77
Concentration techniques for stool examinatio กกกกกกกกกกกกกกกกกกกก กกกกกกก Panupong Sahaisook Division of Parasitology Faculty of Medical technology

Concentration techniques for feacal examination

Embed Size (px)

Citation preview

Page 1: Concentration techniques for feacal examination

Concentration techniquesfor stool examinationsการตรวจอุ�จจาระด้�วยว ธี�เข้�มข้�น

Panupong SahaisookDivision of Parasitology

Faculty of Medical technology

Page 2: Concentration techniques for feacal examination

Stool specimen

fresh preserved

Routine procedures employed for examination of fecal specimen

direct smear

preserved

- concentration- permanent stain

Page 3: Concentration techniques for feacal examination

Stool examination

Qualitative technique Quantitative technique

Unconcentrationtechnique

Concentrationtechnique

- Simple smear

- Direct smear method of Beaver- Stoll’s dilution egg count- Kato-Katz technique

Flotation technique Sedimentation technique

- Brine flotation- Sugar flotation- Zinc-sulfate flotation

- Simple sedimentation- Centrifugal sedimentation- Formalin-ether concentration technique

Page 4: Concentration techniques for feacal examination

Concentration techniques

• เป็�นการทำาให้�ป็รสิ�ตในอุ�จจาระมารวมต�วก�น ในขณะเดี�ยวก�นม�การกาจ�ดีเศษอุ�จจาระอุ� นๆอุอุกไป็ ช่$วยให้�พบป็รสิ�ตทำ� ม�จานวนน�อุยห้ร�อุไม$สิามารถตรวจพบดี�วยว�ธี�การ wet smear

Page 5: Concentration techniques for feacal examination

Concentration techniques

• Sedimentation techniques– เป็�นการทำาให้�เช่�)อุป็รสิ�ตมารวมต�วก�นโดียอุาศ�ยการตก

ตะกอุน

• Flotation techniques– เป็�นการทำาให้�เช่�)อุป็รสิ�ตทำ� อุย+$ในอุ�จจาระลอุยต�ว

Page 6: Concentration techniques for feacal examination

Stool examination

Qualitative technique Quantitative technique

Unconcentrationtechnique

Concentrationtechnique

- Simple smear

- Direct smear method of Beaver- Stoll’s dilution egg count- Kato-Katz technique

Flotation technique Sedimentation technique

- Brine flotation- Sugar flotation- Zinc-sulfate flotation

- Simple sedimentation- Centrifugal sedimentation- Formalin-ether concentration technique

Page 7: Concentration techniques for feacal examination

Sedimentation technique

• Simple sedimentation

• Centrifugal sedimentation

• Formalin-ether concentration technique

Page 8: Concentration techniques for feacal examination

Simple sedimentation(gravity sedimentation)

1 .นาอุ�จจาระป็ระมาณ 1-2 g กวนใน NSS ป็ระมาณ 10-15 ml

2. กรอุงผ่$านผ่�าก/อุสิ 2 ช่�)น ลงในแก�วก�นแห้ลมและแบ$งลงใน centrifuge tube ป็ระมาณ 2 ml เต�ม NSS 10 ml ต�)งทำ�)งเอุาไว�ให้�อุ�จจาระตกตะกอุนป็ระมาณ 15 นาทำ�

3. เทำน)าสิ$วนบนทำ�)งจนเก�อุบห้มดีให้�เห้ล�อุเฉพาะตะกอุน 2-3 ห้ยดีทำ� ก�น tube แล�วจ2งนาตะกอุนทำ�)งห้มดีมาตรวจห้าป็รสิ�ต

Page 9: Concentration techniques for feacal examination

น)ากรอุงอุ�จจาระ

Page 10: Concentration techniques for feacal examination

นาน)าอุ�จจาระแบ$งใสิ$ Centrifuge tube 2 ml + NSS 10 mlต�)งทำ�)งไว� 15 นาทำ�

NSS 10 ml Simple sedimentation

อุ�จจาระ 2 ml

Page 11: Concentration techniques for feacal examination

เทำน)าสิ$วนใสิทำ�)งไป็ ให้�เห้ล�อุป็ระมาณ 2-3 ห้ยดีทำ� ก�น tube แล�วนาไป็ห้าเช่�)อุป็รสิ�ต

