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DINÁMICA DEL NITRÓGENO DEL SUELO EN SISTEMAS DE MAÍZ Zea mays L. y SOYA Glycine max L. BAJO EL EFECTO DE ABONOS VERDES BRENO AUGUSTO SOSA RODRIGUES UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS COORDINACIÓN GENERAL DE POSGRADOS PALMIRA 2013

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DINÁMICA DEL NITRÓGENO DEL SUELO EN SISTEMAS DE MAÍZ Zea mays

L. y SOYA Glycine max L. BAJO EL EFECTO DE ABONOS VERDES

BRENO AUGUSTO SOSA RODRIGUES

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

COORDINACIÓN GENERAL DE POSGRADOS

PALMIRA

2013

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DINÁMICA DEL NITRÓGENO DEL SUELO EN SISTEMAS DE MAÍZ Zea mays

L. y SOYA Glycine max L. BAJO EL EFECTO DE ABONOS VERDES

BRENO AUGUSTO SOSA RODRIGUES

Trabajo de grado para optar al título de DOCTOR EN CIENCIAS

AGROPECUARIAS, LÍNEA DE INVESTIGACIÓN MANEJO DE SUELOS Y

AGUAS

Directora

MARINA SÁNCHEZ DE PRAGER Ph.D.

Codirector

MARTÍN PRAGER MÓSQUERA Ph.D.

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

COORDINACIÓN GENERAL DE POSGRADOS

PALMIRA

2013

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La Facultad y Los Jurados de Tesis no serán responsables de las ideas

emitidas por el autor de la misma.

(Artículo 24, Resolución 04 de 1974 del Consejo Directivo Universidad

Nacional de Colombia)

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Nota de aceptación

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DEDICATORIA

Ao meus pais

Miguel y Nilza

Ao mues irmãos

Glauco, Roberta y Ariana

Ao meus sobrinhos

Glauco, Laura, Suri y Nilza

Ao Meu AMOR

Samanta y Luan Marcelo

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AGRADECIMIENTOS

A Dios por darme la oportunidad de vivir a su voluntad

A mis amores Yuly Samanta García Vivas y Luan Marcelo Sosa García, todo lo hago

y haré por ustedes

A mi familia brasileña, hondureña y colombiana, les quiero con el alma

Al ICETEX, por ser el soporte financiero de mi vida en Colombia

A mi casa de estudio, la Universidad Nacional de Colombia sede Palmira

A mis profesores, en especial a Marina Sánchez de Prager por los mensajes que

trasmite en sus consejos, aseveraciones y cuestionamientos. Le agradezco de todo

corazón

A mis compañeros de academia: Elida, Marcela, Luis, Pilar, Andrés, Pino, Paula,

Cristian, Francisco, etc., en especial a Oscar Eduardo Sanclemente, gracias por tu

amistad y camaradería

A mi familia adoptiva colombiana: Doña Amalia, Don Gerson, Francia, Yerson,

Jojoy, Natalia y Cristian

A mis compañeros de futbol: Pinino, Goleo, Labios, Alexandra, Limitado, Silva,

Pedrote, Wilson, Nando, Poli, Don Carlos, Balines, Boyan, Joaco, Messi, Cristian,

Tello, Dago F.C., Maderita, Empresario, Araña, Luifer, Brasil, Dameveinte, Totono,

Magneto, etc., en especial a Dago y el Profesor Ochoa

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ii

TABLA DE CONTENIDO

TABLA DE CONTENIDO ....................................................................................................................ii LISTA DE FIGURAS .......................................................................................................................... iv LISTA DE TABLAS ........................................................................................................................... vi LISTA DE ANEXOS ......................................................................................................................... viii RESUMEN ......................................................................................................................................... ix ABSTRACT..........................................................................................................................................x 1. INTRODUCCIÓN .........................................................................................................................1 2. OBJETIVOS .................................................................................................................................5

2.1 Objetivo General ..................................................................................... 5

2.2 Objetivos Específicos .............................................................................. 5

3. MARCO TEORICO ......................................................................................................................6 3.1 La influencia del N en la productividad de agroecosistemas de maíz y

soya ........................................................................................................ 6

3.1.1 Dinámica del N en el suelo y planta ..................................................... 9

3.1.1.1 Entradas de N al agroecosistema ..................................................... 9

3.1.1.2 Pérdidas de N los agroecosistemas ................................................ 17

3.1.1.4 La biología molecular como herramienta para comprender la dinámica del N ..................................................................................................... 23

3.1.1.4 Algunas estrategias para influir en el balance del N en los agroecosistemas .................................................................................. 26

3.2 Los abonos verdes como práctica agroecológica multipropósito en los agroecosistemas .................................................................................. 29

3.2.1 El uso de Mucuna pruriens L. y otras especies como abono verde en el mundo y en Colombia ....................................................................... 32

4. MATERIALES Y MÉTODOS .................................................................................................... 37 4.1 Localización del área experimental ....................................................... 37

4.2 Tratamientos y diseño experimental ...................................................... 39

4.3 Descripción del ensayo experimental .................................................... 39

4.3.1 Manejo agronómico de las parcelas ................................................... 42

4.4 Variables de respuesta .......................................................................... 44

4.5 Análisis estadístico de la información .................................................... 50

5. RESULTADOS.......................................................................................................................... 51 5.1 Dinámica del N y C en el suelo y acumulación en plantas de soya y maíz

............................................................................................................. 51

5.1.1 Nitrógeno en el suelo.......................................................................... 51

5.1.2 Carbono orgánico del suelo ................................................................ 56

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iii

5.1.3 C y N en tejido vegetal ....................................................................... 57

5.1.4 Comparaciones específicas entre N y C en el suelo y en la planta .... 60

5.2 Variables asociadas a la actividad de bacterias nitrificantes en el suelo ..................................................................................................... 64

5.2.1 Dinámica poblacional de las BOA y su influencia en la disponibilidad de NO3

- bajo cambios en la temperatura y humedad del suelo ................. 65

5.2.2 Comparaciones específicas entre variables relacionadas a la actividad de las bacterias nitrificantes ................................................................. 68

5.3 Variables asociadas al flujo y PCG de GEI en el suelo ......................... 69

5.3.1 Cambios en los flujos de CO2, CH4 y N2O y PCG .............................. 69

5.3.2 Porosidad total llena de agua ............................................................. 74

5.3.3 Comparaciones específicas entre variables relacionadas al flujo de GEI ............................................................................................................. 75

5.4 Productividad de los cultivos en el agroecosistema .............................. 76

5.4.1 Rendimiento en grano de soya ........................................................... 76

5.4.2 Rendimiento en grano de maíz .......................................................... 77

5.4.3 Comparaciones específicas para el rendimiento de los cultivos ........ 77

6. DISCUSIÓN .............................................................................................................................. 81 6.1 Dinámica del N en el suelo y en tejido vegetal ...................................... 81

6.2 Actividad de las bacterias nitrificantes BOA .......................................... 83

6.3 Variables asociadas al flujo y PCG de GEI en el suelo ......................... 84

6.4 Productividad de los cultivos en el agroecosistema .............................. 87

6.5 Consideraciones finales ........................................................................ 88

7. CONCLUSIONES ..................................................................................................................... 92 8. RECOMENDACIONES ............................................................................................................. 94 9. BIBLIOGRAFÍA ........................................................................................................................ 95 10. ANEXOS ................................................................................................................................. 130

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iv

LISTA DE FIGURAS

Pág.

Figura 1. Representación esquemática del ciclo de nitrógeno en los agroecosistemas...12

Figura 2. Asimilación de N en plantas con y sin raíces noduladas……………..…………..17

Figura 3. Esquema simplificado del efecto invernadero natural en la superficie terrestre..20

Figura 4. Dinámica del N2O generado en el suelo a partir del manejo agrícola…………22

Figura 5. Ciclo del CH4 y CO2 en la agricultura……………..………………….…………….22

Figura 6. Distribución espacial de los tratamientos en campo bajo el diseño de bloques completos al azar con arreglo factorial 32 +2 (Parcelas Divididas)………….…42

Figura 7. Distribución mensual de la temperatura ambiental y lámina de agua en el suelo (precipitación pluvial + riego) durante el experimento………………..………….42

Figura 8. Arreglo espacial en la siembra de la leguminosa y gramínea como AV y cultivos principales en cada unidad experimental………………………………………..…43

Figura 9. Componentes de la cámara cerrada estática y frascos utilizados en la toma de muestras de gases…………………………………………………..………………...48

Figura 10. Concentración de N total (mg kg-1) en el suelo en las etapas y tratamientos evaluados en el ensayo………..………………………………...…………………53

Figura 11. Concentración de NH4+ y NO3

- (mg kg-1) en el suelo en los tratamientos durante la etapa productiva de floración.………………………………...…………………54

Figura 12. Concentración de NH4+ y NO3

- (mg kg-1) en el suelo en los tratamientos durante la etapa productiva de llenado de grano.…………...…………………………….55

Figura 13. Concentración de Nit (mg kg-1) en el suelo y precipitación pluvial (mm) en las etapas y tratamientos evaluados ………………………………………………….56

Figura 14. Concentración de carbono orgánico en el suelo en cada tratamiento durante las etapas productivas de los cultivos…………………….……………………………57

Figura 15. Concentración de C (g kg-1) en las hojas del cultivo de soya en las etapas y tratamientos evaluados ………………………………………..…………………….58

Figura 16. Concentración de N (g kg-1) en las hojas del cultivo de soya en las etapas y tratamientos evaluados …………………………..………………………………..59

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v

Figura 17. Concentración de C (g kg-1) en las hojas del cultivo de maíz en las etapas y tratamientos evaluados ……………………………..……………………………….60

Figura 18. Concentración de N (g kg-1) en las hojas del cultivo de maíz en las etapas y tratamientos evaluados ……………………………………………...……………...61

Figura 19. Evaluación de las variables asociadas a la actividad de las bacterias nitrificantes del suelo: BOA (numero copias gen amoA/g suelo seco), NO3

- (mg kg-1), temperatura (°C) y humedad volumétrica (%) en cada tratamiento durante la etapa de floración de los cultivos……………………………………..………...66

Figura 20. Evaluación de las variables asociadas a la actividad de las bacterias nitrificantes del suelo: BOA (numero copias gen amoA/g suelo seco), NO3

- (mg kg-1), temperatura (°C) y humedad volumétrica (%) en cada tratamiento durante la etapa de floración de los cultivos……………………………………………...68

Figura 21. Flujo acumulado de CO2 en los tratamientos y etapas evaluadas……..…….71

Figura 22. Flujo acumulado de CH4 en los tratamientos y etapas evaluadas……..…….72

Figura 23. Flujo acumulado de N2O en los tratamientos y etapas evaluadas…………….73

Figura 24. PCG de GEI en los tratamientos y etapas evaluadas …………………………74

Figura 25. Aporte porcentual de cada GEI emitido del suelo en el agroecosistema….…75

Figura 26. PPA en los tratamientos y etapas evaluadas …………………………………..75

Figura 27. Rendimiento en grano de los cultivos de maíz y soya en los tratamientos evaluados.……………………………………………………………………………77

Figura 28. Conglomerado calculado a partir del efecto de los tratamientos sobre las variables estudiadas…………………………………………………….…………..80

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vi

LISTA DE TABLAS

Pág.

Tabla 1. Estimación de fuentes y sumideros del Nitrógeno Global Reactivo debido a las actividades humanas………….………………………………………………………27

Tabla 2. Especies de más amplio uso como AV y sus efectos benéficos para los cultivos. Adaptado de Bunch (1994). (†) Efecto medio, (††) efecto alto, y (†††) efecto muy alto…………………………………………………….………………….……………..33

Tabla 3. Caracterización química inicial del Typic Haplustert donde se implementó el experimento (profundidad de 0-20 cm)……………………………………………..39

Tabla 4. Caracterización física inicial del Typic Haplustert donde se implementó el experimento (profundidad de 0-20 cm)………………………………………………39

Tabla 5. Descripción de tratamientos del experimento………………...…………………..41

Tabla 6. Métodos de análisis de las variables de respuesta relacionadas con C y N a nivel del suelo y en tejidos foliares de soya y maíz……………………………..……….45

Tabla 7. Métodos de análisis de las variables de respuesta relacionadas a la actividad de bacterias asociadas a procesos de nitrificación en el suelo sembrado con soya y maíz ……………………………………………………………………………………..46

Tabla 8. Métodos de análisis de las variables de respuesta relacionadas con el flujo y PCG de GEI en un Typic Haplustert sembrado con soya y maíz……………….……………………………………………….………………….…47

Tabla 9. Variables relacionadas a la productividad de los cultivos…………………………51 Tabla 10. Correlaciones de las fracciones de C y N en el suelo y planta en las etapas de

desarrollo evaluadas……………………………………….………………………...62

Tabla 11. Relación C:N en tejido vegetal del cultivo de soya y maíz ……………….……63

Tabla 12. Contrastes ortogonales para la concentración de fracciones del C y N en el suelo y hojas del cultivo de soya y maíz en las etapas de producción……....64

Tabla 13. Resumen de diferencias significativas para las variables evaluadas………..…67

Tabla 14. Contrastes ortogonales para BOA, NO3- y variables físicas del suelo relacionadas

a la nitrificación en las etapas fenológicas evaluadas……………70

Tabla 15. Contrastes ortogonales para las emisiones de GEI y la porosidad del suelo llena de agua durante las etapas de producción de los cultivos.....………………..…76

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vii

Tabla 16. Contrastes ortogonales para el rendimiento de los cultivos del agroecosistema ………………………………………………………………………………………….78

Tabla 17. Matriz de correlaciones y valores propios de las variables originales evaluadas en el agroecosistema…………………………….…………………………………..80

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viii

LISTA DE ANEXOS

Pág.

Anexo 1. Determinaciones, métodos y referencias utilizadas de caracterización previa al ensayo………………………………………………………………………………..131

Anexo 2. Análisis de varianza (P<0.05) para las fracciones de C y N del suelo y planta.132 Anexo 3. Análisis de varianza (P<0.05) para las variables asociadas a la actividad de las

bacterias nitrificantes en el suelo………………………………………………….136 Anexo 4. Correlación de Pearson entre las variables asociadas a la actividad de bacterias

nitrificantes en el suelo……………….…………………………………………….138

Anexo 5. Análisis de varianza (P<0.05) para las variables asociadas al flujo de GEI en el suelo……………………….………………………………………………………..139

Anexo 6. Correlación de Pearson entre las variables asociadas al flujo de GEI………140

Anexo 7. Análisis de varianza (P<0.05) para el rendimiento de los cultivos……………140

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ix

RESUMEN

Los abonos verdes (AV) se implementan en agroecosistemas para mejorar y/o restaurar la

fertilidad del suelo, mediante el aporte que hacen de nutrientes, materia orgánica y agua.

Este estudio se realizó con el objetivo de evaluar la dinámica del nitrógeno (N) del suelo en

sistemas de maíz y soya bajo el efecto de AV. En un Typic Haplustert ubicado en el Valle

del Cauca-Colombia (980 msnm, 3° 25’ 34’’ N y 76° 25’ 53’’ O) durante 2011-II se estableció

como AV la asociación Mucuna pruriens var. utilis – maíz y, 90 días después de la siembra,

los residuos se incorporaron como AV o se dispusieron sobre la superficie del suelo como

acolchado orgánico (AO). En 2012-I, se sembraron los cultivos de maíz-soya en forma

intercalada y se formularon 11 tratamientos bajo el diseño de bloques completos al azar

con arreglo factorial 32 +2 (Parcelas Divididas) con tres repeticiones. Las parcelas

principales las constituyó AV, AO y barbecho (B), por la arvense nativa Rottboellia

cochinchinensis L. Las subparcelas correspondieron al uso de tres diferentes programas de

fertilización, compost (FO), fertilizante de síntesis química industrial (FQ) y ninguna adición

(SF). Paralelamente, se sembraron como referentes de la investigación los monocultivos

de maíz y soya manejados de forma convencional (FQ). En la etapa de floración y llenado

de grano de los cultivos se analizaron algunas variables, relacionadas con el suelo: N total,

amonio, nitrato, N inorgánico total (Nit), carbono orgánico (CO), población de bacterias

oxidantes de amonio (BOA), humedad volumétrica, temperatura, porosidad total llena de

agua (PPA), dióxido de carbono (CO2), metano (CH4) y óxido nitroso (N2O); en tejido vegetal

de maíz y soya: carbono (C) y N. Los resultados analizados mediante SAS versión 9.1.3

indicaron que la adición de materiales orgánicos de alta calidad (M. pruriens var. utilis - maíz

como AV/AO), estimularon la mineralización del C y dinámica de las diferentes fracciones

de N en el suelo, sin cambios significativos en el contenido de estos elementos en el tejido

vegetal del cultivo de maíz y soya. Las poblaciones de BOA y la producción de NO3- variaron

significativamente entre etapas fenológicas evaluadas, sin diferir entre tratamientos. El flujo

CO2 se incrementó en los cultivos intercalados adicionados con AV/AO en comparación con

los monocultivos. En las parcelas principales AV, AO y B el uso de fertilizantes de síntesis

química industrial estimuló significativamente los flujos de N2O y CH4. En el cultivo

intercalado maíz-soya el uso de materiales orgánicos de alta calidad AV/AO promovió en

maíz rendimientos similares a los obtenidos con FQ, mientras que en soya, cuando se

adicionó AO los rendimientos superaron al promedio del sistema convencional (B).

Palabras Claves: Abonos verdes, Nitrógeno inorgánico, Bacterias nitrificantes, Gases de

efecto invernadero, maíz, soya.

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x

ABSTRACT

Green manure (GM) are implemented in agroecosystems to improve and/or restore the

fertility of the soil, through the input of nutrients, organic matter and water. This study was

conducted with the objective of evaluating the dynamics of nitrogen (N) of the soil in systems

of corn and soybeans under the effect of AV. In a Typic Haplustert located in the Valle del

Cauca-Colombia (980 msnm, 3° 25' 34" N and 76° 25' 53" O) during 2011-II was established

as the association GM Mucuna pruriens var. utilis - corn and, 90 days after planting, residues

were incorporated as GM or were arranged on the surface of the soil as organic mulch (OM).

In 2012-I, the crops were planted corn-soy in interleaved fashion and made 11 treatments

under the design of randomized complete block with a factorial arrangement 32 +2 (Split

Plots) with three replications. The main plots the formed GM, OM and fallow (F), by the

arvensis native Rottboellia cochinchinensis L. The subplots corresponded to the use of three

different fertilization programs, compost (FO), fertilizer industrial chemical synthesis (FQ)

and any addendum (SF). In parallel, were planted as relating to the investigation of the

monoculture of corn and soybean handled in the conventional way (FQ). In the flowering

stage and grain filling of the crops were analyzed some variables relating to the ground: N

total, ammonium, nitrate, total inorganic N (Nit), organic carbon (CO), population of

ammonium oxidizing bacteria (AOB), volumetric moisture, temperature, total porosity filled

with water (PPA), carbon dioxide (CO2), methane (CH4) and nitrous oxide (N2O); in plant

tissue of maize and soybean: carbon (C) and N. Results analyzed using SAS

version 9.1.3 indicated that the addition of organic materials of high quality (M. pruriens var.

utilis-corn as GM/OM) stimulated the mineralization of the C and dynamics of the different

fractions of N in the soil, without significant changes in the content of these elements in the

plant tissue of the cultivation of corn and soybeans. The populations of AOB and the

production of NO3- varied significantly between phenological stages evaluated, without differ

between treatments. The CO2 flow is increased in the intercropping added with GM/OM in

comparison with the monoculture. In the main plots GM, OM and F the use of fertilizers of

industrial chemical synthesis flows significantly stimulus of N2O and CH4. In the intercropping

corn-soybean the use of organic materials of high quality GM/OM promoted in corn yields

similar to those obtained with FQ, while in soybean, when added OM yields exceeded the

average of the conventional system (F).

Key Words: Green manure, inorganic nitrogen, nitrifying bacteria, greenhouse gases, corn,

soy.

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1

1. INTRODUCCIÓN

La producción de alimentos en los agroecosistemas está sujeta a las condiciones

del suelo y ambiente como a la disponibilidad y aporte de nutrientes en forma natural

y/o externa mediante insumos de síntesis química industrial. Colombia se

caracteriza por el alto consumo de maíz y soya en productos de alimentación

humana y animal, sin embargo, su producción es insuficiente ante la demanda de

la población, por ello importa más del 70% de éstos granos (FENALCE, 2010;

Leibovich et al., 2010).

Durante el manejo agronómico de los cultivos, la fertilización es fundamental para

brindar alta productividad, el nitrógeno (N) es el nutriente mineral más limitante y

costoso de suplir vía insumos de síntesis química industrial para la producción

primaria de ecosistemas terrestres en regiones tropicales (Sánchez y Logan, 1992).

Este nutrimento es requerido en muchas reacciones bioquímicas de la planta, ya

que fluye por el sistema como componente de organelos y catalizador de procesos

metabólicos, promoviendo el crecimiento, desarrollo y producción de cultivos

(Fassbender, 1982; Benton Jones, 1998; Mengel y Kirkby, 2000; Rao, 2009).

En las regiones tropicales y subtropicales de países en desarrollo, alrededor de 45%

de los suelos presentan baja fertilidad natural (Nair, 1993; Brown et al., 1994; Giller,

2001), la producción de biomasa es limitada por las altas tasas de descomposición

(Lavelle et al., 1993; Woomer et al., 1994), estas limitantes naturales son

acentuadas por el uso de prácticas de producción económica y ambientalmente

insostenibles, que contribuyen a la degradación del suelo (Brown et al., 1994;

Amézquita et al., 1998).

