LAPORAN FARMAKOLOGI IIBRINE SHRIMPS LETHALITY TEST
1.1. Tujuan percobaan Tujuan dari percobaan ini adalah untuk
menentukan Median Lethal Concentration (LC50) dari larutan sampel
dengan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) terhadap Larva
Udang (Artemia salina Leach).
1.2. Tinjauan pustakaKanker adalah segolongan penyakit yang
ditandai dengan pembelahan sel yang tidak terkendali dan kemampuan
sel-sel tersebut untuk menyerang jaringan biologis lainnya, baik
dengan pertumbuhan langsung di jaringan yang bersebelahan (invasi)
maupun dengan migrasi sel ke tempat yang jauh (metastasis).
Pertumbuhan yang tidak terkendali tersebut disebabkan oleh
kerusakan DNA dan menyebabkan mutasi di gen vital yang mengontrol
pembelahan sel pada jaringan dan organ.Sel kanker timbul dari sel
tubuh yang normal, tetapi mengalami transformasi atau perubahan
menjadi ganas oleh bahan-bahan yang bersifat karsinogen (agen
penyebab kanker) ataupun karena mutasi spontan. Transformasi
sejumlah gen menjadi gen mutan disebut neoplasma atau tumor.
Neoplasma merupakan jaringan abnormal yang terbentuk akibat
aktivitas proliferasi yang tidak terkontrol (neoplasia). Sel
neoplasma mengalami perubahan morfologi, fungsi, dan siklus
pertumbuhan, yang pada akhirnya menimbulkan disintegrasi dan
hilangnya komunikasi antarsel.Sel kanker mengganggu sel induk
karena menyebabkan desakan akibat pertumbuhan tumor, penghancuran
jaringan tempat tumor berkembang atau bermetastasis, dan gangguan
sistemik lain sebagai akibat sekunder dari pertumbuhan sel kanker.
Agen penyebab kanker disebut karsinogen. Penyebab tunggal untuk
terjadinya kanker hingga saat ini belum diketahui. Namun demikian,
berdasarkan laporan berbagai penelitian dapat diketahui bahwa
karsinogen digolongkan ke dalam 4 golongan yaitu :a. Bahan kimia,
karsinogen bahan kimia melalui metabolisme membentuk gugus
elektrofilik yang kurang muatan elektron, sebagai hasil antara,
yang kemudian dapat berikatan dengan pusat-pusat nukleofilik pada
protein, RNA dan DNA.b. Virus, contohnya adalah pada golongan virus
DNA seperti virus hepatitis B yang menyebabkan kanker hati.c.
Radiasi, terutama radiasi ultraviolet dengan panjang gelombang
290-370 nm berkaitan dengan terjadinya kanker kulit.d. Agen
biologis, antara lain hormon estrogen yang membantu pembentukan
kanker payudara dan kanker rahim.Brine Shimp Lethality Test (BSLT)
merupakan salah satu metode uji toksisitas yang banyak digunakan
dalam penelusuran senyawa bioaktif yang toksik dari bahn alam.
Metode ini menunjukkan aktifasi farmakologis yang luas, tidak
spesifik dan dimanifestasikan sebagai toksisitas senyawa terhadap
larva udang (Artemia Salina Leach).Metode ini dapat dilakukan
dengan cepat, murah, mudah dan cukup reproduksibel sehingga dapat
digunakan sebagai bioassay Guided Isolation yaitu isolasi komponen
kimia berdasarkan aktifitas yang ditunjukkan oleh bioessay
tersebut. Dengan mengetahui aktifitas dari suatu kelompok komponen
kimia (fraksi), dapat dilakukan isolasi senyawa sehingga diperoleh
senyawa tunggal aktif.Toksisitas adalah efek berbahaya dari suatu
bahan obat pada organ target. Uji toksisitas dilakukan untuk
mengetahui tingkat keamanan zat yang akan di uji. Adapun sumber zat
toksik dapat berasal dari bahan alam maupun sintesis. Toksisitas
diukur dengan mengamati kematian pada hewan coba. Kematian hewan
coba dianggap sebagai respon dengan menggunakan kematian sebagai
jawaban toksik adalah titik awal untuk mempelajari
toksisitas..Median Lethal Dosis (LD50)adalah dosis dari sample yang
diuji yang mematikan 50% dari hewan coba, sedangkan Median Lethal
Concentration LC50 adalah konsentrasi sample yang diuji yang dapat
mematikan 50% dari hewan coba.Toksisitas adalah efek berbahaya dari
bahan kimia suatu obat pada organ target, berhubungan dengan kanker
yang merupakan salah satu ancaman utama di bidang kesehatan. Guna
mendukung pencarian obat kanker yang spesifik, saat ini banyak
dilakukan penggalian dari bahan-bahan alam. Sekarang, kita dapat
menggunakan tanaman sebagai obat kanker. Sehingga perlu dilakukan
penelitian-penelitian yang berguna bagi pengembangan dalam
pemanfaatan flora yang ada secara maksimal alam termasuk untuk
pengobatan kanker.Dilakukan penelitian, guna mendukung pencarian
obat kanker yang spesifik, dari bahan-bahan alam. Oleh karena itu,
perlu dilakukan penelitian-penelitian yang berguna bagi
pengembangan dalam pemanfaatan flora yang ada secara maksimal alam
termasuk untuk pengobatan kanker. Dalam mempelajari toksisitas yang
paling awal dilakukan adalah dengan menggunakan kematian dari hewan
percobaan sebagai suatu respon dari pengaruh suatu senyawa yang
diuji. Angka kematian hewan percobaan dihitung sebagai Median
