Apuntes-III-Parcial-Micologia-y-Virología

5/17/2018 Apuntes-III-Parcial-Micologia-y-Virolog a - slidepdf.com

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HONGOS CONTAMINANTES COMUNES . Ruby N. Gutiérrez 5.1

- Medios de Sabouraud y Mycosel- El agar Mycosel contiene cicloheximida y cloranfenicol (antibióticos) que inhiben el crecimiento de casi

todas las especies saprofitas de hongos, mientras que el agar Littman contiene estreptomicina y que impideque se rieguen las colonias de las especies saprófitas.

- Dematiáceos: se pueden obtener abriendo los platos de medios de cultivo, la semana anterior a la práctica por15 minutos, exponiéndolos al ambiente y luego incubándolos a temperatura ambiente.- Colonias = contaminantes que pudieran esperarse de un exudado, o cualquier lesión que estuviera en

contacto con el aire.- Algunas colonias son de color gris o negro-verdoso. Estas representan la familia Dermatiaceae y suelen

constituir alrededor del 50%, o más de los hongos transmitidos por el aire. Las colonias de levaduras que sonblandas y pastosas no deben ser numerosas.

- Colonias con tinte color verde = Aspergillus o Penicillium. - Características:

o Carencia de clorofila. Se alimentan de materia orgánica = Quimioorganótrofos (Heterótrofos)o Eucariotaso Pared celular rígida de polisacáridos, polipéptidos y quitinao Absorben nutrientes mediante enzimas extracelulareso Levaduras estructuras unicelulares que se reproducen por gemacióno Presentan talo o micelio, constituidos por hifas (unidad básica)o Talo o micelio

Vegetativo (desarrollo, nutrición y fijación) Reproductor (se forman los órganos de reproducción) hifas, levaduras y pseudohifas

o Levaduras: talo disociado produce colonias de crec rápido, suave, aspecto similar a bacterias.o Mohos: talo filamentoso aéreo entremezclado más o menos largo o agrupado de manera compacta,

de crecimiento lento salvo en los hongos oportunistas.o Dimórficos: hongos que tienen una fase parasitaria levaduriforme (37ºC) y una saprofítica micelial

(20-25ºC)

- Espora: forma de reproducción asexual en los hongos- Hifas: filamento que forma el tallo o cuerpo de un hongo- Micelio: conjunto de hifas entrelazadas y ramificadas- Conidias: estructura de reproducción asexual en fase micelial de los hongos. Son esporas producidas por

hifas especializadas (llamadas conidióforos) mediante “estrangulamientos” sucesivos en el punto de unión. - Conidióforo: estructura en los extremos de las hifas vegetativas. Dan origen a las conidias.

Rhizopus

Colonia de rápido crecimiento, de aspecto típicamente algodonoso, de color blanco o blanco ceniza o negruzcodado por los órganos reproductores (hifas).Micelio vegetativo formado por hifas sin septos (cenocíticas) hialinas o ligeramente coloreadas a partir de las

cuales se diferencian los conidióforos (esporangioforos) sobre un rizoide típico que le da una apariencia al hongode los tallos estoloníferos de la “fresa”. Estos esporangioforos terminan en vesículas (esporangiosporas)variadas en forma; coloreadas o hialinas.Especies de amplia distribución, en todos los ambientes; saprófitas en su mayoría.* Mucor es igual a Rhizopus, sólo que el primero no tiene raicillas*



Aspergillus

Colonias de crecimiento rápido y aspecto variable, afelpado, pulverulento o algodonoso, de colores diversos quevan del blanco al amarillo pálido, del ro jo al rojo vinoso o marrón oscuro, de olor característico a “moho”.

Los conidióforos son fácilmente distinguibles del micelio vegetativo, de longitud variable terminando en unavesícula globosa o clavada, rodeada parcial o totalmente, con sus conidias globosas o elipsoidales, hialinas o

coloreadas. Género con especies saprófitas y algunas parásitas.Aspergillus fumigatus (el de mayor virulencia dentro del género) y A. flavus, son las que se encuentranvinculadas con patologías.

Fusarium

Colonias de crecimiento rápido y abundante, generalmente de aspecto algodonoso, de diversos colores que vandel blanco, rosado, salmón o violeta cubriendo toda la superficie del medio.Conidióforos simples o ramificados; solitarios o agrupados formando esporodoquios; conidas apicales simples(microconidias) o septadas (macroconidias) típicas de bordes curvados (falcado o apariencia de media luna),con ápices obtusos o agudos, solitarios o en cadenas; produciendo algunas especies, esporas de resistenciadenominadas clamidosporas, generalmente globosas, intercalares o terminales. Se les encuentra en todos los

ambientes en forma saprófita o parásita.



