Capítulo II: Extracción de compuestos polifenólicoseditorial.unca.edu.ar/Publicacione on line/DIGITESIS/Tesis de Gomez... · extracción y tratamientos de la muestra para extraer

Capítulo II: Extracción de compuestos polifenólicos

53 Editorial Científica Universitaria – Secretaría de Ciencia y Tecnología

Universidad Nacional de Catamarca ISBN: 978-987-661-125-1

2.1.- Introducción

Los compuestos polifenólicos son antioxidantes que constituyen una clase de

metabolitos secundarios biosintetizados por el reino vegetal [1]

.

Debido a que los antioxidantes sintéticos utilizados en la industria tienen la desventaja

de ser muy volátiles y se sospecha que son perjudiciales para la salud, existe en la

actualidad un gran interés por la búsqueda de sustancias o compuestos alternativos,

preferiblemente de origen biológico, que además de ser eficaces como antioxidantes, su

aprovechamiento no impacte negativamente sobre el medio ambiente.

Por otro lado, cada día se conoce más acerca de los beneficios del empleo de

antioxidantes naturales en la salud humana e industria, por lo que es necesario explorar

nuevas fuentes. Los residuos de la poda de olivo podrían resultar una excelente opción,

ya que estudios recientes a nivel internacional evidencian la presencia de compuestos

polifenólicos con propiedades antioxidantes en la hoja de olivo, lo que condujo a la

comercialización de sus extractos debido a la gran utilidad en fitoterapia, cosmética y

las industrias farmacológicas y de la alimentación. En contraste, apenas existen

antecedentes sobre la composición fenólica en la madera de esta especie.

Por lo expuesto y teniendo en cuenta que la provincia de Catamarca presenta una

extensa área de cultivo de olivo, con perspectiva de crecimiento y consecuente

producción de una biomasa de residuos de poda, actualmente sin aprovechamiento,

surge la necesidad de desarrollar un método confiable que implique procedimientos de

extracción y tratamientos de la muestra para extraer la mayor cantidad de fenoles

presentes en las hojas y la madera de olivo, manteniendo algunas de las características

beneficiosas de sus extractos, como ser el poder antioxidante.

De acuerdo con lo presentado por Waterman y Mole (1994) [2]

, con respecto a los

solventes y condiciones de trabajo para la extracción de CF de materiales vegetales y en

función de los mejores resultados registrados en antecedentes que se refieren al poder

extractivo de diferentes solventes orgánicos sobre la madera y la hoja de olivo [3]

, en el

presente ensayo se aplica la extracción por maceración con etanol acuoso y acetato de

etilo sobre residuos de poda de la variedad Arbequina del Valle Central de Catamarca

para evaluar su poder extractivo y la actividad antioxidante de los extractos obtenidos.




2.2.- Objetivos del presente capítulo

Seleccionar un solvente de extracción de sustancias fenólicas, presentes en hojas

y madera procedentes de la poda de olivos de la variedad Arbequina cultivados

en el Valle Central de la Provincia de Catamarca, en función de los mayores

rendimientos alcanzados.

Determinar el rendimiento en sólidos totales, polifenoles totales y ortodifenoles

de los extractos de las hojas y la madera derivados de la poda de olivo de la

variedad Arbequina, según el solvente utilizado en el proceso de extracción.

Comparar el rendimiento en polifenoles de los residuos derivados de la poda de

olivo de la variedad Arbequina, con antecedentes de antioxidantes provenientes

de otras fuentes.

2.3.- Materiales y métodos

2.3.1.- Preparación de las muestras: Obtención de los extractos

Reactivos:

Solución de etanol acuoso al 50%

Acetato de etilo absoluto

Agua bidestilada

Los extractos en etanol acuoso al 50% y en acetato de etilo se obtienen utilizando una

relación 1:10 p/v. Para ello se pesan, por quintuplicado, 5 g de muestra de hoja y 5 g

de muestra de madera, por separado. Se adicionan 50 ml de etanol acuoso al 50%, se

dejan macerar en vasos de precipitado, recubiertos con film y papel de aluminio, a

temperatura ambiente, durante 24 hs. Posteriormente se filtran al vacío y al residuo

remanente se le adicionan 50 ml de solvente fresco. Se repite el proceso estimando 48

hs de maceración. Los extractos obtenidos de la primera y segunda maceración se

combinan y el volumen final de cada extracto se divide en dos alícuotas de 50 ml,

medidos en matraz aforado. Una de las alícuotas se destina para la cuantificación de

polifenoles, ortodifenoles y para calcular actividad antioxidante, la otra se utiliza para

determinar la cantidad de sólidos totales. Las muestras se almacenan en recipientes

ámbar para mayor protección contra la luz a una temperatura de 5-10 ºC.