lethal concenration.Metode pengujian BST dengan menggunakan Artemia
salina dianggap memiliki korelasi dengan daya sitotoksik
senyawa-senyawa antikanker, sehingga sering dilakukan untuk
skrining awal pencarian senyawa antikanker. Metode ini memiliki
keuntungan dimana hasil yang diperoleh lebih cepat (24 jam), tidak
mahal, mudah pengerjaannya dari pengujian inilah efek toksik dapat
diketahui atau diukur dari kematian larva karena pengaruh bahan uji
dan hasilnya dapat dipertanggung jawabkan.Kanker bukanlah istilah
yang asing lagi tetapi sering menjadi momok dan sangat menakutkan
bagi masyarakat. Kanker merupakan suatu penyakit yang disebabkan
oleh pertumbuhan sel-sel jaringan tubuh yang tidak normal dan tak
terkontrol. Sel-sel tersebut terbentuk karena terjadinya mutasi gen
sehingga mengalami perubahan baik bentuk,ukuran, maupun fungsi dari
sel tubuh yang asli. Mutasi gen ini dipicu oleh keberadaan suatu
bahan asing yang masuk kedalam tubuh diantaranya zat bahan tambahan
makanan, radioaktif, oksidan, atau karsinogenik yang dihasilkan
oleh tubuh sendiri secara alamiah.Kanker dapat menyerang semua
bagian tubuh. Berdasarkan organ-organ tubuh yang terserang, dikenal
berbagai jenis kanker seperti kanker payudara, kanker mulut rahim,
kanker otak, kanker hati, kanker paru-paru, kanker prostat, kanker
kulit dan kanker usus. Toksikologi adalah pengetahuan tentang efek
racun dari obat terhadap tubuh dan sebetulnya termasuk pula dalam
kelompok farmakodinamika, karena efek terapeutis obat berhubungan
erat dengan efek toksisnya. Pada hakikatnya setiap obat dalam dosis
yang cukup tinggi dapat bekerja sebagai racun dan merusak organisme
(Sola dosis facit venenum: hanya dosis membuat racun,
Paracelsus).Untuk obat yang struktur kimianya belum diketahui dan
untuk sediaan tak murni atau campuran dari beberapa zat aktif ,
metode spektrofotometer ultraviolet/ infrared, dan polarograf tidak
dapat dilakukan. Obat-obat ini diukur dengan metode biologis, yaitu
dengan bio-assay, dimana aktivitas ditentukan oleh organisme hidup
(hewan, kuman) dengan membandingkan efek obat tersebut dengan efek
suatu standar internasional. Bila ditemukan suatu aktivitas
farmakologik yang mungkin bermanfaat, maka senyawa yang lolos
penyaringan ini akan diteliti lebih lanjut.Sebelum calon obat baru
ini dapat dicobakan pada manusia, dibutuhkan waktu beberapa tahun
untuk meneliti sifat farmakodinamik, farmakokinetik, dan efek
toksisnya pada hewan coba. Dalam studi farmakokinetik ini tercakup
juga pengembangan teknik analisis untuk mengukur kadar senyawa
tersebut dan metabolitnya dalam cairan biologik. Semuanya ini
diperlukan untuk memperkirakan dosis efektif dan memperkecil resiko
penelitian pada manusia.Ada beberapa kemungkinan untuk
menggolongkan toksikologi diantaranya :1. Efek toksis akut, yang
langsung berhubungan dengan pengambilan zat toksik.2. Efek toksik
kronik, yang pada umumnya zat dalam jumlah sedikit diterima tubuh
dalam jangka waktu yang lama sehingga akan terakumulasi mencapai
konsentrasi toksik dan dengan demikian menyebabkan terjadinya
gejala keracunan.Setiap zat kimia pada dasarnya bersifat racun dan
terjadinya keracunan ditentukan oleh dosis dan cara pemberian.
Paracelsus pada tahun 1564 telah meletakkan dasar penilaian
toksikologis dengan mengatakan, bahwa dosis menetukan apakah suatu
zat kimia adalah racun (dosis sola facit venenum). Sekarang dikenal
banyak faktor yang menentukan apakah suatu zat kimia bersifat
racun, namun dosis tetap merupakan faktor utama yang terpenting.
Untuk setiap zat kimia, termasuk air, dapat ditentukan dosis kecil
yang tidak berefek sama sekali, atau suatu dosis besar sekali yang
dapat menimbulkan keracunan dan kematian. Untuk zat kimia dengan
efek terapi, maka dosis yang adekuat dapat menimbulkan efek
farmakoterapeutik.Efek toksik, atau toksisitas suatu obat dapat
diidentifikasi melalui pemantauan batas terapeutik obat tersebut
dalam plasma (serum). Tetapi, untuk obat-obat yang mempunyai indeks
terapeutik yang lebar, batas terapeutik jarang diberikan. Untuk
obat-obat yang mempunyai indeks terapeutik sempit, seperti
antibiotika aminoglikosida dan antikonvulsi, batas terapeutik
dipantau dengan ketat. Jika kadar obat melebihi batas terapeutik,
maka efek toksik kemungkinan besar akan terjadi akibat dosis yang
berlebih atau penumpukan obat.Angka kematian hewan coba dihitung
sebagai Median Lethal Dose (LD50) atau Median Lathal Concentration
(LC50). Penggunaan LC50 dimaksudkan untuk pengujian ketoksikan
dengan perlakuan terhadap hewan coba secara inhalasi atau
menggunakan media air. Kematian pada hewan percobaan digunakan
sebagai pedoman untuk memperkirakan dosis kematian pada manusia.