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2

Actualmente la mayoría de los países basan la máxima capacidad productiva de los

agroecosistemas en el uso de agroquímicos y de otras prácticas que afectan el

entorno con graves daños al sistema. Diferentes investigaciones ha demostrado que

la aplicación de fertilizantes nitrogenados conlleva pérdidas de 60% o más de la

cantidad aplicada, por vías como lixiviación, volatilización y escorrentía, que

contaminan el ambiente con óxido nitroso (N2O) y dióxido de N (NO2) (Parker, 1972;

Jarvis, 1996; Glass, 2003; Jordan et al., 2008; Sepúlveda et al., 2012). A la vez,

Rockstrom et al., (2009) alertan que el desbalance creado en el ciclo biogeoquímico

del N es ocasionado por el uso inadecuado de fertilizantes de síntesis industrial,

lamina de riego y mecanización agrícola, impactando sobre la sanidad del ambiente

en general por el incremento de la emisión de gases de efecto invernadero (GEI).

Si bien estas actividades agrícolas contribuyen a generar la mayoría del alimento

mundial, también ocasionan el incremento de la concentración de metano (CH4),

N2O y dióxido de carbono (CO2) en la atmósfera (UNFCCC, 2002; IPCC, 2007). A

nivel mundial, se estima que la agricultura contribuye con 20% de las emisiones

antropogénicas de GEI; aproximadamente 22% de las emisiones totales de CO2,

55% de CH4 y 80% de N2O (Mosier et al., 1998; Houghton, 2001; IPCC, 2007).

Siendo el impacto más relevante por el potencial de calentamiento global (PCG),

encontrando al N2O con 296 veces mayor poder calorífico que el CO2 después de

100 años (Hensen et al., 2006).

La degradación de suelos y contaminación de aguas son otros impactos negativos

de las actividades antropogénicas. Se estima que entre el 50% (Bossio et al., 2004;

MEA, 2005) y 65 % (WRI, 2001) de todas las tierras sufren algún tipo de degradación

en las propiedades físicas, químicas y biológicas. Bergstrom y Jansson (2006)

aseguran que la acidificación de las aguas en regiones de Norte América y Europa

es causada por el incremento de los depósitos de N inorgánico en lagos. También

Galloway et al., (2008) informan que las transformaciones de N en ecosistemas

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3

acuáticos a escala local y global incrementa por el aumento en el uso de

agroquímicos, en especial los fertilizantes.

Ante esta insostenibilidad, que pone bajo amenaza no sólo la sanidad del ambiente

sino la seguridad alimentaria de las sociedades, se hace necesario el abordaje más

intensivo de tecnologías agroecológicas limpias y sostenibles. El uso de especies

leguminosas y gramíneas como abonos verdes (AV) o manejado en forma de

acolchado orgánico (AO) en los agroecosistemas puede ser una alternativa al

sistema convencional que utiliza el barbecho (B) como escasa fuente de materia

orgánica (MO) y nutrimentos en la agricultura de pequeña escala. Estos materiales,

en especial el frijol terciopelo Mucuna pruriens var. utilis, son considerados como

mejoradores de la fertilidad de suelos en todo el mundo (Bunch, 1994; Anthofer y

Kroschel, 2005; Blanchart et al., 2006), el potencial de brindar cantidades

considerables de MO, nutrientes y agua (Baijukya et al., 2004; Gallego et al., 2012)

a través de mecanismos basados en la fijación biológica de N2 (FBN), ciclaje de

nutrientes por la biota del suelo (Prager et al., 2001) y hongos formadores de

micorriza arbuscular (HMA) (Sánchez de P. et al., 2010) impactan de forma positiva

las propiedades físicas, químicas y biológicas del suelo, tornando un sistema más

sostenible y sano para el agricultor y ambiente.

La praxis continua de esta tecnología a nivel internacional ha permitido vislumbrar

como manejarlos en condiciones específicas y fines particulares, aumentando el

aporte nutricional (MO, nutrientes y agua) y la eficiencia de las especies en la fijación

de N y reciclaje de nutrientes, repercutiendo de forma positiva propiedades del suelo

y consecuente productividad de cultivos (Bunch, 1994; Sullivan, 2003; Tscherning

et al., 2006; Clark, 2007; Douxchamps et al., 2011).

En Colombia también se han realizado experimentos desde el enfoque agronómico

(Prager et al., 2002; FHJC, 2004; Carder, 2007), algunos enfatizan en sus aportes

nutricionales por la biomasa depositada al suelo (Salamanca 2003; Sanclemente,

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2009) y otros en la actividad biológica del suelo, disponibilidad de nutrientes y

productividad de cultivos (Gallego, 2012; Vélez, 2012; Marín, 2013).

Este trabajo parte de la hipótesis: el uso y manejo de materiales orgánicos de alta

calidad en forma de AV, AO y compost incrementan la dinámica y disponibilidad del

N en el suelo y la productividad de los cultivos de maíz y soya en forma similar al

uso de fertilizantes de síntesis química industrial.

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2. OBJETIVOS

2.1 Objetivo General

Avanzar en la comprensión de cómo el uso y manejo de AV, B y compost afectan

a) la dinámica del N del suelo y microorganismos involucrados en su disponibilidad,

b) la productividad en los cultivos de maíz Zea mays L. y soya Glycine max L., en

forma similar a como lo hacen los fertilizantes de síntesis química industrial (FQ).

2.2 Objetivos Específicos

1. Caracterizar la disponibilidad del amonio (NH4+), nitrato (NO3

-), N total y carbono

orgánico (CO) en el suelo y acumulación de N y carbono (C) en la planta, con el uso

y manejo de AV, B, compost y FQ en los cultivos de maíz y soya.

2. Evaluar cambios poblacionales de bacterias nitrificantes en diferentes etapas

fenológicas de los cultivos de maíz y soya por el uso y manejo de AV, B, compost y

FQ en los cultivos de maíz y soya.

3. Evaluar el flujo de CO2, CH4 y N2O en el Typic Haplustert cultivado con maíz y

soya, bajo el uso y manejo de AV, B, compost y FQ.

4. Evaluar la producción de los cultivos de maíz y soya y, relacionarla con la

dinámica del N y C en el suelo y planta.

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3. MARCO TEORICO

3.1 La influencia del N en la productividad de agroecosistemas de maíz y

soya

La alta producción de maíz y soya en Colombia y el mundo está relacionada con el

adecuado aporte y disponibilidad del N en el suelo y su absorción por la planta. Para

cubrir esta necesidad, a nivel mundial se adiciona en fertilización nitrogenada

aproximadamente 100 a 162.2 millones t N año-1 (IFA, 2005; FAO, 2011). Pero la

eficiencia de utilización de este nutriente por las plantas es muy baja, Raun et al.,

(2002) en cultivos de cereales registraron un uso eficiente del N de 33%, lo cual

representa una pérdida económica de $20 billones año-1, invertidos ineficientemente

en la aplicación de N (Raun y Johnson, 1999, Landeros et al., 2007; Lerner et al.,

2013).

El manejo nutricional de los cultivos y, en especial, el suplir la demanda de N es un

factor preponderante en la alta rentabilidad. Este nutrimento es muy dinámico en el

suelo por la influencia biológica al que está sujeto, además, por prácticas agrícolas

como la mecanización, lamina de riego, fertilización, uso de pesticidas, momentos

en el uso de agroquímicos, naturaleza y origen del suelo, que definen la textura,

estructura, MO, entre otros (Navarro y Navarro, 2003; Estrada et al., 2007; Menjivar,

2012).

Todos estos componentes y su manejo van a influir en la eficiencia de uso del

nutriente por los cultivos. Rockstrom et al., (2009) alertan acerca de la influencia del

manejo, pues si es inadecuado se crea un desbalance en los procesos

biogeoquímicos del N, impactando en la degradación de suelos, eutrofización y

emisión de GEI del suelo. Con ello se pone en riesgo la sostenibilidad del sistema y

del productor, por el incremento en los costos de producción, la pérdida de fertilidad

del suelo y la contaminación ambiental generada.

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En la llamada ‘‘Revolución Verde’’ caracterizada por adopción de tecnologías con

miras a obtener la máxima capacidad productiva en los agroecosistemas, el uso de

fertilizantes nitrogenados de síntesis química industrial se convirtió en la alternativa

más utilizada. Sin embargo, a través del tiempo fueron apareciendo los múltiples

problemas asociados a su uso intensivo e indiscriminado (Palm et al., 2001; Wardle,

2003; Dobermann, 2004; Pérez y Landeros, 2009; López, 2013).

En el continente americano, cada país posee sus propias condiciones culturales,

edafoclimáticas y emplean modalidades y criterios diferentes en cuanto a esta

idiosincrasia de productividad alrededor del N. Por ejemplo, en Colombia,

caracterizada por alto consumo de maíz, destinado a la alimentación humana y

animal para consumo directo e indirecto (materia prima), el 85% de los cultivos de

maíz son de pequeños productores (extensiones de tierra menores a las 5

hectáreas) bajo sistemas de siembra tradicional con promedios de producción bajos

de 1.3 a 1.8 t ha-1) (Comfecampo, 2008; FENALCE, 2011).

En 2008, el país requirió 4.5 millones de toneladas de maíz, de las cuales, 1.2

millones fueron abastecidas por la producción nacional y 3.3 importadas (FENALCE,

2009). Para el 2009, un productor nacional de maíz en zona de ladera invertía

$1.362.912 ha-1 (19% correspondía al costo de fertilizantes) con un margen de

utilidad negativo de $127.752. En zona plana, se invertía $3.201.441 ha-1, (29.9%

correspondía al costo de fertilizantes) obteniendo $69.759 ha-1 de utilidad

(MINAGRICULTURA, 2009). Los sistemas tecnificados incrementaron su

productividad de 2.93 t ha-1 en 1995 a 4.21 t ha-1 en 2008 y 4.83 t ha-1 para el 2011,

sin embargo, se sigue importando el 70% (más de 2.5 millones toneladas) de la

demanda nacional y el margen de ganancia continúa siendo bajo (FENALCE, 2011).

El mayor productor del maíz tecnificado es el Departamento Valle del Cauca con

una participación del 25.8% de la producción nacional y el Departamento de Bolívar

con maíz tradicional con una participación del 16.4% de la producción nacional. A

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partir del 2000 el rendimiento del maíz tecnificado fue tres veces mayor al tradicional

(Leibovich et al., 2010). Los costos de producción pasaron de $ 2.6 a 2.8 millones

en el 2008, en gran parte debido a los altos precios de los fertilizantes (Domínguez,

2008) y aunque en el 2010 los costos descendieron a $ 2.5 millones ha-1, la relación

beneficio/costo desestimula la siembra de este cultivo. Zuñiga (2013) registró que

la renta neta es menos de un millón de pesos por ciclo productivo y casi dos millones

al año.

Con respecto a la soya, esta leguminosa posee un importante valor nutritivo para la

dieta humana y fuente principal de proteína en la elaboración de alimentos

balanceados para animales (ABA). Los principales países productores de soya son

Estados Unidos (34.9%), Brasil (25.9%), Argentina (20%), China (6.7%) e India

(3.9%) (Leibovich et al., 2010).

Durante el período 1990-2010, el consumo promedio anual se incrementó en 1.9%,

causando el aumento en las importaciones a una tasa promedio de 8.3%, pasando

de 69 mil toneladas en 1990 (Leibovich et al., 2010) a 352 mil toneladas para 2010

(FENALCE, 2010). Estas cifras representan aproximadamente 84% de la soya

consumida, el 16% restante se produce en el país. Los costos de producción al 2009

fueron de $ 2.1 millones ha-1, donde los fertilizantes representaron el 26% de la

inversión, estos costos son un 33% más altos si se comparan con Brasil y 108% con

Estados Unidos (Leibovich et al., 2010). FENALCE (2013) confirma esta tendencia,

Colombia posee uno de los precios más altos en los fertlizantes como la urea, DAP

y KCL, que oscila entre 25 a 45% por encima del precio internacional, los cuales

representan el 30% de la inversión.

Colombia como otros países afronta esta problemática en el sector alimenticio de

cereales y leguminosas, caracterizados por altos costos de producción y baja

relación beneficio/costo por tonelada producida. Ante esta insostenibilidad

productiva, financiera, aunado a lo ambiental en los agroecosistemas de maíz y

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soya, se le suman limitantes edáficas naturales y normas competitivas con otros

países, originando una influencia negativa sobre la soberanía y seguridad

alimentaria de la población. El entender mejor la dinámica del N del suelo podría

mejorar la eficiencia en su uso durante las fertilizaciones y permitir atenuar los bajos

rendimientos de los cultivos.

Uno de los mayores costos de producción en ambos cultivos lo constituye el uso de

FQ, cuya baja eficiencia de uso puede alcanzar porcentajes entre el 40 y 60%,

(FENALCE, 2013) factor que incrementa costos para el país, para el agricultor.

Además, la dinámica del N en el suelo, altamente gobernada por la actividad de los

microorganismos (organismos nitrificantes y fijadores de N2) y las condiciones

ambientales (aerobiosis que favorece los dos procesos nombrados, y, la

anaerobiosis en el suelo que incide sobre la pérdida de N - desnitrificación) llevan

a reflexionar acerca de cómo manejar este elemento mediante prácticas alternativas

como el uso de AV y AO. De allí la necesidad de profundizar en la dinámica del N

del suelo como forma de mejorar su eficiencia en su uso (Johansson et al., 2001;

López-Bellido et al., 2004; Fuertes-Mendizábal et al., 2010), y plantear la posibilidad

de empleo de prácticas de manejo alternativo como AV y AO, con su incidencia,

además de lo económico, en lo social y ambiental.

3.1.1 Dinámica del N en el suelo y planta

3.1.1.1 Entradas de N al agroecosistema

Mineralización del N

Esta ampliamente establecido que el N es el nutriente mineral requerido en mayor

cantidad por las plantas superiores, por su participación en la mayoría de las

reacciones bioquímicas, se necesita de un flujo continuo por todo el sistema vegetal

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como el mayor componente en proteínas, ácidos nucléicos, clorofila, vitaminas,

enzimas y hormonas esenciales para la vida de las plantas. En consecuencia,

promueve el desarrollo de la planta en general, limitando y/o controlando la

productividad en los agroecosistemas (Benton Jones, 1998; Rao, 2009; Llonín,

2013; Martín, 2013).

Los aportes del N al suelo ocurren a partir de diferentes procesos metabólicos: 1) la

mineralización de los materiales orgánicos depositados en el agroecosistema, que

hace que éstos se descompongan y transformen a sus formas minerales, que

quedan disponibles en el suelo como nutrientes y C en forma orgánica simple como

aminoácidos y ácidos orgánicos, CO2, N2O y CH4, 2) la fijación atmosférica de N2

por medio de deposiciones húmedas (lluvia y lluvia ácida) y seca (aerosoles),

química por fertilizantes de síntesis industrial y, biológica, a través de organismos

libres o/y en asociaciones con las plantas conocidas como fijación biológica de N2

(FBN) y, 3) el suministro externo de fertilizantes orgánicos y/o de síntesis química

industrial (Sanclemente, 2009; García, 2012; Labrador, 2012).

La mineralización de MOS constituye la fuente natural más importante de aporte de

N al suelo, por esta vía se asegura la disponibilidad del 95% del N total presente

(Stevenson, 1982; Schulten y Schnitzer, 1998; Orozco, 1999; Philippot y Germon,

2005; Pegoraro et al., 2010) y con las posteriores transformaciones a fracciones

minerales, afecta la biota presente, así como la producción del cultivo,

particularmente en la agricultura de bajos insumos común en las regiones tropicales

(Palm et al., 2001). Su manejo adecuado es clave de la sanidad y fertilidad del suelo

y, en consecuencia, en la sostenibilidad de los sistemas productivos (FAO, 2008).

La mayoría del N orgánico se encuentra disponible en las capas superiores del

suelo, Broadbent (1984) asegura que cuando se agregan volúmenes importantes

de materiales orgánicos, este proceso provee cantidades significativas de N en los

agroecosistemas (20-80% de lo requerido por las plantas). Se considera que la

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reserva mundial de N en la MOS es de aproximadamente 2.2x106 Tg y 2.0x104 Tg

fijado como NH4+ en las arcillas (Tg= 106 t) (García, 2012).

Orozco (1999) expone que en todo suelo el N se encuentran en formas orgánicas e

inorgánicas. Las formas orgánicas representan del 90 al 92% de este elemento,

mientras que las inorgánicas sólo llegan a representar del 8 al 10%. Como parte

integra de la MOS, durante la permanencia del N en el agroecosistema, este sufre

transformaciones en el suelo dando lugar a un ciclo biológico muy complejo, el cual

consta de varios procesos caracterizados como la mineralización (catabolismo):

amonificación, nitrificación y desnitrificación y, la inmovilización, en las cual las

formas minerales del N se acomplejan nuevamente en moléculas orgánicas (Figura

1). La inmovilización del N puede ocurrir por dos vías, incorporado temporalmente

por los microorganismos y absorbido por las plantas en formas inorgánicas o en

compuestos orgánicos simples para integrarse a la biomasa vegetal (McNeill y

Unkovich, 2007; Azcón Bieto y Talón, 2008).

La mineralización del N es un proceso donde los organismos en condiciones

aeróbicas y/o anaeróbicas del suelo juegan un papel importante para la

transformación de los componentes orgánicos a formas inorgánicos como el NH4+,

nitrito (NO2-) y NO3

-. (Azcón Bieto y Talón, 2008; Hentschel et al., 2009; Martín,

2013). La inmovilización el proceso complementario, mediante la cual el N se

acompleja y permanece temporalmente al interior del agroecosistema (1).

En la mineralización, el N sufre dos procesos bien diferenciados, mediados por

actividad microbiana: la amonificación y la nitrificación, fases complementarias que

ocurren de manera paralela en los suelos (Coyne, 2000). De acuerdo con Sylvia et

al., (2005), durante la amonificación la MO nitrogenada es transformada a NH4+ por

1 Sánchez de P. M. 2013.Comunicación personal. Profesora Titular UNAL-Palmira.

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acción enzimática de bacterias y hongos del suelo, luego bacterias nitrificantes

oxidan el NH4+ a NO2

- y luego a NO3-, proceso conocido como nitrificación.

Figura 1. Representación esquemática del ciclo de nitrógeno en los agroecosistemas

Fuente: Modificado de Zsoldos y Haunold, 1982; Azcón Bieto y Talón, 2008. Rojo: salidas, Azul: entradas, Verde: transformaciones

La velocidad de nitrificación es mediada por la temperatura, humedad y pH del

suelo. En zonas cálidas con suelos húmedos y pH casi neutro las bacterias

nitrificantes oxidan el NH4+ a NO3

- en pocos días, en zonas frías con suelos ácidos

las bacterias nitrificantes son menos eficientes y abundantes, por lo que el NH4+ es

la fuente de N más importante (Zsoldos y Haunold, 1982; Navarro y Navarro, 2003;

Madigan et al., 2003; Sylvia et al., 2005; Gubry-Rangin et al., 2010).

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En la nitrificación, el N es transformado por dos grupos de microorganismos, las

bacterias oxidantes del amoniaco (BOA) y, por las bacterias oxidantes del nitrito

(BON) (Larrea, 2002; Sylvia et al., 2005). El género Nitrosomonas es el de mayor

importancia en la nitritación y posteriormente las Nitrobacter en la nitratación. Estas

transformaciones están limitadas a bacterias autótrofas y aerobias estrictas (Tisdale

y Nelson, 1970; Focht y Verstraete, 1977; Hooper, 1989), arqueobacterias (Prosser,

2007; Spang et al., 2010) y a hongos como Aspergillus (Atlas y Bartha, 2001;

Schinko et al., 2010).

Durante la desnitrificación biológica el suelo suele emitir gases en presencia de

proteobacterias Gram-negativas como Pseudomonas y Alcaligenes, algunas

bacterias Gram-positivas como Bacillus e, incluso arqueobacterias halófilas. Todos

los desnitrificantes son microorganismos quimiótrofos o heterótrofos, anaerobios

facultativos, lo que significa que utilizan NO3- ó NO2

- como aceptores de electrones

(Rittmann y McCarty, 2001), produciendo NOx, principalmente N2 (Knowles, 1982;

Atlas y Bartha, 2001; Rösch y Bothe, 2009).

Coyne (2000) expresa que la desnitrificación se afecta por las condiciones del suelo

(humedad, textura, pH, temperatura, etc.) y los organismos involucrados. Este

proceso ocurre en los poros del suelo donde la concentración de O2 es inferior al

10%. La temperatura óptima oscila entre 25-35°C, pero puede ocurrir entre los 2 y

50°C. Suelos muy ácidos con pH menores a 5 inhiben rápidamente la producción

de N2 y favorecen la formación de N2O. Si bien en los ecosistemas la emisión de

GEI como N2O ocurre en forma natural, su incremento es reflejo del manejo y tipo

de agroecosistema establecido.

Fijación del N2: Biológica e Industrial

La fijación biológica e industrial del N2 es otra fuente importante de nutrición para

las plantas y microorganismos presentes en el suelo. La cantidad de N fijado en la

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naturaleza oscila de 176 a 230 x106 Tm año-1, de las cuales 13% es por descargas

eléctricas y 87% por microorganismos, esta cantidad es cuatro veces mayor a la

fijada por la industria química (Azcón Bieto y Talón, 2008).

La fijación industrial es un proceso altamente demandante de energía vía suministro

de combustibles fósiles, basado en el postulado de Haber-Bosch que consiste en la

reacción química siguiente:

CH4 + H2O CO2 + 3H2 luego N2 + 3H2 2NH3

En esta reacción, el metano combinado con agua genera H2 y, luego éste H2 se

combina con N2 en presencia de un catalizador produce el amoniaco a una

temperatura de 600°C y una presión de ≤106 kPa. Estas necesidades energéticas

son suplidas en la industria con el uso del petróleo (McNeill y Unkovich, 2007).