Penicillium

Descubierto en 1929 por Alexander FlemingSólo una especie es patógena: Penicillium marnefeii.Colonias de crecimiento rápido y abundante, de aspecto variable, afelpado, algodonoso o pulverizado, decolores diversos que van del blanco, azul-verdoso a verde olivo. Con o sin producción de exudado, confiriendo ono color al medio de cultivo, de olor fácilmente reconocible a “moho”. Micelio vegetativo con hifas septadas coloreadas o hialinas; micelio reproductor diferenciado a partir de las hifasvegetativas, formando los conidióforos simples o ramificados simétricos, que dan lugar a las ramas o métulas encuyos extremos se tienen los esterigmas o fiálides, los cuales sostienen a las conididas dispuestas en cadenas.Conidias unicelulares hialinas o coloreadas, globosas y ovoides, de contorno liso o irregular. Géneroampliamente distribuido en todos los ambientes teniendo especies saprófitas y parásitas.



LEVADURAS DE IMPORTANCIA CLÍNICA- Medio agar harina de maíz- Poseen crecimiento similar a las bacterias- Se caracterizan por las blastosporas y artrosporas (se dan cuando las hifas se segmentan en células

rectangulares de paredes gruesas, de donde resultan esporas asexuales)- Hongos superiores poseen hifas y micelios, mientras que las levaduras poseen pseudohifas y pseudomicelios.

Levadura con Azul de Lactofenol Artrosporas

Candida albicans

Pseudohifas Blastosporas = son esporas asexuales simples que se desarrollan por gemación de la célula madre, y su

separación subsecuente del brote. Medio de Sabouraud Clamidospora (TIPICA) = las células de las hifas aumentan de tamaño y se rodean de paredes gruesas.

Estas esporas asexuales son resistentes a condiciones ambientales desfavorables y germinan cuando lascondiciones se hacen más favorables para el crecimiento vegetativo.

Prueba en suero humano = tubo germinativo (UNICA) luego de 2 ó 3 horas en la incubadora

Tinción de Gram Tubos germinales Clamidosporas

Rhodotorula

NARANJA!! API y VITEC = pruebas de azúcares para levaduras

Cryptococcus neoformans

En pulmones Contagio por excretas de palomas y otras aves Cryptococcus gatis eucalipto. No necesariamente en inmunosuprimidos Microorganismo ENCAPSULADO!!

Tinción de Tinta China Tejido infectado



Malassezia furfur Pityriasis versicolor / Tinea versicolor

Tinción con Azul de Algodón

PREGUNTAS

1. Muestras clínicas que podemos procesar para el hallazgo de levaduras:a. LCRb. Sangrec. Esputod. Biopsias

2. Característica de Cryptococcus neoformans : cápsula

3. Pruebas estudiadas para un diagnóstico rápido de Candida albicans : prueba en suero, ya que nospuede dar tubos germinales en 2 horas a una temperatura de 37°C

4. Pruebas bioquímicas para el diagnóstico de levaduras:

a. Azúcaresb. Asimilación de carbohidratos

5. Método comercial para pruebas de asimilación de azúcares: Disco de azúcares

ESTUDIO DE LOS DERMATOFITOS

Los dermatofitos son hongos que afectan solamente los tejidos superficiales queratinizados como la piel,pelo y uñas

Tiña el nombre depende del lugar que este afectando. Es lo mismo que mazamorra o pie de atleta Las colonias de los dermatofitos son algonodosas y poseen color Habitats de donde proceden:

o Antrofílicoso Zoofílicoso Geofílicos

Diagnóstico:o Limpieza con alcohol al 70%o Examen directo

KOH 20% Azul de Algodón

o Cultivo a temperatura ambiente de 2 a 4 semanas Medio de Sabouraud Medio de Mycosel

o Observación Macroscópica = colonias Microscópica = 10x y 40x

Trichophyton rubrum

MICELIO: crecimiento moderado (14 días); de color blanco con difusión del pigmento; aspecto aterciopelado,

algodonoso o granuloso y plano; al reverso de se puede observar la colonia de color rojo.HIFAS: pectinadas y con clamidosporas. Los microconidios son piriformes en forma de lágrima a los lados delfilamento; macroconidios escasos, fusiformes, largos, estrechos, en "punta de lápiz".In vitro perfora pelos y produce pigmento en agar papa y harina de maíz.



Trichophyton mentagrophytes es el agente responsable más frecuente de pie de atleta.MICELIO: de crecimiento moderado (7 a 10 días); de color blanco marfil; de aspecto polvoriento, granuloso,plano y centro acuminado.HIFAS: en raqueta, astas de ciervo, espirales, zarcillos; microconidios abundantes, en racimos y redondos;macroconidios escasos, en cigarro o salchicha, pared delgada y de 1 a 6 lóculos.In vitro perfora pelos, es ureasa (+).

