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OBIETTIVO
Illustrare le tecniche di allestimento di base sucampioni biologici emessi spontaneamente dalpaziente o prelevati attraverso l'utilizzo di mezzidi induzione, e metodi di processazione piùrecenti,quali il cell-block o citoincluso .
l Epitelio squamoso stratificato: cavità orale, oro-ipofaringe, laringe
l Epitelio respiratorio cilindrico stratificato ciliato: trachea, bronchi principali
l Epitelio respiratorio cilindrico monostratificato: bronchioli, bronchioli terminali, alveoli ( pneumociti di tipo 1 e 2 e macrofagi alveolari)
CELLULARITA’
IN LABORATORIO...MATERIALE FRESCO
Il campione perviene in laboratorio allegato ad unarichiesta che deve essere compilata adeguatamente intutte le sue parti;
Successivamente il campione verrà descrittomacroscoscopicamente e identificato con un numerocitologico e barcode
VIA SPONTANEA: ESPETTORATO
INDOTTA: BRUSHING BRONCHIALE
BRONCOASPIRATOBRONCOLAVAGGIOFNA
VERSAMENTO PLEURICO
IN LABORATORIO...
ESPETTORATOl L’esame richiede la raccolta di 3 campioni in giornate consecutive
(anche con kit SaveCyt U)
Emesso spontaneamente con colpi di tosse e versato in un recipiente a bocca larga
Consegna in laboratorio
l Accettazione
l Allestimento
1 – PREPARA 2 VETRI PER OGNI CAMPIONE
NumeroNome1°ESP
NomeRepartomateriale
NumeroNome1°ESP
3-CON ANSA MONOUSO APPOGGIA SUL VETRO IL MATERIALE (DENSO NON SALIVA)
ALLESTIMENTO ESPETTORATO
5- FISSA IMMERGENDO DELICATAMENTE IN ALCOOL 95° o ATTRAVERSO L’UTILIZZO DI SPRAY BIO FIX
4-CON L’AIUTO DI UN TERZO VETRINO AMALGAMA E STRISCIA UNIFORMEMENTE IL CAMPIONE
N.B: per i campioni pervenuti con soluzione fissante si centrifuga il campione a 1800 rpm/min per 10 min. Dopodichè si prosegue come indicato dalle immagini precedenti.
COLORAZIONE PAPANICOLAOU
PRELIEVO INDOTTOUTILIZZO DEL FIBROBRONCOSCOPIO FLESSIBILE:
strumento a fibre ottiche con calibro di dimensioni contenute, in grado di passare il piano delle corde vocali e di scendere all’interno dell’apparato respiratorio.
BRUSHING BRONCHIALE
l SPAZZOLAMENTO (brushing) di una lesione superficiale sospetta di un bronco, impiegando un idoneo spazzolino (brush).
l Striscio del materiale prelevato su vetrini
l Fissazione in alcool 95° o spray
l Consegna in laboratorio
l Colorazione con Papanicolaou
BRONCOASPIRATO l ASPIRAZIONE : permette la valutazione di distretti periferici bronchiali
l Se il materiale è denso puo’ essere immessa una certa quantità di soluzione salina ( poi segnalata in richiesta) all’interno del bronco
l Aspirazione
l Raccolta del materiale in appositi contenitori
l Consegna in laboratorio
l Accettazione
ALLESTIMENTO DI BRONCOASPIRATON
OM
E----
------
REP
ARTO
------
MAT
ERIA
LE---
-
1-TRAVASA IN UNA PROVETTA CON SCRITTO IL N° DEL CAMPIONE
3- RECUPERA IL SURNATANTE NEL CONTENITORE ORIGINALE E RIPONI NEL FRIGORIFERO NEL VASSOIO
2- CENTRIFUGA 1800 rpm X 10 min
4- PREPARA 2 VETRI PER OGNI PAZIENTE
NumeroNomeBAS
NumeroNomeBAS
5- CON ANSA MONOUSO APPOGGIA SUL VETRINO IL MATERIALE RACCOLTO DAL FONDO DELLA PROVETTA
6-CON L’AIUTO DI UN TERZO VETRINO AMALGAMA E STRISCIA UNIFORMEMENTE IL CAMPIONE 7- FISSA IMMERGENDO
DELICATAMENTE IN ALCOOL 95°O CON SPRAY BIOFIX
NumeroNomeBAS
COLORAZIONE PAPANICOLAOU
LAVAGGIO BRONCOALVEOLARE-BALl LAVAGGIO: campionamento del tratto respiratorio profondo mediante
incuneamento del fibroscopio in un bronco subsegmentario. Dà la possibilità di campionare gli spazi alveolari.