Simple sedimentation

Page 12: Concentration techniques for feacal examination

Simple Sedimentation

ข�อุดี�1. ทำาไดี�ง$าย2. ใช่�เคร� อุงม�อุน�อุย3.สิามารถตรวจไข$พยาธี�

ไดี�เก�อุบทำ�กช่น�ดีรวมทำ�)ง Cyst ขอุงโป็รโตซั�วดี�วย

4.ไข$พยาธี�และ Cyst ขอุงโป็รโตซั�วไม$เสิ�ยร+ป็ร$างห้ร�อุบ�ดีเบ�)ยว

ข้�อุเสี�ย1. ใช่�เวลานาน2.ช่$วงเวลาขอุงการตก

ตะกอุนต�อุงนานพอุทำ� จะแน$ใจไดี�ว$าไข$พยาธี�ทำ�กช่น�ดีตกตะกอุนห้มดีแล�ว

Page 13: Concentration techniques for feacal examination

Centrifugal sedimentation

1 .นาอุ�จจาระป็ระมาณ 1-2 g กวนใน NSS ป็ระมาณ 10-15 ml

2. กรอุงผ่$านผ่�าก/อุสิ 2 ช่�)น ลงในแก�วก�นแห้ลมและแบ$งลงใน centrifuge tube ป็ระมาณ 2 ml เต�ม NSS 10 ml

3. นาไป็ป็5 นทำ� 1500 rpm นาน 5 นาทำ� (2900 rpm 3 นาทำ�)

4. เทำ supernatant ทำ�)งไป็ แล�วนาตะกอุนไป็ตรวจดี+ดี�วยกล�อุงจ�ลทำรรศน6

Page 14: Concentration techniques for feacal examination

นาน)าอุ�จจาระแบ$งใสิ$ Centrifuge tube 2 ml + NSS 10 ml

NSS 10 ml Centrifugal sedimentation

อุ�จจาระ 2 ml

Page 15: Concentration techniques for feacal examination

Centrifugal sedimentation

ป็5 นทำ� 1500 rpm 5 นาทำ�ห้ร�อุ 2900 rpm 3 นาทำ�

Page 16: Concentration techniques for feacal examination

เทำน)าสิ$วนใสิทำ�)งไป็แล�วนาไป็ห้าเช่�)อุป็รสิ�ต

Centrifugal sedimentation

Page 17: Concentration techniques for feacal examination

Centrifugal Sedimentation

ข�อุดี�1. ทำาไดี�ง$าย2. รวดีเร7ว3. ไม$ต�อุงใช่�สิารเคม� นอุกจากน)าเกล�อุ (NSS)

เทำ$าน�)น

ข�อุเสิ�ยเศษขยะทำ� ป็ะป็นในอุ�จจาระย�งคงม�อุย+$และอุาจบดีบ�งห้ร�อุข�ดีขวางในการตรวจห้าพยาธี�และไข$พยาธี�ในอุ�จจาระ

Page 18: Concentration techniques for feacal examination

Formalin-ether concentration technique (FECT)

1 .นาอุ�จจาระป็ระมาณ 1-2 g กวนใน NSS ป็ระมาณ 10-15 ml

2 .กรอุงผ่$านผ่�าก/อุสิ 2 ช่�)น ลงในแก�วก�นแห้ลมและแบ$งลงใน centrifuge tube ป็ระมาณ 2 ml เต�ม 10% formalin 7 ml mix ให้�เข�าก�น ต�)งทำ�)งไว� 5 นาทำ�

3 .เต�ม ether 3 ml mix ให้�เข�าก�น4 .นาไป็ป็5 นทำ� 1500 rpm นาน 5 นาทำ� (2900 rpm 3

นาทำ�)5 .ใช่�ไม�แห้ลมเข� ยเศษอุ�จจาระทำ� เกาะอุย+$ระห้ว$างช่�)น ether

และ formalin อุอุกจากผ่น�งห้ลอุดี6 .เทำ supernatant ทำ�)งไป็ แล�วนาตะกอุนไป็ตรวจดี+ดี�วย