El procedimiento se repite para la obtención de los extractos con acetato de etilo

(Anexo 4; Fotos A.4.7 a A.4.28).




2.3.2.- Determinaciones analíticas

a.- Sólidos totales

Reactivos:

Extractos hoja- etanol 50% (EHE)

Extractos hoja- acetato de etilo (EHAc)

Extractos madera- etanol 50% (EME)

Extracto madera - acetato de etilo (EMAc)

Se colocan 50 ml de cada uno de los extractos en cápsulas de porcelana previamente

secadas y pesadas. Se llevan a baño maría hasta evaporación completa. Posteriormente

se introducen las cápsulas en estufa a 105 ºC hasta sequedad, se enfrían en desecador y

se efectúan pesadas hasta que la masa residual permanezca constante (Anexo 4; Fotos

A.4.31 y A.4.32). Finalmente se realizan los cálculos correspondientes tomando la

última pesada como referencia.

Cálculo: ST = [(M2 – M1)/ M] x 100

Donde: ST: Sólidos totales

M2: Peso de la cápsula más el residuo.

M1: Peso de la cápsula vacía.

M: Peso de la muestra.

b.- Polifenoles totales

Método de Folin Ciocalteu, a λ= 725 nm según Vázquez et al. (1975) [5].

Reactivos:

Ácido cafeico

Agua bidestilada




Extracto madera- acetato de etilo (EMAc)

Folín Ciocalteu

Solución saturada de carbonato de sodio

I. Recta de calibrado

Se prepara una solución de ácido cafeico de 210 ppm. A partir de ésta se calculan los

volúmenes apropiados para preparar 25 ml de soluciones patrones de 0.0; 2.0; 4.0; 8.0;

12.0; 16.0 ppm (Tabla 2.1).

Luego se llevan a matraz aforado de 25 ml en los que previamente se adicionan 10 ml

de agua bidestilada, se someten a reacción con 1,25 ml de Folín Ciocalteu. Se agita




vigorosamente y se deja reposar 3 minutos. Por último se agregan 2,5 ml de Na2CO3

saturado y se enrasa con agua bidestilada.

Estas soluciones se mantienen en oscuridad durante una hora para que se complete la

reacción. Se mide la absorbancia de cada muestra patrón en espectrofotómetro a

longitud de onda de 725 nm. Una vez obtenidos los datos de absorbancia, se construye

la recta de calibrado.

II. Determinación de la concentración de polifenoles en los extractos de hoja y madera

de olivo

Se miden 10 ml de agua bidestilada, se llevan a matraz aforado de 25 ml y se adiciona

0,1 ml de extracto. Se agrega 1 ml de reactivo Folín Ciocalteu, se agita vigorosamente y

se deja reposar por tres minutos. Por último se agregan 2,5 ml de Na2CO3 saturado y se

enrasan con agua bidestilada. Estas soluciones se mantienen en oscuridad durante una

hora para que se complete la reacción. Se mide la absorbancia de cada muestra en

espectrofotómetro a longitud de onda de 725 nm.

Cálculo: ppm PFT = L x VD x VT/(VA x MM)

Donde: L: Lectura de la curva en ppm.

VD: Volumen de dilución.

VT: Volumen total de extracto.

VA: Volumen de la alícuota.

MM: Masa de la muestra.

c. Ortodifenoles

Método de molibdato de sodio.

Reactivos:

Ácido cafeico

Agua bidestilada




Extracto madera- acetato de etilo (EMAc)

Solución de molibdato de sodio al 5 % en etanol al 50%

Concentración

(ppm)

Volumen

(ml)

0.0 0

2.0 0,238

4.0 0,476

8.0 0,952

12.0 1,428

16.0 1,905

Tabla 2.1. Volúmenes para preparar 25 ml de soluciones patrones de PFT.