l Si inietta una quantità variabile di fisiologia
l Aspirazione del materiale
l Raccolta in appositi contenitori
Diagnostica non tumorale: patologie interstiziali, polmonitiDiagnostica tumorale: carcinoma bronchioloalveolare, linfoma...
PRIMA DI ALLESTIRE
l Filtraggio blando con garza
l Divisione del materiale filtrato in due contenitori
Allestimento citologico
Immunofenotipizzazionecitometria a flusso
1- PREPARARE 3 VETRI 2- CITOCENTRIFUGARE I VETRI CON 200 MICROLITRI DI CAMPIONE TAL QUALE IN OGNUNO DEI DUE POZZETTI 1000 rpm X 6 min
3x
NomeRepartomateriale
NumeroNomeBAL
NumeroNomeBAL
200 +200 MICROLITRI
3x
Fissare in alcool 95° o con spray fix
COLORAZIONE PAPANICOLAOU
1x
2- CENTRIFUGA 1800 rpm X 10 min
3-ELIMINA IL SURNATANTE. RIPONI IL CAMPIONE RESIDUO NEL FRIGORIFERO NEL VASSOIO CORRISPONDENTE AL GIORNO DI ACCETTAZIONE Numero
NomeBAL
4- STRISCIARE 1 VETRO
1-TRAVASA IN UNA PROVETTA CON SCRITTO IL N° DEL CAMPIONE
N°
acc
ALLESTIMENTO BAL
FNA: FINE NEEDLE ASPIRATIONAGOASPIRAZIONE: può essere transbronchiale che campiona lesioni centrali, mediastiniche e linfonodali e transcutanea che campiona invece lesioni periferiche
l Agoaspirazione del materiale in sede ecografica
l Striscio di vetrini che vengono fissati in alcool 95°
l Eventuale lavaggio dell’ago utilizzato per il prelievo l in alcool 50° o in formalina al 10%
l Consegna ed accettazione in laboratorio
VETRINI STRISCIATI IN ALCOOL 95°
RIPORRE LA PROVETTA NEL FRIGORIFERO NELLA VASCHETTA CORRISPONDENTE AL GIORNO DI ACCETTAZIONE
1- APPORRE LA DATA SULLA PROVETTA E PREPARARE UN VETRINO
NomeCITO
NomeCITO
2- CITO-CENTRIFUGARE I VETRI CON 200 MICROLITRI DI CAMPIONE IN OGNUNO DEI DUE POZZETTI 1300 rpm X 6 min
200 +200 MICROLITRI
NomeCITO
FISSARE IN ALCOOL 95° o CON SPRAY BIOFIX
LAVAGGIO DELL’AGO IN ALCOOL 50°
AGOASPIRATI
COLORAZIONE PAPANICOLAOU
CELL-BLOCK AGOASPIRATISe il materiale prelevato fosse simile a un frustolo il tecnico in laboratorio lo traferisce in biocassetta da inclusione
Nel caso in cui il materiale non fosse un frustolo si procede come segue..
