1.1 Aislamiento, caracterizaci6n, manipulaci6n y regula-ci6n de los genes del metabolismo nitrogenado de Es-cherichia coli y otros microorganismos.

1.2 Aislamiento y caracterizaci6n del gene de la enzima pe-nicilino acilasa de Escherichia coli y Kluvera citrophila.

1.3 Caracterizaci6n de las protefnas de membrana externade Salmonella typhi.

1.4 Genetica de enterotoxinas.1.5 Plasticidad de los plasmidos simbi6ticos de Rhizobium

leguminosarum bv. phaseoli.

Programa 1.1 Aislamiento, caracterizaci6n, manipulaci6ny regulaci6n de los genes del metabolismo nitrogenado deE. coli y otros microorganismos.

Con el objetivo de entender mejorlos mecanismos decontrol que gobiernan la expresi6n genetica en los organis-mos vivos hemos elegido el sistema experimental mejor ca-racterizado tanto bioqufmica como genetica y molecular-mente: la bacteria Escherichia coli. Nuestro interes en losmecanismos moleculares que intervienen en la regulaci6nde la expresi6n de los genes que conforman una red decontrol, asf como en el metabolismo nitrogenado bacteria-no nos ha llevado a adentrarnos en la regulaci6n del oper6ngltBDF de E. coli. Este oper6n contiene los genes (gltB ygltD) para la enzima glutamato sintasa (GOGAT) que catalizala sfntesis de glutamato, y dos genes adicionales (gltF y gltX)que codifican para dos protefnas con funci6n regulatoria.

La caracterizaci6n genetica y bioqufmica de mutantescercanas a los genes ya caracterizados para GOGAT, nos lle-v6 a proponer la existencia de dos genes mas dentro deloper6n ahora denominado gltBDFX. Estos resultados fue-

ron corroborados por datos de secuencia nucleotfdica en elgrupo de F. Bolfvar que, por otro lado, indicaron los posi-bles inicios y terminos de cada gen, asf como la secuenciade aminoacidos de las protefnas para las que codifican. Losresultados de los diferentes tipos de experiment os sugirie-ron una funci6n regulatoria para ambas protefnas, 10 quenos permiti6 generar una hip6tesis en la que proponemosque la protefna gltF interviene en la red de control que re-gula el metabolismo nitrogenado de la bacteria, denomina-da Ntr. A su vez, esto sugiere una relaci6n en los mecanis-mos de regulaci6n que controlan la sfntesis de glutamatopor GOGAT Yglutamina por la enzima glutamina sintetasa(GS). Es interesante hacer notar que ambas protefnas tam-bien regulan la sfntesis de GOGAT, actuando una como re-presor (gltF) y la otra como activador (gltX).

En este contexto, el objetivo general de este proyecto esel conocer la funci6n de las protefnas GltF y GltX tantoen el sistema Ntr como en la regulaci6n de la sfntesis deGOGAT.

Regulaci6n de la expresi6n genetica del oper6n que co-difica para la enzima glutamato sintasa (GOGAT) y dos pro-tefnas regulatorias en E. coli K12.A. Covarrubias, 1. Castano, N. Flores, ]. Mazariy F. Bolfvar1990/P/DBM/DBMP

Aislamiento y caracterizaci6n de los genes que codificanpara glutamato sintasa y glutamato geshidrogenasa de S.typhi.].1. Puente, M. Fernandez, B. Becerril, F. Bolfvar y E. Calva1986/T IDBM/FBMP

Construcci6n de mutantes sencillas y dobles en genesque participan en el manejo de nitr6geno en E. coli (gltF,gltX, glnG, glnB, glnD).

J. Mazari, A. Garciarrubio y A. Covarrubias1989/P/DBMP

Caracterizaci6n genetica, bioqufmica y molecular de mu-tantes obtenidas en el oper6n gltBDF.J. Mazari, A. Garciarrubio y A. Covarrubias1989/P/DBMP

Caracterizaci6n de las sefiales de iniciaci6n y terminaci6nde la transcripci6n dentro del oper6n gltBDF de E. coli.F. Bolivar, J. Mazari, y A. Covarrubias1989/P/DBMIDBMP

Programa 1.2 Aislamiento y caracterizaci6n del gene quecodifica para la enzima penicilino acilasa de E. coli y Kluve-ra citrophila.

La enzima penicilino acilasa se utiliza en la conversi6ndel antibi6tico penicilina, en el acido 6-aminopenicilanico;este, a su vez, es utilizado en la sfntesis de penicilinas semi-sinteticas.

Con el fin de caracterizar y manipular este gene, se ha 10-grado aislarlo del genoma de las bacterias E. coli ATCC11105 Y Kluvera citrophila. De esta manera se procede adeterminar la secuencia nucleotfdica de los genes para po-der manipularlos a nivel fino y colocarlos bajo la expresi6nde un promotor mas fuerte y regulable. Ademas se pretendetrabajar en aspectos relacionados con el procesamiento delprecursor de esta enzima, compuesta de dos polipeptidosque provienen de un precursor comun.

