Article : Parlati et al. 2002 PNAS 99 : 5424-5427

1. Sur le site des données génomiques de la levure http://www.yeastgenome.org/Rechercher le gène codant pour la syntaxine 5 ‘Sed5’Quel est le phénotype du mutant nul ?

2. Dans l’expérience rapportée sur la figure 1, quels complexes de t-SNARE ont été préparés ? Avec quelles v-SNARE sont ils testés ?

3. Quels sont les deux complexes de SNAREs auxquels Sed5 prend part ?

4. Sur la Fig.2, que désignent GST-Sed5 et Sft1c ?

5. Que prouvent les différents éléments de la Fig.2 ?

6. Quel renseignement supplémentaire apporte la Fig.3 ?

7. Que montre la Fig.5A ?

8. Sur la Fig.5B, pourquoi les complexes de SNAREs sont immunoprécipités à partir de mutants thermosensibles sec18 ? Que prouve cette expérience ?

9. A quoi peuvent servir deux complexes de SNAREs dans l’appareil de Golgi ? Cf Volchuk et al. Mol. Biol. Cell 2004, 15: 1506-18

Sutton et al. 1998 Nature 395: 347-353

Les SNAREs catalysent la fusion membranaire

Assemblage et dissociation du complexe de SNAREs

Parlati et al. 2002 PNAS 99 : 5424-5427

Fig.1

Parlati et al. 2002 PNAS 99 : 5424-5427

Fig.2

Fig.3

Parlati et al. 2002 PNAS 99 : 5424-5427

Fig.5

Sed5Ykt6Gos1Sft1

Sed5Bos1Sec22Bet1

Countercurrent distribution of two distinct SNARE complexes mediatingtransport within the Golgi stackVolchuk et al. Mol. Biol. Cell 2004, 15: 1506-18

syntaxin 5 Sed5mYkt6 Ykt6GOS28 Gos1GS15 Sft1

syntaxin 5 Sed5membrin Bos1ERS24 Sec22rBet1 Bet1

Sft1

Bet1

Sed5Bos1Sec22

Sed5Gos1Ykt6

budding ARF1

budding ARF6

SN

AR

E dissociation

NS

F, S

NA

PS

NA

RE

dis

soci

atio

nN

SF

, S

NA

Ptrans-Golgicis-Golgi

Rab6

Rab1

Fig.4Syntaxin regulation

inactive

active

primed by Sft1p

Article by Karatekin et al. (2010): A fast, single-vesicle fusion assay mimics physiological SNARE requirements. PNAS 107 : 3517–3521 1. Write down the chemical structure of poly(ethylene glycol) (PEG).2. Describe Fig. 1 A-D3. Why is a gaussian fit used in Fig. 1E ?4. Why does the variance of the Gaussian fits, σ2, increase linearly with time after fusion ?5. Explain how the normalized fusion rate is calculated (Fig. 2A).6. What does Fig. 2B prove ?7. Describe Fig 3. A-C. 8. What is the purpose of Fig. 3D ?9. What does Fig. 4 show ?10. According to the authors, why are several SNARE complexes necessary to trigger vesicle-membrane fusion ?11. Explain the logics of the last paragraph of the discussion.