Belakangan ini telah banyak pengujian tentang toksisitas yang
dikembangkan untuk pencarian produk alam yang potensial sebagai
bahan antineoplastik. Metode pengujian tersebut antara lain Simple
Brench-Top Bioassay (terdiri dari Brine Shrimp Lethality Test,
Lemma Minor Bioassay dan Crown-Gall Potato Disc Bioassay) dan
pengujian pada sel telur bulu babi.1.Dengan berdasarkan pada
pemikiran bahwa efek farmakologi adalah toksikologi sederhana pada
dosis yang rendah dan sebagian besar senyawa anti tumor adalah
sitotoksik, maka Brine Shrimp Lethality Test dapat digunakan
sebagai uji pendahuluan senyawa anti tumor. Senyawa yang mempunyai
kemampuan membunuh larva udang diperkirakan juga mempunyai
kemampuan membunuh sel kanker dalam kultur sel. Pengujian ini
adalah pengujian letalitas yang sederhana dan tidak spesifik untuk
aktifitas tumor, tetapi merupakan indicator toksisitas yang baik
dan menunjukkan korelasi yang kuat dengan pengujian antitumor
lainnya seperti uji sitotoksitas dan uji leukemia tikus. Karena
kesederhanaan prosedur pengerjaan, biaya yang rendah serta
korelasinya terhadap pengujian toksisitas dan pengujian antitumor
menjadikan Brine Shimp Lethality Test sebagai uji hayati
pendahuluan untuk aktivitas tumor yang sesuai dan dapat dilakukan
secara rutin di Laboratorium dengan fasilitas sederhana.2.Metode
BST juga digunakan untuk mendeteksi keberadaan senyawa toksik dalam
proses isolasi senyawa dari bahan alam yang berefek sitotoksik
dengan menentukan harga LC50 dari senyawa aktif. Metode BST dapat
digunakan dari berbagai system uji seperti uji pestisida,
mitotoksin, polutan, anastetik, komponen seperti morfin,
karsinogenik, dan ketoksikan dari hewan dan tumbuhan laut serta
senyawa racun dari tumbuhan darat.3.Lemma Minor Bioassay terutama
digunakan sebagai uji pendahuluan terhadap bahan yang dapat
menghambat dan meningkatkan pertumbuhan tanaman. Dengan pengujian
ini dapat diamati bahwa senyawa anti tumor alami juga dapat
menghambat pertumbuhan lemma, walaupun korelasinya dengan pengujian
anti tumor lainnya kurang baik. Oleh karena pengujian ini lebih
diarahkan untuk mencari herbisida dan stimulant pertumbuhan tanaman
baru.4.Crown-Gall Potato Disc Bioassay merupakan metode pengujian
toksisitas yang relatif cepat pengerjaannya, tidak mahal, tidak
memerlukan hewan percobaan serta menunjukkan korelasi yang sangat
baik dengan uji antitumor lainnya.5.Pengujian pembelahan sel telur
bulu babi dilakukan dengan mengamati pengamatan penghambatan
pembelahan sel telur oleh suatu senyawa, diamati secara normal
pembelahan sel telur tersebut terjadi dengan cepat. Keuntungan dari
metode ini adalah pengerjannya yang relative cepat, tidak
memerlukan kultur sel serta peralatan dengan metode khusus. Seperti
sel kanker, embrio Bulu Babi juga mempunyai sensitivitas selektif
terhadap obat sehingga pengujian dengan cara ini menjadi metode
yang layak bagi penentuan bahan yang akan dievaluasi lebih
lanjut.Walaupun semua sel bereproduksi selama embriogenesis, hanya
sel sel tertentu yang terus melakukannya setelah beberapa bulan
kelahiran bayi. Sel sel yang bereproduksi, seperti sel hati, kulit
dan gastrointestinal, menduplikasi secara persis DNA mereka dan
kemudian membelah menjadi dua sel anak. Sele bereproduksi melalui
sebuah proses, yang disebut siklus sel. Sel sel yang tidak
bereproduksi setelah lahir, misalnya sel otot skeletela, tidak
menjalani siklus sel ini. Perjalanan siklus sel ini secara ketat
dikontrol dan dapat dihentikan atau dimulai bergantung pada kondisi
sel dan sinyal yang diterimanya, yang sebagian bahasannya diuraikan
berikut ini. Sel sel yang bereproduksi biasanya melalui siklus sel
dengan kecepatan yang sudah semestinya kecepatannya dapat
ditambahkan atau dikurangi. Sel yang bereproduksi secara lambat,
atau tidak sama sekali, menghabiskan sebagian besar waktu mereka
pada stadium interfase tahap gap (G1 atau G2).Siklus sel dikontrol
oleh konstribusi berbagai gen yang bererspon terhadap tanda
pemadatan sel, cedera jaringan, dan kebutuhan untuk tumbuh. Secara