Sefiales metab6licas involucradas en la regulaci6n de losgenes de la penicilino acilasa de E. coli y K. citrophila.

E. Merino, F. Valle, F. Recillas, A. Vazquez y F. Bolfvar1986/P/S/DBM

Influencia de la velocidad especifica de crecimiento ymodo de inducci6n sobre la estabilidad de plasmidos, pro-cesamiento y expresi6n de penicilino acilasa en E. coli.E. Merino, G. Espinosa, A. L6pez-Munguia y a.T. Ramirez1989/P/S/DBIIDBM

Programa 1.3 Caracterizaci6n de las protefnas de mem-brana externa de Salmonella thypi.

La S. typhi es una bacteria gram-negativa, agente causalde la fiebre tifoidea en humanos. Nuestro objetivo es lograruna mejor comprensi6n de la estructura de la membranaexterna de este parasito, ya que probablemente participa eninteracciones con el huesped. Estamos estudiando la regula-ci6n genetica de las protefnas de la membrana, asi como suparticipaci6n en procesos inmuno16gicos.

Estudio sobre la variabilidad genetica del gene ompC deS. typhi.].1. Puente, M. Bobadilla, D. Juarez y E. Calva1988/P/S/DBM

Caracterizaci6n de la respuesta inmune humoral haciaprotefnas de la membrana externa de S. typhi.A. Verdugo, Y. L6pez-Vidal, F.]. Santana, ].1. Puente, G.M.Ruiz-Palacios y E. Calva1988/T IS/DBM-INNSZ

Regulaci6n y manipulaci6n del gene ompC de S. typhi.].1. Puente, D. Juarez, c. Arias, A. Verdugo, 1. Martinez y E.Calva1989/P/S/DBM

Clonacion y caracterizacion de los genes ompF y phoEde S. typhi.M. Fernandez, L. Gutierrez, A. Torres, R. Opropeza, A. Ver-dugo,].L. Puente y E. Calva1990lIlS/DBM

Campylobacter jejuni es un microorganismo causantede enteritis en una gran parte de los paises en desarrollo ypaises desarrollados. Dadas las dificultades para crecer esteorganismo en ellaboratorio, su patogenicidad fue reconoci-da hace solo diez arios. Se ha determinado que C.jejuni sin-tetiza una enterotoxina similar a la enterotoxina (LT) labil alcalor de E. coli y a la enterotoxina (CT) de Vibrio cholerae.

Hemos encontrado que S. typhi, el agente causante de lafiebre tifoidea tiene una enterotoxina similar aCT, aunqueno se ha caracterizado su estructura ni su funcion. EI objeti-vo es caracterizar los genes que codifican para las enteroto-xinas de C.jejuni y S. typhi.

La caracterizacion de los genes para estas enterotoxinasnos ayudara a entender su similitud con los genes de E. coliy de V. cholerae y el papel que estas toxinas juegan en losprocesos de virulencia.

Caracterizacion y analisis del gene de la enterotoxina deS. typhi.E. Avila,M. Fernandez, F. Sanchez, ].L. Puente y E. Calva1988/P/S/DBM

Clonacion del gene que codifica para la enterotoxina deCampylobacter jejuni.A. Verdugo, E. Avila, M. Fernandez,].L. Puente y E. Calva1988/P/SIDBM

Programa 1.5 Plasticidad de los plasmidos simbi6ticos deRhizobium leguminosarum bv. phaseoli.

Rhizobium es una bacteria del suelo que fija nitr6genoen asociaci6n con rakes de ciertas leguminosas formandoestructuras caracterfsticas llamadas n6dulos; el nitr6geno fi-jado en amonio es asimilado por la planta y utilizada parasu crecimiento.

La informaci6n gen€tica que Ie permite a Rhizobium no-dular y fijar nitr6geno esta codificada en plasmidos denomi-nados simbi6ticos.

Los plasmidos son moleculas de DNA con gran plastici-dad, ya que tienen una gran frecuencia de rearreglos geni-cos; pueden transferirse entre bacterias y las bacterias pue-den perderlos sin que se disminuya su viabilidad.

Usando como modelo un plasmido simbi6tico de Rhizo-bium leguminosarum bv. phaseoli, se estudiam, mediantetecnicas de genetica molecular, los rearreglos genicos y latransferencia de informaci6n simbi6tica entre bacterias. Porotra parte, se evalua la expresi6n de diferentes plasmidossimbi6ticos de una cepa de Rhizobium leguminosarum ca-rente de plasmidos simbi6ticos.

Rearreglos genicos del plasmido simbi6tico de Rhizo-bium leguminosarum by. phaseoli CFN23.R. Najera, M. Fernandez, E. Calva y G. Sober6n-Chavez1987/T/DBI

Expresi6n de distintos plasmidos simbi6ticos en una cepano simbi6tica de Rhizobium leguminosarum.B. Palmeros, R. Sanchez y G. Sober6n-Chavez1987/P/DBI