I. Recta de calibrado

Se prepara una solución de ácido cafeico de 210 ppm. A partir de ésta se miden los

volúmenes apropiados para preparar 10 ml de soluciones patrones de 0.0; 2.0; 4.0; 8.0;

12.0; 16.0 ppm (Tabla 2.2).

Tabla 2.2. Volúmenes para preparar 10 ml de soluciones patrones de ODF.

Luego se llevan a matraz aforado de 10 ml, en los que previamente se adicionan 5 ml de

agua bidestilada, se someten a reacción con 1 ml de solución de molibdato de sodio al 5

% en etanol al 50%. Se agitan vigorosamente y se enrasan con agua bidestilada. Estas

soluciones se mantienen en oscuridad durante 15 minutos para que se complete la

reacción. Se mide la absorbancia de cada muestra en espectrofotómetro a longitud de

onda de 370 nm. Una vez obtenidos los datos de absorbancia, se construye la recta de

calibrado.

II. Determinación de la concentración de ortodifenoles en los extractos de hoja y

madera de olivo

Se toman 5 ml de agua bidestilada, se llevan a matraz aforado de 10 ml y se adicionan

0,1 ml de extracto. Se agrega 1 ml de solución de molibdato de sodio al 5 % en etanol al

50%, se agita vigorosamente y se enrasa con agua bidestilada. Estas soluciones se

mantienen en oscuridad durante quince minutos para que se complete la reacción. Se

mide la absorbancia de cada muestra en espectrofotómetro a longitud de onda de 370

nm (Anexo 4; Fotos A.4.29 y A.4.30).

Cálculo: ppm ODF = L x VD x VT/ (VA x MM)

Donde: L: Lectura de la curva en ppm.

VD: Volumen de dilución.

VT: Volumen total de extracto.

VA: Volumen de la alícuota.

MM: Masa de la muestra.

Concentración

(ppm)

Volumen

(ml)

0.0 0

2.0 0,095

4.0 0,190

8.0 0,380

12.0 0,570

16.0 0,760




2.4.- Resultados y Discusión

2.4.1.- Comportamiento de los extractos de hojas

Los máximos, mínimos, medianas, medias, desviaciones estándar y coeficientes de

variación de los rendimientos en sólidos totales (ST), expresados como porcentaje de

extracción (%) y los rendimientos en polifenoles totales (PFT) y orto-difenoles (ODF),

expresados como ppm de ácido cafeico (mg ácido cafeico kg -1

hojas), de cinco

repeticiones de extracciones etanólicas y con acetato de etilo de hojas de olivo, se

presentan en la tabla 2.3.

Parámetros Medidas

descriptivas

Extractos HE HAc

Sólidos

Totales

(%)

Máx 28,31 7,87

Mín 24,39 6,97

Mediana 25,53 7,07

Media 26,11 7,31

DE 1,53 0,42

CV % 5,86 5,75

Polifenoles

Totales

(mg de ácido

cafeico kg - 1

de hojas)

Máx 30020,39 11675,15

Mín 24117,12 9633,96

Mediana 27467,65 10562,84

Media 27540,73 10497,36

DE 2544,79 848,99

CV % 9,24 8,09

O-difenoles

(mg de ácido

cafeico kg - 1

de hoja)

Máx 21002,44 6434,72

Mín 16022,36 4378,16

Mediana 17401,08 5018,80

Media 18130,80 5093,28

DE 1904,85 810,09

CV % 10,51 15,91

Tabla 2.3. Medidas descriptivas de los rendimientos en ST, PFT y ODF de los extractos etanólicos y

con acetato de etilo de hojas de olivo.

Considerando los elevados valores de las DE obtenidos en la tabla 2.3, se decide

trabajar con los datos de las medianas para realizar el análisis descriptivo y estadístico.

En la tabla 2.4 se exhiben las medianas de los rendimientos en ST, PFT y ODF para los

extractos etanólicos y con acetato de etilo con las diferencias estadísticas respectivas,

calculadas mediante el análisis unilateral da varianza por rangos, de Kruskal Wallis

(Anexo 3; Tablas A.3.3.1 a A.3.3.3).