Desde 1962 la producción anual de fertilizantes nitrogenados ha incrementado de

13.5 a 86.4 Tg (1 Tg=1012 g) en todo el mundo (FAO, 2004). La demanda global

está directamente relacionado con la producción de granos (Cassman et al., 2002),

la cual, sólo de 1995 a 1997, cerca del 65% del consumo fue para la producción de

granos de cereales (IFA/FAO, 2001). El IFA (2005) expone que a nivel mundial se

usa en fertilización sintética nitrogenada aproximadamente 100 millones t N año-1

en los agroecosistemas. Ya para el 2011, la producción mundial de fertilizantes

nitrogenados alcanzó los 163.2 millones de toneladas y se calcula que la demanda

para el 2015 sea alrededor de 190 millones (FAO, 2011) El proceso de producción

estos fertilizantes y posteriormente su uso, generan problemas económicos,

políticos, sociales y ambientales que trascienden los estados y generan crisis global

(Reca, 2006; Oya, 2009; Sumpsi, 2011).

Por el contrario, Baca et al., (2000) expone que el proceso de fijación biológica del

N2 es de bajo costo energético (25 oC y 79 kPa de presión), es mediado por

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organismos en forma libre o en asociaciones (Philippot y Germon, 2005). En este

sentido, las leguminosas juegan un papel fundamental a través de la simbiosis

planta-rizobios para fijar más de 100-250 kg ha-1 año-1 y de 6-10 por

microorganismos de vida libre en el suelo (Navarro y Navarro, 2003; Azcón Bieto y

Talón, 2008). Este proceso es influenciado fuertemente por el clima, pH y fertilidad

del suelo, actividad fotosintética y especie de la leguminosa (Tisdale et al., 2005).

Acumulación de N en biomasa vegetal (inmovilización)

Es de amplio conocimiento que el N, después de H, C y O es el mineral más

abundante en la materia seca de las plantas (Salisbury y Ross, 1994; Mohr y

Schopher, 1995; Marschner, 1995; Kochian, 2000; Rao, 2009). La absorción y

asimilación de este elemento en formas inorgánicas (NH4+ y NO3

-) por las plantas

está asociado a condiciones específicas, como la cantidad y equilibrio de N

inorgánico, pH, temperatura, aireación, humedad y relación C:N en el suelo,

microorgranismos presentes (principalmente bacterias amonificantes y nitrificantes),

edad y especie de la planta (Malavolta et al., 1976; Marschner, 1995; Crawford et

al., 2000; Sylvia et al., 2005; Azcón Bieto y Talón, 2008; Menjivar, 2012).

Las plantas por medio de las raíces captan formas inorgánicas de N por flujo de

masa, difusión e interceptación (Mengel y Kirkby, 2000; Marschner, 1995; Hinsinger

et al., 2011), la planta absorbe este nutrimento en función de la concentración de

estos en la solución de suelo, el patrón de distribución radical, el contenido de agua

del suelo y la tasa de crecimiento de la planta (McNeill y Unkovich, 2007). Otras

vías utilizadas son realizadas por la FBN y por las hojas, donde el NH3 es absorbido

a través de sus estomas (Fassbender, 1982; Salisbury y Ross, 1994; Azcón Bieto y

Talón, 2008).

En las plantas el N puede ser absorbido y asimilado por dos vías en las raíces,

ocurre por la presencia de formas inorgánicas cuando no existen nódulos o N2 en

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las leguminosas (Figura 2), dependiendo a condiciones específicas se opta por una

mayor actividad en una de las vías. En el cultivo soya y alfalfa el sistema simbiótico

es afectado y/o inhibido por diferentes condiciones en el suelo como por la

moderada o alta concentración de N inorgánico, baja relación C:N, carencias de P,

K, Ca, S y micronutrientes, anegación por 2 a 3 días, alta compactación, pH bajo,

estrés hídrico y temperaturas bajas (Lett et al., 1998; Perticari, 2001; Merrick, 2005;

Freixas et al., 2010; Vileta et al., 2010). En suelos bien aireados y pH cercanos al

neutro hay mayores concentraciones de NO3- y en condiciones ácidas o alcalinas

prevalecen la formas NH4+, NH3 y NO2

-(Orozco, 1999; Sylvia et al., 2005; Gubry-

Rangin et al., 2010), la preferencia por el uno o por el otro depende del tipo y edad

de planta entre otros factores antes mencionados, en donde la mayor parte del NH4+

absorbido se incorpora a los compuestos orgánicos en las raíces, mientras que el

NO3- es móvil en el xilema y se puede almacenar en la vacuola de las raíces y demás

órganos aéreos de la planta.

La acumulación de nitratos en la planta no es dañino en ningún momento y es de

importancia para el balance iónico (anión - catión) como en la osmoregulación, sin

embargo, se debe reducir a NH4+ para luego ser incorporado rápidamente a los

esqueletos carbonados en la síntesis de aminoácidos y así evitar la toxicidad por la

disminución del pH, este proceso que se denomina asimilación del NH4+, este

proceso es tan importante para la vida de las plantas como la misma reducción y

asimilación del CO2 en la fotosíntesis (Marschner, 1995; Crawford, et al., 2000;

McNeill y Unkovich, 2007; Azcón Bieto y Talón, 2008; Nӓsholm et al., 2009; Cedeño,

2012).

Figura 2. Asimilación de N en plantas con y sin raíces noduladas.

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Fuente: Modificado de Mejía de Tafur, 2010.

3.1.1.2 Pérdidas de N los agroecosistemas

Rutas de salida del N en el suelo

Durante el manejo de los cultivos, la nutrición de las plantas es imprescindible para

la productividad del sistema, práctica que el agricultor convencional asume,

principalmente fertilizantes. Varios autores sostienen que la aplicación de

fertilizantes nitrogenados al suelo conlleva pérdidas de aproximadamente 70-80%,

las cuales ocurren por vías de lixiviación, erosión, volatilización contaminando el

aire, agua y el mismo suelo. Dejando sólo entre el 20-30% a disposición por los

cultivos, lo cual torna esta práctica insostenible en términos económicos y

ambientales (Bunch, 1994; Jarvis, 1996; Raun y Johnson, 1999; Glass, 2003;

Padilla, 2005; Jordan et al., 2008; Van Den Heuvel, 2010; Sepúlveda et al., 2012).

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La lixiviación ocurre por las cargas negativas que posee los coloides del suelo

(arcillas, materia orgánica y complejos órgano-minerales), el NH4+ puede adherirse

y es relativamente inmóvil, pero el NO3- se repele siendo fácilmente lixiviado por las

aguas de drenaje y desplazarse lejos de la rizosfera de las plantas (Philippot y

Germon, 2005; Sylvia et al., 2005). Estas pérdidas se intensifican cuando existe de

forma paralela excesiva fertilización e irrigación de tierras, en algunos casos se ha

registrado pérdidas alrededor de 912 kg de nitratos ha-1 año-1 (Adriano et al., 1972;

Pratt y Adriano, 1973; Goulding, 2000; Cavero et al., 2003). Ramos et al., (2002) en

los cultivos de cebolla y patata temprana registran pérdidas que varían entre 240 y

340 kg N ha-1 dependiendo del tratamiento de fertilización y, representan entre el

66-70% del nitrógeno total aplicado en el cultivo de cebolla y entre el 38-65% en el

cultivo de patata, respectivamente. Castellanos y Celaya (2011) y Marcano y

Elizalde (2012) encontraron que cuando existe alta irrigación y temperaturas

elevadas aceleran los procesos de nitrificación y, acompañada de altos niveles de

MOS, actúan como promotores en pérdidas considerables de NO3- por lixiviación.

La erosión hídrica y eólica son vías poco estudiadas como pérdidas del N, en los

agroecosistemas las diferentes formas de N adheridos tanto a las partículas del

suelo como a la MO pueden sufrir algún tipo de transporte, especialmente en

regiones áridas y semiáridas con altas velocidades de viento (McNeill y Unkovich,

2007). La influencia del agua es un factor importante por el potencial en la

degradación del suelo, caracterizado por la disminución de los contenidos de la MO

y especialmente fracciones lábiles (Mariscal, 2008). Durante las lluvias cuando las

gotas golpean los suelos desprotegidos o los flujos sobrepasan la capacidad de

infiltración del suelo ocurren los desprendimientos, transporte y deposición de

partículas en otras zonas (Philippot y Germon, 2005; Camas, 2011; Camas et al.,

2012).

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19

La volatilización del amoniaco (NH3) en el suelo es un proceso natural que ocurre

en el sistema suelo-planta a partir de la degradación del material vegetal y cuando

se suministran abonos orgánicos o fertilizantes de síntesis química indutrial,

normalmente es gas se encuentra en equilibrio con el NH4+ (Brady y Weil, 2004), de

acuerdo a la reacción reversible: NH4+ + OH- H2O + NH3. Sin embargo, cuando

aumenta el pH y temperatura del suelo, se acelera la producción de NH3 (McNeill y

Unkovich, 2007), también la emisión de este gas ocurre cuando son aplicados

fertilizantes nitrogenados (urea y sulfato de amonio) al suelo, pérdidas que pueden

alcanzar el 50% de lo aplicado en suelos bajo riego y hasta el 80% en suelos

anegados, como el arroz.

Una técnica recomendable para reducir las pérdidas de los fertilizantes aplicados

en la superficie del suelo, es la incorporación de unos pocos centímetros,

aminorando entre un 25 a 75% la salidas del sistema (Philippot y Germon, 2005;

Sylvia et al., 2005).

La desnitrificación biológica es otra vía que sigue el N en condiciones de baja

concentración de oxígeno, permitiendo la acción de bacterias heterotróficas

anaeróbicas del suelo que utilizan en sus procesos de respiración, los nitratos como

aceptores de electrones, en lugar del O2 y, el carbono orgánico como donador de

electrones, con productos finales de NO2, NO, N2O y N2 (Coyne, 2000; McNeill y

Unkovich, 2007), los cuales hacen parte de los GEI. Este proceso genera las

mayores pérdidas de N desde el suelo por la emisión de N2 y N2O (40 a 350 Tg año-

1) (Haynes, 1986; Simon, 2002; Rösch y Bothe, 2009).

El N hace parte de los GEI

El aumento en las emisiones de GEI por sistemas agrícolas convencionales tiene

repercusiones directas por el calentamiento global e indirectas como inundaciones,

sequías, tormentas, entre otras, problemas que involucran a las sociedades en todo

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el globo terráqueo (Stern, 2006; Pandey et al., 2010). Este fenómeno es causado

por la absorción en la atmósfera de radiaciones infrarrojas de baja frecuencia

reflejadas en la superficie terrestre, impidiendo que escapen al espacio exterior. Los

GEI (CO2, CH4 y N2O) más importantes tienen la habilidad de estas frecuencias

(Figura 3) y aunque representan menos del 1% de la concentración en la atmósfera

han provocado el calentamiento global. El CO2 puede aumentar en la actualidad la

temperatura a 2°C (400 ppmv) por encima de las registradas en la época

preindustrial (270 ppmv) y, se espera un incremento adicional de 1 a 3.5°C (450

ppmv) para el 2100 (UNFCCC, 2004; IPCC, 2011; Espíndola y Valderrama, 2012;

NCYT, 2013).

Figura 3. Esquema simplificado del efecto invernadero natural en la superficie terrestre.

Fuente: Modificado de BBC, 2008

A nivel mundial la agricultura contribuye con el incremento de las concentraciones

de los GEI en la atmósfera, esta actividad aporta el 20% de las emisiones

antropogénicas; aproximadamente 22% de las emisiones totales de CO2, 55% de

CH4 y 80% de N2O (Mosier et al., 1998; Houghton, 2001; IPCC, 2007; García, 2013).

Se atribuye que el cambio en el uso de la tierra, deforestación y quema de biomasa

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21

son las principales causas de las emisiones de CO2, mientras que el depósito de

rastrojos de plantas leguminosas y uso indiscriminado de fertilizantes nitrogenados

de síntesis química industrial son para las de N2O y las de CH4, en sistemas

inundados de arroz o explotación ganadera, que suelen ocurrir en condiciones con

poca o nula aireación (Kessavalou et al., 1998; Costa, 2005; IPCC, 2007; MTC,

2009; Zanatta et al., 2010).

En algunas investigaciones (Prather et al., 1995; Glass, 2003; Smith et al., 2007)

relacionan a las actividades agrícolas a nivel global con la generación del 60% de

las emisiones de N2O del suelo por la vía de la nitrificación y desnitrificación, con un

incremento cercano al 17% entre 1990 y 2005, llegándose a acumular este gas en

la atmósfera a una concentración de 319 ppbv (partes por billón de volumen). Este

gas destruiye la capa de ozono estratosférico, con sus graves efectos sobre la salud

humana y planetaria (IPCC, 2007).

Las grandes demandas alimenticias de la sociedad se han utilizaso como

justificación para intensificar las prácticas de la revolución verde, entre ellas, el uso

de fertilizantes de síntesis química industrial, sin ningún control sobre los impactos

ambientales, de salubridad y bienestar del agroecosistema. En la Figuras 4 y 5 se

observa que al utilizar altas dosis de fertilizantes nitrogenados, el ciclo del C y N en

el suelo es afectado, estimulando la emisión de N2O y reducción en el

almacenamiento (oxidación) de CH4 (Bronson y Mosier, 1994; Powlson et al., 1997;

Freney, 1997).

Figura 4. Dinámica del N2O generado en el suelo a partir del manejo agrícola

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Fuente: Modificado de Mosquera et al., 2007.

Figura 5. Ciclo del CH4 y CO2 en la agricultura

Fuente: Modificado de Mosquera et al., 2007.

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3.1.1.4 La biología molecular como herramienta para comprender la dinámica

del N

El papel de la microbiología ha sido caracterizar el comportamiento y entender las

relaciones de la biota con su entorno, ya que ocurren procesos de relevancia

mundial, el identificar y cuantificar la actividad de las bacterianas involucradas en

las transformaciones del N en el suelo es un hecho relevante para la microbiología.

Se conoce que la biomasa microbiana sobre y subsuelo posee una reserva de C

similar al material vegetal (Whitman et al., 1998). En este contexto los

microorganismos del suelo contribuyen a la sostenibilidad del ecosistema, como

factores claves en el ciclaje de nutrientes (N, P, S) y degradación de pesticidas del

sistema suelo, sin embargo, pueden afectar el ambiente por la producción de GEI y

contaminación de aguas cuando se disponen y pierden altas cantidades de

fertilizantes minerales al sistema (Tebbe, 2005).

Los microorganismos en los agroecosistemas acuáticos promueven continuas

interconversiones de compuestos nitrogenados orgánicos e inorgánicos,

conformados en biomasa y gases (Stephenson et al., 2000). En los ríos y lagos, el

NH4+ es muy tóxico para los organismos presentes, pues es rápidamente oxidado

hasta NO3- provocando una disminución de la concentración de O2, con ello se

favorece la proliferación de algas y obstrucción de la penetración de luz solar a

mayores profundidades, este proceso se denomina eutrofización. El P proveniente

de las aguas servidas contribuye a éste proceso en las aguas superficiales,

provocando la muerte de muchos organismos acuáticos (EPA, 2002).

Si bien la microbiología ha avanzado, casos como el anterior se conocen y se

entienden las implicaciones económicas y ambientales que provoca hacia el

sistema, pero los agentes causales no se logran vislumbrar en tales procesos, se

ha asociado que problemas técnicos limitan la habilidad de responder a preguntas

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fundamentales. La `caja negra´ es la metáfora que se utiliza para describir estas

situaciones (Tiedje et al., 1999).

La naturaleza y clasificación de la microfauna del suelo es extremadamente

compleja, la microbiología del suelo ha llegado a un punto que a la técnica del cultivo

puro se le suma la identificación a través de la biología molecular, el estudio de la

diversidad procariota desde un punto de vista diferente: el nivel genético (Tunlid,

1999; Manefield y Turner, 2002; Torsvik y Ovreas, 2002; Paerl y Steppe, 2003).

Muyzer (1999) comenta que la clasificación en función de propiedades fisiologías y

bioquímicas es imposible, puesto que se estima que un 99% de la totalidad de los

microorganismos existentes en la naturaleza no ha sido jamás aislado ni cultivado

en condiciones de laboratorio. A su vez Muyzer y Smalla (1998) apuntan que esto

se debe en gran parte a la falta de conocimientos sobre los requerimientos reales

de los mismos en condiciones naturales que impide emularlas a nivel de laboratorio,

así como el desconocimiento de posibles interdependencias entre organismos en

sus hábitats naturales.

Una de las aproximaciones más extendidas para estudiar la diversidad microbiana

a nivel genético es el uso de genes marcadores, capaz de identificar organismos

por la expresión genética individual (Jansson et al., 2000) y por la inserción de genes

en un organismo mediante ingeniería genética (Jansson, 2003). Los marcadores

más importantes son los genes que codifican para el ARN de la subunidad de

ribosomas (SSU ARNr) (Head et al., 1998). Para realizar estudios ecológicos se ha

utilizado la clonación y secuenciación del gen SSU ARNr (16s para bacterias y

arqueas) que al poseer una sonda evolutiva lenta permite detectar relaciones

filogenéticas y, con un tamaño relativamente pequeño (1540 nucleótidos) ha

facilitado su secuenciación (Tourasse y Gouy, 1997; Otsuka et al., 1999).

La secuencia del 16s se realiza por tres pasos enzimáticos diferentes: transcritasa

inversa, ADN polimerasa I y un termina de desoxynucleotido1-transferasa (Weller

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y Ward, 1989). En este mismo tiempo, Giovannoni ha trabajado con una técnica

más rápida y aplicable a estudios de ecología molecular y microbiología del suelo:

la cadena de reacción polimerasa (PCR) (Giovannoni et al., 1990). Esta estructura

ha permitido el diseño de cebadores universales para la aplicación de estrategias

de PCR (Weisburg et al., 1991), que posibilitan la clonación de fragmentos de los

ARNr 16s de microorganismos a partir del ADN total extraído de muestras naturales,

de este modo se profundiza en el conocimiento de la diversidad de las comunidades

microbianas en los ecosistemas (Muyzer y Smalla, 1998).

Diversos autores han cuantificado las poblaciones de bacterias nitrificantes del

suelo (Papen y Berg, 1998; Bengtsson y Bergwall, 2000; Rodríguez et al., 2007).

Sin embargo, Coyne (2000) asevera de la dificultad de cultivar y cuantificar estos

organismos en medios sólidos debido a su lento crecimiento y dificultad de

aislamiento. Por ello, los investigadores en sus metodologías utilizan medios

líquidos y del método número más probable (NMP) para su conteo. Pero Madigan

et al., (2003) afirman que este procedimiento presenta inconvenientes en la

veracidad de los resultados que brinda, ya que se suele encontrar desfases en la

producción de N inorgánico y la actividad de las bacterias nitrificantes.

En la actualidad se disponen de técnicas más precisas a través de biología

molecular facilitando esta labor, como la hibridación por fluorescencia in situ (FISH)

y reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (qPCR) (Moreta et al., 2009;

Qin et al., 2011; Peng et al., 2013). En este sentido, se hace necesario ver el impacto

de las bacterias nitrificantes en la dinámica del N en agroecosistemas y como estos

responden a diferentes manejos del suelo y programas de fertilización orgánica e

inorgánica.

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3.1.1.4 Algunas estrategias para influir en el balance del N en los

agroecosistemas

Durante el desarrollo de los ecosistemas, a partir de rocas improductivas sin ningún

tipo de vegetación hacia un suelo profundo y con abundante vegetación, existió un

incremento de los niveles N en estos componentes. Este incremento se atribuye a

las diversas deposiciones húmedas y secas del N atmosférico como de la FBN. El

los ecosistemas el nivel de equilibrio en el N encontrado es obtenido debido a la

maduración del sistema (Haynes, 1986). Estos procesos juegan papel fundamental

para el balance de este nutriente y contrarrestar las pérdidas tan grandes que

ocurren de él.

En este sentido, Schnoor (1996) resume en la Tabla 1 que las actividades humanas

orientadas a la producción de fertilizantes, el empleo de combustibles fósiles y

cambios en el uso del suelo (fuentes), rivalizan con las tasas de fijación natural

(sumidero) como la acumulación del N2O en la atmósfera, transporte fluvial al

océano, acumulación como biomasa, entre otros, expresados en nitrógeno global

reactivo (NH3, NOx, N2O).

Estas tendencias globales sobre el manejo del N en los agroecosistemas, confirman

el endeble renglón sostenible aplicado en la agricultura, convirtiéndola en la mayor

fuente de N2O. Se ha cuantificado que las emisiones de las tierras cultivadas

producen 3.5 millones t N2O año-1, del cual, 1.5 es atribuido al uso de fertilizantes

de síntesis química industrial (Kroeze, 1994; Smith et al., 1997; Pavei, 2003; Syakila

y Kroeze, 2011).

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Tabla 1. Estimación de fuentes y sumideros del Nitrógeno Global Reactivo debido a las actividades humanas.

Fuentes de Nitrógeno Reactivo Tg N/año

Producción de energía (uso combustibles fósil) 20

Producción de fertilizantes 80

Agricultura de cultivo de legumbres (cambio de usos del suelo) 40

Total 140

Sumideros de Nitrógeno Reactivo Tg N/año

N2O en la atmósfera 3

Transporte fluvial a los océanos 41

Deposición atmosférica oceánica 18

Toma de biomasa (fertilización) 20

Sumideros restantes (desnitrificación a N, acumulación en los suelos y aguas subterráneas)

58

Total 140 Fuente: Tomado de Schnoor, 1996.

Las emisiones de GEI son un problema mayor con base en el potencial de

calentamiento global (PCG). El IPCC (2007) registra que el N2O y el CH4 poseen un

PCG de 296 y 23 veces más que CO2 después de 100 años, respectivamente. Por

esto, los sistemas convencionales de producción que favorecen la emanación de

los gases, representan enormes problemas para el ambiente.