กล�อุงจ�ลทำรรศน6

Page 19: Concentration techniques for feacal examination

ค�ณสิมบ�ต�ขอุงสิารเคม�ทำ� ใช่�ใน FECT

1. 10% formalin ช่$วยร�กษาร+ป็ร$างและสิภาพขอุงเช่�)อุป็รสิ�ต

2. Diethyl ether (Ethyl acetate) ช่$วยละลายไขม�นและดี2งกากใยทำ� ม�น)าห้น�กเบาให้�ลอุยต�วข2)นมา

Page 20: Concentration techniques for feacal examination

นาน)าอุ�จจาระแบ$งใสิ$ Centrifuge tube 2 ml + formalin 7 mlต�)งทำ�)งไว� 5 นาทำ�

formalin 7 mlFECT

อุ�จจาระ 2 ml

Page 21: Concentration techniques for feacal examination

เต�ม diethyl ether 3 ml เขย$าแรงๆ (ระว�งแรงดี�นขอุง ether)

Ether 3 mlFECT

อุ�จจาระ 2 ml

Page 22: Concentration techniques for feacal examination

FECT

ป็5 นทำ� 1500 rpm 5 นาทำ�ห้ร�อุ 2900 rpm 3 นาทำ�

Page 23: Concentration techniques for feacal examination

การแยกช่�)นห้ล�งจากการทำาว�ธี� FECT

formalin

Ether

ตะกอุน

กากอุ�จจาระ

Page 24: Concentration techniques for feacal examination
Page 25: Concentration techniques for feacal examination

เทำน)าสิ$วนใสิทำ�)งไป็แล�วนาไป็ห้าเช่�)อุป็รสิ�ต

FECT

Page 26: Concentration techniques for feacal examination

Formalin- ether(ethyl acetate) concentration technique

ข�อุดี�1. ตรวจห้าไดี�ทำ�)ง cyst , egg

,larva (ยกเว�น trophozoite)

2. ethyl acetate ละลายไขม�น

3. formalin ร�กษาร+ป็ร$างขอุง cyst, , egg , larva เก7บไว�ไดี�นาน

ข�อุเสิ�ย 1. ใช่�เคร� อุงป็5 น, สิารเคม� 2. ไม$เห้มาะในการใช่�ตรวจห้า cyst ขอุง Giardia lambria และไข$ขอุง H. nana

Page 27: Concentration techniques for feacal examination

Formalin-ether concentration technique (FECT)

** ห้ล�งจากเต�ม 10% formalin จะต�อุงต�)งทำ�)งไว� 5 นาทำ� เพ� อุให้�ทำาป็ฏิ�ก�ร �ยาและสิามารถร�กษาสิภาพเช่�)อุป็รสิ�ตไดี� **

Modified Formalin-ether concentration technique (Modified FECT)

Page 28: Concentration techniques for feacal examination

Modified formalin-ether concentration technique (Modified FECT)

1 .ผ่สิมอุ�จจาระป็ระมาณ 1 g ก�บ 10% formalin ป็ระมาณ 15-20 ml กวนให้�กระจายต�วก�นดี�

2 .กรอุงอุ�จจาระผ่$านผ่�าก/อุสิ 2 ช่�)น ลงใน centrifuge tube ป็ระมาณ 10 ml

3 .เต�ม ether 3 ml ป็:ดีจ�กและ mix ให้�เข�าก�น4 .นาไป็ป็5 นทำ� 1500 rpm นาน 5 นาทำ� (2900 rpm 3

นาทำ�)5 .ใช่�ไม�แห้ลมเข� ยเศษอุ�จจาระทำ� เกาะอุย+$ระห้ว$างช่�)น ether

และ formalin อุอุกจากผ่น�งห้ลอุดี6 .เทำ supernatant ทำ�)งไป็ แล�วนาตะกอุนไป็ตรวจดี+

ดี�วยกล�อุงจ�ลทำรรศน6

Page 29: Concentration techniques for feacal examination

Stool examination

Qualitative technique Quantitative technique

Unconcentrationtechnique

Concentrationtechnique

- Simple smear

- Direct smear method of Beaver- Stoll’s dilution egg count- Kato-Katz technique

Flotation technique Sedimentation technique

- Brine flotation- Sugar flotation- Zinc-sulfate flotation

- Simple sedimentation- Centrifugal sedimentation- Formalin-ether concentration technique