Extractos Medianas* ST PFT ODF

HE 25,53 A 27467,65 A 17401,08 A

HAc 7,07 B 10562,84 B 5018,80 B

% Diferencia de extracción por solvente 72,30 61,54 71,16

* Letras distintas indican diferencias significativas al 5%

Tabla 2.4. Medianas de rendimientos en ST, PFT, ODF de los extractos etanólicos y con acetato de

etilo de hojas de olivo.




Los gráficos 2.1 y 2.2 muestran las medianas de los rendimientos en ST, PFT y ODF de

los extractos etanólicos y con acetato de etilo de las hojas de olivo.

25,53

7,07

HE

HAc

Extr

acto

s

ST/ %

HE HAc

Gráfico 2.1. Medianas del rendimiento en ST de extractos de hoja.

La extracción de los principios activos a partir de las hojas de olivo por maceración con

etanol acuoso al 50 %, manifiesta un rendimiento significativamente superior en ST

(p<0,0079) respecto de los macerados con acetato de etilo en un 72,30 % (Tabla 2.4;

Gráfico 2.1).

27467,65

10562,84

17401,08

5018,80

HE

HAc

Extr

acto

s

Concentración/ ppm Ac. Cafeico

PFT ODF

Gráfico 2.2. Medianas del rendimiento en PFT y ODF de extractos de hoja.

Igualmente, son los extractos etanólicos los que muestran rendimientos en PFT y ODF

significativamente superiores (p<0,0079) que los macerados en acetato de etilo, tal

como evidencian la tabla 2.4 y gráfico 2.2. La concentración de PFT registrada en los

extractos etanólicos de hojas de olivo, se impone en un 61,54% sobre los fenoles




cuantificados para los extractos de acetato de etilo, obteniéndose 27467,65 mg y

10562,84 mg de fenoles totales por kilogramo de hoja respectivamente (Tabla 2.3;

Gráfico 2.2). Asimismo, el contenido en ODF de los extractos etanólicos es

estadísticamente superior a la concentración de ODF presentes en los extractos con

acetato de etilo, en una proporción del 71,16 % (Gráfico 2.2; Tabla 2.3).

Resulta importante señalar, que del total de los fenoles cuantificados, una proporción

elevada de estos son ODF. En el extracto etanólico el 63,35% de los PFT son ODF, en

tanto que, en el extracto de acetato de etilo el porcentaje diminuye a 47,51%. Esto

resulta interesante si se tiene en cuenta que son los ODF quienes confieren, en gran

medida, la valiosa bioactividad a las hojas de olivo [6; 7]

.

En síntesis, los extractos obtenidos a partir de hojas con etanol al 50% presentan un

contenido en PFT, ODF y rendimiento en ST claramente superior al de los extractos de

hojas con acetato de etilo; lo que permite deducir que desde el punto de vista de la

capacidad extractiva del solvente, el etanol acuoso al 50% resulta ser el mejor de los

solventes ensayados para la extracción de PF y ODF en hojas de olivo. Este

comportamiento, además, permite predecir la naturaleza polar de los compuestos

fenólicos presentes en este residuo agrícola. Es decir, que se pone en evidencia que la

composición química de los extraíbles de las hojas de olivo serían en gran medida

compuestos fenólicos hidrosolubles.

Por otra parte, en función de estos resultados se puede considerar a las hojas de olivo de

la variedad Arbequina procedente del Valle Central de la provincia de Catamarca, como

una fuente importante de fitofenoles. Por lo que resulta importante el estudio de las

propiedades antioxidantes de los extractos obtenidos, temática que se aborda en el

capítulo 3 de la presente tesis.

2.4.2.- Comportamiento de los extractos de madera

Los valores máximos, mínimos, medianas, medias, desviaciones estándar y oeficientes

de variación de los rendimientos en sólidos totales (ST), expresados como porcentaje de

extracción (%), y los rendimientos en polifenoles totales (PFT) y o-difenoles (ODF),

expresados como ppm de ácido cafeico (mg ácido cafeico kg-1

de madera), de cinco

repeticiones de extracciones etanólicas y con acetato de etilo sobre madera de olivo, se

presentan en la tabla 2.5.