Durante las últimas décadas en América Latina se han observado importantes

cambios climáticos, sobre todo en la precipitación y temperatura. Además, los

cambios en el uso del suelo han intensificado la explotación de los recursos

naturales y exacerbado muchos procesos de degradación de suelos como la

erosión, salinización, desertificación y remociones masales (IDEAM, 2004; Magrin

et al., 2007; Torres, 2012; López y Fuster, 2012).

Otros efectos se han evidenciado en los aumentos del nivel del mar y eventos

extremos que afectan las zonas costeras como aumento en la temperatura mínima

y medias como de la humedad atmosférica, desplazamiento de variables climáticas

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en ciclos cortos y anuales, variación de precipitación e intensificación de extremos

hidrológicos, que repercuten en la reproducción de peces y mariscos como en la

movilización de zonas y épocas de alimentación de la fauna. Se prevé escenarios

con aumentos en la temperatura, estrés hídrico, cambios de los bosques tropicales

por sabanas y, que la vegetación semiárida puede ser remplazada por vegetación

de tierras áridas (Pérez et al., 1998; IPCCWGII, 2007; Espinosa et al., 2012;

Maldonado, 2012).

En este contexto, Colombia produce el 0.37% de las emisiones globales de CO2

(IDEAM y MAVDT, 2010). De acuerdo al último inventario realizado por IDEAM en

los periodos de 1990-1994 y 2000-2004, registraron que la agricultura aporta el 38%

de total de emisiones en el país, correspondiendo el 38.1-42.8% a CO2, 65.92-

77.26% a CH4 en CO2-eq y 95.32-95.56% a N2O en CO2-eq (IDEAM, 2004). Los

rubros implicados en el proceso son la ganadería (19.14%), uso de fertilizantes

nitrogenados (18.11%), transporte (12.09%), conversión de bosques y praderas

(9.24%), industrias de generación de energía (8.24%) y consumo de combustible en

industria y construcción (7.28%) (ANDI, 2010).

Dentro de ésta perspectiva de contaminación, se plantea la reducción de emisiones

de GEI promoviendo los sumideros de C con los bosques y sistemas

agrosilvopastoriles (SEAE, 2007). El secuestro de C practicada por parte de la

agricultura ecológica se basa en la reducir el uso de fertilizantes de síntesis

industrial y promoción de AV. El IPCC (2000) señala que estas prácticas

agroecológicas mejoran la calidad de las tierras y de forma significativa la captación

de C y N.

Más allá de las características edáficas y climáticas, prácticas de manejo también

pueden interferir en la mineralización de MO, influenciando asimismo la

disponibilidad de nutrientes y por tanto la emisión de GEI (Costa et al., 2008;

Bouwman et al., 2010). Las prácticas de manejo pueden aumentar o reducir los

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bancos de C y N orgánico del suelo; por ejemplo, la preparación del suelo con el

arado promueven pérdidas de MO por varios mecanismos (Sey et al., 2008):

Fraccionamiento de agregados del suelo que protegen la MO de la

descomposición microbiana.

Aumento de aireación que estimula la actividad microbiana, resultando en la

liberación de grandes cantidades de CO2 y N2O a la atmósfera.

En contraparte, los sistemas conservacionistas utilizan la siembra directa con la

rotación de cultivos para incrementar los aportes de residuos vegetales, alternativa

eficiente en el aumento de la MO (Zanatta, et al., 2007; Hernández, 2012; Carvalho

et al., 2012). Además, se han registrado beneficios de las prácticas

conservacionistas cuando se hace uso de leguminosas como plantas de cobertura

por su efecto en la acumulación de MO y reducción de emisiones de GEI del suelo

a la atmósfera (Diekow et al., 2004; Gomes, 2006; Rojas et al., 2013). Las

contribuciones de las leguminosas en la acumulación anual de las reservas de C y

N en el suelo en los agroecosistemas, está relacionada con el depósito continuo de

residuos, reciclaje de nutrientes y con la productividad del cultivo en sucesión

(Lovato et al., 2004; Sivila y Hervé, 2006; Parra, 2012).

3.2 Los abonos verdes como práctica agroecológica multipropósito en los

agroecosistemas

Los AV son plantas que se siembran en rotación y/o asocio con un cultivo comercial

y, que posteriormente son incorporadas al suelo in situ para mantener, mejorar o

restaurar las propiedades físicas, químicas y biológicas del suelo (Calegari et al.,

1992; Dinesh y Dubey, 1998; Tejada et al., 2008; Marín, 2013). Prager et al., (2001)

enfatizan que los AV poseen la capacidad de establecer dos relaciones simbióticas:

1) la leguminosa-rizobios, que permite que el sistema se enriquezca con N a través

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del tiempo mediante la fijación biológica de N2 (FBN) y 2) micorriza arbuscular (MA),

en la cual los hongos formadores de micorriza arbuscular (HFMA) se convierten en

sifones que se conectan a las raíces de las plantas asociadas y contribuyen a la

absorción de nutrientes, especialmente el P, propiciando a la productividad y

sanidad de los cultivos adjuntos y/o posteriores (Sánchez de P. et al., 2010).

Los acolchados son una práctica agrícola que consiste aplicar todo material de

origen orgánico e inorgánico sobre la superficie del suelo sin ser incorporados

(Robinson, 1988; Burbano, 1989; Turney y Menge, 1994). Los acolchados orgánicos

(AO) son utilizados en la agricultura con el fin de mejorar la productividad del cultivo

de interés, a través del aporte de nutrientes según su naturaleza, barrera para la

emergencia de la flora arvense, reducir la evaporación directa del agua desde la

superficie del suelo, mantener una mayor humedad que en un suelo desnudo,

disminuir las fluctuaciones de temperatura en los primeros 15 cm del suelo,

favorecer a la estabilidad estructural y reducir la erosión y salinización del suelo

(Leal et al., 2007; Zhang et al., 2008; Smets y Poesen, 2009; Zribi et al., 2011).

Cuando se aportan grandes cantidades de residuos orgánicos a través de AV o AO

como alternativa al barbecho en los sistemas de producción convencional

comienzan los procesos de descomposición por acción de la microfauna presente.

Marschner y Rengel (2007) registraron que las bacterias nitrificantes son capaces

de mineralizar el N del suelo y liberarlo en forma de NH4+ y NO3

-, trabajando en

condiciones aeróbicas y anaeróbicas, con mayor actividad en la primera capa suelo

(0–5 cm) por su alto contenido de MO en diferentes estados de descomposición.

Según Clark (2007), los AV juegan un papel fundamental en el ciclo del N en el

suelo. Las bacterias del suelo descomponen sus residuos y los utilizan como fuente

de alimento, llegando a doblar su población inicial en apenas siete días bajo

condiciones de campo. El resultado es una rápida y considerable liberación de

nitratos una semana después de su incorporación. Por otra parte, Cobo et al., (2002)

sostienen que los mayores picos de liberación de N amoniacal en el suelo se

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presentan a las dos semanas de su incorporación mientras que los de N nítrico se

presentan a las cuatro semanas.

El manejar adecuadamente las relaciones C:N de la especies utilizadas como AV y

conocer los picos de absorción del cultivo principal, permitirá que el cultivo pueda

tomar el N en el momento que los AV lo están aportando y con ello reducir pérdidas

de este elemento hacia acuíferos y la atmósfera. En ese sentido, Martin y Rivera

(2004) también aseguran que el N incorporado se mineraliza muy rápido,

especialmente sí el AV es de baja relación C:N y más aún en período lluvioso y con

altas temperaturas, liberando N inorgánico al entorno, parte de ello como N2O a la

atmósfera. De manera que es preponderante lograr una buena sincronización entre

la mineralización del N y los requerimientos del cultivo, este hecho es la llave para

optimizar el uso del nutrimento, alcanzar la productividad y reducir la contaminación

ambiental (Cassman et al., 2002).

Es por ello que Baligar y Fageria (2007) exponen que es oportuno estudiar y aplicar

la relación C:N de los AV incorporados dentro de un sistema productivo agrícola

como una buena herramienta para predecir la tasa de descomposición de los

residuos. Ellos consideran que las relaciones que van de 25 a 30 han sido sugeridas

como el límite entre la mineralización neta y la inmovilización del N. Tisdale y Nelson

(1970) registraron inmovilización del N a relaciones mayores de 30, entre 20 a 30

no hay ni inmovilización ni liberación y a menos de 20 existe liberación al inicio de

la descomposición.

El implementar prácticas agroecológicas en el agroecosistema es una alternativa

amigable con el ambiente y la económica para el agricultor. Una de ellas es el uso

y manejo de AV que incluye leguminosas como gramíneas con el fin de cubrir las

necesidades de N de los cultivos. Bunch (1994) comentó que la Mucuna sp. utilizada

como AV es importante en la conservación y fertilidad del suelo en áreas de

producción con pendientes ≥ 35%, 2,000 mm de pluviosidad y sin ninguna práctica

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de esta índole. De acuerdo con Salamanca y Wilson (2003), la incorporación de AV

en el suelo además de elevar el contenido de MO estimula la actividad microbiana,

específicamente de poblaciones bacterianas de vida libre fijadoras de N.

Las gramíneas también ofrecen beneficios hacia el suelo, al poseer un sistema

radicular fasciculado permite el rompimiento del suelo mejorando su estructura y la

capacidad de infiltración (Prager et al., 2002). Estos materiales son capaces de

agregar al suelo hasta 50 t ha-1 de MO (peso fresco) en cada siembra, mejorando

su capacidad de retención de agua, contenido de nutrientes y equilibrio del pH

(Bunch, 1994).

El uso de AV se ha distribuido en continentes como África, Asia y América, utilizando

diversas especies de forma empírica en lotes de producción y en la investigación

científica. En la Tabla 2 se observan las más usadas a nivel mundial.

3.2.1 El uso de Mucuna pruriens L. y otras especies como abono verde en el

mundo y en Colombia

Hasta el momento se han realizado distintas investigaciones sobre el uso de AV en

cultivos de interés. La finalidad se ha dirigido a la recuperación de suelos como

fuente alimenticia en sistemas ganaderos, avícolas y personas, este último

principalmente en África. El fríjol terciopelo (M. pruriens var. utilis) es la más utilizada

como AV en cultivos de maíz, tanto en sistemas tradicionales en Centroamérica

(Honduras, El Salvador, Nicaragua) como en otros programas de desarrollo en el

mundo (Bunch, 1994; Anthofer y Kroschel, 2005; Blanchart et al., 2006; Shoko,

2009). Entre las ventajas obtenidas con su uso se destacan la alta tasa de fijación

de N2 (hasta 150 kg N total ha-1), el control de arvenses por efectos alelopáticos e

interferencia lumínica por su rápida cobertura, el control de nematodos y reducción

de pudriciones causadas por hongos del género Phytophthora y Rhizoctonia en

altitudes que van desde a nivel del mar hasta 1500 m (Bunch, 1994).

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Tabla 2. Especies de más amplio uso como AV y sus efectos benéficos para los cultivos. Adaptado de Bunch (1994). (†) Efecto medio, (††) efecto alto, y (†††) efecto muy alto.

Especie Nombre común

Control lixiviación de

Nitrógeno Fijación de N2 Efecto

herbicida Efecto

antipatógeno

Aporte de Materia

orgánica

Avena sativa Avena blanca † † ††

Loliummultiflorum Raygrass † † †

Secalecereale Centeno † †† ††

Sesbaniacannabina Sesbania † † † † †

Mucuna pruriens Frijol terciopelo †† †† †† †† †

Crotalariajuncea Crotalaria † † † † † † Trifoliumsubterraneum Trébol subterráneo † † †

Trifolium pratense Trébol blanco † † † †

Vicia villosa Arvejilla † † † †

Vignasinensis Caupí † †† † † † † Vicia faba Haba † † †

Raphanussativus Rábano forrajero † † † ††

Phaceliatanacetifolia Facelia † † † † Dolichoslablab Dólicos † †† †

Canavaliaensiformis Canavalia † †† † † ††

Cajanuscajan Guandúl † †† † † †

Arachispintoi Maní forrajero † † †† † †

Phaseoluscoccineus Chinapopo † †† † †

Lathyrusnigrivalvis Choreque †† † † ††

Lupinusmutabilis Tarhuí †† ††† † † ††

Ojiem et al., (2007) investigaron el aporte de N al suelo por M. pruriens en tres

parcelas para la producción de maíz al oeste de Kenia, las cuáles fueron

catalogadas de baja, media y alta fertilidad. Se obtuvo una FBN que oscilo entre 42

y 132 kg N ha-1 en los suelos de baja fertilidad, entre 67 y 204 kg N ha-1 en los de

mediana y, entre 74 y 234 kg N ha-1 en los de alta.

La Canavalia ensiformis L. sobrevive a condiciones extremas como la sequía,

suelos pobres y ácidos, al sombrío e incidencia de insectos y enfermedades (Prager

et al., 2002). Por lo tanto puede ser usada en lugares muy extremos, típicos de

zonas rurales de producción a pequeña escala. Ángel (1988) expresa que

sembrándola desde el nivel del mar hasta los 1600 m puede fijar hasta 240 kg ha-1

de N y aportar 40-50 t ha-1 de biomasa al cortarlo en prefloración.

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La crotalaria (Crotalaria juncea) puede producir hasta 70 t ha-1 de biomasa en

rotaciones con sorgo, maíz, arroz, algodón y caña de azúcar, incrementando los

rendimientos en 40% (Gutiérrez, 1988). Estos efectos se deben a los aportes de

entre 300-360 kg N total ha-1, alta tolerancia a sequía, actividad nematicida y

capacidad de albergar insectos benéficos (Ángel 1988, Prager et al., 2001).

El Axonopus scoparius posee un crecimiento frondoso llegando a medir hasta 1.5

m de altura, con un sistema radical abundante que rompe la estructura del suelo

mejora la infiltración del agua y circulación del aire, adaptado a suelos ácidos y a

sequía prolongada, con una alta producción de biomasa verde (35 a 45 t ha-1) es

capaz de reciclar P y N (Prager et al., 2001).

Wildner (1990) encontró altos contenidos de P y K aportados por el uso de la arvejilla

(Vicia villosa) y rábano forrajero (Raphanus sativus) como AV, se registraron valores

cercanos al 0.35% de P y 3% de K en la materia seca. En el frijol terciopelo también

se obtuvieron altos contenidos de Ca y Mg y, en la crotalaria valores cercanos a 1%

de Ca y 0.4% de Mg en la materia seca.

En Tanzania, Baijukya et al., (2004) evaluaron el aporte de N por M. pruriens en

suelos clasificados como Humic acrisol y Alumi humic ferrasol, obteniendo una

mineralización del 25% del N aportado en biomasa equivalente a 58 mg kg-1 de

suelo.

En Colombia también se han hecho esfuerzos durante los últimos 20 años por

entender la temática de AV. En el departamento del Valle del Cauca, Ángel y Prager

(1989) evaluaron durante dos años la influencia de los AV Crotalaria, Canavalia y

Cajanus, sobre los rendimientos de los sistemas de producción maíz-soya, maíz-

frijol, maíz-caupí y, sobre la fertilidad del suelo. Durante el experimento los AV

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35

aportaron más de 2 t MS ha-1, aporte valioso de N al suelo por su efecto en variables

de rendimiento y económicas evaluadas para la asociación maíz-caupí.

En otro estudio realizado por Sánchez et al., (1998) en La Mojana (Costa Caribe),

se evaluó el potencial de algunos AV como crotalaria, canavalia, frijol caupí y

vitabosa (Mucuna deeringianum L.) para mejorar la capacidad productiva de suelos

arroceros. La especie crotalaria sobresalió como mejor productora de biomasa (11.6

ton MS ha-1), y M. deeringianum (7.7 ton MS ha-1) más fertilización de síntesis

química industrial (60 kg N ha-1) promovieron los mayores rendimientos en grano

seco de arroz con 4.3 ton ha-1.

Salazar et al., (2004) evaluaron en una zona de ladera del municipio de Piendamó

(Cauca), la relación entre AV y productividad de yuca (Manihot esculenta). El uso

de sorgo (Sorghum vulgare) como AV propició el mayor rendimiento del cultivo

(17.08 t ha-1), seguido de la mezcla de millo (Panicum miliaceum L.) y fríjol

(Phaseolus vulgaris L.) (16.9 t ha-1), rendimientos que se consideran sobresalientes

para las condiciones del suelo y las características agroecológicas de la zona.

También en un Humic Dystrudepts del Valle del Cauca se evaluó el efecto de AV

compuesto por la mezcla de Canavalia ensiformis y Axonopus scoparius sobre

diferentes características del suelo, el cultivo del maíz y la emisión de GEI

(Hernández y Sánchez de P. 2011). Encontrando que el manejo con AV y compost

incorporados promovió la mayor respiración del suelo evaluada a través de CO2,

indicando alta mineralización de nutrientes en estos tratamientos.

El grupo de investigación en Agroecología de la Universidad Nacional de Colombia

sede Palmira, coordinado por la profesora Marina Sánchez de Prager, ha realizado

adelantos valiosos en la comprensión del efecto durante el uso y manejo de los AV

sobre la dinámica del N y P en el suelo, conservación del suelo y la productividad

de cultivos.

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Sanclemente y Prager (2009) evaluaron el uso de M. pruriens como mulch y AV

sobre algunas propiedades físicas, químicas y biológicas de un suelo de ladera

clasificado como Typic Haplustalfs en Palmira (Valle del Cauca). Se encontró un

incremento en el suelo de 201 kg N ha-1 cuando se usó M. pruriens en comparación

con el testigo. Estos valores tuvieron correlación con los rendimientos de grano seco

de maíz, los cuales fueron de 6.5, 4.8 y 4.1 t ha-1, para el mulch, AV y testigo,

respectivamente.

Correa (2010) estudiaron la capacidad del suelo para retener los GEI en un sistema

de maíz bajo el efecto de AV, obteniendo mayores emisiones cuando se removió el

suelo para la incorporación de los AV y compost en forma individual y/o en mezcla,

en estado fresco o como compost.

Gallego (2012) evaluó el efecto de los AV sobre la mineralización del N y la dinámica

de bacterias amonificantes y nitrificantes en un sistema de producción de maíz.

Encontrando similares aportes de N inorgánico al suelo en tratamientos a base de

fertilizantes orgánicos comparados con fertilizantes de síntesis industrial. Por su

parte Vélez (2012) estudio el efecto de los AV en la agregación y actividad de HMA

en un suelo cultivos con maíz en zona de ladera, la mayor expresión de los

componentes de HMA: longitud y actividad de micelio externo, micelio externo vivo

y porcentaje de colonización por arbúsculos, ocurrió con la adición de los AV.

Si bien se han hecho aportes significativos en la comprensión del uso de AV en

sistemas agrícolas como alternativa más económica para el productor y limpia para

el medio ambiente en Colombia, la presente investigación pretende aportar

conocimientos desde un enfoque sistémico de cómo el uso de los AV manejados

bajo la incorporación como acolchados en el suelo y fertilizaciones nitrogenadas a

través del compost y fertilizante de síntesis química industrial generan un efecto en

la dinámica del N en el sistema suelo-planta-atmosfera y productividad de los

cultivos de maíz y soya.

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4. MATERIALES Y MÉTODOS

4.1 Localización del área experimental

Este estudio se realizó en el Campo Experimental de la Universidad Nacional de

Colombia sede Palmira (CEUNP), corregimiento El Carmelo, municipio de

Candelaria, departamento del Valle del Cauca, Colombia, georeferenciada bajo

coordenadas 3° 25’ 34’’ N y 76° 25’ 53’’ O. Este campo está ubicado a una altitud

de 980 msnm, temperatura promedio de 24ºC, humedad relativa de 69% y

precipitación pluvial media anual de 1406 mm (García, 2012).

El suelo correspondió a un Haplustert típico francoso fino isohipertérmico con

pendiente de 1% (Acosta et al., 1997) que ha estado en B aproximadamente ocho

años, al cual se le efectuó caracterización química y física (Anexo 1) del suelo siete

días antes de instalar el ensayo en los laboratorios de UNAL-Palmira y CIAT. El

muestreo se realizó en Z a una profundidad de 0-10 cm tomando muestras

compuestas de cada tratamiento (Jaramillo, 2002).

Para la interpretación de las propiedades químicas (Tabla 3) se acudió a criterios

manejados a nivel nacional (Castro, 2004; IGAC, 2006). Este suelo tiene pH neutro

(6.84), media concentración de CO (26.6 g kg-1) y N inorgánico (18.26 mg kg-1) y,

alto nivel de fósforo (57.45 mg kg-1). Se encontraron niveles medios de Na+ y K+ y

altos de Mg2+ y Ca2+ y CIC. Para los elementos menores S, B (28.03 y 1.45 mg kg-

1) los niveles fueron altos y muy altos para Mn (61.75 mg kg-1); bajos para Cu y Zn

(0.67 y 1.49 mg kg-1) y muy bajos para Fe (8.83 mg kg-1), los cuales se muestran

como limitantes. En suelos con pH neutro se encuentra la mayor disponibilidad de

bases que en condiciones acidas, por el contrario, desfavorecen el desarrollo del

sistema radicular, reducen la actividad microbiana y por ende la nitrificación,

además, la asimilación del P disminuye por combinaciones insolubles con Fe y los

microelementos, con excepción del Mo son más asimilables, particularmente las

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plantas prefieren absorber el Cu y Zn por encima de Mn, lo que conlleva a aumentar

su contenido en la solución del suelo (Marschner, 1995; Zapata, 2004; Tisdale et

al., 2005; Piraneque, 2008; Menjivar, 2012).

Tabla 3. Caracterización química inicial del Typic Haplustert donde se implementó el experimento (profundidad de 0-20 cm).