Page 30: Concentration techniques for feacal examination

Flotation technique

• Concentrated brine flotation

• Sugar flotation

• Zinc sulfate centrifugal flotation technique

Page 31: Concentration techniques for feacal examination

Concentrated brine flotation technique

Reagent- Saturated sodium chloride solution

เตร�ยมโดียใสิ$เกล�อุแกงในน)าเดี�อุดีห้ร�อุน)าร�อุนจนเกล�อุไม$ละลายในน)าอุ�กต$อุไป็ ต�)งทำ�)งไว�ให้�เย7น ตรวจความถ$วงจาเพาะให้�ไดี�ไม$ต ากว$า 1.20 และต�อุงกรอุงก$อุนนามาใช่�

Page 32: Concentration techniques for feacal examination

Method

Feces 0.5-1 g + saturated NaCl 2 mlในขวดีป็ากกว�างป็ระมาณ 2 cm สิ+ง 3-4 cm

กวนให้�เข�าก�น

เต�ม saturated NaCl ลงไป็จนเต7มพอุดี�

วาง cover slip บนป็ากขวดี 10-15 นาทำ�

ยก cover slip ข2)นตามแนวดี� ง

นามาป็:ดีบน slide ตรวจดี+ดี�วยกล�อุงจ�ลทำรรศน6

Page 33: Concentration techniques for feacal examination

Concentrated brine flotation

ข�อุดี�1 .เห้มาะสิาห้ร�บการ

ตรวจห้าไข$พยาธี�ป็ากขอุ และไข$ขอุงพยาธี�ช่น�ดีอุ� นๆ ยกเว�นช่น�ดีทำ� ม� operculum

2 .เกล�อุแกง ห้าง$าย ราคาถ+ก

3 .ทำาง$าย สิะดีวก

ข�อุเสิ�ย1 .ตรวจไม$พบไข$พยาธี�ทำ� ม�

operculum2 .ตรวจไม$พบไข$พยาธี�ทำ� ม�ค$า

ความถ$วงจาเพาะมากกว$า 1.18 เช่$น1.Ascaris lumbricoides

(unfertilized egg)2.Taenia spp. Egg3.Schistosoma egg

3. Protozoa cyst อุาจถ+กทำาลายถ�าต�)งทำ�)งไว�นาน

Page 34: Concentration techniques for feacal examination

Sugar flotation technique

ReagentSugar solution (sp.gr.1.180)

- Cane sugar 1,000 g- Water 1,125 ml- Phenol 10 ml

ละลายน)าตาลทำรายในน)าจนห้มดี เต�ม phenol ลงไป็ 10 ml เพ� อุเป็�น preservation ตรวจห้าความถ$วงจาเพาะก$อุนนามาใช่�

Page 35: Concentration techniques for feacal examination

Method

Feces 0.5-1 g + sugar solution 2 mlในขวดีป็ากกว�างป็ระมาณ 2 cm สิ+ง 3-4 cm

กวนให้�เข�าก�น

เต�ม sugar solution ลงไป็จนเต7มพอุดี�

วาง cover slip บนป็ากขวดี 20-30 นาทำ�

ยก cover slip ข2)นตามแนวดี� ง

นามาป็:ดีบน slide ตรวจดี+ดี�วยกล�อุงจ�ลทำรรศน6

Page 36: Concentration techniques for feacal examination

Sugar flotation

ข�อุดี�

เห้มาะสิมสิาห้ร�บการตรวจห้า

Cyst

ข�อุเสิ�ย

ใช่�เวลานาน

Page 37: Concentration techniques for feacal examination

Zinc sulfate flotation technique

ReagentZinc sulfate solution (sp.gr.1.180)

