•Prueba inmunoenzimática indirecta para determinar anticuerpos IgG IgM .

•El diagnóstico de infección por C. trachomatis se realiza mediante cultivo celular o tecnicas serològicas ( microinmunofluorescencia Indirecta), pero las técnicas de ELISA son más fáciles de realizar.

•Puesto que en la mayor parte de las infecciones la presencia de IgM solo se mantiene por un periodo corto de tiempo, representa un marcador adecuado de infección reciente.

FUNDAMENTO DEL MÉTODO:

Método de ELISA basado en la reacción de los Anticuerpos de la muestra con el antígeno unido a la superficie de poliestireno (pocillo).

Las inmunoglobulinas no unidas por la reacción con el antígeno son eliminados en el proceso de lavado.

Reacciona con el complejo Ag-Ac, la que no se une es eliminado por los lavados, la unida reacciona con el sustrato, para ver una reacción coloreada azul que cambia a amarillo tras la adición de solución de parada.

• usar en condiciones asépticas •Utilizar pipetas diferentes y limpias para cada fase •No pipetear con la boca•Utilizar solo la cantidad necesaria, no devolver al vial el sobrante •Contiene material de origen animal, no obstante debe manejar con precaución ,ningún método en la actualidad puede asegurar por completo la ausencia de agentes infecciosos•Los pocillos contienen antígeno de Chlamydia trachomatis inactivado, manejar con cuidado.•Durante los periódos de incubación, un adecuado sellado de las placas con la lámina adhesiva evita la desecación de la muestra.

El único reactivo que es necesario preparar con anticipación la solución de lavado la dilución a realizar es 1/20.

Si aparecen cristales durante durante la conservación calentar a 37ºC antes de diluirlo.

Una vez preparado conservar entre2º y 8ºC

Sacar los reactivos una hora antes de realizar el test Sacar toda la cantidad de pocillos necesarios

Para la determinación de IgG: añadir 100 ul de diluyente de muestras + 5 ul de muestra, en los pocillos correspondientes, agitar la muestra dos minutos para garantizar la homogenización.

Para la determinación de IgM: añadir 25 ul de sorvenmte IgG a todos los pocillos exepto a los pocillos donde se dispensen controles, añadir 5ul de muestra, seguidamente 75 ul de diluyente de muestra homogenizar por dos minutos.

En ambos casos tapar mediante la lámina adhesiva e incubar en estufa/ baño maría durante 30 minutos a 37ºC

Retirar la lámina adhesiva, aspirar el contenido de todos los pocillos y lavar 5 veces con 300 ul de solución de lavado

Añadir 100 ul de sustrato a los pocillos

Incubar a temperatura ambiente por 20 minutos en la oscuridad

Añadir 50 ul de solución de parada todos los pocillos

Valorar espectrofotograficamente a 450/620 nm antes de 1 hora

FORMULA: VALOR DE ABSORVACIONCIA CUTT OFF