CO pHH2O N

total NH4

+ NO3-

P (Bray II)

S B Fe Mn Cu Zn K Ca Mg Na CIC

g.kg-1 -------------------------------------------mg.kg-1-------------------------------------- --------cmolc.kg-1----------

26.6 6.84 1.174,5 4.42 13.84 57,45 28.03 1.45 8.83 61.75 0.67 1.49 0.44 10.9 5.63 0.10 21.10

Análisis: Laboratorio de servicios analíticos del CIAT. 2011

Los análisis de las propiedades físicas (Tabla 4) indican textura franco arcillosa

(suelo pesado), la cual permite una adecuada laborabilidad siempre y cuando la

humedad gravimétrica no supere un 50% (Madero, 2011), aun así pueden afectar

las propiedades hidrológicas, debido a la susceptibilidad a la compactación y la

tendencia al encostramiento, riegos que aumentan al disminuir la humedad (Pla,

1993). La textura pesada influye en la alta densidad aparente encontrada (1.72 g

cm-3), que se refleja en muy baja porosidad total (35.34%). Según SSS (1999) un

valor superior a 1.3 g cm-3, constituye una condición limitante que puede perturbar

no sólo el crecimiento de raíces (según especie), drenaje y aireación en el suelo

(Amézquita y Londoño, 1997; Jaramillo, 2002), sino que cuando supera 60% del

espacio poroso con agua genera condiciones de reducción favoreciendo la emisión

de GEI (Ferreira, 2008; Escobar, 2011).

Tabla 4. Caracterización física inicial del Typic Haplustert donde se implementó el experimento (profundidad de 0-20 cm).

Densidad aparente y real (g cm3) 1.7 y 2.6

Porosidad total (%) 35.3

Humedad gravimétrica y volumétrica (%) 19.1 y 32.8

Porosidad total llena agua (%) 92.9

Arenas, Arcillas y Limos (%) 43.1, 27.4 y 29.5

Clase Textural Franco Arcillosa

Análisis: Laboratorio de física de suelos de UNAL-Palmira. 2011

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4.2 Tratamientos y diseño experimental

Para cumplir con los objetivos propuestos se diseñaron los tratamientos descritos

en la Tabla 5. Para la formulación de estos tratamientos se tuvo como base el trabajo

previo realizado por el Grupo de Investigación en Agroecología de UNAL-Palmira

(Sanclemente, 2009; Correa, 2010; Gallego, 2012), en los cuales se encontró que

el uso y forma de aplicación de los AV y compost tienen impacto sobre la dinámica

y disponibilidad de fracciones del N y productividad del agroecosistema.

Se empleó un diseño de bloques completos al azar con arreglo factorial 32 +2

(Parcelas Divididas) con tres repeticiones (Figura 6). Las cuatro parcelas principales

las constituyó el componente vegetal (AV o B) previo al establecimiento de los

cultivos, incluyendo dos con AV incorporados o acolchados, más dos con B, todos

seguidos por sistemas de cultivos asociados (maíz + soya) y de monocultivos (maíz

o soya). Las subparcelas correspondieron a tres diferentes programas de

fertilización (compost, fertilizante de síntesis química industrial y ninguna adición).

4.3 Descripción del ensayo experimental

Preparación del lote experimental

Las unidades fueron parcelas en campo con una dimensión de 20 m2 (6x3.34m)

para los tratamientos del 1 a 9 y de 30 m2 (6x5m) para los tratamientos 10 y 11. Las

parcelas se dividieron por calles de 0.5 m y con 1 m de separación entre las

repeticiones, para una área total del experimento de 900 m2.

Para la preparación del lote en barbecho se realizó labranza convencional con dos

pases en cruz con el arado de discos. Posteriormente se instaló el sistema de riego,

que fue usado en casos necesarios (principalmente periodo seco), además, se

estableció un pluviómetro y termómetro (Figura 7) con el fin de estimar la lámina de

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riego que cayó sobre el suelo (precipitación pluvial + riego) y temperatura ambiental

de la zona durante el desarrollo del experimento.

Tabla 5. Descripción de tratamientos del experimento.

Parcela principal Subparcela Tratamiento

1. Abono Verde Mucuna pruriens + Zea mays L.

Cultivo intercalado de maíz y soya, tratado con abono orgánico: 3.4 t ha-1 y quelatos de cobre, zinc e hierro (dosis comercial)

AV-FO

Cultivo intercalado de maíz y soya, tratado con fertilizante de síntesis: 50 kg N ha-1; 50 kg P ha-

1; 50 kg K ha-1 y quelatos de cobre, zinc e hierro (dosis comercial)

AV-FQ

Cultivo intercalado de maíz y soya, sin fertilización adicional

AV-SF

2. Acolchado Orgánico Mucuna pruriens + Zea mays L.

Cultivo intercalado de maíz y soya, tratado con abono orgánico: 3.4 t ha-1 y quelatos de cobre, zinc e hierro (dosis comercial)

AO-FO

Cultivo intercalado de maíz y soya, tratado con fertilizante de síntesis: 50 kg N ha-1; 50 kg P ha-

1; 50 kg K ha-1 y quelatos de cobre, zinc e hierro (dosis comercial)

AO-FQ

Cultivo intercalado de maíz y soya, sin fertilización adicional

AO-SF

3. Barbecho

Cultivo intercalado de maíz y soya, tratado con abono orgánico: 3.4 t ha-1 y quelatos de cobre, zinc e hierro (dosis comercial)

B-FO

Cultivo intercalado de maíz y soya, tratado con fertilizante de síntesis: 50 kg N ha-1; 50 kg P ha-

1; 50 kg K ha-1 y quelatos de cobre, zinc e hierro (dosis comercial)

B-FQ

Cultivo intercalado de maíz y soya, sin fertilización adicional

B-SF

4. Barbecho

Monocultivo comercial de maíz, tratado con fertilizante de síntesis: 50 kg N ha-1; 50 kg P ha-

1; 50 kg K ha-1 y quelatos de cobre, zinc e hierro (dosis comercial)

B-FQ

Monocultivo comercial de soya, tratado con fertilizante de síntesis: 50 kg N ha-1; 50 kg P ha-

1; 50 kg K ha-1 y quelatos de cobre, zinc e hierro (dosis comercial)

B-FQ

Nota: la estructura factorial 32 corresponde del tratamiento 1 al 9, sin embargo se adiciono el tratamiento 10 y 11 (+2), convirtiéndose en un factorial aumentado (32 +2).

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Figura 6. Distribución espacial de los tratamientos en campo bajo el diseño de bloques

completos al azar con arreglo factorial 32 +2 (Parcelas Divididas).

Figura 7. Distribución mensual de la temperatura ambiental y lámina de agua en el suelo (precipitación pluvial + riego) durante el experimento.

Fuente: Autor

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4.3.1 Manejo agronómico de las parcelas

Manejo de los lotes previo al establecimiento de los cultivos

comerciales

Después del trazado de las unidades experimentales, se sembró como AV la

leguminosa M. pruriens L. var. utilis (CIAT No. 9349) y Z. maíz (variedad ICA 305)

en las unidades experimentales correspondientes a los tratamientos 1 a 6. Se

dejaron crecer por un período aproximado de 3 a 4 meses hasta la etapa

reproductiva del llenado de grano lechoso (R3) de la gramínea (etapa de choclo).

La siembra de M. pruriens se realizó colocando una semilla por sitio a distancias de

0.5m entre surcos y 0.15m entre plantas para una densidad de 133,333 plantas ha-

1. El Z. mays L. se sembró junto a la leguminosa colocando dos semillas por sitio a

una distancia de 1.0m entre surcos y 0.25m entre plantas para una densidad de

40,000 plantas ha-1. La relación de siembra fue de dos surcos de M. pruriens por

uno de Z. mays L. (Figura 8).

Figura 8. Arreglo espacial en la siembra de la leguminosa y gramínea como AV y cultivos principales en cada unidad experimental.

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Con el fin brindar soporte alimenticio a las plantas y microorganismos presentes

donde se sembró los AV, se siguió el siguiente programa de fertilización: 20 días

antes del establecimiento se aplicó al voleo 90 kg P ha-1 usando roca fosfórica, a

los 15 días de establecidas las especies se fertilizó en bandas 20 kg de K2O ha-1

usando KCL y a los 30 días, a nivel foliar se suministró 1.2 kg ha-1 de hierro, cobre

y zinc usando quelatos. El manejo de arvenses se realizó de forma manual durante

los primeros 30 días después de sembrados los AV.

La adición o incorporación de biomasa de los AV se realizó en los primeros cinco

centímetros del suelo después de la cosecha del choclo en el cultivo de maíz.

Posteriormente se cortó, troceó y dejó descomponer por 20 a 30 días. Luego se

incorporó sobre las parcelas experimentales que incluye este manejo, utilizando el

rotavator realizando dos pases. Se finalizó con la siembra de los cultivos de maíz y

soya.

Establecimiento de los cultivos de maíz y soya

La siembra del cultivo de maíz (variedad ICA 305) se realizó con la misma densidad

de siembra empleada para establecer los AV, la siembra de soya (variedad ICA

P34) se realizó colocando una semilla por sitio, con distancias de 0.5m entre surcos

y 0.10m entre plantas para una densidad de 200,000 plantas ha-1, con una relación

de un surco de maíz por dos de soya.

Las fertilizaciones con fuentes orgánicas y sintéticas se realizaron en dos

momentos, a los 15 (19 enero de 2012) y 45 días de la resiembra efectiva de los

cultivos. En los tratamientos con fertilización de síntesis química industrial, ésta se

realizó aplicando el fertilizante triple quince (15-15-15) a una dosis de 50 kg N, P y

K ha-1 (335 g y 501 g/aplicación en parcelas de Intercultivo y monocultivo,

respectivamente) de acuerdo con los requerimientos de los cultivos (Moreno et al.,

2008). Para los tratamientos con adición de abono orgánico tipo compost, la dosis

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se calculó (Autor) para que aportara la misma cantidad de N que el fertilizante

sintético, es ese sentido, este consistió en gallinaza madura aplicada en dosis de

3.4 t ha-1 (3.4 kg/aplicación), lo que equivalente a 50 kg N ha-1 y, el resto de

tratamientos se manejó sin la aplicación de fertilizantes o enmiendas. El manejo de

arvenses se realizó en forma manual durante los primeros 30 días después de

sembrados los cultivos.

4.4 Variables de respuesta

Para evaluar las variables que corresponden a cada objetivo específico en el

ensayo, se tomaron muestras en el estado reproductivo de floración y llenado de

grano de los cultivos de maíz y soya.

Variables asociadas a la dinámica del N y C en suelo y planta

Para caracterizar la disponibilidad del NH4+, NO3

-, N inorgánico total-Nit

(NH4++NO3

-), N total y carbono orgánico (CO) en el suelo y acumulación de N y

carbono (C) en la planta, debido al uso y manejo de AV, B y fertilización

nitrogenada en los cultivos de maíz y soya, se analizaron estas variables en el

suelo y el C y N en las hojas del cultivo de maíz y soya (Tabla 6). En cada etapa

se colectaron nueve submuestras de suelo y tres hojas/planta ubicadas al lado

opuesto a la espiga de las 10 plantas muestreadas para analizar cada

tratamiento (Malavolta et al., 1997).

Tabla 6. Métodos de análisis de las variables de respuesta relacionadas con C y N a nivel del suelo y en tejidos foliares de soya y maíz.

Determinaciones Métodos Referencia

Carbono orgánico (g kg-1) Volumetría Espectrometría molecular Autoanalizador.

(Walkley-Black)

CIAT, 2006 N total, NH4

+ y NO3- (mg kg-1) Colorimetría Espectrofotómetro en KCL 1M.

Carbono (g kg-1) Volumetría Espectrometría molecular Autoanalizador.

(Walkley-Black)

Nitrógeno (g kg-1) Colorimetría Espectrofotómetro en KCL 1M.

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Variables relacionadas con la actividad de bacterias nitrificantes

Las bacterias nitrificantes se analizaron a través de los cambios en las poblaciones

de bacterias oxidantes de amonio (BOA), sustrato inicial y producto final de su

actividad (NO3-), humedad y temperatura en el suelo (Tabla 7). Los muestreos para

cada variable se realizaron en forma simultánea, las muestras se mantuvieron

refrigeradas permanentemente y se llevaron a los laboratorios de análisis en el

menor tiempo posible.

Tabla 7. Métodos de análisis de las variables de respuesta relacionadas a la actividad de bacterias asociadas a procesos de nitrificación en el suelo sembrado con soya y maíz.

Determinaciones Métodos Referencia

NO3- (mg kg-1)

Colorimetría Espectrofotómetro en KCL 1M.

CIAT, 2006

Numero copias gen amoA de BOA/g suelo seco

qPCR Moreta et al., 2009

Humedad Volumétrica Fórmula matemática Jaramillo, 2002

Temperatura del suelo Termómetro Escobar, 2011

Para la cuantificación absoluta de los genes amoA de las BOA del suelo se procedió

conforme al protocolo desarrollado y estandarizado por el CIAT (Moreta, 2009). El

ADN de las muestras del suelo se extrajo usando el kit FastDNA® SPIN

(Biomedicals MP, Cat. No. 116560200), luego se cuantificó por fluorescencia con el

reactivo PicoGrenn® dsDNA (Laboratorio: Molecular Probes) y, posteriormente se

sometió a una electroforesis en un gel de agarosa al 1% para determinar su calidad.

La estimación del número de copias del gen amoA de las BOA se hizo a través de

PCR en tiempo real (qPCR) usando el par de primers (sentido 5’-3’): amoA - 1F

GGGGTTTCTACTGGTGGT y amoA - 2R CCCCTCKGSAAAGCCTTCTTC, cuyo

producto de PCR es de 493 pares de bases (bp) (Rotthauwe et al., 1997).

Los genes en estudio se cuantificaron usando el colorante fluorescente Brilliant II

SYBR® Green QPCR Master Mix (Agilent Technologies, Cat. No. 600828). Las

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reacciones de qPCR se corrieron por triplicado en un volumen 20 µl/reacción,

conteniendo 20 ng de ADN del suelo, 0.5 µM de cada primer y 10 µl de Brilliant

SYBR Green qPCR Master Mix. El control negativo consistió de agua en lugar de

ADN y, como control positivo se usó ADN de plásmido el cual contenía inserto el

gen amoA. Las reacciones se corrieron en un termociclador OPTICONTM2 (Detector

Continuo de Fluorescencia) (MJ Research) y analizado con el MJ OPTICONTM

Software versión 3 (BIO-RAD). Las condiciones de amplificación del gen de interés

fueron las siguientes: (i) 95 °C, 5 min; (ii) 95 °C, 1.5 min; (iii) 55 °C, 1.5 min; (iv) 72

°C, 1.5 min. Los datos crudos (número de copias de gen / reacción) fueron

corregidos utilizando la humedad gravimétrica del suelo y luego expresados como

número de copias de gen / g suelo seco.

Variables asociadas al flujo y PCG de GEI en el suelo

El flujo de los GEI (CO2, CH4, N2O) y su poder calorífico, se analizó directamente y

se relacionó con variables como compactación y circulación del agua en el suelo,

las cuales, hacen parte de la fórmula del PPA (Tabla 8).

Tabla 8. Métodos de análisis de las variables de respuesta relacionadas con el flujo y PCG de GEI en un Typic Haplustert sembrado con soya y maíz.

Determinaciones Métodos Referencia

CO2 (kg m2) Cámara Cerrada Estática Ferreira, 2008

CH4 y N2O (mg m2)

Humedad gravimétrica (%) Suelo seco al horno

Jaramillo, 2002

Humedad volumétrica (%) Fórmula matemática

Densidad aparente (g cm3) Cilindro biselado

Densidad real (g cm3) Picnómetro

Porosidad total (%) Fórmula matemática

Porosidad total llena de agua-PPA (%) Fórmula matemática Escobar, 2011

PGG (kg CE-CO2) Fórmula matemática Gomes, 2006

Para la toma de los gases se procedió con base al protocolo estandarizado en varias

investigaciones (Ferreira, 2008; Novoa et al., 2011) por el Laboratorio de Servicios

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Ambientales del CIAT. Se inició con la instalación de una cámara de PVC sobre el

anillo previamente instalado en la parcela de cada tratamiento (Figura 9), las

cámaras se cerraron herméticamente con bandas de caucho. La parte superior de

estás poseen una tapa de goma o séptum de 1 cm de diámetro, por la cual se

tomaron las muestras de aire, utilizando una jeringa de plástico con válvula

adaptada.

Por cada cámara se tomaron muestras de 20 ml de aire en los tiempos 0, 10, 20 y

30 minutos a partir de la instalación de la cámara, luego se eliminaron 5 ml y los

restantes 15 ml se transfieren a frascos con vacío. Es necesario conocer la

temperatura del aire dentro de la cámara al momento del muestreo para poder

calcular adecuadamente los flujos de gases, en ese sentido, la primera cámara en

cada tratamiento estuvo equipada con un termómetro que para registrar los valores

para cada uno de los tiempos.

Figura 9. Componentes de la cámara cerrada estática y frascos utilizados en la toma de muestras de gases.

Las muestras se enviaron al laboratorio de CIAT donde se estimaron las

concentraciones de los GEI, utilizando un cromatógrafo de gases Shimadzu GC-

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48

14A, equipado con detectores de inonización de llama (FID) en el análisis de CH4 y

detector de captura de electrones (ECD) para el N2O. Las condiciones del

cromatógrafo fueron: Precolumna Porapak Q (80-100 mesh) con 1 m de longitud y

2 mm de diámetro interno; Columna Porapak Q (80-100 mesh) con 2 m de longitud

y 2 mm de diámetro interno; Fase Móvil Nitrógeno de alta pureza; Flujo de 22 ml/min;

Temperatura del horno, inyector y detector: 70, 80 y 320 ºC, respectivamente;

Estándar Scotty balanceado en nitrógeno con una precisión de aproximadamente

de 5%.

Para el CO2, se utilizó un analizador Modelo S151 con tecnología infrarroja,

calibrado antes de iniciar las mediciones con estándares Scotty balanceados en

nitrógeno. Se usó sílica gel para retener humedad y una trampa de NaOH, para

asegurar que solo el CO2 proveniente de la muestra ingrese al equipo y evitar

sobreestimación en la cuantificación.

Los muestreos en el suelo de las variables relacionadas a la emisión de GEI se

realizaron en forma paralela a la toma de los gases, en cada etapa (floración y

llenado de grano de cultivos) se recolectaron o midieron muestras para evaluar

directamente la humedad y densidad del suelo, otras se calcularon de forma

indirecta (fórmula). A partir de los valores de densidad y humedad gravimétrica se

calcularon el porcentaje de PPA por la ecuación (Escobar, 2011):

Dónde:

Hg= Humedad gravimétrica (%)

Da= Densidad aparente del suelo (g cm3)

PT= Porosidad total del suelo (%)

PPA (%) = (Hg x Da)

𝑃𝑇

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49

Para la comparación de sistemas de manejo por el PCG que genera, es común

expresar la emisión de GEI en kg de C equivalente de CO2 (kg CE-CO2), el PCG de

CH4 y N2O expresada en CE-CO2 se calcularon a partir de las ecuaciones:

CH4 (kg CE-CO2 ha-1) = CH4 (kg CH4 ha-1) x 23 x 12

44

N2O (kg CE-CO2 ha-1) = N2O (kg N2O ha-1) x 296 x 12

44

Dónde:

12

44 = razón molar entre C y la molecular de CO2

23 y 296= PCG de CH4 y N2O, respectivamente, en un tiempo de 100 años (Gomes,

2006; Escobar, 2011)

Variables productivas de los cultivos

La estimación del rendimiento en peso de grano seco se realizó cuando ambos

cultivos alcanzaron el estado de madurez de cosecha, en maíz se llevó a cabo

aproximadamente a los 150 días después de la siembra (DDS) y en soya alrededor

de los 115 DDS. En los respectivos cultivares se cosecharon las mazorcas y vainas

de 10 plantas por tratamiento para su posterior desgrane y toma de peso seco. En

ambos cultivos se midió la humedad de grano al momento de pesar las muestras,

para posteriormente ajustar sus rendimientos al 14% de humedad gravimétrica,

valor de referencia para el rendimiento de granos. Las cantidades se extrapolaron

a t ha-1.

Se realizó el análisis de componentes principales (ACP) con 16 variables iniciales

(Tabla 9) relacionadas a los tres objetivos anteriores de la investigación, para

conocer la variabilidad inherente de algunas condiciones agroclimáticas que

normalmente afectan en la productividad de los cultivos, además, se clasifico en un

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50

cluster los tratamientos que tuvieron un efecto similar o no en las variables de

respuesta analizadas.

Tabla 9. Variables que se relacionaron con la productividad de los cultivos.

Objetivo 1 Suelo

Carbono orgánico

N total, NH4+, NO3

- y Nit

Tejido-Hojas C y N en soya y maíz

Objetivo 2 Suelo

Bacterias nitrificantes

Humedad Volumétrica

Temperatura del suelo

Objetivo 3 Suelo

CO2

Densidad aparente

Porosidad total

PPA

4.5 Análisis estadístico de la información

La información obtenida se sometió a análisis de varianza (p˂0.05), prueba de

promedios de Duncan (p˂0.05), contrastes ortogonales, correlaciones de Pearson,

análisis de componentes principales y conglomerados mediante el uso del software

SAS versión 9.1.3 (2006). Para ello se contó con la colaboración del estadístico

Norbey Marín Arredondo, profesional con más de 15 años de experiencia en el

diseño y análisis de experimentos agropecuarios.

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51

5. RESULTADOS

5.1 Dinámica del N y C en el suelo y acumulación en plantas de soya y maíz

El ANDEVA realizado para las variables relacionadas con el suelo: CO, N total,

NH4+, NO3

-, Nit y, relacionadas con el tejido vegetal: C y N en hojas del cultivo de

soya y maíz, solo detectó diferencias significativas para algunas de las fuentes de

variación analizadas: efecto de bloqueo y en épocas fenológicas de los cultivos. En

algunas de ellas se detectaron diferencias entre tratamientos (Anexo 2).

