APLICACIONES DIAGNÓSTICAS

DE LA MICROSCOPÍA

ELECTRÓNICA EN PATOLOGÍA XXVI Congreso Nacional de la SEAP-IAP

XXI Congreso Nacional de la SEC

II Congreso Nacional de la SEPAF

22-24 mayo 2013

Dra Nuria Juanpere

Servicio de Patología

Hospital del Mar, Barcelona

INTRODUCCIÓN

• Ruska y cols. Alemania, 1931-1933

• Comercialización Siemens, 1939

• Aplicación en Ciencias Biológicas y

Médicas, 1950-60

• Gran impacto sobre nuestro conocimiento

de la Biología y la Medicina

INTRODUCCIÓN

• Poder de resolución:

• Distancia más pequeña a la que pueden encontrarse

dos partículas para ser observadas como diferentes

• x1000 respecto al microscopio óptico

0,2 mm 0,2 m 0,2 nm

INTRODUCCIÓN

• Biología celular e investigación

• Herramienta diagnóstica

– Profundiza en el conocimiento aportado por la MO

– Sustrato ultraestructural de la morfología óptica

– Información adicional / mayor precisión en el diagnóstico

– ~ 3% de las biopsias

LIMITACIONES ME

• Infraestructura más compleja

• Entrenamiento más específico

• No sustituye a la MO:

– MO: mayor perspectiva del contexto lesión

– Identificación estructuras benignas y malignas

– Información MO es necesaria para el Dx ME

• ME: técnica complementaria

VENTAJAS ME

• Detecta estructuras muy pequeñas

dentro de las células (organelas) o en la

matriz extracelular

• Estructuras escasas, pero dispersas en el

tejido

• Estructuras específicas de una

enfermedad

VENTAJAS ME

• ME: Identifica estructuras

– Indetectables mediante IHQ • Anomalías estructurales

– Sin técnicas IHQ específicas

– Antígeno muy escaso

• IHQ: varios Ac para visualizar varias estructuras

• IHQ: muchos anticuerpos son relativamente inespecíficos

INDICACIONES ME

• Enfermedades no neoplásicas – Renales

– Ciliares

– Neuromusculares

– Metabólicas

– Infecciosas

– Cutáneas

– Hematológicas

• Enfermedades neoplásicas

ENFERMEDADES RENALES

• Definición patología glomérulo

• MO, IF, ME: protocolo integrado Bx renal

– MO: morfología en conjunto

– IF: composición / localización depósitos inmunes

– ME: Esencial para el Dx: 11-25%

Confirma el Dx

Datos adicionales

a los de IHQ / IF

36%-75%

Nefron.png

CORPÚSCULO RENAL

LC

EV

End

EU

MB MB

Ms

End

LC

EV Ms

Alteraciones del epitelio visceral

(podocitos)

• Nefropatía de cambios mínimos

• MO: glomérulo aparentemente normal

• IF: negativa

• ME: borramiento de los procesos

podocitarios o pedicelos

ENFERMEDADES RENALES

PODOCITOS

NEFROPATÍA DE CAMBIOS MÍNIMOS

Alteraciones de la membrana basal

glomerular

• Síndrome de Alport

• Enfermedad de la membrana basal fina o

hematuria familiar benigna

ENFERMEDADES RENALES

SÍNDROME DE ALPORT HEMATURIA FAMILIAR

Enfermedades con depósitos inmunes

subepiteliales

• Glomerulonefritis membranosa

• Primaria: autoAc circulantes contra una

proteína podocitaria que activan la vía del

complemento y dañan a los podocitos

• Secundaria: infecciones, neoplasias,

enfermedades autoinmunes, fármacos

ENFERMEDADES RENALES

GN MEMBRANOSA – FASE I (temprana)

GN MEMBRANOSA – FASE II (establecida)

Enfermedades con depósitos inmunes

subepiteliales

• Glomerulonefritis aguda postinfecciosa

(GN proliferativa endocapilar)

• Jorobas (“humps”), infiltrado inflamatorio

endocapilar (macrófagos, PMN), y

ocasionalmente semilunas

• Nefritis lúpica

ENFERMEDADES RENALES

GN PROLIFERATIVA ENDOCAPILAR

NEFRITIS LÚPICA

Enfermedades con depósitos inmunes

subendoteliales

• GN mesangiocapilar

(membranoproliferativa) tipo I

• Crioglobulinemia

• Nefropatía lúpica

• Enfermedad de depósitos densos

(GNMC tipo II)

ENFERMEDADES RENALES

CRIOGLOBULINEMIA

NEFRITIS LÚPICA

GN CON DEPÓSITOS DENSOS

Enfermedades con depósitos

mesangiales

• Nefropatía IgA (enfermedad de Berger)

• GN más frecuente

• Depósito mesangial de complejos inmunes IgA1 +

autoanticuerpo

• GN mesangiocapilar (membranoproliferativa)

tipo I

ENFERMEDADES RENALES

NEFROPATÍA IgA

GN MESANGIOCAPILAR

Enfermedades con depósitos

organizados

• Amiloidosis

• Primaria y asociada a MM (amiloide AL y AH)