1)
2)
CELL-BLOCK AGOASPIRATI1) Si travasa il materiale in provetta e si centrifuga a 3000
giri per 10 minuti
2) Il sedimento viene risospeso con fisiologicae ri-centrifugato per 10 min a 3000 giri (per 2 volte)
3) Al pellet ottenuto vengono uniti PLASMA e TROMBOPLASTINA in rapporto 1: 2
CELL-BLOCK AGOASPIRATI4) Attraverso l’utilizzo di un’ansa monouso, con movimenti circolari, si risospende la soluzione fino alla creazione del coagulo
5) Utilizzando un puntale monouso si stacca il coagulo dall’ansa e lo si introduce in una biocassetta da inclusione
PROCESSO CITOINCLUSO
MONTAGGIO
PROCESSAZIONE
INCLUSIONE
TAGLIO
COLORAZIONE EMATOSSILINA EOSINA
IIC-BIOLOGIA MOLECOLARE-FISH
ROSE (Rapid On-Site Evaluation)
Presenza del citopatologo in sede di prelievo con conseguente valutazione dei campioni prelevati, l prelevare l strisciare l colorare l osservare l decidere se terminare la procedura diagnostica
o continuare ancora ad eseguire prelievi.
ROSELa presenza del citopatologo in sede di
prelievo consente di poter dare indicazioni in tempo reale sull’adeguatezza del prelievo ottimizzando la quantità e la qualità del materiale prelevato e
garantendo la diagnosi citomorfologica e la caratterizzazione molecolare della neoplasia
Consente di aumentare la sensibilità del prelievo e di diminuire il numero degli inadeguati e dei falsi negativi
VERSAMENTO PLEURICOTORACENTESI: manovra chirurgica che consente di estrarre dal cavo pleurico, spazio virtuale compreso tra i due foglietti pleurici che rivestono i polmoni e la superficie interna del torace, il liquido pleurico che in tale spazio si è accumulato.
• aspirazione praticata attivamente con il pistone di una grossa siringa
• con modalità “a caduta ”, lasciando che il liquido pleurico defluisca lentamente dal torace attraverso l’ago infisso nella parete toracica, fin nella sacca di raccolta dalla quale potrà poi essere recuperato in contenitori appositi
l Consegna ed accettazione del materiale in laboratorio
l Allestimento di vetrini
l Allestimento di cell-block, molto utile per metodiche di immunoistochimica, FISH, biologia molecolare
VERSAMENTO PLEURICO
VERSAMENTO PLEURICO
NomeRepartomateriale
1-TRAVASA IN UNA PROVETTE CON SCRITTO IL N° DEL CAMPIONE
N°
acc
2- CENTRIFUGA 1800 rpm X 10 min
3-ELIMINA IL SURNATANTE. RIPONI IL CAMPIONE RESIDUO NEL FRIGORIFERO NEL VASSOIO CORRISPONDENTE AL GIORNO DI ACCETTAZIONE
NumeroNomeLIQ
NumeroNomeLIQ
5x 3xPAPANICOLAU
4- Preparare 3 vetri
5x
200 +200 MICROLITRI Numero
NomeLIQ
Fissare in alcool 95° per almeno 15 minuti O CON SPRAY BIOFIX papanicolaou
5- CITOCENTRIFUGARE I VETRI CON 200 MICROLITRI DI CAMPIONE IN OGNUNO DEI DUE POZZETTI 1000 rpm X 6 min
STRISCIARE I VETRINI NEL CASO IN CUI IL PELLET LO PERMETTA
NumeroNomeLIQ
COLORAZIONE PAPANICOLAOU
1. Travasare il contenuto in una provetta
2. Centrifugare 10 minuti a 3000 giri
3. Gettare surnatante nel contenitore originale
4. Sul sedimento ottenuto aggiungere 100 microlitri di PLASMA e
200 microlitri di TROMBOPLASTINA , mantenendo il rapporto di 1:2
5. Agitare con un’ansa fino a formazione del COAGULO
6. Mettere in biocassetta da inclusione riportante il n citologico corrispondente al
campione, meglio se tra due spugnette per evitare la perdita di materiale.
CELL-BLOCK DA LIQUIDO PLEURICO