umum, sel menjalani siklusnya jika distimulasi oleh faktor hormon
dan pertumbuhan yang diekskresi oleh sel sel yang jauh, oleh faktor
pertumbuhan yang diproduksi secara lokal, dan oleh isyarat kimia
yang dilepaskan dari sel sekitarnya, termasuk sitokinin yang
dihasilkan oleh sel imun dan sel radang. Isyarat eksternal ini
bertindak mengikat reseptor spesifik yang ada di membran plasma sel
target. Setelah terikat, kompleks reseptor mengaktifkan sistem
penghantar kedua (Second Massenger system), yang mengirimkan sinyal
pertumbuhan ke inti sel. Ketika sinyal mencapai inti sel. Protein
tertentu yang ada di inti sel, yang disebut faktor transkripsi,
mengaktifkan atau menginaktifkan gen khusus yang pada akhirnya
menghasilkan protein yang mengontrol proliferasi sel. Gen yang
diaktifkan jugan menghasilkan protein yang memberikan umpan balik
terhadap setia tahap sinyal dan stimulasi penghantar untuk
memperkuat untuk meminimalkan efek stimulasi awal. Berikutnya akan
diuraikan isyarat eksternal yang mengontrol pertumbuhan sel dan
menyajikan contoh sistem penghantar kedua yang penting. Akhirnya
akan disajikan dua kategori besar gen yang produksi akhirnya
mengontrol siklus sel, yaitu gen supresor/penekan tumor dan proto
onkogen. Proto onkogen adalah gen yang ditemukan di sel, yang
ketika diaktifkan, merangsang sel untuk menjalani siklus sel untuk
menjalani siklus sel sehingga menghasilkan pertumbuhan dan
proliferasi sel. Gen ini dapat merangsang terjadinya siklus sel
disemua tingkatan, termasuk (1) menghasilkan produksi yang
membentuk reseptor membran untuk mengikat hormon dan bahan kimia
perangsang pertumbuhan, (2) meningkatkan pertumbuhan protein
penghantar kedua, termasuk protein ras, yang mentransfer sinyal
pertumbuhan ke inti sel, dan (3) menghasilkan faktor transkripsi
yang mengaktifkan gen vital yang mendorong pertumbuhan an sel
(mis., keluarga gen myc).
Diferensiasi SelSelama perkembangan, sel normal akan ber
diferensiasi. Diferensiasi sel berarti bahwa suatu sel menjadi
khusus dalam struktur dan fungsinya, dan berkumpul dengan sel
selyang berdiferensiasi serupa. Sebagai contoh, sebagian sel
embrionik ditakdirkan untuk menjadi sel retina, selain yang lain
ditakdirkan untuk menjadi sel kulit atau jantung. Semakin tinggi
diferensiasi sebuah sel, semakin jarang sel tersebut masuk ke
siklus sel untuk bereproduksi, dan membelah. Sel sel saraf, yang
tidak mengalami reproduksi, adalah sel yang berdiferensiasi tinggi.
Sel yang jarang atau tidak pernah mengalami siklus sel tidak
mungkin menjadi sel kanker, sedangkan sel yang sering menjalani
siklus sel lebih mungkin cenderung mengalami kanker. Diferensiasi
tampaknya terjadi akibat supresi selektif gen tertentu pada
beberapa sel, sedangkan pada sel lain, gen yang sama tetap aktif.
Diferensiasi setiap sel dan jaringan tampaknya mempengaruhi
diferensiasi sel dan jaringan disekitarnya. Sel melepaskan faktor
pertumbuhan khusus yang menuntun diferensiasi sel sekitar.
Uraian Tentang Larva Uraian Hewan CobaKlasifikasi Filum :
ArthopodaDivisio : CrustaceaeSubdivisio : BranchiopodaOrdo :
AnostracaFamili : ArtemiidaeGenus : ArtemiaSpecies : Artemia
salina
MorfologiUdang (Artemia salina) mengalami beberapa fase hidup,
tetapi secara jelas dapat dilihat dalam tiga bentuk yang sangat
berlainan, yaitu bentuk telur, larva (nauplii) dan artemia dewasa.
Telur yang baru dipanen dari alam berbentuk bulat dengan ukuran
0,2-0,3 mm. Telur yang menetas akan berubah menjadi larva. Telur
yang baru menetas ini berukuran kurang lebih 300 . Dalam
pertumbuhannya larva mengalami 15 kali perubahan bentuk yang
merupakan satu tingkatan hidup, setelah itu berubah menjadi artemia
dewasa.Waktu yang diperlukan sampai menjadi artemia dewasa umumnya
sekitar 2 minggu. Berbentuk silinder dengan panjang 12-15 mm. Tubuh
terbagi atasl bagian kepala, dada dan perut. Pada bagian kepala
terdapat 2 tangkai mata, 2 antena dan dua antenula. Dada terbagi
atas 12 segmen yang masing-masing mempunyai sepasang kaki renang.
Perut ternagi atas 8 segmen. Dapat hidup dalam air dengan suhu
25o-30oC dan pH sekitar 8-9.