Microsporum canis no suelen afectar las uñas (ni canis ni gypseum)MICELIO: de crecimiento moderado (6 a 10 días); de color blanco amarillento; aspecto velloso, plano, radiado olanoso; al reverso color anaranjado.HIFAS: en raqueta con clamidosporas y cuerpos nodulares; microconidios ocasionales; macroconidios en huso,extremos afilados, pared gruesa y con 6 o más lóculos.

Microsporum gypseum

MICELIO: de crecimiento rápido (6 días); de color café canela; aspecto polvoriente, granuloso y plano.HIFAS: con microconidios ocasionales y macroconidios en huso, paredes delgadas y menos de 6 lóculos.



PREGUNTAS

1. Significado de:

a. Microconidias o microaleurisporas: conidias pequeñas unicelulares. Son estructuras dereproducción asexual en dermatofitos

b. Macroconidias o macroaleurisporas: conidias grandes multicelulares

c. Septas: paredes transversas que se pueden ver en las hifas septadas. 2. Parte del cuerpo atacada por:

a. Microsporum: pelo y piel

b. Trichophyton: pelo, piel y uñas c. Epidermophyton floccosum: piel y uñas

3. Tineas: son dermatofitosis. 4. Ejemplos:

a. Tinea pedis (pie) b. T. unguium (uña) c. T. corporis (piel) d. T. capitis (cabello)

DEMATIACEOS Proceden del ambiente Lesiones = protuberancias que asemejan un coliflor. Examen directo = KOH 20%

Colonias de los dematiáceos

Los cultivos se realizan en medios como Sabouraud simple o con antibióticos; crecen más rápido en agar papa yfructifican mejor en agar harina de maíz; se desarrollan a la temperatura ambiente o a 37ºC.El crecimiento es lento, en 7 a 12 días se observan colonias de superficie vellosa o algodonosa, de color negro oligeramente gris verdoso, verde oscuro o café desde una vista superior e inferior del plato petri o tubo de ensayo.Asemejan color centavo chocolate oscuro (CROMOBLASTOMICOSIS)

Phialophora

Fiálides en forma de florero o botella, son sésiles, de base ancha y cuello estrecho, con collarete terminal en elcual se encuentran las fialosporas, que son ovaladas, hialinas y de pared delgada. Las fialosporas se unen porun material adhesivo y se aglutinan en forma de ramillete.



Cladosporium

Conidióforos cortos y pigmentados, con formación acropétala de conidios (sólo es terminal) y cada conidioproduce al subsecuente por gemación, de manera que forman cadenas.Las cadenas pueden ser cortas, de 3 a 4 esporas y son muy ramificados y con conidios elípticos de tamañoconstante.

PREGUNTAS

1. Estructuras observadas en los hongos dimórficos:

a. Fiálides

b. Fialosporas

c. Macroconidias

d. Conidióforos y conidios

2. Tipos de esporulación

a. Cladospórica

b. Phialophórica

c. Acrotheca

3. Defina:

a. Anamorfo: Hongo de reproducción asexual b. Teleomorfo: Hongo de reproducción sexual c. Holomorfo: Hongo de reproducción sexual y asexual

4. Diagnóstico con muestras de:

a. Aspirados

b. Material de biopsias

c. Raspado de piel 5. Estructura microscópica patognomónica para un hongo dematiáceo en el examen directo de la

muestra clínica: células furnagoides



Hongos dimórficos

Son dimórficos porque poseen dos fases:o Vegetativa (micelios) a temperatura ambienteo Levaduriforme (37°C)

Histoplasma capsulatum

Se encuentra principalmente donde hay guano de murciélago. Descrito primero en Panamá Fase micelial muy infectiva El cultivo se realiza en agar sangre, agar papa, agar con extracto de levadura, sin antibióticos y se

coloca a 25ºC durante 6 a 12 semanas. Las colonias son lisas, blanquecinas o de color rosado al principio, después son vellosas y de color

blanco o café parduzco. Hifas son largas, ramificadas y septadas; a los lados hay microconidias esféricas. Las macroconidias (CARACTERÍSTICO!!) son equinuladas o tuberculadas, redondeadas o piriformes y

nacen en conidióforos tubulares. La conversión a la fase de levadura se logra al sembrar en agar sangre acondicionado de peptona y

cisteína, a pH de 7,4 o en medio de Kurung; se colocan a 37ºC y se tapan los tubos para aumentar latensión de CO2. Al principio aparece pseudomicelio, después la colonia es lisa y se encuentranlevaduras al microscopio con blastosporas de cuello estrecho y un solo núcleo.