- ZnSO47H2O 331 g

- Water 1,125 ml

ละลาย Zinc sulfate ในน)าอุ� $นจนห้มดี ตรวจห้าความถ$วงจาเพาะก$อุนนามาใช่�

Page 38: Concentration techniques for feacal examination

MethodFeces 1 g + น��า 1 ml

กวนให้�เข้�าก�น เต มน��าอุ�ก 10 ml

กรอุงด้�วยผ้�าก�อุซ 2 ชั้��น

centrifuge ที่� 1,500 rpm 2 นาที่� เที่สี!วนใสีที่ �ง

ใสี! zinc sulfate solution 1 ml กวนให้� เข้�าก�น แล้�วเต มอุ�กจนเก$อุบเต&ม tube

centrifuge ที่� 2,000 rpm 1 นาที่� สีารล้ะล้ายจะแยกเป็(นชั้��น

zinc sulfate

surface film

sediment

Page 39: Concentration techniques for feacal examination

ใชั้� wire loop เสี�นผ้!าศู*นย+กล้าง~ 5 mm แตะบนผ้ วบนสี�ด้ข้อุง suspension

น�าน��าที่� ต ด้มาก�บ loop ห้ยด้ล้งบน slide 2-3

loop

ป็,ด้ cover glass ตรวจด้*ด้�วยกล้�อุงจ�ล้ที่รรศูน+

Page 40: Concentration techniques for feacal examination

Zinc sulfate flotation

ข�อุดี�

ไดี�ผ่ลดี�สิาห้ร�บการตรวจห้า

Cyst, ไข$และต�วอุ$อุนขอุงพยาธี�บางช่น�ดี เช่$น

เดี�ยวก�นก�บว�ธี� Brine flotation

ข�อุเสิ�ย

ใช่�เวลานาน ข�)นตอุนย�$งยาก

Page 41: Concentration techniques for feacal examination

Stool examination

Qualitative technique Quantitative technique

Unconcentrationtechnique

Concentrationtechnique

- Simple smear

- Direct smear method of Beaver- Stoll’s dilution egg count- Kato-Katz technique

Flotation technique Sedimentation technique

- Brine flotation- Sugar flotation- Zinc-sulfate flotation

- Simple sedimentation- Centrifugal sedimentation- Formalin-ether concentration technique

Page 42: Concentration techniques for feacal examination

Quantitative techniques(Estimation of helminth eggs in feces)

• เป็�นการตรวจห้าจานวนไข$ขอุงป็รสิ�ตทำ� ม�อุย+$ในอุ�จจาระ

• สิามารถบ$งช่�)ถ2งภาวะความร�นแรงขอุงโรคพยาธี�• ห้น$วยน�บเป็�น epg : egg per gram

(จานวนไข$พยาธี�ต$อุอุ�จจาระ 1 กร�ม)• ม�ป็ระโยช่น6ในการต�ดีตามผ่ลการร�กษา

Page 43: Concentration techniques for feacal examination

Method for estimated helminth eggs in feces

• Direct smear method of Beaver

• Stoll’s dilution egg count

• Kato-Katz technique

Page 44: Concentration techniques for feacal examination

Direct smear method of Beaver

เป็�นการ smear อุ�จจาระลงบน slide และนามาห้าน)าห้น�กขอุงอุ�จจาระโดียเทำ�ยบก�บ standard smear ซั2 งอุาศ�ย Photoelectric light meter เพ� อุว�ดีแสิงผ่$าน ต$อุมาจ2งไดี�ดี�ดีแป็ลงโดียใช่�การช่� งน)าห้น�กห้ร�อุป็ระมาณการว$า อุ�จจาระแต$ละคร�)งจะไดี�จานวนอุ�จจาระ 2 mg เม� อุน�บไข$แล�วจ2งมาคานวณห้าจานวนไข$ต$อุอุ�จจาระ 1 กร�ม

Page 45: Concentration techniques for feacal examination

Direct smear method of Beaver

ต�วอุย$างตรวจน�บไข$พยาธี�ไสิ�เดี�อุนจากอุ�จจาระ 2 mg พบไข$พยาธี� 200 ใบ

อุ�จจาระ 2 mg พบไข$พยาธี�ไสิ�เดี�อุน 50 ใบอุ�จจาระ 1000 mg จะพบ (50x1000)/2

= 25000 epg

Page 46: Concentration techniques for feacal examination

Stoll’s dilution egg count

• ว�ธี�น�)ใช่�ก�นแพร$ห้ลาย

• ไม$เห้มาะก�บผ่+�ทำ� ต�ดีเช่�)อุพยาธี�จานวนน�อุย (light infection)

• ห้ล�กการค�อุการนาอุ�จจาระมาเจ�อุจางใน stoll’s flask ทำ� ม�ข�ดีบอุกป็ร�มาตรแน$นอุนทำ� คอุขวดี น�บจานวนไข$พยาธี�และคานวณไข$พยาธี�ต$อุอุ�จจาระป็กต� (formed stool) 1 กร�ม

