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Microbiologa II UNIVERSIDAD DE
BELGRANO
MARISA M RODRIGUEZ Licenciada en Ciencias Biolgicas
ANALISIS BACTERIOLOGICO DE AGUAS
AGUA POTABLE y Libre de microorganismos patgenos y libre
de minerales, de sustancias orgnicas que puedan producir efectos fisiolgicos adversos.
y Libre de turbidez visible, color y sabor aceptables. y Podr ser ingerida o utilizada en el
procesamiento de alimentos sin temor por los efectos nocivos que pueda producir sobre la SALUD.
Artculo 982 "Agua potable de suministro pblico y uso domiciliario" (1994) PARAMETROS MICROBIOLOGICOS
Aguas para consumo humano y Rcto. de Bacterias Aerobias Mesfilas < 500 UFC/ml y Rcto. Coliformes totales NMP igual o < de 3/100 ml y Rcto. Escherichia coli ausencia en 100 ml y Rcto. Pseudomonas aeruginosa ausencia
en 100 ml
Tratamiento de aguas residuales antes de su eliminacin o reutilizacin. Mtodos de purificacin del agua
para proporcionar agua potable y segura.
Control microbiolgico del agua
Como evitar las enfermedades de
transmisin hdrica? P R E V E N C I O N
Pero y En que nmero? y Que microorganismo? y Sistema de deteccin temprana
"alarma?
Aislamiento de microorganismos
patgenos H2O de peligro potencial para la salud.
Que buscamos? y Indicadores de contaminacin fecal. y Deben estar presente en gran nmero
en el intestino del hombre y animales de sangre caliente
y Fcilmente detectable por mtodos analticos simples y econmicos y No debe proliferar en aguas naturales y Debe tener una persistencia en el
agua similar a la de los patgenos.
Que buscamos? y FAMILIA ENTEROBACTERIACEAE y Enterobacterias y Coliformes totales y Coliformes termotolerantes y E. coli
BACILOS GRAM NEGATIVOS NO ESPORULADOS OXIDASA NEGATIVA
AEROBIOS ANAEROBIOS FACULTATIVOS UTILIZAN GLUCOSA (ACIDO Y GAS)
REDUCEN NITRATOS
Coliformes totales CARACTERSTICAS y Origen (habitat) fecal y no fecal y Bacilos gram-negativos, oxidasa (-) y Crecen en presencia de sales biliares y Fermentan lactosa con produccin de cido y gas a 35-37 C en 48 hs
? ?
?
Microorganismo Oxidasa
Pseudomonas aeruginosa +
Neisseria spp. + Aeromonas spp. +
Vibrio spp.* + Moraxella +
Familia Enterobacteriaceae -
La prueba debe realizarse utilizando cultivos frescos (18-24 horas), y que
no provengan de medios con azcares con pH cido
G (-) cepas que fermenten
la lactosa
ssales biliares Violeta cristal Rojo neutro
Lactosa Peptona
un indicador visual de pH, distinguiendo as las bacterias gram negativas que pueden fermentar la lactosa (Lac+) y las que no pueden (Lac-).
Presencia de coliformes totales
Desventajas: Crecimiento en el sistema de distribucin. Ser habitantes normales del suelo, plantas y agua. No siempre estn presentes durante los brotes de origen hdrico.
Coliformes totales
Coliformes termotolerantes Su presencia en agua tratada indica: y Contaminacin fecal y Inadecuado tratamiento para remocin
de bacterias fecales. y En agua cruda indica el grado de
contaminacin, el tipo de tratamiento para potabilizarla y el riesgo sanitario.
?
son capaces de fermentar lactosa a 44-45 C se
conocen como coliformes termotolerantes
Coliformes termotolerantes CARACTERSTICAS y Coliformes que fermentan la lactosa a
44,5C con produccin de gas. y Incluyen Escherichia coli, Citrobacter
spp.,Klebsiella spp. y Enterobacter spp. y Origen (hbitat) predominantemente
fecal
Escherichia coli y Pertenece a los Coliformes
Termotolerantes y Origen (hbitat) intestino del hombre y animales de sangre caliente Su presencia indica: y Contaminacin fecal y Inadecuado tratamiento para remocin
de bacterias fecales
Pseudomona aeruginosa CARACTERSTICAS y Patgeno oportunista y Bacilo gram- negativo, no fermentador,
oxidasa positivo, mvil, produce pigmentos
y Muy diseminado en el medio ambiente y Moderada resistencia a la cloracin
Mtodos para Detectar Coliformes y NMP y Basado en probabilidad estadstica y NO es recuento directo y Tcnica lquida y Medio Slido y Recuento directo en medio
{
NMP/MPN y Las bacteria tienen una distribucin al
azar. y Los organismos no se aglutinan. y Si hay un microorganismo presente,
crecer. y PERO. y Existen las condiciones apropiadas para
crecer
NMP-El mtodo y Serie de diluciones de la muestra de
cultivo, en un medio lquido adecuado para el crecimiento de dicho organismo de un volumen diez veces mayor.