• Secundaria o reactiva (amiloide AA)

• Fibrillas no ramificadas de 7-12 nm Ø

• GN fibrilar

• GN inmunotactoide

ENFERMEDADES RENALES

AMILOIDOSIS

CILIOS: especializaciones de la superficie apical de las células epiteliales

• Epitelio bronquial:

– Limpian vías aéreas de moco, microorganismos y partículas

• Epitelio tubárico:

– Propulsan al óvulo hacia la cavidad uterina

ENFERMEDADES CILIARES

MOTILIDAD CILIAR:

9 pares de túbulos periféricos y 1 par central, unidos por proteínas (brazos de dineína)

ENFERMEDADES CILIARES

DISCINESIA CILIAR:

• Pérdida total/parcial de la motilidad ciliar – Congénita (Síndrome de Kartagener):

• Infecciones respiratorias, neumonías de repetición, esterilidad, alteraciones en la posición del corazón

– Secundaria: tabaco, contaminación, infecciones repetidas

• ME: pérdida de componentes del cilio en distintas proporciones

– Único método para el estudio morfológico de los cilios

– DxD entre alteraciones congénitas o secundarias

ENFERMEDADES CILIARES

ENFERMEDADES MUSCULARES

• Músculo: completar estudios de MO e HQ

• Miopatías:

– Inclusiones: nucleares, citoplasmáticas,

mitocondriales

– Acúmulo de proteínas filamentosas

– Alteraciones de la sarcómera

FIBRA MUSCULAR

CRISTALES MITOCONDRIALES

ENFERMEDADES METABÓLICAS

ENFERMEDADES LISOSOMALES:

• Defectos enzimáticos congénitos

• Acumulo anómalo de productos en lisosomas

• ME:

– Inclusiones típicas (Gaucher, Fabry, enfermedad de celulas I)

– Inclusiones inespecíficas (estudio BQ posterior)

INCLUSIONES LIPÍDICAS – ENF. DE FABRY-

FABRY CUERPOS ZEBRA

ENFERMEDADES INFECCIOSAS

• Dx de patógenos no identificables con

métodos tradicionales: – Microorganismos no cultivables

– El tejido disponible no puede ser cultivado (formol)

• Identificación de microorganismos

aunque sean muy escasos

• Distinción de artefactos

ENFERMEDADES INFECCIOSAS

• Técnica polivalente

– detección de distintos microorganismos en

una sola determinación

• Visión más amplia: – No es necesaria una sospecha específica

– Identificación de microorganismos en muestras mal preservadas

– Relación del microorganismo con las células y tejidos del huésped

• Técnica de screening

ENFERMEDADES INFECCIOSAS

• Virología: principal aplicación

práctica de la ME en el estudio

de las EI

– Visualizar partes del virus

– Infección productiva

– Distinción de especies

47

Virus Inmunodeficiencia Humana

ENFERMEDADES INFECCIOSAS

Bacterias

• Enfermedad de Whipple

• Angiomatosis bacilar

• Espiroquetosis intestinal

49 Tropheryma whippleii

50

Bartonella henselae

GIEM

WS

ENFERMEDADES INFECCIOSAS

Protozoos

• Criptosporidiosis

• Toxoplasmosis

• Leishmaniasis

52

Cryptosporidium sp.

Ooquiste de Cryptosporidium

Cápsula

Gránulos

mucina

N

Microvellosidade

s intestinales

C

Trofozoíto

Toxoplasma gondii

Bradizoítos

Quiste

GIEM

ENFERMEDADES INFECCIOSAS

Hongos

• Histoplasmosis

• Pneumocistosis

• Microsporidiosis

55

Histoplasma capsulatum

PASD

GROC

Artefacto

de

retracción

Núcleo

Núcleo

Citoplasma

Pared

celular

56

Pneumocystis jiroveci

Pared

celular

esporangios*

*

*

*

GROC

PAP

*

ENFERMEDADES NEOPLÁSICAS

• Diferenciación: células tumorales

intentan reproducir la morfología

normal de las células del tejido del

que provienen

• ME: clasifica los tumores en función

del tipo de diferenciación

ENFERMEDADES NEOPLÁSICAS

• Está indicada la ME cuando en la IHQ:

– No se obtiene más información

– Se obtienen resultados contradictorios

– La batería de Ac es demasiado amplia

– Sólo un Ac es positivo

– Todos los Ac son negativos

– Como control de calidad

ADC. INTESTINAL MESOTELIOMA

ADENOCARCINOMA

CA. LOBULILLAR

DESMOSOMA

MITOCONDRIAS

CARCINOMA ESCAMOSO

CA. ACINAR

NEUROBLASTOMA

CARCINOMA RENAL

RABDOMIOSARCOMA

MELANOSOMA

CUERPO DE WEIBEL PALADE

¡Muchas gracias!