Telur-telur yang kering direndam dalam air laut yang bersuhu
25oC akan menetas dalam waktu 24-36 jam. Dari dalam cangkangnya
keluarlah burayak (larva) yang juga dikenal dengan istilah
nauplius. Dalam perkembangan selanjutnya, burayak akan mengalami 15
kali perubahan bentuk (metamorfosis). Burayak tingkat I dinamakan
instar, tingkat II instar II, tingkat III Instar III, demikian
seterusnya sampai Instar XV. Setelah itu berubahlah mereka menjadi
artemia dewasa.Burayak yang baru saja menetas masih dalam tingkat
Instar I bentuknya bulat lonjong dengan panjang sekitar 400 mikron
(0,4 mm) dan beratnya 15 mikrogram. Warnanya kemerah-merahan karena
masih banyak mengandung makanan cadangan. Oleh karena itu, mereka
masih belum perlu makanan. Anggota badannya terdiri dari sungut
kecil (antenula atau antena I dan sepasang sungut besar (antenna
II). Dibagian depan diantara kedua sungut kecilnya terdapat bintik
merah yang tidak lain adalah mata naupliusnya (oselus). Dibelakang
sungut besar terdapat sepasang mandibula (rahang) dan rudimenter
kecil. Sedangkan dibagian perur (ventral) sebelah depan terdapatlah
labrum.Pada pangkal sungut besar (antena II) terdapat bangunan
seperti duri yang menghadap ke belakang (gnotobasen seta) bangunan
ini merupakan cirri khusus untuk membedakan burayak instar I,
instar II dan instar III. Pada burayak instar I (baru menetas)
gnotobasen setanya masih belum berbulu dan juga belum bercabang.
Sekitar 24 jam setelah menetas, burayak akan berubah menjadi instar
II. Lebih lama lagi akan berubah menjadi instar III.Pada tingkatan
II, gnotobasen setanya sudah berbulu tapi masih belum bercabang.
Sedangkan pada instar III, selain berbulu gnotobasen seta tersebut
sudah bercabang II.Pada tingkatan instar II, burayak mulai
mempunyai mulut, saluran pencernaan dan dubur. Oleh karena itu,
mereka mulai mencari makan, bersamaan dengan itu, cadangan
makanannya juga sudah mulai habis. Pengumpulan makanannya dengan
cara menggerak-gerakkan antena II-nya. Selain itu untuk
mengumpulkan makanan antena II juga berfungsi untuk bergerak. Tubuh
instar II dan instar III sudah lebih panjang dari instarI.Pada
tingkatan selanjutnya, disebelah kanan dan kiri mata nauplius mulai
terbentuk sepasang mata majemuk. Mula-mula masih belum bertangkai.
Kemudian secara berangsur-angsur berubah menjadi bertangkai. Selain
itu, dibagian samping badannya (kanan dan kiri) juga
berangsur-angsur tumbuh tunas kakinya (torakopada). Mula-mula
tumbuh dibagian depan kemudian berturut-turut disusul oleh
bagian-bagian yang lebih ke belakang. Setelah menjadi instar XV,
kakinya sudah lengkap sebanyak 11 pasang, maka berakhirlah masa
burayak, dan berubah menjadi artemia dewasa.Alasan digunakannya
larva udang dalam percobaan ini adalah karena larva udang merupakan
general biossay sehingga semua zat dapat menembus masuk menembus
dinding sel larva tersebut. Biossay adalah suatu pengujian tentang
toksisitas pada suatu produk dalam rangka pencarian produk alam
yang potensial yang biasanya menggunakan makhluk hidup sebagai
sampel.LC50 adalah konsentrasi dari suatu senyawa kimia di udara
atau dalam air yang dapat menyebabkan 50% kematian pada suatu
populasi hewan uji atau makhluk hidup tertentu. Penggunaan LC50
dimaksudkan untuk pengujian ketoksikan dengan perlakuan terhadap
hewan uji secara berkelompok yaitu pada saat hewan uji dipaparkan
suatu bahan kimia melalui udara maka hewan uji tersebut akan
menghirupnya atau percobaan toksisitas dengan media air. Nilai LC50
dapat digunakan untuk menentukan tingkat efek toksik suatu senyawa
sehingga dapat juga untuk memprediksi potensinya sebagai
antikanker.Kanker bukanlah istilah yang asing lagi tetapi sering
menjadi momok dan sangat menakutkan bagi masyarakat. Kanker
merupakan suatu penyakit yang disebabkan oleh pertumbuhan sel-sel
jaringan tubuh yang tidak normal dan tak terkontrol. Sel-sel
tersebut terbentuk karena terjadinya mutasi gen sehingga mengalami
perubahan baik bentuk,ukuran, maupun fungsi dari sel tubuh yang
asli. Mutasi gen ini dipicu oleh keberadaan suatu bahan asing yang
masuk kedalam tubuh diantaranya zat bahan tambahan makanan,
radioaktif, oksidan, atau karsinogenik yang dihasilkan oleh tubuh
sendiri secara alamiah.Kanker dapat menyerang semua bagian tubuh.