Parámetros Medidas

descriptivas

Extractos

ME MAc

Sólidos

Totales

(%)

Máx 18,07 3,64

Mín 13,88 2,34

Mediana 17,54 3,00

Media 17,21 2,96

DE 1,20 0,47

CV% 6,97 6,30

Polifenoles

Totales

(mg de ácido

cafeico kg - 1

de madera)

Máx 21246,00 6087,78

Mín 18520,01 4792,79

Mediana 18938,85 5395,13

Media 19635,51 5412,26

DE 1293,02 476,42

CV% 6,58 8,80

O-difenoles

(mg de ácido

cafeico kg - 1

de madera)

Máx 7708,75 4512,18

Mín 7202,78 2360,35

Mediana 7313,85 3463,80

Media 7422,45 3453,65

DE 278,76 762,31

CV% 3,76 22,07

Tabla 2.5. Medidas descriptivas de los rendimientos en ST, PFT y ODF de los extractos etanólicos y

con acetato de etilo de madera de olivo.

Analizando la tabla 2.5 se observa que las DE calculadas son elevadas y por ello se

decide trabajar con las medianas para realizar el análisis estadístico.

En la tabla 2.6 se exhiben las medianas de los rendimientos en ST, PFT y ODF para los

extractos etanólicos y con acetato de etilo con las diferencias estadísticas respectivas,

calculadas mediante el análisis unilateral da varianza por rangos de Kruskal Wallis.

(Anexo 3, Tablas A.3.3.4 a A.3.3.6).

Tabla 2.6. Medianas de rendimientos en ST, PFT, ODF de los extractos etanólicos y con acetato de

etilo de madera de olivo.

Los gráficos 2.3 y 2.4 muestran las medianas de los rendimientos en ST, PFT y ODF de

los extractos etanólicos y con acetato de etilo de madera de olivo.

Extractos Medianas* ST PFT ODF

ME 17,54 A 18938,85A 7313,85 A

MAc 3,00 B 5395,13 B 3463,80 B

% Diferencia de extracción por solvente 82,90 71,51 52,64





17,54

3,00

ME

MAc

Extr

acto

s

ST/ %

ME MAc

Gráfico 2.3. Medianas del rendimiento en ST de extractos de madera.

En los extractos de madera de olivo de la variedad Arbequina, la extracción con acetato

de etilo es un 82,90% menor en ST que la obtenida con etanol acuoso al 50% y de

acuerdo al análisis estadístico, existen diferencias significativas (p<0,0079) en el

rendimiento de ST en relación a los solventes de extracción (Tabla 2.5 y Gráfico 2.3).

A su vez, con acetato de etilo se extrae un 71,51% de PFT menos que con etanol agua

50%, registrándose valores de 5395,13 mg y 18938,85 mg de fenoles por kilogramo de

madera respectivamente (Gráfico 2.4). Las diferencias de las medianas del contenido en

PFT para los extractos tratados con etanol 50% y acetato de etilo resultan

estadísticamente significativas (p<0,0079) (Tabla 2.6).

18938,85

5395,13

7313,85

3463,80

ME

MAc

Extr

acto

s


PFT ODF

Gráfico 2.4. Medianas del rendimiento en PFT y ODF de extractos de madera.

Un comportamiento similar se observa en los valores registrados en los rendimientos en

ODF (Gráfico 2.4). El etanol acuoso extrae un 52,64% más de ODF que el acetato de




etilo. En este caso, a nivel estadístico, también se encuentran diferencias significativas

(p<0,0079) entre las medianas de los extractos (Tabla 2.6).

Contrariamente a lo manifestado por los extractos de hoja (Tabla 2.4), el acetato de etilo

extrae mayor proporción de ODF en madera que el etanol acuoso. Los valores

registrados en PFT y ODF (Tabla 2.6) señalan que sólo el 38,62% de PFT cuantificados

en el extracto etanólico son ODF, en tanto que, en el extracto con acetato de etilo este

porcentaje asciende al 64,20%. Como se señaló anteriormente, esto resulta interesante si

se tiene en cuenta que el grado de hidroxilación y la posición de los grupos oxhidrilos

en la molécula son factores importantes en la actividad antioxidante de los CF [6; 7]

.

