Colorazione delle Spore

Premessa: Spora dal greco seme è una fase peculiare del ciclo vitale di alcuni batteri presenti nel terreno i quali,alla forma vegetativa,fanno seguire la sporulazione .

La Spora è una forma batterica di vita Latente,profondamente diversa dalla forma vegetativa,priva di attività metaboliche,straordinariamente disidratata e resistente a molti agenti fisico-chimico quali radiazioni ionizzanti e ultravioletti,antibiotici,enzimi idrolitici.

Resiste ad alte temperature ,all’essiccamento,al congelamento alle elevate pressioni,a valori estremi di pH

Rappresenta una forma di adattamento a situazioni sfavorevoli per proteggere il patrimonio genetico.

Resistenza della Spora

L’elevata resistenza della Spora deriva dall’acido DIPICOLINICO che,legandosiagli ioni calcio forma il dipicolinato di calcio .La Spora batterica è un Endospora che si forma all’interno del corpo battericodetto Sporangio ,attraverso un processo di sporogenesi.In condizioni ottimali,la Spora sospende lo stato di quiescenza ed inizia il processo Di germinazione che la porterà alla forma tipica della specie.

Malattie.:L’elevata resistenza nel tempo costituisce un pericoloso fattore di diffusione di alcune malattie come il Tetano,Gangrena gassosa e il Botulismo quest ultimo Associato alla preparazione degli alimenti a lunga conservazione in anaerobiosi.L’unico modo per eliminarle è sterilizzare in autoclave a 121°C per 15 minuti.

Tecnica di colorazione delle Spore

Le spore sono difficili da colorare per la loro particolare struttura di rivestimento impermeabili ai coloranti normali.Uno dei metodi impiegati è quello con verde Malachite.

Materiali Chimico:

Verde Malachite, Safranina,olio per immersione. Materiale biologico:

colture microbiche: Escherichia Coli , Bacillus presenti in una fiala di Enterogermina.

Attrezzatura:

vetrini portaoggetti,bacchette,ansa,beacher,carta assorbente,spruzzetta con acqua, piastra elettrica, microscopio.

Procedimento

•Fissazione dei batteri sul vetrino•Scaldare l’acqua di un beacher fino all’ebollizione •Appoggiarvi sopra il supporto poggia vetrini•Posizionare i vetrini con i batteri fissati•Ritagliare della carta assorbente della stessa dimensione del vetrino•Versare sopra la carta la soluzione Verde malachite facendo attenzione di non fare cadere gocce di colorante sull’acqua calda ( vapori tossici).•Lasciare i vetrini esposti ai vapori per cinque minuti,aggiungendo eventualmente altre gocce di colorante per evitare alla carta di seccarsi.•Lavare delicatamente con acqua •Contrastare con Safranina per 30-60 secondi •Lavare con acqua ,sgocciolare e far asciugare all’aria•Osservare al microscopio con obiettivo a immersione

•RISULTATI I corpi Batterici appaiono rossi mentre le spore ,che possono essere interne al corpo batterico o isolate risultano Verde.