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Coprocultura, Urinocultura e Cultura de secreções
Prof. Dr. Renato Motta Neto
UNIVERSIDADE FEDERALDO RIO GANDE DO NORTECENTRO DE BIOCIÊNCIAS
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA E PARASITOLOGIA
TÉCNICA DE CULTURA PARA SECREÇÕES
• INTRODUÇÃO:
• O exame bacteriológico de secreções
envolve o exudato amigdaliano, secreções
de orofaringe, conjuntival, nasal, ouvido
médio, escarro e outras provenientes de
lesões abertas ou fechadas; já as lesões
superficiais envolvem furúnculo,
abscessos e feridas cirúrgicas.
CULTURA DE OROFARINGE
• MICROBIOTA:
• Diversificada(Estreptocos alfa-hemolíticos,Beta-hemolíticos nãopertencentes ao Gr. A,Neisserias saprófitas,Estafilococos , difteróides, algumasenterobactérias e bactérias anaerobias, etc..);
• FOCO: Pesquisa de Streptococcus pyogens Gr.A, N.meningitidis (portadores), S.aureus eCorynebacterium diphtheriae (mét. Especiais).
CULTURA DE OROFARINGE
• MÉTODO:
• 1) Coleta do material (não realizar asseio bucal);
• 2) Bacterioscopia;
• 3) Cultura.
COLETA
2 SwabsNo caso de semeioNão imediato,acondiciona-lo em meioPara tranporte
BACTERIOSCOPIA
• PRIMEIRO PASSO:
• Faz-se um esfregaço em lâmina (GRAM);
• Informações importantes:
• Presença de PMN (>25 PMN e < 10 cél);
• Descrição da microbiota (Gram positiva e ou Gram negativa – relatar o predomínio);
• Arranjos celulares.
CULTURA
• Semeio (técnica: em quadrantes);
• MEIOS:
• ASA (cortes com a alça -padrão hemolítico) ;
• Mc. Conkey;
• Ágar sal manitol (melhor isolamento de estafilococos).
ENTENDENDO O GÊNEROESTREPTOCOCOS
• CLASSIFICAÇÃO SEGUNDO LANCEFIELD• Grupo A (beta-hemolíticos):(impetigo,
f.escarlatina,f.reumática e GNDA);• Grupo B (beta-hemolítico):septicemia puerperal,
infecções recém-nascidos, hidrólise do hipurato eCAMP;
• Grupo D(alpha ou beta): enterococos,CAMP (+), bileesculina (+), caldo hiper (+);
• Grupo viridans (Alpha);
• Steptococcus pneumoniae (alpha):pneumonia, otite emeningite, optoquina (sensível), bile (solúvel).
Streptococcus pyogens(Beta-hemolítico Gr. A)
BETA-HEMÓLISE Sensível a Bacitracina
ENTENDENDO O GÊNEROESTAFILOCOCO
• ESPÉCIES INTERESSE MÉDICO:
• Staphylococcus aureus (abcessos, intoxicaçãoalimentar, síndrome do ch. Tóxico);
• Staphylococcus epidermidis (infecções de próteses, encontrado na pele);
• Staphylococcus saprophyticus (infecção tr.urinário)
PROVA DA CATALASE
• INTRODUÇÃO:
• Diferencia as espécies de estafilocos (+), dos estreptococos(- ).
PROVA COAGULASE
• INTRODUÇÃO:
• Diferencia a espécie S.aureus
Fator clumpingCoagulase ligada a célula
Coagulase livre
S. epidermidis x S.saprophyticcus
S.epidermidisSensível -Novobiocina
S.SaprophyticcusResistente -Novobiocina
ESCARRO
• INTRODUÇÃO:
• O exame microbiológico do escarro é realizadona identificação de patógenos que podemestar associados a infecções pulmonaresconsiderando-se que o escarro refletequalquer infecção que possa estar ativa naárvore brônquica e pulmões.
ESCARRO
• MICROBIOTA PATOGENICA:
• Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, staphylococcus aureus, Enterobacteriaceae, bacilos Gram-negativos não fermentadores, Legionella spp, Micoplasma pneumoniae e outros.
ESCARRO
• OBJETIVO:
• 1) Diagnóstico de pneumonias bacterianas;
• 2) Diagnóstico de casos suspeitos de tuberculose.
• MÉTODO:
• Bacterioscopia;
• Cultura.