Page 47: Concentration techniques for feacal examination

อุ�ป็กรณ6- stoll’s flask ทำ� ม�ข�ดีบอุกป็ร�มาตร 56 และ 60 ml

(ห้ร�อุใช่� Erlenmayer flask แทำน)

- 0.1 N NaOH

- Glass bead 5-10 เม7ดี- stoll’s pipette : 0.15, 0.075 ml (ห้ร�อุ autopipette 150, 75 ul)

Page 48: Concentration techniques for feacal examination

0.1 N NaOH 56 ml

เต�มอุ�จจาระถ2งข�ดี 60 ml (4 g)

glass bead 5-10 เม7ดี เขย$าแรงๆ

56 ml 60 ml

ว�ธี�ทำา

Page 49: Concentration techniques for feacal examination

pipette 0.15 ml ใสิ$บน slide (เขย$า flask ทำ�กคร�)งก$อุน pipette)

ป็:ดีดี�วย cover glass 22x40 mm

ตรวจน�บไข$พยาธี�ดี�วยกล�อุงจ�ลทำรรศน6

คานวณ จานวนไข$ทำ� น�บไดี� x dilution factor x factor อุ�จจาระ

= จานวนไข$/ อุ�จจาระ 1 g (epg)*** ถ�าอุ�จจาระแข7งมากให้�เก7บค�างค�นในต+�เย7นเพ� อุให้�อุ$อุนต�ว

Page 50: Concentration techniques for feacal examination

อุ�จจาระ 4 ml ในสี!วนผ้สีม ที่��งห้มด้ 60 ml.

Dilution = 4 = 1:15

60

ถ้�าน�าอุ�จจาระมา 0.15 ml (150 ul)Dilution = 1 x 0.15 = 1 15 100

Factor = 100

Dilution factor มาไดี�อุย$างไร ??

Page 51: Concentration techniques for feacal examination

อุ�จจาระ 4 ml ในสี!วนผ้สีม ที่��งห้มด้ 60 ml.

Dilution = 4 = 1:15

60

ถ้�าน�าอุ�จจาระมา 0.075 ml (75 ul)Dilution = 1 x 0.075 = 1 15 200

Factor = 200

แล�วถ�าดี+ดีสิารละลายอุอุกมา 0.075 ml ล$ะ??

Page 52: Concentration techniques for feacal examination

Factor สิภาพอุ�จจาระformed 1

soft 1.5

mushy, loose 2

mushy-diarrheic 3

diarrheic, watery 4,5

Page 53: Concentration techniques for feacal examination

Stoll’s dilution egg count techniqueต�วอุย$างตรวจน�บไข$พยาธี�ป็ากขอุจาก Formed stool ดี�วยว�ธี� stoll’s dilution egg count โดียดี+ดีสิารละลายอุอุกมา 0.15 ml พบไข$พยาธี� 40 ใบ จงคานวณห้าป็ร�มาณการต�ดีเช่�)อุ

จากสิ+ตร จานวนไข$ทำ� น�บไดี� x dilution factor x factor

สิภาพอุ�จจาระ

Page 54: Concentration techniques for feacal examination

Stoll’s dilution egg count technique

จากโจทำย6จานวนไข$พยาธี�ป็ากขอุ 40 ใบDilution factor 100Factor อุ�จจาระ 1

ป็ร�มาณการต�ดีเช่�)อุต$อุอุ�จจาระ 1 กร�ม= 40x100x1 = 4000 epg

Page 55: Concentration techniques for feacal examination

การป็ระเม นความร�นแรง

Page 56: Concentration techniques for feacal examination

ป็5จจ�ยทำ� ม�ผ่ลต$อุการคานวณจานวนไข$พยาธี�1. ระยะขอุงการต�ดีเช่�)อุ 1.1 ระยะเพ� งต�ดี 1.2 ระยะต�ดีนานแล�ว 1.3 ต�ดีเช่�)อุเร�)อุร�ง2. ขนาดีห้นอุนพยาธี� : พยาธี�ต�วให้ญ่$อุอุกไข$ > พยาธี�ต�วเล7ก3. ความร�นแรงขอุงโรค4. สิ� งแวดีล�อุม : อุาห้าร & metabolism ขอุงโฮสิต65. อุาย�ขอุงโฮสิต6 : เดี7ก < ผ่+�ให้ญ่$

