Die Regulation von Nampt nach .Schmerzlokalisierung und -charakteristik (Druck, Engegefühl) sowie

  • View
    212

  • Download
    0

Embed Size (px)

Text of Die Regulation von Nampt nach .Schmerzlokalisierung und -charakteristik (Druck, Engegefühl) sowie

  • INAUGURAL-DISSERTATION zur Erlangung des Grades eines Dr. med. vet.

    beim Fachbereich Veterinärmedizin der Justus-Liebig-Universität Gießen

    VVB VVB LAUFERSWEILER VERLAG

    édition scientifique

    VVB LAUFERSWEILER VERLAG STAUFENBERGRING 15 D-35396 GIESSEN

    Tel: 0641-5599888 Fax: -5599890 redaktion@doktorverlag.de www.doktorverlag.de

    VVB LAUFERSWEILER VERLAG édition scientifique

    9 7 8 3 8 3 5 9 6 1 4 0 1

    ISBN: 978-3-8359-6140-1

    K R

    I S T I N

    A J O

    R E S N

    A M

    P T N

    A C

    H M

    Y O

    K A

    R D

    I N

    F A

    R K

    T

    Kristina Jores

    Die Regulation von Nampt

    nach Myokardinfarkt

    édition scientifique

  • Das Werk ist in allen seinen Teilen urheberrechtlich geschützt.

    Die rechtliche Verantwortung für den gesamten Inhalt dieses Buches liegt ausschließlich bei dem Autor dieses Werkes.

    Jede Verwertung ist ohne schriftliche Zustimmung des Autors oder des Verlages unzulässig. Das gilt insbesondere für Vervielfältigungen, Übersetzungen, Mikroverfilmungen

    und die Einspeicherung in und Verarbeitung durch elektronische Systeme.

    1. Auflage 2014

    All rights reserved. No part of this publication may be reproduced, stored in a retrieval system, or transmitted,

    in any form or by any means, electronic, mechanical, photocopying, recording, or otherwise, without the prior

    written permission of the Author or the Publishers.

    st1 Edition 2014

    © 2014 by VVB LAUFERSWEILER VERLAG, Giessen Printed in Germany

    VVB LAUFERSWEILER VERLAG

    STAUFENBERGRING 15, D-35396 GIESSEN Tel: 0641-5599888 Fax: 0641-5599890

    email: redaktion@doktorverlag.de

    www.doktorverlag.de

    édition scientifique

  • Aus dem Institut für Veterinär-Physiologie und –Biochemie, Fachbereich Veterinärmedizin der Justus-Liebig-Universität Gießen

    Betreuer: Prof. Dr. R. Gerstberger

    und

    aus der Medizinischen Klinik I Abteilung für Kardiologie / Angiologie der

    Universitätsklinikum Gießen und Marburg GmbH, Standort Gießen,

    Gf. Direktor: Prof. Dr. C. Hamm

    Betreuer: Prof. Dr. D. Sedding

    Die Regulation von Nampt

    nach Myokardinfarkt

    INAUGURAL-DISSERTATION zur Erlangung des Grades der

    Doktorin der Veterinärmedizin (Dr. med. vet.) beim Fachbereich Veterinärmedizin der Justus-Liebig-Universität Gießen

    eingereicht von

    Kristina Jores

    Tierärztin aus Neuwied/Rhein

    Gießen 2014

  • Mit Genehmigung des Fachbereichs Veterinärmedizin

    der Justus-Liebig-Universität Gießen

    Dekan: Prof. Dr. Dr. h.c. M. Kramer

    Gutachter: Prof. Dr. R. Gerstberger

    Prof. Dr. D. Sedding

    Tag der Disputation: 27.06.2014

  • Meinen Eltern

  • Inhaltsverzeichnis

    1 Inhaltsverzeichnis

    1 Inhaltsverzeichnis .............................................................................................. 1-2

    2 Einleitung .............................................................................................................. 7

    2.1 DER MYOKARDINFARKT ......................................................................................... 7

    2.1.1 Epidemiologie ................................................................................................... 7

    2.1.2 Symptomatik ..................................................................................................... 7

    2.1.3 Pathogenese ..................................................................................................... 7

    2.1.4 Hypoxie im Herzen ...........................................................................................10

    2.1.5 Aufbau des Infarktareals ..................................................................................10

    2.2 ANGIOGENESE .....................................................................................................12

    2.2.1 Therapeutische Angiogenese ..........................................................................12

    2.2.2 Definition ..........................................................................................................12

    2.2.3 Angiogenese im Rahmen pathologischer Prozesse .........................................14

    2.3 NICOTINAMID PHOSPHORIBOSYLTRANSFERASE NAMPT ..........................................15

    2.4 MICRORNAS ........................................................................................................16

    2.4.1 Grundlagen ......................................................................................................16

    2.4.2 Synthese und Funktion von miRNAs ................................................................16

    2.5 SIRTUINE .............................................................................................................20

    2.5.1 Entdeckung, Eigenschaften, Einteilung ............................................................20

    3 Fragestellung .......................................................................................................24

    4 Material und Methoden ........................................................................................27

    4.1 MATERIAL ............................................................................................................27

    4.1.1 Verbrauchsmaterialien und Geräte ..................................................................27

    4.1.2 Versuchstiere ...................................................................................................29

    4.1.3 Chemikalien und Pharmaka .............................................................................29

    4.2 METHODEN ..........................................................................................................32

    4.2.1 Tierexperimentelle Arbeiten .............................................................................32

    4.2.2 Experimenteller Myokardinfarkt ........................................................................33

    4.2.3 Das Elektrokardiogramm nach Myokardinfarkt .................................................37

    4.2.5 Western Blot ....................................................................................................42

    4.2.6 Proteinisolierung ..............................................................................................42

  • Inhaltsverzeichnis

    4.2.7 Proteinkonzentrationsbestimmung ...................................................................42

    4.2.8 Primärantikörper ..............................................................................................43

    4.2.9 Sekundärantikörper ..........................................................................................43

    4.2.10 Proteinaufbereitung ........................................................................................43

    4.2.11 SDS-Polyacrylamidgelelektrophorese ............................................................44

    4.2.12 Transfer .........................................................................................................44

    4.2.13 Immundetektion der aufgetrennten Proteine ..................................................45

    4.2.14 Isolierung von murinen Kardiomyozyten nach Myokard-infarkt.......................46

    4.2.15 Isolierung von Leukozyten aus venösem Blut ................................................46

    4.2.16 Arbeiten mit Endothelzellen aus humanen Koronararte-rien (HCAECs) .........47

    4.2.17 Kombinierte RNA- und miRNA-Isolierung ......................................................48

    4.2.18 Real-time quantitative Polymerase-Kettenreaktion .........................................50

    4.2.19 Reverse Transkription: RNA ..........................................................................51

    Reverse Transkription: miRNA ....................................................................................52

    Quantitative real-time PCR ..........................................................................................52

    Real-time PCR: miRNA ...............................................................................................54

    4.2.20 SIRT1 activity Assay ......................................................................................55

    4.2.21 Reverse Transfektion mit miRNA-Inhibitoren (anti-mi-RNAs) bzw. miRNA-

    Precursor-Molekülen (pre-miRNAs) .............................................................................56

    4.2.22 Endothelzell-Stimulation mit verschiedenen Faktoren ....................................57

    Hypoxiebehandlung .....................................................................................................58

    4.2.23 Proliferationsassay .........................................................................................59

    4.2.24 Migrationsassay .............................................................................................60

    4.2.25 Tube formation Assay ....................................................................................61

    4.2.26 Transfektion von Endothelzellen mit Nampt siRNA ......