VDx®ASFVqPCR의 검출 한계 및 URL-ASF reference DNA 및

조직 샘플 검사 결과

강보규

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2018 KASV 연례세미나

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VDx®ASFVqPCR의 검출 한계 및

URL-ASF reference DNA 및 조직 샘플 검사 결과

강보규 메디안디노스틱

개요

VDx®ASFVqPCR은 아프리카돼지열병바이러스(ASFV) p72 유전자를 타겟으로 감염 의심 동

물의 시료 및 오염의심 축산물 시료에서 ASFV 존재 여부를 고감도로 검사하는 실시간유전자

증폭 검사시약이다. 본 연구에서는 본 검사시약의 검출한계를 확인하고, ASF EU 표준실험실의

ASF진단기법 validation에 사용하는 URL-ASF reference DNA material과 ASFV감염 돼지의

조직샘플을 검사함으로써 그 민감도를 확인하였다.

임상보고(현장에 대한 상황들 전개)

1) 개요

합성된 ASFV p72 DNA를 10배 단계희석한 것을 표준검사재료로 사용하여 VDx®ASFVqPCR

의 바이러스 핵산 기준 검출한계를 확인하였으며, URL-ASF 표준 핵산샘플과 ASFV. 감염돼지의

다양한 조직샘플을 대상으로 검사하여 민감도 및 특이도를 확인하였다.

2) 재료 및 방법

· Primer & Probe

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VDx®ASFVqPCR의 검출한계 및 URL-ASF reference DNA 및 조직 샘플 검사결과

· 합성 ASFV DNA: 438 bp sized ASFV p72 DNA

· URL-ASF 표준 핵산샘플: 스페인 외 13개 발생국에서 분리된 21개 바이러스의 핵산(유전형 1,

2, 5, 8, 9, 10, 23)

· ASFV감염 돼지의 조직샘플 12개(신장, 폐, 간, 임파절, 혈청) 및 비감염 돼지의 조직샘플 4개(신

장, 폐, 편도, 혈청)

· 시험방법

① PCR cycle

② 검출한계 비교

: 합성 ASFV p72 DNA (107copy/㎕)를 10진 단계희석하여 OIE primer & probe set와

VDx ASFV qPCR primer & probe set로 상기 cycle로 PCR 진행

③ URL-ASF 표준 샘플 및 ASFV 감염(비감염) 돼지 조직샘플 검사

: VDx®ASFVqPCR로 검사 진행

④ 판정기준: Ct-value 40 이하 양성으로 판정

3) 결과

· 검출한계 비교 결과

: OIE 권장 primer & probe set와 VDx®ASFVqPCRprimer&probeset 모두 1 copy/㎕까지

검출하였음.

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· ASFV 유전형 1, 2, 5, 8, 9, 10, 23형 바이러스 유래 표준 핵산 샘플 모두 검출하였음.

· ASFV 감염 돼지의 조직 및 혈청 12개 샘플과 비감염 돼지 조직 및 혈청 4개 샘플에 대한 검사

를 한 결과, 감염 샘플 12개는 모두 양성으로, 비감염 샘플 4개는 모두 음성으로 확인되었음.

검토

- ASFV가 OIE listed disease로 BL3 실험시설이 요구되어 생바이러스가 아닌 합성 DNA로

검출한계를 확인하여 분리된 ASFV 생바이러스에 대한 추가 시험이 필요한데, 다양한 유전형

(특히 1형과 2형)의 바이러스에 대한 시험을 통해 유전형에 관계없이 동일한 수준의 검출 한계

가 확인되는지 추가 연구가 필요함.

- URL-ASF 표준핵산 샘플과 ASFV 감염 돼지 조직 샘플들은 모두 ASF reference

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Genetic diversity of Korean PRRS field viruses in recent five years(2013-2018)

laboratory에서 구입한 불활화 샘플들로써 실제 야외 감염 샘플들에 대한 본 키트의 추가 야

외 확대시험(임상적 민감도, 임상적 특이도)이 필요함.

■ 요약

- VDx®ASFVqPCR에 사용되는 primer & probe set은 OIE에서 권장하는 ASFV real time PCR용

primer.& probe set과 비교하여 동등한 수준의 검출한계를 보였음.

- EU reference laboratory의 ASFV 진단기법 validation용 표준 핵산 샘플 21개와 ASFV OIE

reference lab에서 구입한 ASFV 감염돼지 조직 샘플 12개 모두 양성으로 확인되어 100%의

민감도로 확인됨.

■ 참고문헌

- Description of ASF-URL reference material for validation and internal verification of ASF

diagnostic techniques (2017)

- Fernandez-Pinero et al., Molecular Diagnosis of African Swine Fever by a New Real-Time

PCR Using Universal Probe Library. 2011. Transboundary and Emerging Diseases.

- Smietanka et al., African Swine Fever Epidemic, Poland, 2014-2015, 2016. Emerging

Infectious Diseases.

- Wozniakowski et al., Current status of African swine fever virus in a population of wild

boar in eastern Poland. 2016. Archive Virology.

- FAO Animal Production and Health Manual, African Swine Fever: Detection and

Diagnosis, 2017

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