Page 57: Concentration techniques for feacal examination

Cellophane thick smear

• เห้มาะสิาห้ร�บการตรวจห้าไข$ป็รสิ�ตในการศ2กษาการต�ดีเช่�)อุป็ระช่ากร (Field study)

• เป็�นไดี�ทำ�)ง Qualitative และ Quantitative technique (semi-quantitative)

Page 58: Concentration techniques for feacal examination

Cellophane thick smear (Kato’s thick smear technique)

ReagentMalachite green solution : เก7บในขวดีป็:ดีฝาเกล�ยว

Malachite green (crystal) 0.3 gDist. Water 10.0 ml

Wetting solution : เก7บในขวดีป็:ดีฝาเกล�ยวGlycerine 100

partsMalachite green solution 1.0 partDist. Water 100 parts(+Phenol)

Page 59: Concentration techniques for feacal examination

อุ�ป็กรณ61. ตะแกรงลวดีละเอุ�ยดี ขนาดีช่$อุง 0.1-0.15 มม.

2. กระดีาษซั�บ3. กระจกสิไลดี64. แผ่$น cellophane ขนาดี 22x44 มม. แช่$ใน น)ายา glycerine-malachite green solution อุย$างน�อุย 24 ช่ม.ก$อุนใช่�งาน

5. ไม�เข� ยอุ�จจาระ

Page 60: Concentration techniques for feacal examination

เข� ยอุ�จจาระ 50-60 mg ลงบนกระดีาษซั�บ

วางแผ่$นตะแกรง

ป็าดีเอุาอุ�จจาระทำ� กรอุงผ่$านร+ตะแกรง

ใสิ$ลงในแผ่$น slide

วางแผ่$น cellophane กดีให้�อุ�จจาระแผ่$อุอุก

ต�)งทำ�)งไว�ทำ� RT 30-60 นาทำ�

ตรวจดี+ดี�วยกล�อุงจ�ลทำรรศน6

Page 61: Concentration techniques for feacal examination

ข�อุดี�1. ง$าย สิะดีวก2. ตะแกรงลวดี : กรอุงเศษอุาห้ารทำ� ม�ขนาดีให้ญ่$อุอุก การตรวจง$ายข2)น3. ตรวจห้าไข$พยาธี�ไดี�ดี� * Ascaris , Trichuris4. Light infection

Page 62: Concentration techniques for feacal examination

ข�อุเสิ�ย1. การต�)งสิไลดี6ไว�นานทำาให้�ไข$พยาธี�บางช่น�ดีเสิ�ยร+ป็ร$าง **เป็ล�อุกไข$ hookworm,

ช่� )น Albuminous layer A. lumbricoides

2. ไข$พยาธี�ใสิกว$าป็กต� ** hookworm, Opisthorchis

3. Cyst, Trophozoite, Larva ถ+กทำาลาย

Page 63: Concentration techniques for feacal examination

Modified Kato’s thick smear technique(Kato-Katz technique)

เป็�นว�ธี�ทำ� ถ+กดี�ดีแป็ลงมาจากว�ธี�ขอุง Kato’s โดียการช่� งน)าห้น�กอุ�จจาระให้�ไดี�จานวนทำ� แน$นอุน ห้ล�งจากน�)นตรวจน�บไข$พยาธี�ทำ�)งห้มดีทำ� พบใน smear แล�วคานวณห้าจานวนไข$พยาธี�ต$อุอุ�จจาระ 1 กร�ม

Page 64: Concentration techniques for feacal examination

Modified Kato’s thick smear technique(Kato-Katz technique)

• เพ� มอุ�ป็กรณ6ข2)นมา 1 ช่�)น ค�อุ แผ่$นกระดีาษแข7งเจาะร+

Page 65: Concentration techniques for feacal examination

Modified Kato’s thick smear technique(Kato-Katz technique)

• แผ่$นกระดีาษแข7งเจาะร+–ห้นา 1.37 mm–กว�าง 3 cm–ยาว 4 cmเจาะร+ตรงกลางให้�ม�เสิ�นผ่$าศนย6กลาง 6 mm

