Campionamento e analisi della densità cellulare di Ostreopsis cf. ovata

Gioia Benedettini, Patrizia Borrello, Patrizia Ciminiello, Enzo Funari, Erika Magaletti,

Maura Manganelli, Antonella Penna, Emanuela Spada, Cecilia Totti, Nicola Ungaro

Presentazione delle nuove Linee Guida per la gestione delle fioriture di Ostreopsis ovata e di cianobatteri nelle acque di balneazione, Roma, 20-21 Aprile 2015

Struttura del Capitolo

Introduzione

Matrice acqua

Campionamento e conservazione dei campioni

Analisi della densità cellulare

Matrice aerosol

Campionamento di aerosol per analisi chimica

Campionamento di aerosol per analisi molecolare

Matrice substrati bentonici

Metodo classico

Metodo della siringa

Metodo della Falcon

Bibliografia

Durata del campionamento

0.E+00

1.E+05

2.E+05

3.E+05

4.E+05

5.E+05

6.E+05

7.E+05

8.E+05

9.E+05

1.E+06

01-gen 01-feb 01-mar 01-apr 01-mag 01-giu 01-lug 01-ago 01-set 01-ott 01-nov 01-dic

Mar Ligure, Tirreno N Adriatico

cell

s g-1

fw

Scelta delle stazioni

Portonovo Passetto H

Passetto L

PN PAS

Matrice acqua – Campionamento e conservazione

0.5 m 0.5 m

1 m

Matrice acqua - Analisi

Matrice aerosol - Campionamento

Campionatori

• a frazione liquida

• a filtro

Campionatore SAS PCR della PBI International (a frazione liquida) per analisi chimiche

Campionatore portatile AirCube COM2 della Analitica Instrument (a filtro) per analisi molecolari

Matrice substrati bentonici – Campionamento e conservazione

Matrice substrati bentonici – Trattamento dei campioni

Macroalghe:

agitazione del campione

leggera sonicazione

risciacqui

conservazione dell’acqua di risciacquo

rilevamento di peso fresco, peso secco e superficie

Substrato duro:

grattaggio

risciacqui

conservazione dell’acqua di risciacquo

misurazione della superficie

Matrice substrati bentonici – Analisi

Identificazione e conteggio secondo il metodo Utermöhl.

Abbondanze espresse come:

• substrati duri: cells cm-2

• macroalghe: cells g-1 ww, cells g-1 dw, cells cm-2

Matrice substrati bentonici – Metodo della siringa

20 ml

20ml

20ml

1

2

3

• Siringa modificata

• 3 repliche

• Per ogni replica prelievo di 20 ml in 3 punti

• Analisi al microscopio ottico

• Risultati espressi come cells ml-1 di campione siringa

Matrice substrati bentonici – Metodo della Falcon

• Prelievo di un frammento di tallo

• Stima del peso attraverso la differenza di volume

• Conteggio su 3 gocce (20 l) di volume noto

Abbondanza di O. ovata su A. taxiformis (n=36)

cell. /g macroalga

y = 0.9463x

R2 = 0.9306

0.0

50000.0

100000.0

0.0 50000.0 100000.0

metodo classico

me

tod

o a

lte

rnat

ivo

abb

revi

ato

N cell g-1fw Rischio

1 400

Basso 5 2000

10 4000

20 8000

30 12000

Medio

40 16000

50 20000

60 24000

70 28000

80 32000

Alto 90 36000

100 40000

150 60000

200 80000

Altissimo 500 200000

1000 400000

Altri metodi

Altri metodi

da Tester et al 2014

Fiberglass screen fissati a una boa a 29 cm dal fondo.

Trasferimento in un barattolo, agitazione per favorire il distacco.

Concentrazione delle cellule su un filtro di 20 µm e aggiunta di 5-10 ml di FSW.

Analisi secondo Utermöhl.

Altri metodi

Jauzein et al.

Filtri a bassa porosità flottanti

Altri metodi

Jauzein et al.

Filtri mantenuti su un substrato rigido

Limiti del campionamento