Berdasarkan organ-organ tubuh yang terserang, dikenal berbagai
jenis kanker seperti kanker payudara, kanker mulut rahim, kanker
otak, kanker hati, kanker paru-paru, kanker prostat, kanker kulit
dan kanker usus.Toksikologi adalah pengetahuan tentang efek racun
dari obat terhadap tubuh dan sebetulnya termasuk pula dalam
kelompok farmakodinamika, karena efek terapeutis obat berhubungan
erat dengan efek toksisnya. Pada hakikatnya setiap obat dalam dosis
yang cukup tinggi dapat bekerja sebagai racun dan merusak organisme
(Sola dosis facit venenum: hanya dosis membuat racun,
Paracelsus).Untuk obat yang struktur kimianya belum diketahui dan
untuk sediaan tak murni atau campuran dari beberapa zat aktif ,
metode spektrofotometer Untuk obat yang struktur kimianya belum
diketahui dan untuk sediaan tak murni atau campuran dari beberapa
zat aktif , metode spektrofotometer ultraviolet/ infrared, dan
polarograf tidak dapat dilakukan. Obat-obat ini diukur dengan
metode biologis, yaitu dengan bio-assay, dimana aktivitas
ditentukan oleh organisme hidup (hewan, kuman) dengan membandingkan
efek obat tersebut dengan efek suatu standar internasional .Bila
ditemukan suatu aktivitas farmakologik yang mungkin bermanfaat,
maka senyawa yang lolos penyaringan ini akan diteliti lebih lanjut
Sebelum calon obat baru ini dapat dicobakan pada manusia,
dibutuhkan waktu beberapa tahun untuk meneliti sifat
farmakodinamik, farmakokinetik, dan efek toksisnya pada hewan coba.
Dalam studi farmakokinetik ini tercakup juga pengembangan teknik
analisis untuk mengukur kadar senyawa tersebut dan metabolitnya
dalam cairan biologik. Semuanya ini diperlukan untuk memperkirakan
dosis efektif dan memperkecil resiko penelitian pada manusia Ada
beberapa kemungkinan untuk menggolongkan toksikologi diantaranya:1.
Efek toksis akut, yang langsung berhubungan dengan pengambilan zat
toksik.2. Efek toksik kronik, yang pada umumnya zat dalam jumlah
sedikit diterima tubuh dalam jangka waktu yang lama sehingga akan
terakumulasi mencapai konsentrasi toksik dan dengan demikian
menyebabkan terjadinya gejala keracunan.Setiap zat kimia pada
dasarnya bersifat racun dan terjadinya keracunan ditentukan oleh
dosis dan cara pemberian. Paracelsus pada tahun 1564 telah
meletakkan dasar penilaian toksikologis dengan mengatakan, bahwa
dosis menetukan apakah suatu zat kimia adalah racun (dosis sola
facit venenum). Sekarang dikenal banyak faktor yang menentukan
apakah suatu zat kimia bersifat racun, namun dosis tetap merupakan
faktor utama yang terpenting. Untuk setiap zat kimia, termasuk air,
dapat ditentukan dosis kecil yang tidak berefek sama sekali, atau
suatu dosis besar sekali yang dapat menimbulkan keracunan dan
kematian. Untuk zat kimia dengan efek terapi, maka dosis yang
adekuat dapat menimbulkan efek farmakoterapeutik.Efek toksik, atau
toksisitas suatu obat dapat diidentifikasi melalui pemantauan batas
terapeutik obat tersebut dalam plasma (serum). Tetapi, untuk
obat-obat yang mempunyai indeks terapeutik yang lebar, batas
terapeutik jarang diberikan. Untuk obat-obat yang mempunyai indeks
terapeutik sempit, seperti antibiotika aminoglikosida dan
antikonvulsi, batas terapeutik dipantau dengan ketat. Jika kadar
obat melebihi batas terapeutik, maka efek toksik kemungkinan besar
akan terjadi akibat dosis yang berlebih atau penumpukan obat.Sampai
detik ini penyakit kanker menjadi ancaman kehidupan manusia di
dunia, sedangkan obat spesifik untuk menghentikan perkembangan sel
kanker belum juga ditemukan. Penyakit kanker merupakan penyakit
ke-2 terbesar di dunia setelah penyakit jantung yang menyebabkan
kematian, sedangkan di Indonesia pada urutan ke-6. Kanker termasuk
penyakit yang sangat ditakuti karena sulit disembuhkan, bahkan
tidak jarang menyebabkan kematian. Secara sederhana, kanker berarti
pertumbuhan sel-sel tubuh yang tidak terkendali atau abnormal.
Hingga kini penyebab pertumbuhan sel tubuh yang abnormal itu tidak
diketahui secara pasti. Jika menyerang suatu organ tubuh, sel
kanker akan berkembang biak dan merusak sel-sel tubuh yang normal
dengan sangat cepat.Penggunaan obat tradisional atau obat asli
Indonesia mengalami peningkatan, baik untuk pemeliharaan kesehatan
maupun untuk pengobatan gangguan kesehatan. Tumbuhan yang dipakai
sebagai obat tradisional mempunyai aktivitas biologis karena
mengandung berbagai senyawa kimia yang dapat mempengaruhi sel-sel
hidup suatu organisme. Salah satu tanaman yang dijadikan obat
tradisional yaitu mengkudu. Manfaat mengkudu untuk terapi adalah
sebagai anti kanker, antibakteri, antihipertensi dan sebagai
antioksidan.Prinsip suatu tanaman dapat digunakan sebagai
antikanker yaitu apabila tanaman tersebut mengandung senyawa yang
bersifat sitotoksik. BSLT ( Brine Shrimp Letahality Test )
merupakan salah satu metode untuk skrining terhadap senyawa
sitotoksik dengan menggunakan Artemia salina Leach. Penelitian ini
merupakan penelitian pendahuluan dalam rangka menemukan senyawa
sitotoksik yang diharapkan dalam perkembangan selanjutnya dapat
digunakan sebagai obat antikanker.