ป็ร�มาตรอุ�จจาระทำ� ไดี�จากพ�มพ6 = 43.7 mg

Page 66: Concentration techniques for feacal examination

ว�ธี�ทำา

จ�ดีเตร�ยมอุ�ป็กรณ6และสิถานทำ� ให้�พร�อุม

Page 67: Concentration techniques for feacal examination

ว�ธี�ทำา

วางแผ่$นกระดีาษแข7งเจาะร+บนแผ่$นสิไลดี6

Page 68: Concentration techniques for feacal examination

ว�ธี�ทำา

สิวมถ�งม�อุให้�เร�ยบร�อุย

Page 69: Concentration techniques for feacal examination

ว�ธี�ทำา

นาไม�ต�กอุ�จจาระป็>าย feces มาวางบนกระดีาษรอุงซั�บห้ร�อุห้น�งสิ�อุพ�มพ6

Page 70: Concentration techniques for feacal examination

นาตะแกรงลวดีวางบน feces แล�วกดีให้�เน�)อุอุ�จจาระลอุดีผ่$านตะแกรงลวดีจากน�)นใช่�ช่�อุนพลาสิต�กป็าดีเอุาเน�)อุอุ�จจาระทำ� ลอุดีผ่$านตะแกรงมา

ว�ธี�ทำา

Page 71: Concentration techniques for feacal examination

นาเน�)อุอุ�จจาระทำ� ลอุดีผ่$านตะแกรงมาใสิ$ในร+ขอุงแผ่$นกระดีาษ ให้�เต7ม

ว�ธี�ทำา

Page 72: Concentration techniques for feacal examination

ยกเอุาแผ่$นกระดีาษอุอุกอุย$างระว�ง เพ� อุให้�อุ�จจาระวางอุย+$บน slide

ว�ธี�ทำา

Page 73: Concentration techniques for feacal examination

นาแผ่$น cellophane ทำ� จ�$มโช่กดี�วย glycerol-malachite green solution

วางทำ�บบนเน�)อุอุ�จจาระ

ว�ธี�ทำา

Page 74: Concentration techniques for feacal examination

พล�ก slide กล�บลงบนกระดีาษรอุงซั�บใช่�น�)วกดีให้�เน�)อุอุ�จจาระกระจายสิม าเสิมอุทำ� วๆก�น

ว�ธี�ทำา

Page 75: Concentration techniques for feacal examination

ต�)งทำ�)งไว� 30 นาทำ� แล�วนาไป็สิ$อุงดี+ดี�วยกล�อุงจ�ลทำรรศน6

ว�ธี�ทำา

Page 76: Concentration techniques for feacal examination

Kato-Katz technique

ต�วอุย$างตรวจน�บไข$พยาธี�แสิ�ม�าดี�วยว�ธี� Kato-Katz techniqueพบไข$พยาธี� 40 ใบ จงคานวณห้าป็ร�มาณการต�ดีเช่�)อุ

อุ�จจาระ 43.7 mg พบไข$พยาธี� 40 ใบอุ�จจาระ 1000 mg จะพบ 40 x 1000

43.7= 915.3 epgป็ระมาณ 916 epg

Page 77: Concentration techniques for feacal examination

Lab อุาทำ�ตย6น�)1 .น�กศ2กษาทำ�กคนทำาการตรวจอุ�จจาระขอุงตนเอุงดี�วยว�ธี�

simple direct exam, Kato-Katz technique รายงานผ่ลลงในใบ request สิ�เห้ล�อุง

2 .แบ$งกล�$มๆละ 3-4 คน ทำาการตรวจอุ�จจาระขอุงใครก7ไดี�ดี�วยว�ธี� Modified FECT พร�อุมรายงานผ่ลลงในใบ Request สิ�เห้ล�อุง

3 .ทำาการตรวจ Stool examination จาก specimen ทำ� เตร�ยมไว�ให้� ห้าเช่�)อุป็รสิ�ตช่น�ดีใดีก7ไดี�ทำ� )งสิ�)น 5 ช่น�ดีโดียไม$ซั)าก�น รายงานผ่ลลงในแบบรายงานผ่ลป็ฎิ�บ�ต�การทำ� ให้� Xerox ห้ร�อุ download อุน�ญ่าตให้�เป็:ดี Atlas ไดี� แต$ไม$อุน�ญ่าตให้�ถามอุาจารย6ป็ระจาโต/ะ (เก7บคะแนน Unknown)!! (ให้�เวลา 45 นาทำ�)