Contar células

Métodos para contar células

Métodos para contar

célulasElectrónicos

Basados en la microscopía

Medidores de la resistencia

Citómetro de flujo

Análisis de imagen

Hemocitómetro

Tinción de cultivos en monocapa

Métodos aproximados

Peso

Contenido de ADN

Contenido de proteínas

Contar células

El hemocitómetro o cámara de Neubauer

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(rojo)

(azul)

(verde)

(amarillo)(gris)

1 mm

Profundidad = 0,1 mm

La cuadrícula del hemocitómetro

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Se introduce la suspensión de células en el hemocitómetro

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La región de recuento del hemocitómetro

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La cámara de recuento del hemocitómetro

Contar células

Recuento de células con el hemocitómetro

Contar células

Observación con microscopio óptico y recuento de células

Contar células

Diferencias entre células vivas y muertas

Célula viva

Célula muerta

De las tres líneas, la del centro es la

que corresponde al límite del cuadrado

Contar células

Tinción de cultivos en monocapa

Contar células

Hay tres tipos de contadores electrónicos

Contar células

Funcionamiento del contador de células electrónico (1)

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Funcionamiento del contador de células electrónico (2)

Contar células

Es importante poner límites a los tamaños (diámetro celular) que se van a medir. El límite inferior elimina el

ruido electrónico y los residuos

celulares. El límite superior se pone en 30 micras o en

infinito.

Hay que establecer el rango de tamaños a medir

7,6 – 50 m

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El contador distingue las células muertas

Contar células

Con este contador no hay que marcar las células

Contar células

Recuento mediante análisis de imagen

Contar células

Fundamento del recuento de células por análisis de imagen

Contar células

Recuento de células por análisis de imagen

Contar células

Esquema del análisis de la imagen

Contar células

Recuento de células mediante citometría de flujo

Contar células

Citometría de flujo

La difracción de luz frontal permite contar las células y, a la vez, nos da información sobre su tamaño.

Contar células

Contar células

Estimación del número de células a partir del peso

Contar células

Estimación del número de células a partir contenido proteico

Contar células

Método de Bradford: fundamento

Contar células

Método de Bradford: protocolo

Contar células

Estimación del número de células a partir contenido de ADN

Contar células

Determinación de ADN por la fluorescencia del H33258

Contar células

Estimación del ADN por la absorbancia en el ultravioleta

Contar células

Comparación de los diversos métodos para contar células

Contar células

Métodos para determinar la viabilidad de las células

Métodos para determinar la viabilidad de las células

Síntesis de novo de proteínas

Incorporación de 3H-timidina al ADN

Exclusión del azul tripán

Marcaje fluorescente con naranja de acridina

y ioduro de propidio

Contar células

Viabilidad celular mediante tinción con azul tripán

Contar células

Viabilidad celular mediante tinción con azul tripán

Contar células

Naranja de acridina: atraviesa la membrana celular y tiñe los

ácidos nucleicos, generando una intensa fluorescencia de color

verde a bajas concentraciones.

Ioduro de propidio: no atraviesa la membrana de células intactas, pero sí la de las células dañadas.

Se une a los ácidos nucleicos, desplazando al naranja de

acridina y genera una intensa fluorescencia de color rojo.

Viabilidad celular: Naranja de acridina + Ioduro de propidio

Células vivas

Células muertas

Contar células

Medida de la viabilidad celular a partir de la síntesis de proteínas

Contar células

Medida de la viabilidad celular a partir de la síntesis de ADN