1.3. Alat dan bahana. Alat Vial 3 buah Spuit Media pembiakan
Artemia Salina leachb. Bahan Artemia Salina leach Larutan sampel
dengan 3 variasi konsentrasi
1.4. Cara kerja1. Persiapan larva udang Kista udang Artemia
Salina leachdimasukkan kedalam wadah penetasan yang berisi air laut
dan telah dilengkapi dengan aerasi dan lampu. Biarkan 48 jam hingga
menjadi larva2. Persiapan larutan sampel Sampel 40 mg dilarutkan
dalam 4 ml methanol (larutan induk 10.000 g/ml) Pipet 0,5 ml
larutan induk dan masukkan kedalam vial kosong. Lakukan pengenceran
dengan mengambil 0,5 ml larutaan induk dantambahkan methanol hingga
5 ml(larutan dengankonsentrasi 1000 g/ml) Pipet 0,5 ml larutan
diataas dan masukkan kedalam vial kosong Pipet 0,5 ml larutan di
atas dan lakukan pengenceran dengan menambahkan metanol 5
ml(larutan dengan konsentrasi 100 g/ml) Pipet larutan diatas
sebanyak 0,5 ml dan masukkan kedalam vial Masing-masing larutan
didalam vial biarkan pelarutnya menguap Tambahkan 50g
dimetilsulfoksida (DMSO) Tambahkan air laut hingga mencapai batas
kalibrasi (5ml)3. Pengujian bslt Masukkan 10 ekor larva ke
masing-masing vial uji Lakukan pengamatan terhadap larva yang mati
selama 24 jam Hitung nilai LC50
1.5. Hasil dan pembahasana. Hasil data
perhitunganKelClar.indukClar.sampelJumlah larvaJumlah larva
mat%kematian rata*Nilai probitLog C
I10.000 ug/ml1000 ug/ml10986,66 %6,0803
9
8
II1000 ug/ml100 ug/ml10556,66 %5,1512
7
5
III100 ug/ml10ug/ml10330 %4,4761
2
4
IV10.000 ug/ml1000 ug/ml10990 %6,2823
9
9
V1000 ug/ml100 ug/ml10546,66 %4.9252
5
4
VI100 ug/ml10ug/ml10433,33 %4.5601
4
2
X= log konsentrasiY= nilai probit Persamaan regresiy= 0,802 x +
3,6315= 0,802 x + 3,6310,802 x = 5- 3,631 X= 1,369 0,802=
1,707LC50= an log 1,707LC50 = 50,93 g/ml
b. PembahasanToksikologi adalah pengetahuan tentang efek racun
dari obat terhadap tubuh dan sebetulnya termasuk pula dalam
kelompok farmakodinamika, karena efek terapeutis obat berhubungan
erat dengan efek toksisnya. Pada hakikatnya setiap obat dalam dosis
yang cukup tinggi dapat bekerja sebagai racun dan merusak organisme
(Sola dosis facit venenum: hanya dosis membuat racun,
Paracelsus)Salah satu metode yang digunakan untuk menguji senyawa
yang memiliki bioaktivitas sebagai antikanker dari senyawa yang
diisolasi adalah Brine shrimp lethality test (BSLT), dimana tujuan
dari penggunaan metode ini adalah sebagai uji pendahuluan yang
dapat mendukung penemuan senyawa-senyawa antikanker. Senyawa yang
diduga memiliki aktivitas anti kanker, harus diujikan terlebih
dahulu pada hewan percobaan. Penelitian ini menerapkan metode Brine
ShrimpLethality Test (BST) dengan menggunakan larva udang Artemia
salina leach sebagai hewan uji. Metode ini merupakan salah satu
metode yang banyak digunakan untuk pencarian senyawa anti kanker
baru yang berasal dari tanaman.LC50 adalah konsentrasi dari suatu
senyawa kimia di udara atau dalam air yang dapat menyebabkan 50%
kematian pada suatu populasi hewan uji atau makhluk hidup tertentu.
Penggunaan LC50 dimaksudkan untuk pengujian ketoksikan dengan
perlakuan terhadap hewan uji secara berkelompok yaitu pada saat
hewan uji dipaparkan suatu bahan kimia melalui udara maka hewan uji
tersebut akan menghirupnya atau percobaan toksisitas dengan media
air. Nilai LC50 dapat digunakan untuk menentukan tingkat efek
toksik suatu senyawa sehingga dapat juga untuk memprediksi
potensinya sebagai antikanker.Pada percobaan ini dilakukan
konsentrasi yang berbeda masing-masing yaitu konsentrasi 10, 100,
dan 1000 g/ml untuk membandingkan toksisitas dan efek toksik yang
ditimbulkan masing-masing konsentrasi tersebut. Juga untuk melihat
pada konsentrasi berapakah larva udang mengalami LC50. air laut
sebagai kontrol dimaksudkan untuk melihat apakah respon kematian
dari sampel dan bukan dari laut. digunakan karena tanaman tersebut
memiliki khasiat sebagai obat antikanker, dan Alasan digunakannya
larva udang dalam percobaan ini adalah karena larva udang merupakan
general biossay sehingga semua zat dapat menembus masuk melalui
dinding sel larva tersebut.Pada percobaan ini pertama-tama
dilakukan adalah pra perlakuan yakni menyiapkan larva udangnya.
