * *

*

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(-)

SF1-wt

SF1-V355M

DAPI SF1-GFP

Absence d’anomalie Absence d’anomalie de localisationde localisation


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Représentation 3D de la mutation V355MReprésentation 3D de la mutation V355M

La substitution de la Valine La substitution de la Valine 355 par la Methionine montre 355 par la Methionine montre une gène stérique de ce une gène stérique de ce résidu qui aurait tendance à résidu qui aurait tendance à repousser les deux hélices.repousser les deux hélices.

Deux conséquences possibles :Deux conséquences possibles :- Modification du domaine de liaison au ligand- Modification du domaine de liaison au ligand- Modification des sites de fixation des cofacteurs transcriptionnels- Modification des sites de fixation des cofacteurs transcriptionnels


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1. Présence de la mutation chez le frère jumeau dizygote (Sain)1. Présence de la mutation chez le frère jumeau dizygote (Sain)

2. Présence de la mutation chez la mère à l’état hétérozygote2. Présence de la mutation chez la mère à l’état hétérozygote

Rôle de SF1 sur la fonction ovarienne?Rôle de SF1 sur la fonction ovarienne?

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3. Analyse spécifique : 1 patient anorchidie bilatérale + micropénis3. Analyse spécifique : 1 patient anorchidie bilatérale + micropénis (CH Lamentin) (CH Lamentin)

4. Analyse spécifique : 1 patient anorchidie bilatérale + ambiguité sexuelle4. Analyse spécifique : 1 patient anorchidie bilatérale + ambiguité sexuelle (CH Lamentin) (CH Lamentin)

PHILIBERT

1-2.Observation spécifique1-2.Observation spécifiqueCHU MontpellierCHU Montpellier

Anorchidie bilatérale + micropénisAnorchidie bilatérale + micropénis

ADN: Substitution G146A homozygote : Polymorphisme ou mutation ?ADN: Substitution G146A homozygote : Polymorphisme ou mutation ?

1 2 3 4 75 6// //// // // //

Ligand-Binding DomainHinge regionA

BoxZinc

fingers

1 461

PhosphorylationSUMOylation

ATG Stop

Chr 9 q33g c

A

B

G146A

PHILIBERT

1-2.Observation spécifique1-2.Observation spécifiqueCHU MontpellierCHU Montpellier

G146A : Mutation ou polymorphisme ?G146A : Mutation ou polymorphisme ?

1. Polymorphisme ? : 1. Polymorphisme ? :

Rapporté par Wada et al. (2 études différentes) Rapporté par Wada et al. (2 études différentes) - Cryptorchidie (1 / 2)- Cryptorchidie (1 / 2)- Micropénis- Micropénis

MAIS : + 60 ADN Contrôle : NégatifMAIS : + 60 ADN Contrôle : Négatif

2. Mutation ?2. Mutation ? : :

Etude fonctionnelle :Etude fonctionnelle : 20 % transactivation P450scc / Aromatase (WuQiang 2003)20 % transactivation P450scc / Aromatase (WuQiang 2003)

Etude fonctionnelle (+ Dr Achermann) : En coursEtude fonctionnelle (+ Dr Achermann) : En coursPHILIBERT






PHILIBERT

1-3.Observation spécifique1-3.Observation spécifiqueCH Lamentin – Dr MbouCH Lamentin – Dr Mbou

Anorchidie bilatérale + micropénisAnorchidie bilatérale + micropénis

ADN: Mutant G146A homozygote ADN: Mutant G146A homozygote

Mutation

PHILIBERT





4. Analyse spécifique : 1 patient anorchidie bilatérale + ambiguité sexuelle4. Analyse spécifique : 1 patient anorchidie bilatérale + ambiguité sexuelle (CH Lamentin, Dr Mbou) (CH Lamentin, Dr Mbou) + Testostérone + Testostérone

PHILIBERT

1-4.Observation spécifique1-4.Observation spécifiqueCH Lamentin – Dr MbouCH Lamentin – Dr Mbou

Anorchidie bilatérale + Ambiguité sexuelle sévèreAnorchidie bilatérale + Ambiguité sexuelle sévère- Micropénis- Micropénis- Scrotum bifide- Scrotum bifide-Testo -Testo / HCG / HCG

ADNADN

SF1: G146A HmzSF1: G146A Hmz WT1: IVS9 + 4c>t htz (Frasier)WT1: IVS9 + 4c>t htz (Frasier)Mutation rapportée Mutation rapportée

(Melo et al. JCEM 2002)(Melo et al. JCEM 2002)

Ambiguité sexuelle:Ambiguité sexuelle:- Cryptorchidie- Cryptorchidie- Scrotum bifide- Scrotum bifide- Hypospadias- Hypospadias

Testostérone NormaleTestostérone NormalePHILIBERT

ConclusionsConclusions

1- Mutation SF1 : Cause probable d'anorchidie bilatérale1- Mutation SF1 : Cause probable d'anorchidie bilatérale

2- G146A : 2- G146A : Polymorphisme ?Polymorphisme ?

Mutation à pénétrance ou expressivité variable Mutation à pénétrance ou expressivité variable / Background génétique/ Background génétique/ Environnement/ Environnement

Anorchidie bilatéraleAnorchidie bilatéraleDysgénésie testiculaireDysgénésie testiculaire

Réversion sexuelleRéversion sexuelleAmbiguité sexuelleAmbiguité sexuelle+/- sévère+/- sévère

SF1SF1Détermination / MaintenanceDétermination / Maintenance

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Anorchidie bilatérale et mutations de SF1