En síntesis, para ambos extractos de madera se observa que los rendimientos en ST,

PFT y ODF presentan variación con respecto al solvente de extracción, lo que puede

explicarse en función a las diferentes afinidades de los compuestos bioactivos del leño y

los solventes del ensayo. Se evidencia en este estudio, que la composición química de

los extraíbles de la madera son en gran medida compuestos fenólicos hidrosolubles, ya

que es el etanol-agua 50% el que exhibe extracciones superiores, obteniéndose los

valores de las medianas de los rendimientos en ST, PFT y ODF significativamente más

elevados. Sin embargo, es preciso resaltar que es el acetato de etilo el que extrae mayor

proporción de ODF sobre los fenoles totales extraídos.

Dado los resultados registrados se puede establecer que, desde la perspectiva de la

capacidad extractiva, el etanol acuoso al 50% se revela como el mejor de los solventes

empleados en la extracción de PFT y ODF originarios de la madera de olivo de la

variedad Arbequina. Además, este residuo de poda se puede considerar como una fuente

potencial de polifenoles naturales, resultando sumamente interesante investigar si estos

biocompuestos, presentes en los extractos, exhiben propiedades antioxidantes, temática

que se analiza en los capítulos 3 y 4 de la presente tesis.

2.4.3.- Análisis comparativo de los residuos de poda de olivo

Las medianas de cinco repeticiones de los rendimientos en sólidos totales (ST),

expresados como porcentaje de extracción (%) y de los contenidos en polifenoles totales

(PFT) y en ortodifenoles (ODF), expresados como ppm de ácido cafeico, de los

extractos de hojas y de madera de olivo extraídos con acetato de etilo y etanol acuoso al

50%, se analizan aplicando la prueba de Kruskal Wallis, que resulta significativa al 5%

(p<0,0079 a p<0,0159 respectivamente). En consecuencia, se utilizan las comparaciones




múltiples y se obtienen los resultados (Anexo 3, Tablas A.3.7 a A.3.12) que se

presentan en la siguiente tabla:

Extractos

Sólidos

totales

(%)

Polifenoles totales

(mg de ácido cafeico kg - 1

de residuo)

O-difenoles

(mg de ácido cafeico kg - 1

de residuo)

HE 25,53 A 27467,65 A 17401,08 A

ME 17,54 B 18938,85 B 7313,85 B

% Diferencia de extracción por

material vegetal 31,30 31,05 57,97

HAc 7,07 A 10562,84 A 5018,80 A

MAc 3,00 B 5395,13 B 3463,80 B

% Diferencia de extracción por

material vegetal 57,57 48,92 30,98


En etanol la hoja presenta un rendimiento en ST un 31,30 % superior al de la madera, de

igual forma, en acetato de etilo las extracciones en hoja tienen un rendimiento mayor

comparado con los extractos de madera en un 57,57%, estas diferencias resultan

estadísticamente significativas (p<0,0079) (Tabla 2.7).

Asimismo, el extracto etanólico de hoja presenta un 31,05% más de PFT que el de

madera y comparando los extractos con acetato de etilo, el de hoja es un 48,92%

superior.

Los contenidos de ODF en hoja, para el etanol acuoso y acetato de etilo, presentan

incrementos de 57,97% y 30,98% comparados con los de madera respectivamente.

El hecho de que las hojas de olivo exhiben rendimientos mayores con ambos solventes

de extracción en los parámetros analizados, confirma lo publicado en otras

investigaciones acerca de que las hojas presentan naturalmente mayor contenido en PFT

que la madera [3]

. Sin embargo, comparados con otras fuentes alternativas de CF [4]

(Tabla 2.8), tanto las hojas como la madera de olivo de la variedad Arbequina

procedente de la poda, pueden ser consideradas excelentes fuentes de PF naturales con

posibles propiedades antioxidantes [3]

.

Extractos Polifenoles totales (ppm)

Etanólico de porotos de soja 343

Metanólico de porotos de soja 320,8

Con acetato de etilo de poroto de soja 23,1

Etanólico en salvado de avena 287,5

Metanólico en salvado de avena 278,1

Con acetato de etilo en salvado de avena 44,3

Tabla 2.8. Contenido de compuestos fenólicos en extractos vegetales. Fuente: Revista A&G [4]

.