5.1.1 Nitrógeno en el suelo

5.1.1.1 N total

Los valores de la variable fueron estadísticamente similares entre las dos etapas

fenológicas evaluadas. En floración se encontraron diferencias significativas

(p<0.05) entre tratamientos (Anexo 2, Figura 10), aunque la mayoría de ellos

alcanzó valores estadísticamente similares, con excepción de B-FQ, en el cual el N

total tuvo el menor valor en esta etapa. El N total a nivel de parcelas principales (AV,

AO y B) y sub parcelas (FO, FQ y SF) fue estadísticamente similar, con excepción

de B-FQ.

Las concentraciones de N total promedias encontradas en este ensayo (1450 a

1550 mg kg-1) coincidieron con registros de varios autores (Brady y Weil, 2004;

Revelli et al., 2010; Flórez, 2010) e incluso mayores a reportes en la mayoría de

suelos agrícolas (1500 mg kg-1).

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Figura 10. Concentración de N total (mg kg-1) en el suelo en las etapas y tratamientos evaluados en el ensayo.

Para cada etapa promedios con las mismas letras no son significativamente diferentes según Duncan (P<0.05).

5.1.1.2 N inorgánico: NH4

+, NO3- y Nit (NH4

++NO3-)

Al igual que en la variable anterior, en NH4+ sólo hubo diferencias significativas

(p<0.05) entre tratamientos en la etapa de floración (Anexo 2, Figura 11). La

amonificación fue mayor en las parcelas con AV y AO combinados con FO, en

comparación con FQ, en donde se encontraron las menores cifras, sin diferir

significativamente de SF.

En cuanto a NO3- la mayor nitrificación ocurrió en las tres parcelas principales de

los cultivos intercalados con la combinación de FO y FQ, mientras que en SF hubo

un detrimento acentuado en AV.

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Figura 11. Concentración de NH4+ y NO3

- (mg kg-1) en el suelo en los tratamientos durante

la etapa productiva de floración.

Promedios con las mismas letras no son significativamente diferentes según Duncan (P<0.05).

En la etapa de floración, la amonificación (Figura 11) predominó sobre la nitrificación

cuando se aplicaron AV y AO combinados con FO y SF, por el contrario, la

nitrificación predominó sobre la amonificación en AV y AO bajo la condición FQ

(uso fertilización industrial), mientras que en B fue mayor en todas las condiciones

evaluadas. Los valores de amonificación y nitrificación encontrados en este ensayo

fueron similares a los registrados en otras investigaciones: Castro (2010) en suelos

de Honduras y Gallego (2012) en el Valle del Cauca encontraron valores en ambas

variables que oscilaron 4.2 y 30 mg kg-1.

Aunque en la etapa de llenado de grano no se encontró diferencias significativas

(p<0.05) entre tratamientos para NH4+ y NO3

-, llamó la atención la tendencia

creciente del NH4+ en esta fase fenológica, que superó ampliamente al proceso de

nitrificación, como se observa en la Figura 12. A través de esta información se pudo

corroborar la importancia que tiene la humedad del suelo en los procesos de

mineralización del N, desde amonificación hasta nitrificación. Mientras que en

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floración el periodo de lluvia fue de 145 mm (Figura 11), en la etapa de llenado de

grano alcanzó los 250 mm (Figura 12), lo cual tuvo alta influencia sobre el

comportamiento de estas variables, con mayor razón en el Vertisol donde se realizó

este trabajo. Está comprobado científicamente que el proceso de amonificación

ocurre por las vías aeróbicas y anaeróbicas, mientras que la nitrificación es un

proceso netamente aeróbico. En este caso, la humedad, alta compactación del

suelo y el tipo de arcillas 2:1 predominante en el sitio, crearon condiciones

desfavorables para la nitrificación.

Figura 12. Concentración de NH4+ y NO3

- (mg kg-1) en el suelo en los tratamientos durante la etapa productiva de llenado de grano.

Promedios con las mismas letras no son significativamente diferentes según Duncan (P<0.05).

En diferentes investigaciones se ha comprobado que las condiciones del suelo

afectan la amonificación y nitrificación. Autores como Madigan et al. 2003; Navarro

y Navarro, 2003; Brady y Weil, 2004; Sylvia et al., 2005; Rivas et al., 2009 y Gallego,

2012 corroboran que variaciones extremas en el pH, textura, temperatura y

especialmente la humedad, influyen en estos procesos.

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Para la variable de Nit (NH4++NO3

-) se pudo observar que las mayores diferencias

ocurrieron entre etapas fenológicas (Figura 13), más disponibilidad en llenado de

grano que en floración. Sin embargo, en esta última etapa, como se discutió con

anterioridad, predominó el NH4+ debido a las condiciones de precipitación aunadas

a condiciones edafológicas. Castro (2010) y Gallego (2012) encontraron valores de

Nit que oscilaron entre 9.2 a 40 mg kg-1, coincidentes con este ensayo.

Figura 13. Concentración de Nit (mg kg-1) en el suelo y precipitación pluvial (mm) en las etapas y tratamientos evaluados.

Para cada etapa promedios con las mismas letras no son significativamente diferentes según Duncan (P<0.05).

Las concentraciones de Nit en este experimento representaron del 0.4% (Floración)

a 1.94% (Llenado grano) del N total del suelo, estos resultados concuerdan con

registros de otros autores, quienes han encontrado que el Nit oscila entre el 0.3% y

2% del N total (Orozco, 1999; Brady y Weil, 2004; Philippot y Germon, 2005; Castro,

2010; Gallego, 2012).

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5.1.2 Carbono orgánico del suelo

Para esta variable se hallaron diferencias significativas (p<0.05) entre etapas y, en

floración entre tratamientos, época donde ocurrió la mayor concentración de CO

(Anexo 2, Figura 14). Al igual que en la dinámica de N, las parcelas principales AV

y AO presentaron valores significativamente similares bajo las condiciones de FO,

FQ y SF. En B-FQ se encontró la menor concentración de CO durante esta etapa.

Figura 14. Concentración de carbono orgánico en el suelo en cada tratamiento durante las etapas productivas de los cultivos.

Para cada etapa promedios con las mismas letras no son significativamente diferentes según Duncan (P<0.05).

Shoko et al., (2007) han registrado que el aporte de biomasa al suelo y

principalmente de M. pruriens proporciona material de descomposición para los

microorganismos, aumentando la MO y por ende el CO.

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5.1.3 C y N en tejido vegetal

Cultivo de soya:

Hubo diferencias significativas (P<0.05) entre etapas fenológicas, la mayor

acumulación de C en las hojas de soya ocurrió en floración (Anexo 2, Figura 15).

Dentro de las dos épocas los tratamientos presentaron valores significativamente

similares.

Figura 15. Concentración de C (g kg-1) en las hojas del cultivo de soya en las etapas y tratamientos evaluados.

Para cada etapa promedios con las mismas letras no son significativamente diferentes según Duncan (P<0.05).

Para la variable N en las hojas del cultivo de soya se hallaron diferencias

significativas (P<0.05) entre tratamientos y épocas fenológicas (Anexo 2, Figura 16).

En floración los niveles registrados en las parcelas AV y AO combinado con FO, FQ

y SF fueron similares estadísticamente, con excepción de B-FO donde se registró

el valor más bajo.

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En llenado de grano, los valores encontrados en las parcelas AV, AO y B manejadas

con FO, FQ y SF fueron similares, sin embargo, la aplicación de compost en AV

estimuló la concentración más alta de N y la más baja en ausencia de fertilización

(SF).

Figura 16. Concentración de N (g kg-1) en las hojas del cultivo de soya en las etapas y tratamientos evaluados.

Para cada etapa promedios con las mismas letras no son significativamente diferentes según Duncan (P<0.05).

Cultivo de maíz:

No se hallaron diferencias significativas (P<0.05) entre etapas fenológicas.

Solamente en floración del cultivo se registró un efecto significativo (P<0.05) de los

tratamientos para la acumulación de C en las hojas (Anexo 2, Figura 17). Los

valores en las parcelas AV, AO y B en mezcla con FQ fueron estadísticamente

similares, mientras que en las parcelas con FO y SF los valores fueron disímiles,

encontrando en AV-SF el mayor valor y en AO-FO el menor valor.

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Figura 17. Concentración de C (g kg-1) en las hojas del cultivo de maíz en las etapas y tratamientos evaluados.

Para cada etapa promedios con las mismas letras no son significativamente diferentes según Duncan (P<0.05).

Para la variable N en las hojas, se encontraron diferencias significativas (P<0.05)

entre épocas y, entre tratamientos, en la etapa de llenado de grano (Anexo 2, Figura

18). En esta época, la acumulación de este nutrimento fue similar entre los

tratamientos, con excepción de AV-FO que difirió significativamente de B-FO y B-

SF, en estos dos últimos se encontró la mayor concentración de N en el cultivo.

Los niveles encontrados en el continente africano por Shoko (2009) oscilaron entre

20 y 30 g kg-1 en la etapa de floración del cultivo de maíz. Valores de N similares a

estos se encontraron en este ensayo en la etapa de floración, sin embargo, en

llenado estos oscilaron entre 15.0 y 19.5 g kg-1. También hay coincidencia con

resultados de Mills y Jones (1996), quienes han encontrado niveles críticos de N

para este cultivo entre 3% a 5% en la etapa de crecimiento y de 1.8% a 2.7% en

floración.

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Figura 18. Concentración de N (g kg-1) en las hojas del cultivo de maíz en las etapas y tratamientos evaluados.

Para cada etapa promedios con las mismas letras no son significativamente diferentes según Duncan (P<0.05).

5.1.4 Comparaciones específicas entre N y C en el suelo y en la planta

En las correlaciones entre N y C en el suelo y en la planta (Tabla 10), se pudo

observar una relación negativa esperada entre las fracciones inorgánicas del N

(NH4+ vrs NO3

-), puesto que el NH4+ es sustrato para la producción de NO3

-. La

relación positiva entre NO3- y Nit (NH4

++NO3-) también es de esperar (Gallego,

2012).

La mayor concentración de NH4+ en el suelo correlacionó directamente con la

concentración C e inversamente con el N presente en las hojas de maíz. La primera

relación puede explicarse por efecto de masas, pues el C es el nutrimento base para

la acumulación de todas las moléculas de la vida, biomasa vegetal. Sin embargo,

su producción debe estar acompañada por el suministro de nutrientes a partir del

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suelo, y el N, después del C, es el nutrimento de mayor demanda para la producción

de biomasa. La menor concentración de N en el tejido vegetal tal vez podría

explicarse por el efecto de dilución, al incrementarse los contenidos de C

(Malavolta., 1997; Taíz y Zeiger, 2006; Azcón Bieto y Talón, 2008)

Tabla 10. Correlaciones de las fracciones de C y N en el suelo y planta en las etapas de desarrollo evaluadas

N-total NO3- NH4+ NO3-+NH4+ CO C-soy N-soy C-maíz N-maíz

Ntotal 1.00000 -0.14784 -0.13468 -0.25068 0.08808 -0.36929 0.14922 -0.24901 -0.07509 0.4116 0.4549 0.1594 0.6260 0.0446 0.4313 0.1845 0.6933 NO3 1.00000 -0.42197 0.73696 0.07677 0.00498 0.12862 -0.15750 0.18237 0.0144 <.0001 0.6711 0.9792 0.4982 0.4059 0.3348 NH4 1.00000 0.28213 0.26952 -0.18201 -0.28700 0.55724 -0.58945 0.1117 0.1293 0.3357 0.1241 0.0014 0.0006 NO3NH4 1.00000 0.29417 -0.17660 -0.04818 0.23515 -0.19194 0.0966 0.3505 0.8004 0.2110 0.3096 CO 1.00000 -0.51289 -0.05542 0.04007 -0.30519 0.0038 0.7711 0.8335 0.1010 Csoy 1.00000 -0.00930 0.11331 0.27205 0.9611 0.5736 0.1698 Nsoy 1.00000 -0.17401 0.40893 0.3854 0.0342 Cmaiz 1.00000 -0.38909 0.0336 Nmaiz 1.00000

*: La correlación es significativa al nivel 0.05

La relación inversa entre CO en el suelo y la concentración de C en hojas de soya

podría relacionarse con la habilidad de las leguminosas para fijar N2 y almacenarlo

en proteínas, cualidad que se ve favorecida por el CO en el suelo. Si se hacen

comparaciones en las relaciones C:N máximas y mínimas obtenidas en el tejido de

maíz y soya en este ensayo (Tabla 11). Se puede observar que mientras en soya

esta relación oscila entre 11.4 y 15.6, en maíz, llega a 18.7 y 21.2. Es decir, que en

este último se acumula mucho más C en el tejido y por el contrario en soya mucho

más N (Gomes, 2006; Ciampitti y García, 2007; Cruzate y Casas, 2012), lo cual es

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de esperarse dado el tipo de plantas por un lado (C4 y C3, respectivamente) y la

habilidad fijadora de N2 en leguminosas que se traduce en mayor contenido proteico.

Tabla 11. Relación C:N en tejido vegetal del cultivo de soya y maíz.

Arreglo P. Principal Sub parcela Maíz Soya

Cultivo intercalado de maíz + soya

AV

FO 21,2 13,3

FQ 21,0 13,6

SF 20,9 13,8

AO

FO 19,0 13,7

FQ 20,5 11,5

SF 19,7 11,4

B

FO 20,5 15,6

FQ 20,0 15,0

SF 18,9 14,7

Monocultivo maíz B FQ 18,7 12,1

Las comparaciones entre las fuentes de variación con respecto a algunas variables

(Tabla 12) mostró en la etapa de floración de los cultivos, un incremento significativo

de las concentraciones de CO, N total y NH4+ cuando se agregó al suelo material

orgánico de alta calidad (AV y AO) versus B y, en AO, en la fracción NH4+, en

presencia de FO y SF en comparación a FQ. Se ha analizado anteriormente, que la

amonificación es un proceso dependiente de la mineralización de la MO, al depositar

volúmenes de residuos orgánicos nitrogenados estos procesos se intensifican,

acumulando C y N en el suelo en sus diferentes formas.

Los contrastes indicaron que la acumulación de C y N en el tejido foliar de soya fue

similar (P<0.05) durante las dos etapas fenológicas, con excepción del N en AV en

combinación con FO y SF que fue mayor a cuando se aplicó FQ.

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Tabla 12. Contrastes ortogonales para la concentración de fracciones del C y N en el suelo y hojas del cultivo de soya y maíz en las etapas de producción.

Suelo Tejido de soya Tejido de maíz

Floración Floración Floración

Fuente de variación1 CO N total NH4

+ NO3- Nit C N C N

g kg-1 -----------------------mg kg-1------------------ ----------g kg-1--------- ---------g kg-1----------

AV vrs AO ns ns ns ns ns ns ns * ns

AV vrs B * ns ns ns ns ns ns ns ns

AO vrs B ns * * ns ns ns ns ns ns

FO-SF vrs FQ en AV ns ns ns ns ns ns ns * ns

FO-SF vrs FQ en AO ns ns * ns ns ns ns * ns

FO-SF vrs FQ en B ns ns ns ns ns ns ns ns ns

Llenado de grano Llenado de grano Llenado de grano

CO N total NH4+ NO3

- Nit C N C N

g kg-1 -------------------mg kg-1---------------------- ----------g kg-1--------- ----------g kg-1---------

AV vrs AO ns ns ns ns ns ns ns ns ns

AV vrs B ns ns ns ns ns ns ns ns *

AO vrs B ns ns ns ns ns ns ns ns ns

FO-SF vrs FQ en AV ns ns ns ns ns ns * ns ns

FO-SF vrs FQ en AO ns ns ns ns ns ns ns ns ns

FO-SF vrs FQ en B ns ns ns ns ns ns ns ns ns 1: AV= Abono verdes; AO= Acolchado orgánico; B= Barbecho; FO= Fertilización orgánica; FQ= Fertilización de síntesis química industrial; SF= Sin adición

de fertilizantes. *= existe diferencia significativa, ns= no significativo.

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En la etapa de floración del cultivo de maíz los niveles de N fueron similares

estadísticamente, sin embargo, los AV estimularon significativamente la

acumulación de C en comparación a AO. En AV bajo la condición FO-SF

encontraron mayores valores de C en contraste a FQ, mientras que en AO

combinado con FO-SF se encontraron menores valores en contraste a FQ. En

llenado de grano, los niveles de C y N fueron similares con excepción de la

comparación AV vs B, donde se encontró en B la mayor concentración de N.

En este ensayo las tendencias similares e incluso de las diferencias significativas

encontradas en el uso de las fuentes nitrogenadas sobre la acumulación de C y N

en las hojas de soya y maíz, pudo estar influenciada más por variabilidad que

implica el camino que recorre el N desde el suelo hasta la distribución de los

asimilados en los distintos órganos de la planta. Es decir, los procesos fisiológicos

inherentes a cada etapa fenológica regula el posible efecto de los tratamientos, ya

que en varios trabajos de investigación, bajo condiciones totalmente diferentes, se

encuentran valores similares en los contenidos de estos nutrimentos (Mills y Jones

(1996; Malavolta et al., 1997; Anthofer y Kroschel, 2005; Cobo et al., 2008; Shoko,

2009; Rao, 2009; Ngome et al., 2012; Sosa et al., 2013).

5.2 Variables asociadas a la actividad de bacterias nitrificantes en el suelo

El ANDEVA realizado para las variables relacionadas con la actividad de las

nitrificantes en el suelo: BOA, NO3-, temperatura y humedad volumétrica, solo

detectó diferencias significativas para algunas de las fuentes de variación

analizadas: efecto de bloqueo y en épocas fenológicas de los cultivos. En algunas

de ellas se detectaron diferencias entre tratamientos (Anexo 3).

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65

5.2.1 Dinámica poblacional de las BOA y su influencia en la disponibilidad de

NO3- bajo cambios en la temperatura y humedad del suelo

Los valores de cada variable fueron estadísticamente diferentes entre las dos

etapas fenológicas evaluadas, con excepción de humedad volumétrica (Anexo 3).

En floración se encontraron diferencias significativas (P<0.05) entre tratamientos

para NO3-, temperatura y humedad volumétrica, más no en poblaciones de BOA

(Anexo 3, Tabla 13).

Las concentraciones de NO3- en las tres parcelas principales (AV, AO y B) y

subparcelas (FO, FQ y SF) de los cultivos intercalados fueron estadísticamente

similares, con excepción de AV-SF, donde se encontró el menor valor (Figura 19).

Figura 19. Evaluación de las variables asociadas a la actividad de las bacterias nitrificantes del suelo: BOA (numero copias gen amoA/g suelo seco), NO3

- (mg kg-1), temperatura (°C) y humedad volumétrica (%) en los tratamientos evaluados durante la etapa de floración de los cultivos.

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66

En cuanto a la temperatura del suelo, no difirió significativamente entre parcelas

principales (AV, AO y B) y sub parcelas (FO, FQ y SF), con excepción de B-FQ en

monocultivo de maíz, donde se halló la mayor temperatura del suelo. La aplicación

de los materiales orgánicos de alta calidad incorporados (AV) o sobre el suelo (AO)

combinados con FO almacenaron la mayor humedad volumétrica, aunque no difirió

estadísticamente con el resto de las subparcelas (FQ y SF), salvo el caso de AO-

SF. Los menores valores de humedad sin diferir estadísticamente entre sí, se

encontraron bajo la combinación AO-SF y B-FQ tanto en el sistema de cultivos

intercalados como en los monocultivos de maíz y soya.

Estos resultados son similares a los reportados en otros suelos agrícolas, en donde

se encontró que las poblaciones de nitrificantes son mayores cuando se aplica FQ

hasta cierto nivel, comparados con FO y SF (Coyne, 2000; Sylvia et al., 2005; Abbott

y Murphy, 2007).

Tabla 13. Resumen de diferencias significativas para las variables evaluadas.

Arreglo sistema

Parcela principal

Sub parcela

BOA (Número copias gen amoA / g suelo

seco)

Nitrato (mg kg-1)

Temperatura suelo (%)

Humedad Volumétrica

(°C)

FLO LLE FLO LLE FLO LLE FLO LLE

Cultivo intercalado de maíz +

soya

AV

FO a 1,9E+10 a 4,2E+09 abc 3,1 a 12,5 b 24,4 de 25,6 a 30,7 ab 27,6

FQ a 2,8E+10 a 3,8E+09 abc 3,6 a 7,4 b 24,2 e 25,4 ab 29,2 a 30,3

SF a 2,2E+10 a 2,9E+09 c 1,7 a 6,9 b 24,4 e 25,2 ab 27,9 bcd 24,8

AO

FO a 2,2E+10 a 3,5E+09 abc 3,0 a 12,1 ab 24,5 bc 27,4 a 30,2 ab 27,6

FQ a 3,0E+10 a 3,3E+09 abc 3,1 a 7,8 b 24,3 cd 26,8 ab 27,4 ab 26,5

SF a 1,8E+10 a 5,3E+09 bc 2,1 a 12,6 ab 24,5 bc 27,5 c 24,5 abc 26,2

B

FO a 2,2E+10 a 2,5E+09 abc 3,7 a 7,7 ab 24,5 bc 27,8 bc 27,1 de 23,7

FQ a 3,4E+10 a 3,2E+09 ab 4,3 a 6,7 b 24,3 cd 26,8 c 24,4 de 24,0

SF a 1,6E+10 a 3,2E+09 abc 2,6 a 7,3 ab 24,5 bc 27,7 bc 26,2 de 22,7

Maíz B FQ a 2,8E+10 a 4,6E+09 abc 2,4 a 4,6 a 25,0 ab 28,4 bc 25,5 de 25,1

Soya B FQ a 3,2E+10 a 4,5E+09 a 4,6 a 11,2 b 24,3 a 29,3 c 24,3 cde 24,9

* FLO= Etapa de Floración; LLE= Etapa de Llenado de grano Letras iguales en la misma columna no son significativamente diferentes según Duncan (P<0.05).