Diagnóstico das pneumonias bacterianas
• FOCO: Streptococcus pneumoniae
• Método: amostra realizar asseio bucal, escolher a porção mais purulenta do escarro e semear em:
• ASA;
• ÁGAR CHOCOLATE (fastidiosos);
• ÁGAR MAC.CONKEY.
Diagnóstico das pneumonias bacterianas
• BACTERIOSCOPIA: (GRAM)
Amostra adequada: < 10 células epiteliais/campo e > 25 PMN/campo
Amostra inadequada: > 10 células epitelilais/campo e <25 PMN/campo
Streptococcus pneumoniae(Alpha-hemolítico)
SENSÍVEL A OPTOQUINA REAÇÃO DE QUELLUNG POSITIVOSOLÚVEL À BILE
COPROCULTURA
• INTRODUÇÃO:
• As culturas de fezes são largamente utilizadas no diagnóstico de gastroenterites inespecíficas e demais infecções do trato intestinal.
• FOCO:
• Salmonella sp (febre tifóide, febres entéricas...invasividade é seu principal f. Virulência);
COPROCULTURA
• FOCO:
• Shigella sp: menor freqüência (disiteria bacilar);
• E.Coli: enterites (crianças-principal)- tipos: EPEC,ETEC, EIEC e EHEC(útil classificação sorológica-epidemiologia);
• Y. Enterocolitica/C.jejuni: não é pesq na rotina.
COPROCULTURA
• Dose Infectante:
• Shigella – 10-100 UFC/mL
• C.jejuni – 100-1.000 UFC/mL
• Salmonella – 100.000 UFC/mL
• E. Coli – 100.000.000 UFC/mL
COPROCULTURA
• AMOSTRA:
• Obtenção na fase aguda (se possível coletar antes da quimioterapia);
• Remeter ao laboratório (2h);
• Meio transporte : Cary-Blair ou Stuart.
COPROCULTURA
• ISOLAMENTO PRIMÁRIO:
• Ágar MacConkey, EMB:não seletivos entre os G(-) entéricos;
• SS: bom para salmonella, podendo inibir Shigella• XLD:salmonella e shigella• HE: salmonella e shigella• Ágar sulfito de bismuto: seletivo para S.typhi• VB:seletivo para Salmonella spp, não indicativo
para S.typhi e S.paratyphi
COPROCULTURA
Lac (-):incolor; Lac (+): rosaLac(+): laranja Lac (-):incolor c/s
pigmento
ENTENDENDO AS PROVAS BIOQUÍMICAS
ENTENDENDO AS PROVAS BIOQUÍMICAS
Pseudomonas spp
Fenil alanina
Citrato
Uréia
Descarboxilaçãoaa
Vm &Vp
Parafenilenodiamina
URINOCULTURA
• INTRODUÇÃO:
• A urinocultura é um dos exames microbiológicos,no qual é indispensável à quantificação dos MO,para que o resultado tenha valor diagnósticodefinitivo.
• MÉTODO:
• 1)Alça calibrada;
• 2) Cultivo em lâmina (semi-quantitativo);
• 3) Método das diluições (mais exato).
URINOCULTURA
FATOR DILUIÇÃO:1µL:nº col x 1.000UFC/mL10µL:nºcol x 100 UFC/mL
ALÇA CALIBRADA
SEMEIO: CLED; MAC.CONKEY
HEMOCULTURA
• INTRODUÇÃO:
• O sangue é normalmente isento de qualquertipo de MO, e uma vez que bactériaspenetram na corrente circulatória,desenvolve-se necessariamente umabacteremia.
HEMOCULTURA
• AMOSTRA:
• Coletar 2-3 amostras antes do acesso febril (24h);
• Volume: 10mL (ADULTO), 1-5 mL (CRIANÇA);
• MEIO:
• Caldo BHI + SPS (inativa leucócitos).
HEMOCULTURA
• ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO:
• Incubação (35-37C)..INSPEÇÃO DIÁRIA;
• EVIDÊNCIAS DE CRESCIMENTO:
• Turvação do meio;
• Colôniascrescendo na camada de sangue sedimentada;
• Evidência de hemólise;
• Produção de gás.
HEMOCULTURA
• SUBCULTIVOS:
• Realizar após 48 h (frasco inicial);
• A cada 48h (permanecerem negativas);
• Período máximo: 7 dias
AÇÕES AULA PRÁTICA
• Urinocultura
• 1) Semeio com alça calibrada no meio cled
• Coprocultura
• 1) Semeio Mac.Conkey, SS
• Secreções
• 1) Semeio ASA, BHI, Gram