y Se incuban las muestras de esos tubos y, pasado un tiempo, se examinan los tubos.
NUMERO MS PROBABLE El mtodo se basa en determinar la presencia o ausencia (positivo o negativo) de atributos especficos de microorganismos en copias obtenidas por diluciones consecutivas a partir de muestras de suelo u otros ambientes. Se basa en el principio de que una nica clula viva puede desarrollarse y producir un cultivo turbio.
NMP y Aquellos tubos que recibieron una o
ms clulas microbianas procedentes de la muestra, se pondrn turbios, los tubos que no recibieron ninguna clula permanecern transparentes.
NPM y Al aumentar el factor de dilucin, se
alcanza un punto en el que algunos tubos contendrn tan slo un microorganismo y otros tubos no contendrn ninguno.
y Al calcular la probabilidad de que los tubos no hayan recibido ninguna clula, se puede estimar el nmero ms probable de microorganismos presentes en la muestra original, a partir de una tabla estadstica.
y La precisin del mtodo del nmero ms probable aumenta con el nmero de tubos que se usan.
10 ml Caldo Brila-Fluorocult
5 ml Caldo Brila-Fluorocult
Sembrar 10ml
Sembrar 1ml
Sembrar 0.1ml
Incubar 48 hs a 37C.
Seleccionar los tubos que posean gas en el interior de la campana de Durham
TABLA 1 Nmero ms probable en 100 ml. usando 3 tubos sembrados con 10, 1 y 0,1 ml. de muestra
Mtodo de Wilson en caldo Brila Fluorocult
Produccin de gas +
Coliformes totales - No Coliformes UV
fluorescencia Reactivo de
Kovacs(indol)
Fluorescencia +
Fecales (E. coli)
Sin turbidez Anillo rojo +
En el mismo tubo
Turbidez
Caldo citrato (48hs a 37C)
No fecales Ausencia de NO FECALES
MEDIDAS DEL CRECIMIENTO MICROBIANO.
Rcto. de clulas totales
Muestras en porta (Camara de Petroff-
Hausser)
TURBIDIMETRIA
MD
MID
No diferencia clulas viables de no viables
Contadores electrnicos de partculas
MCFARLAND
Estndares de turbidez Saber que el nmero de bacterias (UFC/mililitro) Una escala que va de 0.5 a 10. Patrones de BaCl2/ H2SO4
0.5 1 2
Escala 0.5 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Nro. Aprox de bacteria x108
1.5 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30
BaCl2 (1%) 0.05 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0
H2SO4(1%)
9.95 9.9 9.8 9.7 9.6 9.5 9.4 9.3 9.2 9.1 9.0
Precipitacin qumica y una suspensin
bacteriana.
RECUENTO DE CLULAS VIABLES VIABLES Clulas capaces de dividirse y dar descendencia. EXTENCION EN PLACA:
Superficie seca Vol de siembra 100l Cc inculo inicial
UFC
Hasta cuando?
100l
DILUCIONES Seriadas 1/10
Inculo
Del tubo del inculo pipetear 100 l y trasvasar al tubo 1, homogeneizar bien y repetir la operacin para los otros tres tubos. Luego sembrar 100l en la placa que corresponde a cada dilucin.
1/10 1/100 1/1000 1/10000
1 2 3 4
100 l 100 l 100 l 100 l
100 l 100 l 100 l 100 l
Diluciones del inculo
900 l caldo(MH/BHI/TS) o SF c/u
Recuento de inculo
Dilucin 1 / 10 Dilucin 1/100 5000 colonias 500 colonias Dilucin 1/1000 Dilucin 1/10000 50 colonias 5 colonias
VERTIDO EN PLACA
TC agar fundido Homogenizacin
UFC al vol de siembra