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67

En la etapa de llenado de grano sólo se encontraron diferencias significativas

(P<0.05) entre tratamientos para temperatura y humedad volumétrica en el suelo.

En esta etapa las poblaciones de BOA se redujeron significativamente en

comparación con floración, mientras que el NO3- y la temperatura se incrementaron

significativamente (Anexo 3, Tabla 14). En análisis de la temperatura del suelo, las

parcelas principales (AV, AO y B) y sus combinaciones fueron similares

estadísticamente.

La mayor humedad volumétrica se encontró con la aplicación de AV y AO

combinados con FO y FQ, mientras que en B en todas las condiciones, se encontró

el menor registro que varió significativamente con respecto a los otros tratamientos

(Figura 20).

Figura 20. Evaluación de las variables asociadas a la actividad de las bacterias nitrificantes del suelo: BOA (numero copias gen amoA/g suelo seco), NO3

- (mg kg-1), temperatura (°C) y humedad volumétrica (%) en los tratamientos evaluados durante la etapa de llenado de grano de los cultivos.

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68

En varias investigaciones se ha comprobado que la humedad y temperatura del

suelo afectan la nitrificación. Autores como Navarro y Navarro, 2003, Rodríguez et

al., 2007 y Szukics et al., 2010 han confirmado una tendencia directamente

proporcional entre la temperatura y la actividad de las bacterias nitrificantes cuando

predominan condiciones aeróbicas. Con esta información, es probable que en la

etapa de llenado de grano, donde se registró un incremento de la temperatura en el

suelo, las mayores precipitaciones pluviales (250 mm) referenciadas en floración,

hayan afectado la actividad de las nitrificantes y por lo tanto, la producción de NO3-

.

5.2.2 Comparaciones específicas entre variables relacionadas a la actividad

de las bacterias nitrificantes

El análisis de contrastes ortogonales planificados para comparar fuentes de

variación y variables que se consideran asociadas a la actividad de BOA (Tabla 14),

corroboró que las poblaciones fueron similares entre tratamientos comparados, al

igual que las concentraciones de NO3- en los cultivos intercalados. Se encontró que

la aplicación de AV favoreció significativamente una mayor humedad volumétrica en

comparación con B en la etapa de floración y, en llenado de grano, tanto AV como

AO favoreció esta variable con respecto a B y, la temperatura del suelo, se

incrementó significativamente en las condiciones AO y B. Estos resultados

confirman las tendencias observadas en los análisis estadísticos anteriores.

La nitrificación es un proceso netamente biológico e influenciado por factores

ambientales y del suelo, antes referenciado, sin embargo, variables físicas como la

humedad y temperatura del suelo son alterables por la adición de materiales

orgánicos. Zribi et al., (2011) han corroborado estos resultados bajo el uso de AV y

AO como prácticas de conservación en suelos agrícolas de España.

Tabla 14. Contrastes ortogonales para BOA, NO3- y variables físicas del suelo relacionadas

a la nitrificación en las etapas fenológicas evaluadas.

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69

Floración

Fuente de variación

BOA NO3- Humedad Volumétrica Temperatura Suelo

Número copias gen amoA / g

suelo seco mg kg-1 % °C

AV vrs AO ns ns ns ns

AV vrs B ns ns * ns

AO vrs B ns ns ns ns

FO-SF vrs FQ en AV ns ns ns ns

FO-SF vrs FQ en AO ns ns ns ns

FO-SF vrs FQ en B ns ns ns ns

Llenado de grano

AV vrs AO ns ns ns *

AV vrs B ns ns * *

AO vrs B ns ns * ns

FO-SF vrs FQ en AV ns ns * ns

FO-SF vrs FQ en AO ns ns ns ns

FO-SF vrs FQ en B ns ns ns ns 1: AV= Abono verdes; AO= Acolchado orgánico; B= Barbecho; FO= Fertilización orgánica; FQ= Fertilización de

síntesis química industrial; SF= Sin adición de fertilizantes. *= existe diferencia significativa, ns= no significativo.

5.3 Variables asociadas al flujo y PCG de GEI en el suelo

El ANDEVA realizado para las variables relacionadas al flujo de GEI: CO2, CH4, N2O

y PPA, se detectó diferencias significativas para la mayoría de las fuentes de

variación analizadas: efecto de tratamientos. En una de ellas se detectó diferencias

entre bloques (Anexo 5).

5.3.1 Cambios en los flujos de CO2, CH4 y N2O y PCG

Se encontraron diferencias significativas (P<0.05) entre tratamientos para el flujo de

CO2 en las etapas productivas de los cultivos (Anexo 5, Figura 21). Los valores a

nivel de parcelas principales (AV, AO y B) y sub parcelas (FO, FQ y SF) fueron

estadísticamente similares, con excepción de B-FQ en el monocultivo de soya,

donde se registró el menor valor.

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70

Los flujos acumulados de CO2 encontradas en este ensayo (0.08 a 0.22 kg m2)

coincidieron e incluso fueron menores con registros de varios autores (Murdiyarso

et al., 2002; Ferreira, 2008; Fernández y Bojollo, 2008; Correa, 2010), los cuales

oscilaron de 0.07 a 2.2 kg m2 año-1.

Figura 21. Flujo acumulado de CO2 en los tratamientos y etapas evaluadas.

Promedios con las mismas letras no son significativamente diferentes según Duncan (P<0.05).

En el flujo de CH4 también se encontraron diferencias significativas (P<0.05) entre

tratamientos (Anexo 5, Figura 22). Los flujos de CH4 oscilaron en todas las parcelas

entre valores del flujo negativo y positivo (-23.3 a 40.8 mg m2), lo cual denotó

cambios en la capacidad de sumidero y emisor del CH4, respectivamente.

Aún con esta dinámica, se ve reflejada alguna tendencia, en las parcelas con AV y

AO bajo la condición FO actuaron como sumideros, mientras en AV y B, la

fertilización de síntesis industrial (FQ) promovió la emisión.

Este comportamiento fluctuante del CH4 ha sido verificado cuando la humedad del

suelo ha variado durante los días de evaluación (Klein et al., 2008; Ciarlo, 2009).

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71

Autores como Ferreira (2008) encontró en suelos de Honduras flujos acumulados

de -200 a 200 mg m2 año-1 y en condiciones de Colombia, Pastrana et al., (2011)

registró flujos de -225 a 204 mg m2 h-1. Coincidiendo que los mayores flujos se

suscitaron en épocas de lluvias y se reducían cuando las precipitaciones cesaban.

Figura 22. Flujo acumulado de CH4 en los tratamientos y etapas evaluadas.

Promedios con las mismas letras no son significativamente diferentes según Duncan (P<0.05).

En general, las condiciones del suelo y prácticas agrícolas también influyen en la

emisión de CH4 (Ussiri et al., 2009), nótese, que no existió un patrón definido en la

emisión del gas, el cual pudo deberse tanto a las diferentes condiciones

ambientales, antes mencionado, como a la disponibilidad de N del suelo, densidad

aparente (oscilo entre 1.1 y 1.7 g cm3) y la humedad volumétrica (oscilo entre 17 y

33%) en las diferentes parcelas durante las etapas de evaluación. Factores que han

sido señalados como influyentes en la absorción o emisión de CH4 (Passianoto et

al., 2003; Horváth et al., 2008; Czóbel et al., 2010; Omonode et al., 2011; Escobar,

2011).

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72

Para la variable N2O se encontraron diferencias significativas (P<0.05) entre

tratamientos (Anexo 5, Figura 23). En las parcelas principales AV, AO y B bajo la

combinación con FQ se estimuló los mayores flujos de N2O en comparación a FO.

Figura 23. Flujo acumulado de N2O en los tratamientos y etapas evaluadas.

Promedios con las mismas letras no son significativamente diferentes según Duncan (P<0.05).

En agroecosistemas de Brasil, Gomes (2006) sembró especies de leguminosas en

asocio con gramíneas y registraron flujos de 0.9 a 83.4 mg m2. Por su parte Escobar

(2011), en agroecosistemas sembrados con maíz y avena con diferente preparación

del suelo encontró resultados aún mayores, los cuales oscilaron aproximadamente

de 100 a 700 mg m2, siendo mayores significativamente los flujos en sistemas con

manejo convencional que a cero labranza.

Ferreira (2008) en sistemas agroforestales de Honduras el flujo de N2O obtuvo

valores alrededor de 300 a 620 mg m2. En Colombia, cultivos de arroz emitieron

flujos de 300 mg N2O m2 año-1 (Rondón, 2002), mientras que en pasturas de

Brachiaria humidicola en el valle del Sinú se reportaron valores menores de 4 mg

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m2 h-1 (Pastrana et al., 2011). Subbarao et al., (2009) en suelos desnudos y

sembrados con soya del Valle del Cauca encontró valores que no superaron los 420

mg N2O m2 año-1.

Para realizar comparaciones entre sistemas agrícolas, las emisiones de GEI se

suelen expresar en kg CE-CO2, en este sentido, se registró mayor poder calorífico

del CO2 emitido del suelo en todos los tratamientos con respecto a los otros gases

y el de N2O, fue mayor a los registrados del CH4 en la mayoría de las parcelas

(Figura 24).

Se conoce que el PCG del N2O es mayor que el de los otros GEI analizados (IPCC,

2007), estos resultados se explican en base al volumen de gas emitido, en el cual,

el CO2 aportó el 99.7% de los GEI totales del agroecosistema (Figura 25). Estos

resultados concuerdan con los encontrados en otros escenarios, en donde el CO2

seguido de N2O y CH4 aporta las mayores emisiones y PCG en sistemas agrícolas

(Robertson et al., 2000; Gomes, 2006; SEAE, 2007; Elder y Lal, 2008; Ferreira,

2008; Correa, 2010; Czóbel et al., 2010; Liebig et al., 2010; Schaufler et al., 2010;

Juárez et al., 2012; Da Silveira et al., 2013).

Figura 24. PCG de GEI en los tratamientos y etapas evaluadas.

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74

Figura 25. Aporte porcentual de cada GEI emitido del suelo en el agroecosistema

5.3.2 Porosidad total llena de agua

No se encontraron diferencias significativas (P<0.05) entre tratamientos (Figura 26),

debido a la variabilidad en los datos obtenidos durante este ensayo, además, el

análisis de correlación Pearson no encontró relación significativa alguna entre esta

variable y cada uno de los GEI analizados en este experimento (Anexo 6).

Figura 26. PPA en los tratamientos y etapas evaluadas.

Promedios con las mismas letras no son significativamente diferentes según Duncan (P<0.05).

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75

5.3.3 Comparaciones específicas entre variables relacionadas al flujo de GEI

Las comparaciones entre las fuentes de variación con respecto a algunas variables

(Tabla 15) indicaron que no existieron diferencias significativas para las variables

CO2 y PPA, por el contrario, se incrementó significativamente la producción de CH4

y N2O cuando se agregaron materiales orgánicos (AV y B) al suelo, en comparación

a AO, principalmente bajo la condición FQ.

Los resultados corroboran que la metanogénesis y desnitrificación son procesos

influenciados por la mineralización de la MO, fertilización mineral nitrogenada y

condiciones del suelo, en especial la humedad. La disposición de la MO sobre el

suelo (AO) generó menor emisión de CH4 y N2O en comparación a AV y B. Al

manejar la MO en forma de acolchado se reduce la velocidad de la mineralización,

por el menor contacto del sustrato con la biota del suelo en comparación a AV,

paralelamente, mejora la circulación del agua y aire en el suelo, regulando de forma

más estable el suministro de los nutrimentos C y N como la variación de la

temperatura y humedad (Smets y Poesen (2009) y Zribi et al., (2011).

Tabla 15. Contrastes ortogonales para las emisiones de GEI y la porosidad del suelo llena de agua durante las etapas de producción de los cultivos.

Fuente de variación CO2 CH4 N2O PPA

kg m2 mg m2 %

AV vrs AO ns * * ns

AV vrs B ns ns ns ns

AO vrs B ns * * ns

FO-SF vrs FQ en AV ns * * ns

FO-SF vrs FQ en AO ns * * ns

FO-SF vrs FQ en B ns * * ns 1: AV= Abono verdes; AO= Acolchado orgánico; B= Barbecho; FO= Fertilización orgánica; FQ= Fertilización de

síntesis química industrial; SF= Sin adición de fertilizantes. *= existe diferencia significativa, ns= no significativo.

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76

5.4 Productividad de los cultivos en el agroecosistema

5.4.1 Rendimiento en grano de soya

Para esta variable se encontraron diferencias significativas (P<0.05) entre

tratamientos (Anexo 7, Figura 27). En las parcelas con cultivos intercalados (AV, AO

y B) los valores de los rendimientos fueron estadísticamente similares, con

excepción de B-SF, donde se registró el menor valor, mientras que el mayor fue en

AO-SF, siendo éste, similar al rendimiento encontrado en el monocultivo de soya.

Figura 27. Rendimiento en grano de los cultivos de maíz y soya en los tratamientos evaluados.

Promedios con las mismas letras no son significativamente diferentes según Duncan (P<0.05).

La mayoría de los rendimientos observados en esta investigación (1.9 a 4.1 t ha-1)

fueron superiores a los reportados en otros trabajos que utilizaron esta variedad, los

cuales oscilaron entre 1.66 t ha-1 y 2.11 t ha-1 (Corpoica, 2009; FENALCE, 2011;

Valencia y Ligarreto, 2012).

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5.4.2 Rendimiento en grano de maíz

No se encontraron diferencias significativas entre tratamientos (Anexo 7, Figura 27).

Los valores oscilaron entre 4.2 t ha-1 y 6.0 t ha-1, superior al promedio registrado en

sistemas tradicionales (1.9) y similar a los tecnificados (5.0) en el agro colombiano

(FENALCE, 2011). Resultados similares fueron encontrados en experimentos

realizados en la zona cafetera y costa atlántica, la producción osciló entre 4.6 t ha-1

y 4.8 t ha-1 (Cardozo y Ferguson, 1995; Granada et al., 2008; Pérez et al., 2009;

Criollo et al., 2013).

5.4.3 Comparaciones específicas para el rendimiento de los cultivos

Las observaciones anteriores son validadas por el análisis de contrastes

ortogonales (Tabla 16), los cuales mostraron que las prácticas manejadas en este

ensayo no estimuló un incremento significativo en el rendimiento del cultivo de maíz.

En el caso de la soya, el rendimiento fue significativamente mayor solamente

cuando se agregó la MO en forma de AO versus B.

Tabla 16. Contrastes ortogonales para el rendimiento de los cultivos del agroecosistema.

Fuente de variación Rendimiento (t ha-1)

Maíz Soya

AV vrs AO ns ns AV vrs B ns ns AO vrs B ns *

FO-SF vrs FQ en AV ns ns

FO-SF vrs FQ en AO ns ns

FO-SF vrs FQ en B ns ns 1: AV= Abono verdes; AO= Acolchado orgánico; B= Barbecho; FO= Fertilización orgánica; FQ= Fertilización de

síntesis química industrial; SF= Sin adición de fertilizantes. *= existe diferencia significativa, ns= no significativo.

5.4.4 Análisis de componentes principales

La selección del número de componentes principales (CP) se basó en los criterios

de valores propios significativos (≥1) y el porcentaje que varianza a explicar.

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78

Seleccionando las variables en cada CP por el valor que más aporta (sea positivo o

negativo) y la correlación existente entre ellas (García, 2011). La descripción de los

resultados se hizo en función de ocho CP seleccionados, de 16 iniciales (Tabla 17).

La varianza total acumulada (87%) en el ensayo fue explicada por cuatro CP

relacionados a ciclo del N (NH4+, Nit, N total y BOA), tres relacionadas a variables

físicas (humedad volumétrica y temperatura) y dos relacionadas al tipo de cultivo (C

y N en hojas de soya).

La disponibilidad de fracciones de N en el suelo está estrechamente relacionada

con los aportes de materiales orgánicos y microorganismos que promueven

procesos de mineralización hasta nitrificación, los cuales son regulados por

condiciones del suelo, en especial la humedad y temperatura. Los resultados del

análisis fueron acertados en la selección de variables, por su afinidad e importancia

en el ciclo del N, aunque la dinámica del N en el suelo de este experimento a través

del uso de los AV y AO no afecto la acumulación de nutrimentos en los cultivos, este

parámetro es fundamental para analizar la eficiencia en el uso del nutriente, el cual

es diferente entre los cultivos, en este caso, se seleccionó a la soya.

Los conglomerados determinados por el ACP mostraron la formación de dos grupos

(Figura 28), el primero, con mayor cohesión en las variables, estuvo conformado por

los cultivos intercalados sujetos a tratamientos en los cuales se hizo adición de

materiales orgánicos en forma de AV y AO bajo la condición FO y SF y el

monocultivo de soya suplementado con FQ. El segundo grupo, más disperso,

agrupó en su mayoría a tratamientos establecidos en la parcela principal de AV y

AO combinados con FQ o SF y a la mayoría de los tratamientos establecidos en B,

lo cual corrobora las ventajas comparativas de AO y AV complementados con FO

frente a B y las combinaciones con FQ.

Tabla 17. Matriz de correlaciones y valores propios de las variables originales evaluadas en el agroecosistema.

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CP1 CP2 CP3 CP4 CP5 CP6 CP7 CP8

C-tej-soya -.226755 0.067748 -.020793 0.533557 0.079525 -.079968 -.285940 -.030226 N-tej-soya 0.082157 0.142563 -.291682 0.120061 0.312892 0.481745 0.424574 0.116651 C-tej-maíz -.030804 -.318869 0.283331 0.208384 -.052136 0.355930 0.021997 -.277814 N-tej-maíz -.124054 0.370587 -.105694 0.050182 0.223017 0.416691 -.293446 0.131688 N-total 0.154089 -.087802 -.106604 -.355422 0.443185 -.331778 0.302389 -.176271 NO3- 0.191367 0.364419 0.323963 0.119534 0.093685 -.199870 -.059096 0.043670 NH4+ 0.051688 -.394659 0.166278 0.008789 -.236687 0.221815 0.205765 0.398271 NO3-+NH4+ 0.257284 0.112493 0.476098 0.105520 -.080379 0.030751 0.094238 0.356273 CO 0.347629 -.116550 0.038837 -.263725 -.175029 0.108743 -.334359 -.061733 BOA -.062430 0.155982 -.291023 0.283047 -.363121 -.178728 0.485177 0.170889 CO2 -.007514 -.361742 -.069644 -.007144 0.349522 0.191613 -.059947 0.207309 Hum-vol 0.445940 -.040552 -.131130 0.222389 0.156713 -.065472 -.098653 0.107393 Temp-suelo -.252070 0.185349 0.040474 -.383229 0.128603 -.025598 -.135606 0.562384 Da -.375986 -.000954 0.303048 0.070556 0.114912 -.228557 0.117940 0.112867 Porototal 0.334740 0.106251 -.348545 0.129253 -.153159 -.100063 -.219991 0.148208 PPA 0.260677 -.138882 0.191070 0.313734 0.418917 -.200930 0.046740 0.121197 % Varianza 0.221 0.202 0.122 0.095 0.087 0.056 0.048 0.038 Varianza Acumulada 0.221 0.423 0.545 0.641 0.728 0.784 0.832 0.871

Figura 28. Conglomerado calculado a partir del efecto de los tratamientos sobre las variables estudiadas.

En este experimento se ha comprobado la capacidad que tienen los AV, AO y

compost de sustituir la fertilización de síntesis química industrial y su efecto en la

disponibilidad de N y productividad de los cultivos. Este comportamiento ha sido

registrado en investigaciones anteriores, Sanclemente (2009) y Egbe et al., (2012)

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encontraron los mayores y similares rendimientos en el cultivo maíz con el uso

individual de la MO (AV + Compost) o FQ.

Aparte del manejo con los materiales orgánicos o de síntesis industrial ricos en N

en esta investigación, la dinámica del N en el suelo, reflejado por la disponibilidad

de fracciones del N y actividad de BOA regulados por los cambios en la humedad y

temperatura del suelo, fueron los principales responsables de explicar la variabilidad

existente en el agroecosistema. El principal factor modular en las transformaciones

del N fue la humedad del suelo, proceso biológico íntimamente ligado a las

reacciones de redox. Los resultados de otras investigaciones han mostrado que

ciertos factores manejados e incluso algunos que no, trascienden en su influencia

hacia determinados procesos biológicos, químicos y físicos en el suelo o

directamente en el cultivo (Gallego, 2012; Egbe et al., 2012). En cultivos tropicales

como el fríjol, caña, maíz, soya y frutales se ha demostrado que la productividad

depende de unas condiciones más que otras, sea la disponibilidad de agua,

fertilización mineral, resistencia a plagas, fertilidad del suelo, entre otras (Canfalone

et al., 2002; Acosta et al., 2007; Torriente y Torres, 2010; Wehbe et al., 2011; Ordúz

y Mateus, 2012).

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81

6. DISCUSIÓN

6.1 Dinámica del N en el suelo y en tejido vegetal

El análisis de las variables estudiadas (N total, N inorgánico: NH4+, NO3

- y Nit, CO,

C y N en hojas del cultivo de soya y maíz) y su estrecha relación permitió integrar

varios resultados:

En general, la floración fue la etapa fenológica donde estas variables expresaron

sus máximos valores. Se ha encontrado que esta edad fenológica es muy dinámica,

pues las plantas exacerban su metabolismo como preludio para la producción, en

este caso, de granos (Taíz y Zeiger, 2006; Azcón Bieto y Talón, 2008).

El N total en este suelo fue similar a registros encontrados en la mayoría de suelos

agrícolas, no sólo en Colombia sino también en Honduras y Argentina (Brady y Weil,

2004; Revelli et al., 2010; Flórez, 2010). Su valor osciló entre 1450 y 1550 mg kg-1.

