COVID-19’a Karı Nötralizan Antikor

1

COVID-19’a Karşı Nötralizan Antikor Geliştirilmesi

Prof. Dr. Şaban TEKİN

Dr. Aylin ÖZDEMİR BAHADIR

COVID-19 Türkiye Platformu Değerlendirme Toplantısı

17 Aralık 2020

2

COVID-19’a Karşı Nötralizan Antikor Geliştirilmesi

COVİD-19’u nötralize edecek antikor temelli bir Biyoteknolojik ilaçlar

Bu projede SARS-CoV-2 enfeskiyonunu önleyici, nötralize edici rekombinant antikorlar (scFv) geliştirerek,

biyoteknolojik bir ilaç geliştirilmesi amaçlanmıştır. Recombinant nötralizan antikorlar, virüse bağlanarak

virüsün hücreyi enfekte etmesini engelleyen antikorlardır.

3

Viral Antijenler ve Nötralizan Antikor Üretim Stratejileri

S1 proteini üretim

SDS-PAGE / Western Blot

S1

250

130

100

70

55

35

25

15

S1

S proteini üretimi

Western Blot

250

130

100

70

55

35

25

S

RBD

250

130

100

70

55

35

25

15

İnso

lub

le

So

lub

le

tota

l

RBD proteini üretim

Western Blot

S

S2

S1

Human-ACE

RBD

Fare AntiCovid Monoklonal Antikorlar

Fare AntiCovid scFV

SARS Cov-2 Antijenlerinin

Rekombinant Üretimi ve

Saflaştırma

4

Fare Hybridoma ve scFV Stratejileri

Dalaklardan/Hybridoma Hücrelerinden cDNA kütüphanesi

oluşturulması.

Bu antijenlere karşı 4 tane rekombinant scFv antikor kütüphanesi

oluşturuldu.

Biyopanning ile 4 farklı anti-COVİD scFv yapısı belirlendi.

Bu yapıların üretimi ve in vitro Sars Cov-2 nötralizasyon testleri

İmmun yanıtı yüksek farelerle 20 füzyon gerçekleştirildi.

S1, RBD, RBD ve NP (2) antijenlerine karşı MAb elde edildi.

Ayrıca Tavşanların S1 ile immunizasyonuyla poliklonal antikorlar elde

edilerek saflaştırıldı.

Monoklonal antikorların in vitro Sars Cov-2 nötralizasyon testleri

Farelerin atijenlerle immunizasyonu.

5

İnsan scFV Kütüphanesi Stratejisi

COVİD-19 Hastaları

mRNA İzolasyonu

İnsan scFV Kütüphaneleri

VL

VH

6

Genel ScFv a.a dizilimi

Ig proteini

Antijen (COVİD-19)

tanıma bölgesi

İnsan scFV Kütüphanesi Stratejisi

7

105 PFU/ml virüs + antikor, 1h, 37C

inkübasyonun ardından eklendi

105 PFU/ml virüs

%2 FBS içeren

Besiyeri

5000 ng/kuyu COV2-N1 antikoru




312,5 ng/kuyu COV2-N1 antikoru

COV2-N1 antikoruna ait nötralizasyon sonuçları

VERO E6 HÜCRE HATTI -NORMAL VERO E6 HÜCRE HATTI -ENFEKTE

8

105 PFU/ml virüs + antikor

1h 37C inkübasyonun

ardından eklendi

24h 48h

Kuyudaki media çekilerek antikor

aynı konsantrasyonda ilave edildi

92h

Kuyudaki media çekilerek antikor

aynı konsantrasyonda ilave edildi105 PFU/ml virüs

%2 FBS içeren

Besiyeri

5000 ng/kuyu COV2-N1antikoru




312,5 ng/kuyu COV2-N1 antikoru

Tekrarlanan dozda COV2-N1 antikoruna ait nötralizasyon sonuçları

Cov2-N1 monoklonal antikorunun nötralizan olduğu belirlendi.


9

105 PFU/ml virüs + antikor

1h 37Co inkübasyonun

ardından eklendi

105 PFU/ml virüs

%2 FBS içeren

Besiyeri

5000 ng/kuyu CoV2-N2

antikoru

2500 ng/kuyu CoV2-N2 antikoru



312,5 ng/kuyu CoV2-N2

antikoru

Cov2 N2 Antikoruna ait RTCA ile Gerçekleştirilen Nötralizasyon Deneyi


10

105 PFU/ml virüs

+ antikor 1h 37Co

inkübasyonun

ardından eklendi

24h 48h

Kuyudaki media çekilerek

antikor aynı konsantrasyonda

ilave edildi

92h

Kuyudaki media çekilerek

antikor aynı konsantrasyonda

ilave edildi

105 PFU/ml virüs

%2 FBS içeren

Besiyeri

5000 ng/kuyu CoV2 N2 antikoru

2500 ng/kuyuCoV2 N2 antikoru



312,5 ng/kuyu CoV2 N2 antikoru

Tekrarlanan Dozda CoV2-N2 Antikoruna ait RTCA ile Gerçekleştirilen Nötralizasyon Deneyi


Cov2-N2 monoklonal antikorunun nötralizan olduğu belirlendi.

11

Antikor Hafif zincir

Antikor Ağır zincir

CoV2-N1 nörtalizan antikorunun insana uyumlu hale getirilmesi

CoV2-N1 antikor yapısının 3 Boyutlu tahmini yapısı

- - - - Fare kökenli CoV2-N1

-------- İnsana uyumlu hale getirilmiş CoV2-N1

12

İN VİVO ETKİNLİK ÇALIŞMALARI

Lab Scale/Pilot üretim- Preklinik Çalışmalar- Chalenge Çalışmaları

K18-hACE2 Transgenik FarelerK18-hACE2 Transgenik Fareler

Placebo

SARS COV-2 VİRÜS

Hasta Fareler ???

Hastalanmayan Fareler ???

Nötralizan Antikorlar

SARS COV-2 VİRÜS

Klinik Çalışmalar

13

Prof. Dr. Şaban Tekin

Dr. Aylin Özdemir Bahadır

Dr. B. Koray Balcıoğlu

Doç. Dr. Fatma Yücel

Dr. Müge Serhatlı

Dr. Hasan Ümit Öztürk

Dr. Filiz Kaya

Dr. Melis Denizci Öncü

Dr. Esin Akçael

Dr. Hivda Ülbeği Polat

Dr. Oya Ari Uyar

Kübra Bilgiç

Dr. Kübra Açıkalın Coşkun

Dr. Berrak Gülçin Balaban

Dr. Neslihan Taşkale Karatuğ

Dr. Ebuzer Kalyoncu

Dr. Beytullah Özgür

Dr. Selma Dağtaş

Melike Oyuncakçı

Şeyma Işık

Esin Bayralı

Gamze Kılıç

İlkay Göksu Polat

G.Gizem Dinç

Nurettin Tokay

M. Masum Tekin

Melike Sarıçam

Serena Özabrahamyan

Sibel Zeybek

Furkan Şahin

Gizem Yılmaz

Gamze Gülden

Ayşenur Saygılı

Elif Güzar

Prof. Dr. Yusuf Tutar

Dr. Gülen Esken

Zeliha Nur Eroğlu

Yağmur Ünal

Mustafa Ekrem

İsmail Selim Yıldırım

Evrim Tekel

Gökhan Güler

Hatice Çelik

Harun Kocağaa

Şakir Sekmen

Mustafa Çakır

TEŞEKKÜRLER

Documents

COVID-19’a Karı Nötralizan Antikor