Pertama-tama Kista udang Artemia Salina leach dimasukkan kedalam
wadah penetasan yang berisi air laut dan telah dilengkapi dengan
aerasi dan lampu. Biarkan 48 jam hingga menjadi larva. Stelah itu
membuat larutan sampel dengan masing-masing konsentrasi. Hal
pertama yang dilakukan adaalah Sampel 40 mg dilarutkan dalam 4 ml
methanol (larutan induk 10.000 g/ml) kemudian Pipet 0,5 ml larutan
induk dan masukkan kedalam vial kosong. Lakukan pengenceran dengan
mengambil 0,5 ml larutaan induk dantambahkan methanol hingga 5
ml(larutan dengankonsentrasi 1000 g/ml). Stelah itu Pipet 0,5 ml
larutan diataas dan masukkan kedalam vial kosong, lalu Pipet 0,5 ml
larutan di atas dan lakukan pengenceran dengan menambahkan metanol
5 ml(larutan dengan konsentrasi 100 g/ml), lalu Pipet larutan
diatas sebanyak 0,5 ml dan masukkan kedalam vial. Masing-masing
larutan didalam vial biarkan pelarutnya menguap kemudian Tambahkan
50g dimetilsulfoksida (DMSO) dan barulah Tambahkan air laut hingga
mencapai batas kalibrasi (5ml). Setelah laukan pengujian BSLT
dengan cara Masukkan 10 ekor larva ke masing-masing vial uji lalu
Lakukan pengamatan terhadap larva yang mati selama 24 jam dan
Hitung nilai LC50.Dari Pengujian diatas diperoleh hasil pada
kelompok kami yaitu kelompok 3 diperoleh jumlah larva yang mati
3,2,4, dengan nilai probit 4,476. Pada praktikum ini data yang
digunakan untuk mencari persamaan regresi dan LC50 adalah data dari
kelompok 1, 2, 3. Dimana diperoleh hasil log konsentasinya adalah
konsentrasi 1000 log konsentrasinya adalah 3, dan pada konsentrasi
100 adalah 2, serta konsentrasi 10 log konsentrasinya adalah 1.
Dimana nilai probit masing masing adalah 6,080 ; 5,151 ; 4,476
.Setelah didapat log konsentrasi dan nilaai probit diperoleh
persaman regresi yaitu y= 0,802 x + 3,631. Diperolehlah nilai LC50
adalah 50,93 g/ml. Artinya konsentrasi larutan sampel yang
menyebabkan kematian dengan nilai LC50 adalah konsentarsi 50,93
g/ml. Angka kematian hewan coba dihitung sebagai Median Lethal Dose
(LD50) atau Median Lathal Concentration (LC50). Penggunaan LC50
dimaksudkan untuk pengujian ketoksikan dengan perlakuan terhadap
hewan coba secara inhalasi atau menggunakan media air. Kematian
pada hewan percobaan digunakan sebagai pedoman untuk memperkirakan
dosis kematian pada manusia.
1.6. Kesimpulan Toksikologi adalah pengetahuan tentang efek
racun dari obat terhadap tubuh dan sebetulnya termasuk pula dalam
kelompok farmakodinamika, karena efek terapeutis obat berhubungan
erat dengan efek toksisnya. Brine Shimp Lethality Test (BSLT)
merupakan salah satu metode uji toksisitas yang banyak digunakan
dalam penelusuran senyawa bioaktif yang toksik dari bahn alam.
Angka kematian hewan coba dihitung sebagai Median Lethal Dose
(LD50) atau Median Lathal Concentration (LC50). Metode BSLT ini
menunjukkan aktifasi farmakologis yang luas, tidak spesifik dan
dimanifestasikan sebagai toksisitas senyawa terhadap larva udang
(Artemia Salina Leach). Alasan digunakannya larva udang dalam
percobaan ini adalah karena larva udang merupakan general biossay
sehingga semua zat dapat menembus masuk menembus dinding sel larva
tersebut. Biossay adalah suatu pengujian tentang toksisitas pada
suatu produk dalam rangka pencarian produk alam yang potensial yang
biasanya menggunakan makhluk hidup sebagai sampel Dari percobaan di
peroleh persamaan regresi y = 1,418x + 2,072 Dari hasil percobaan
yang dilakukan diperoleh hasil konsentrasi untuk mematikan 50%
larva udang (Artemia salina) adalah21,375,90 g/ml sehingga dapat
dikatakan sampel pada percobaan ini memiliki potensi toksisitas
akut menurut metode BSLT yaitu pada perlakuan dengan hewan coba
larva Artemia salina Leach.
DAFTAR PUSTAKA
Donatus, A.Imono.2001. Toksikologi Dasar .Yogjakarta:Universitas
Gajah Mada
Ganiswarna, Sulistia G. 1995. Farmakologi dan Terapi. FK-UI:
Jakarta.
Katzung, Bertram. 1997.Farmakologi Dasar dan Terapi. Edisi
VI.Jakarta: EGC. Lu, Frank .1995.Toksikologi Dasar: asas, organ
sasaran, dan penilaian risiko. Penerjem hE-di Nugroho. Jakarta:
UI-Press.
Mutschler, E. 1991.Dinamika Obat edisiV. Bandung: ITB
BSLT 19