Paracoccidioides brasiliensis PANAMA!! El examen directo con KOH o Lugol se realiza en esputo, exudado o triturado de la biopsia. Se observan levaduras esféricas u ovales de doble pared y con gemación múltiple (UNICA LEVADURA

MULTIGEMANTE) Las blastosporas a veces forman cadenas de 4 a 12 esporas adoptando una disposición en "timón de

barco" u "orejas de Mickey Mouse"; también puede observarse en frotis y teñirse con Giemsa o Wright. La colonia micelial muestra filamentos septados y ramificados, hifas en espiral, clamidosporas y

microaleuriosporas no características. En la fase de levadura se encuentran las células multigemantes



Blastomyces dermatitidis Europa, EUA, Asia Para el examen directo se obtiene esputo, lavado bronquial o pus. Se practica con solución salina o

KOH. La fase levaduriforme es igual a la de P. brasiliensis. Se observa una levadura con brote germinativo de base muy ancha; la blastospora generalmente crece

sin separarse de la célula madre y se presentan en pares. Al principio del cultivo llevado a cabo a 25ºC, el micelio se encuentra fragmentado, después aparecen

conidios ovoides o piriformes, laterales o terminales que semejan una "paleta". La colonia a 37ºC es cremosa y plegada, microscópicamente se encuentran levaduras de 8 a 15 um con

blastosporas de base ancha.

Sporotrix schenkii

Dimórfico, pero no sistémico. Afecta al haber pinchanzos de plantas. En el examen directo se pueden encontrar levaduras o cuerpos asteroides en solución salina con 1 gota

de formol 10%; que de manifiesto la levadura rodeada por la Inmunoglobulina del huésped. El crecimiento del cultivo se da entre 3 a 5 días en gelosa de Sabouraud y agar sangre a 25ºC. Al

principio la colonia es cremosa y brillante, después tornan beige, marrón o negra. A 35-37ºC adoptacolor gris o crema.

En su forma micelial, posee hifas delgadas, septadas y ramificadas; la reproducción es por conidiosacrógenos o simpodulosporas que se forman a los lados del filamento y dan la imagen de "duraznos en

floración" o conidióforos en forma de margarita.



Pneumocystis jirovecii no es dimórfico, pero es sistémico No se puede cultivar Tinción de plata (Gimori) Se creía antes como parásito Trofozoítos = esporas Invade pulmones

PREGUNTAS

1. Muestras clínicas para el hallazgo de Histoplasma capsulatum

a. Orinab. Esputoc. Biopsiad. Raspadoe. Lesiones

2. Población más expuesta a infección por Sporothrix schenckii: jardineros3. Medios de cultivo adecuados para trabajar hongos dimórficos:

a. Littmanb. Mycosel

c. BHI4. Características morfológicas de Coccidiodes immitis en ambas fases:

a. Fase micelial = hifas con autoconidias intercaladasb. Fase levaduriforme = cridosporas

5. Diferencias entre P. brasiliensis y B. dermatitides en forma de levadura: P. brasiliensis esmultigemante

6. Cultivo en lámina, definición y valor en el diagnóstico micológico: sirve para identificar dermatiasis.Se puede hacer en agar harina de maíz o agar dextrosa de papa.



VIROLOGIA

Células Vero

Efecto citopático

Ojo de búho por CMV

En infección por CMV se observan células más grandes que las normales, con inclusiones intranuclearesbasofílicas. Dicha inclusión tiene apariencia de un "ojo de búho". El CMV es un virus de ADN, por ello su dañoes a nivel nuclear.

Cuerpos de Negri

Sucede por Rabdovirus. En esta muestra de tejido cerebral se observa la formación de inclusionesintracitoplasmáticas conocidas como "cuerpos de Negri".

Coilocitos



Cuerpo de Cowdry

Dilución del suero del paciente

Se colocan microplatos con cultivo de células, se les añade a cada uno una cantidad constante del virus y luegoel suero del paciente. Si el paciente tiene anticuerpos para el virus se evitará la formación de Placas líticas (seobservan como manchas transparentes en el medio azul). A mayor concentración de suero del paciente, mayorcantidad de anticuerpos y menor formación de Placas líticas.

Dilución de una suspensión viral

En este caso se toma la muestra al paciente, se hace una suspensión del virus de la muestra y luego se hacenvarias diluciones las cuales se añaden a este medio células cultivadas. En este caso, a mayor dilución de lasuspensión viral, menor será la formación de las Placas líticas (las placas líticas son producto del efecto del virussobre las células).

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