Tabla 2.7. Medianas de los rendimientos en ST, PFT, ODF de los extractos HE, ME, HAc y MAc.




De acuerdo con el análisis estadístico el rendimiento en PFT y ODF del etanol acuoso

es significativamente superior al acetato de etilo tanto en hoja como en madera de olivo

(p<0,0079, en ambas variables) (Tablas 2.4 y 2.6). El mayor poder extractivo del etanol

frente al acetato de etilo sobre compuestos fenólicos de diferentes fuentes vegetales fue

registrado recientemente por otros autores para madera y hoja de olivo cultivado bajo

las condiciones edafoclimáticas del mediterráneo [3]

y sobre soja y salvado de avena [4]

(Tabla 2.8), coincidiendo con los resultados obtenidos en la presente tesis para residuos

de poda de Arbequina, cultivadas en zonas cálidas.

25,53

17,54

7,07

3,00

HE

ME

HAc

MAc

Extr

acto

s

ST/ %

HE ME

HAc MAc

Gráfico 2.5. Medianas de los rendimientos en ST de los extractos MAc, HAc, ME y HE.

27467,65

18938,85

10562,84

5395,13

17401,08

7313,85

5018,80

3463,80

HE

ME

HAc

MAc

Extr

acto

s


ODF

PFT

Gráfico 2.6. Medianas de los rendimientos en PFT y ODF de los extractos MAc, HAc, ME y HE.

En función de lo expuesto, se puede concluir que existe una mayor afinidad entre las

estructuras fenólicas presentes en los dos residuos vegetales y el etanol acuoso al 50 %,

lo que confirma la naturaleza polar de los fenoles presentes en ambos materiales. Queda




comprobado además, que los residuos foliares del cultivar Arbequina presentan un

rendimiento significativamente superior en ST (p<0,0079), PFT (p<0,0079) y ODF

(p<0,0079 y p <0,0159), tanto en etanol acuoso al 50% como en acetato de etilo que la

madera de la misma variedad (Tabla 2.7 y Gráficos 2.5 y 2.6).

Un análisis más profundo de los rendimientos fenólicos revela que en los extractos la

mayor proporción de ODF no siempre coincide con la mayor concentración en PFT y en

ODF. Así, en el caso de los extractos MAc, que registra concentraciones en PFT y ODF

inferiores al resto de los extractos ensayados, es el que contiene mayor proporción de

ODF, ya que un 64,20% de los fenoles totales cuantificados resultan ser ODF, por lo

que se esperaría que este extracto manifieste la mejor propiedad antioxidante frente a un

sistema radicalario. El extracto HE, con los contenidos más elevados en PFT y ODF es

el que le sigue en este aspecto al extracto MAc con un 63,35% de ODF sobre el total de

PFT. En el caso del extracto HAc un 47,51% de los PFT son ODF y en ME este

porcentaje baja a un 38,62% (Tabla 2.4 y 2.6).

En síntesis, en base a los resultados registrados en el presente estudio, se puede estimar

que con acetato de etilo se puede llegar a extraer por kilogramo de residuo 18,94 g de

PFT en hoja y 5,40 g de estos compuestos bioactivos en la madera. En tanto, con el

etanol acuoso puede llegar a obtenerse para la hoja y madera respectivamente 27,48 g y

10,56 g de fitofenoles por kilogramo de residuo, lo que incrementa el interés del estudio

de la potencialidad de los extractos para contrarrestar la acción de RL sobre diferentes

sustratos. Por otra parte, cabe señalar que desde el punto de vista de las posibles

aplicaciones de los extractos como conservantes de productos alimenticios o su empleo

en la industria farmacológica y cosmetológica, el mayor poder extractivo de la mezcla

etanólica acuosa resulta positivo debido a la inocuidad del etanol y la toxicidad e

inflamabilidad del acetato de etilo. Resta comprobar la actividad antioxidante de los

extractos sobre distintos sistemas radicalarios.

En los capítulos 3 y 4 se analiza la incidencia de las propiedades antioxidantes de los

extractos frente a dos sistemas radicalarios diferentes, solución metanólica de DPPH y

aceite de oliva virgen sometido a condiciones forzadas de oxidación, respectivamente.




2.5.- Citas bibliográficas

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42.

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