El N total no significa disponibilidad, pues los resultados encontrados en este

ensayo y en otras investigaciones han señalado que, alrededor del 98 al 99% del

N está constituido por N orgánico, el cual debe mineralizarse gradualmente para

quedar a disponibilidad de las plantas. Así, el Nit, viene a constituir realmente la

fuente disponible. En este ensayo osciló aproximadamente entre 0.4 y 2% del

reservorio total. Hay alta coincidencia de estos resultados con registros de Orozco,

1999; Schulten y Schnitzer, 1998; Philippot y Germon, 2005; Kaizzi et al., 2006;

Sanclemente, 2009; Castro, 2010 y Gallego, 2012.

También en concordancia con estos mismos autores se encontró que el Nit

conformado por las fracciones NH4+ y NO3

- tuvieron dinámicas complementarias. Al

ser el NH4+ el sustrato sobre el cual las BOA desarrollan su metabolismo, cuando

éstas incrementan su actividad, éste baja y la molécula resultado final (NO3-)

aumenta. En el ensayo se observó que cuando se aplicaron AV y AO combinado

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con FO predominó la amonificación, mientras que estos mismos con FQ se estimuló

más la nitrificación, situación explicable por la biomasa agregada a este suelo con

ciertas limitaciones en la oxigenación y, fuera de ello, por el efecto estimulante que

pudo tener el fertilizante de síntesis química sobre la mineralización de la MO

presente en el suelo, en los tratamientos correspondientes. Un ejemplo de la

importancia de la oxigenación en la nitrificación se ilustró en la época de llenado de

granos, como se analizó con anterioridad.

En este ensayo la tendencia similar de AV y AO con B en la expresión de CO pudo

estar influenciado porque este suelo estuvo en barbecho por ocho años, en decir,

acumuló CO en el suelo. La situación de AV-FO con respecto a AO-FO también

pudo estar influenciada por las condiciones físicas del suelo y la tasa de

mineralización. Se ha registrado que las adiciones de compost u otros materiales

orgánicos están mediados por la mineralización y condiciones del suelo, por lo tanto

la acumulación de CO en el suelo es gradual (Labrador, 1996; Navarro y Navarro,

2003; Hentschel et al., 2009; Adiku et al., 2010; Restovich et al., 2011; Martín, 2013).

Las acumulaciones de C y N encontradas en las hojas de soya fueron similares a

las registradas cuando se analizaron las hojas de M. pruriens sembrada como AV

en este ensayo, las cuales fueron en promedio 417 g C kg-1 y 49 g N kg-1 (Sosa et

al., 2013). Otros trabajos confirman estos resultados, en especial en el caso del N,

donde se han hallado valores que oscilan entre 25 y 66 g kg-1 (Anthofer y Kroschel,

2005; Cobo et al., 2008; Shoko, 2009; Ngome et al., 2012). En el caso del maíz, los

niveles de N oscilaron dentro de los estándares registrados (18 a 30 g kg-1 en la

etapa de floración) en las hojas de maíz (Mills y Jones, 1996; Malavolta et al., 1997;

Shoko, 2009; Rao, 2009).

Es de conocimiento general que el N aplicado a través de fertilizaciones de síntesis

química industrial tiene baja eficiencia en su uso por las plantas, ya que está sujeto

a condiciones edafoclimáticas. El N absorbido en edades tempranas por las plantas

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es altamente móvil vía floema a los distintos puntos de crecimiento en los órganos

de la planta, donde permanece para luego ser movilizado en etapas de alta

demanda como la floración y llenado de grano (Salisbury y Ross, 1994; Marschner,

1995; Malavolta et al., 1997; Taíz y Zeiger, 2006; Castro et al., 2006; Azcón Bieto y

Talón, 2008; Rao, 2009). Esta dinámica se reflejó en los procesos biológicos en el

suelo y fisiológicos en los cultivos de maíz y soya.

6.2 Actividad de las bacterias nitrificantes BOA

En esta investigación se corroboró que los intermediarios de la nitrificación, BOA y

NO3-, son considerablemente afectados por las condiciones ambientales y del suelo,

en especial la humedad (Navarro y Navarro, 2003; Brady y Weil, 2004; Gallego,

2012).

Las poblaciones de BOA y producción de nitrato encontraron sus mayores

expresiones en la etapa de floración, cuando existieron mejores condiciones de

oxigenación por la menor precipitación (145 mm) en comparación con llenado de

grano (250 mm). Los promedios poblacionales encontrados en este ensayo

utilizando el qPCR fueron mayores (oscilo entre 2.5E+9 y 3.4E+10) a registros en otros

medios edáficos, en los cuales se han encontrado poblaciones entre 9.5E+4 y 2.0E+7

copias gen amoA g-1 suelo (Moreta et al., 2009; Szukics et al., 2010; Cao et al.,

2011; Jin et al., 2011). Otras técnica utilizada para medir las BOA, es la del número

más probable (NMP), Gallego (2012) en suelos con uso de AV, compost y FQ

registró poblaciones que oscilaron entre 4.0E+4 UFC g suelo seco-1 (UFC gss-1) y

2.9E+5 UFC gss-1. Boccolini et al., (2010) en suelos con el uso de cultivos de

cobertura y FQ encontró poblaciones entre 120E+2 UFC gss-1 y 165E+2 UFC gss-1.

Varios autores (Navarro y Navarro, 2003; Avrahami y Bohannan, 2007; Stres et al.,

2008; Nicol et al., 2008; Montaño et al., 2013) coinciden en la alta influencia de las

condiciones aeróbicas en las poblaciones de BOA y por tanto en la producción de

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NO3-. Estos mismos autores han encontrado que la temperatura también ejerce alta

influencia sobre la actividad de estas poblaciones, sostienen que si la temperatura

alcanza de 25 a 30°C, la actividad de BOA se maximiza, lo cual concuerda con las

condiciones presentes en esta investigación (la temperatura osciló entre 25.5 y

29.3°C).

Los resultados obtenidos mostraron que se requiere del sustrato básico para la

nitrificación: NH4+ y, este puede ser suplido en el cultivo intercalado por AV y AO

combinado con FO o FQ, mientras que el B utilizado, es la fuente menos eficiente

para el proceso y para suplir las necesidades de los monocultivos, se tiene que

acudir a FQ, especialmente en el caso de la soya.

En este trabajo se ha comprobado que AV y AO constituyen mejores fuentes

nitrogenadas, posiblemente por su relación C:N, que los hace rápidamente

metabolizables, en comparación con B. Las variables que sufrieron mayores

cambios en el ensayo fueron la temperatura y humedad del suelo. A pesar de las

evidencias que arrojaron los análisis estadísticos realizados, cuando se hizo la

correlación de Pearson en busca de corroborar la influencia de algunas de las

variables evaluadas (humedad y temperatura del suelo) con actividad de BOA, los

resultados no fueron significativos, los cual puede ser explicable por los altos

coeficientes de variación (Anexo 3), dado que el ensayo se realizó en condiciones

de campo, considerando al suelo muy variable por los factores de formación y

condiciones ambientales y de manejo al cual está sujeto (Jaramillo et al., 1994;

Malagón et al., 1995).

6.3 Variables asociadas al flujo y PCG de GEI en el suelo

En los cultivos intercalados los tratamientos generaron efectos similares en el flujo

de CO2, en este sistema se encontraron mayores flujos de CO2 que en los

monocultivos. Es posible que la mayor cobertura en la superficie del suelo al cual

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estuvo sujeto al sembrar cultivos intercalados, permitió mayor respiración

autotrófica y heterotrófica, originado la liberación del CO2 tanto de los sistemas

radiculares de las plantas como de la actividad de organismos en el suelo al

descomponer la compleja MO en compuestos más simples (Labrador, 1996;

Franzluebbers, 2005; Adiku et al., 2010).

El flujo de CH4 fue fluctuante, caracterizado por parcelas con la capacidad de ser

sumidero y emisor del gas. Algunos investigadores coinciden con este

comportamiento dinámico del CH4 en suelos agrícolas. Se ha registrado que el

proceso metanogénesis es regulado por microorganismos que oxidan el CH4 como

de las condiciones del suelo, entre ellas, la textura, humedad y porosidad (Hütsch

et al., 1994; 1997; Hutsch, 1998). Este proceso, se suscita cuando prevalecen

condiciones anaeróbicas en el suelo y las poblaciones de bacterias metanogénicas

transforman el ácido acético, H2 y CO2 en CH4 (Weber et al., 1984). Caso contrario

sucede cuando el medio es más aeróbico, las bacterias metanotróficas oxidan el

CH4 y el suelo actúa como sumidero (Jones y Morita, 1983; Glaztel y Stahr, 2001).

Kessavalou et al., (1998) ha demostrado que la perturbación del suelo durante el

establecimiento de cultivos, aumenta la oxidación del CH4, en el siguiente orden:

campo nativo (33 a 44 µg m2 h-1) > siembra directa (31 a 34 µg m2 h-1) > preparación

convencional (24.5 a 33 µg m2 h-1).

Otros autores han estudiado la metanogénesis tomando las lluvias como factor que

regula la humedad en el suelo, provocando que éste sea emisor o sumidero del gas.

Registraron que en épocas de altas precipitaciones predominaban las condiciones

anaeróbicas en el suelo y propiciaba la emisión y cuando la humedad del suelo se

reducía, asociado directamente con la disminución de las precipitaciones, empiezan

a generarse procesos oxidativos donde actúan las bacterias aeróbicas quienes

contribuyen a la acumulación del CH4, llegando a la reducción de la emisión e

incluso actuaba como sumidero (Klemedtsson y Klemedtsson, 1997; Kammann et

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al., 2001; Dunfield, 2007; Visscher et al., 2007; Reay et al., 2007; Ferreira, 2008;

Pastrana et al., 2011).

Se ha demostrado que la fertilización nitrogenada regula la absorción del CH4. En

algunos suelos la oxidación de CH4 se disminuye, ya que el NH4+ disponible actúa

como inhibidor de la reacción por que compite con el CH4 por la enzima mono-

oxigenasa producida vía oxidación del NH4+ (Boeckx et al., 1997; Wang y Ineson,

2003; Majumdar y Mitra, 2004; Zanatta et al., 2010). En otros trabajos se confirma

que esta práctica reduce de forma directa la oxidación del CH4 por la inhibición

competitiva e indirectamente, a largo plazo, la acidificación del suelo modifica el pH

óptimo para el establecimiento de poblaciones metanotróficas (Hustch, 1998;

Kravchenko et al., 2002).

En otras ocasiones está práctica agrícola no afecto la emisión del gas. Glaztel y

Stahr (2001) obtuvieron valores muy cercanos de emisión en un experimento

conducido durante 10 años, al comparar el efecto de la fertilización nitrogenada y

sin fertilización. Ruser et al., (1998) compararon tratamientos que recibieron

diferentes dosis de urea, sin verificar efecto alguno en la oxidación de CH4.

Un efecto diferente fue encontrado por Veldkamp et al., (2001), Hellebrand et al.,

(2003) y Dunfield (2007), el N mineral aplicado al suelo estimuló la oxidación del

CH4.

Parece ser que el N mineral es un pre-requisito, aún poco explicado, para activar

las reacciones enzimáticas que involucran la emisión o absorción del CH4. Esto es

porque este nutrimento puede actuar como inhibidor de nutrientes y de

microorganismos metanotróficos. En el suelo actúa sobre el pH, tipo de población

metanotrófica, la forma y concentración N presente (NH4+, NO2

- o NO3-) (Bodelier y

Laanbroek, 2004; Visscher et al., 2007).

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En este ensayo se pudo verificar la variabilidad de resultados reseñada, en estas

condiciones existe incertidumbre sobre qué factores influyeron de forma significativa

la absorción o emisión del CH4, entre ellos, la disponibilidad del N vía FO y FQ o por

la fertilidad natural del suelo, como de las condiciones del suelo, entre algunas,

textura, humedad, porosidad que condicionan la actividad de los microorganismos

involucrados, de manera que existe un desafío latente para encontrar las relaciones

entre el N y CH4, como de las bacterias intermediarias en el proceso.

Al igual que la metanogénesis, la desnitrificación es un proceso que ocurre cuando

predominan condiciones anaeróbicas del suelo y con ello, entra a jugar un papel

importante la disponibilidad de N inorgánico y humedad en el suelo para la máxima

expresión del proceso biológico (Sylvia et al., 2005; Czóbel et al., 2010).

En las parcelas con FQ existió mayor desnitrificación que las manejadas con FO,

tendencia similar a la registrada para el proceso de nitrificación, especialmente en

la etapa de floración de los cultivos (Figura 19). Varias investigaciones en sistemas

de producción agrícola demostraron que el N2O emitido es respuesta a la

fertilización mineral nitrogenada (Kayer et al., 2004; Omonode et al., 2011), más

cuando esta sucede en periodos lluviosos (Passianoto et al., 2003; Ferreira, 2008;

Pastrana et al., 2011; Escobar, 2011). Horváth et al., (2008) y Czóbel et al., (2010)

argumentan que aparte de los cambios en la humedad y temperatura del suelo, el

flujo de N2O también es influenciado por la disponibilidad de N, pH y textura del

suelo.

6.4 Productividad de los cultivos en el agroecosistema

El rendimiento en grano del cultivo de soya fue significativamente estimulado por

adicionar MO en forma de AO, en comparación a B. Estos resultados y el análisis

multivariado (conglomerado) señalan que las adiciones de materiales orgánicos de

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alta calidad como maíz y M. pruriens promueven rendimientos similares que el

aplicar fertilizantes de síntesis química industrial y aún mayores, cuando no se

adiciona ninguna MO.

La mayoría de los rendimientos observados en esta investigación fueron superiores

a los reportados en otros trabajos a nivel nacional que utilizaron esta variedad,

cuyos rendimientos oscilaron entre 1.66 t ha-1 a 2.11 t ha-1 (Corpoica, 2009;

FENALCE, 2011; Valencia y Ligarreto, 2012). Otras investigaciones sobre el uso y

manejo de los AV, corroboran que es una práctica agrícola que impacta

positivamente las propiedades de los suelos y por lo tanto en la productividad de los

cultivos sembrados en asociación o rotación (CIDICCO, 2003; Viteri y Velandia,

2006; Crespo et al., 2011; Sarkar et al., 2011; Prager et al., 2012), sin embargo, esta

tecnología provocó rendimientos del cultivo de maíz similares que al no adicionar

MO, posiblemente por el tipo de suelo y la condición de descanso que le precede,

porque en otras condiciones, sí se ha podido confirmar la influencia de esta práctica

sobre la productividad del cultivo (García et al., 2002; Astier et al., 2006;

Sanclemente, 2009; Vélez, 2012; Egbe et al., 2012; Shafi et al., 2012).

6.5 Consideraciones finales

La dinámica del N en el suelo es netamente dependiente de procesos biológicos y

altamente influenciados por las propiedades físicas, químicas y biológicas que

predominan, como de las condiciones climáticas y tipo de agroecosistemas

establecidos, volviendo al N un nutrimento complejo para analizar y comprender. Lo

anterior, debido a la gran influencia que tuvieron estas características sobre los

tratamientos evaluados, los cuales también influenciaron a las variables de

respuesta.

El Typic Haplustert donde se instaló el ensayo fue de textura franco arcilloso con

alta susceptibilidad a la compactación por la densidad aparente, humedad

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volumétrica y porosidad del suelo que presentaba. Este suelo pesado estuvo

aproximadamente ocho años en barbecho, traducido en un pH neutro con niveles

medios a altos de MO y de la mayoría de los nutrientes analizados previo a la

investigación.

Los materiales orgánicos aplicados en forma de AV y AO permitieron la acumulación

de MOS y cuando se suscitó la mineralización, fueron capaces de disponer similares

cantidades de N inorgánico que al realizar la fertilización con productos de síntesis

química industrial. Sin embargo, dichas fuentes nitrogenadas en los sistemas

agrícolas pueden promover pérdidas hasta del 90% del N aplicado a través de los

procesos de nitrificación y desnitrificación, las cuales pueden aumentar si no existe

una sincronía entre la mineralización y la absorción por la planta (Jarvis, 1996; Smith

et al., 1997; Glass, 2003; Jordan et al., 2008; Sepúlveda et al., 2012).

En esta investigación fue verificable la escasa influencia de los tratamientos sobre

la acumulación de nutrimentos en los cultivos de soya y maíz, un argumento que

trata de explicar este proceso fisiológico es el señalado por Malavolta et al., (1997),

quienes señalan que tras la absorción y rápida distribución de nutrimentos a los

diferentes órganos de la planta y cumplir funciones específicas durante el aumento

de la biomasa, ocurre el efecto de dilución. Otros factores en la argumentación están

relacionados con la capacidad fotosintética de la planta, sea C3 o C4 y la asignación

de asimilados en cada etapa fenológica (Taíz y Zeiger, 2006).

Se confirmó que la nitrificación es un proceso biológico altamente afectado por las

condiciones ambientales y del suelo, en particular, la humedad del suelo. La adición

de materiales orgánicos tuvo mayor influencia en la temperatura y humedad del

suelo que en las poblaciones nitrificantes, esta tendencia fue encontrada en el

experimento de (Gallego, 2012), al analizar las poblaciones de BOA y BON en

suelos pesados bajo el efecto de cambios constantes de humedad del suelo.

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Esta investigación se centró en la dinámica del N en el suelo, lo que implica que

cuando se moviliza vía mineralización, también lo hace vía desnitrificación. Al igual

que lo sucedido en el proceso de nitrificación, la producción de GEI está

estrechamente relacionada con la actividad de microorganismos y condiciones del

suelo como la humedad, densidad y porosidad (Horváth et al., 2008; Ciarlo, 2009;

Czóbel et al., 2010), de tal manera que los tratamientos de forma similar el flujo de

CO2 y PPA y, si bien existió alguna coherencia en los resultados obtenidos entre la

disponibilidad de N mineral con el flujo de N2O (Kaye et al., 2004; Pastrana et al.,

2011; Omonode et al., 2011), para el CH4 fue fluctuante como lo señalan otros

resultados (Hellebrand et al., 2003; Visscher et al., 2007; Dunfield, 2007; Zanatta et

al., 2010).

La adición de restos vegetales provenientes de la asociación M. pruriens-maíz

estimuló rendimientos similares que el uso de fertilizantes de síntesis química

industrial en los cultivos de manejo convencional. Considerando esta tecnología

factible, económica y amigable con el ambiente para su uso en el agroecosistema,

en el cual, la variabilidad existente estuvo explicado por la dinámica del N,

principalmente por fracciones de N, BOA, temperatura y humedad del suelo, siendo

esta última, el principal factor modular en las transformaciones del N.

La integración de variables permite afirmar que los tratamientos más aconsejables

para estas condiciones edafoclimáticas fueron, la adición individual de residuos

orgánicos en forma AO o en mezcla con FO.

Aún existen incógnitas sobre el uso y manejo de los AV sobre la dinámica que

genera en torno al N y su impacto sobre la productividad de los cultivos. Nos

encontramos cotidianamente en múltiples escenarios del agro en donde la filosofía

tradicional es la continua dependencia de subproductos del oro negro, petróleo. Sin

embargo, la agroecología también es perseverante en el continuo esfuerzo por la

utilización y descubrimiento de tecnologías que nos ofrece la naturaleza como la

implementada en este estudio y otras como la FBN, hongos formadores de micorriza

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arbuscular, inhibición biológica de nitrificación, plaguicidas de origen biológico, entre

otros. De manera que en los sistemas agrícolas actuales que maximicen la utilidad

de los recursos naturales, también lo harán en el futuro, por lo que los AV y AO son

una apuesta segura para los agricultores que aparte de buscar rentabilidad

productiva busquen sostenibilidad productiva.

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7. CONCLUSIONES

En el Typic Haplustert estudiado localizado en Candelaria (Valle -Colombia), en el

cultivo intercalado maíz-soya, la adición de materiales orgánicos de alta calidad (M.

pruriens var. utilis - maíz como AV/AO), estimularon la mineralización y por ende, la

dinámica del C y de las diferentes fracciones de N en el suelo, sin cambios

significativos en el contenido de estos elementos en el tejido vegetal. La humedad

del suelo fue el factor modulador que más influyó en estas actividades biológicas en

el suelo.

Las poblaciones de BOA y su producto metabólico el NO3- variaron

significativamente entre etapas fenológicas evaluadas, sin diferir entre tratamientos.

Su expresión estuvo influenciada por la humedad del suelo, especialmente en AV

donde se favoreció la aireación del suelo.

El flujo CO2 se incrementó en los cultivos intercalados adicionados con AV/AO en

comparación con los monocultivos. En las parcelas principales AV, AO y B el uso

de fertilizantes de síntesis química industrial estimuló significativamente los flujos

de N2O y CH4. Estos resultados señalan la necesidad de planificar sistemas de

cultivos de mayor complejidad que además de ventajas socio-económicas actúen

como sumideros de C y N.

En el cultivo intercalado maíz-soya el uso de materiales orgánicos de alta calidad

basados en M. pruriens-maíz ya sea como AV/AO promovió en maíz rendimientos

similares a los obtenidos con fertilizantes de síntesis química industrial, mientras

que en soya, cuando se adicionó AO los rendimientos superaron al promedio del

sistema tradicional (B).

Los resultados obtenidos en este ensayo plantean la adición al suelo de materiales

orgánicos de alta calidad (M. pruriens-maíz) como alternativa viable desde lo social,

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económico y ambiental. También corroboran que las condiciones físicas de

humedad y temperatura del suelo, la dinámica del N (NH4+, Nit, N total y BOA) y del

C, son variables estrechamente ligadas al manejo de estos materiales, a la materia

orgánica del suelo, a la actividad microbiológica y a las condiciones del sistema

evaluado.

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8. RECOMENDACIONES

El N inorgánico liberado por el uso de los AV/AO se puede perder como el aplicado

por los fertilizantes de síntesis química industria. Por lo tanto se recomienda

sincronizar los picos de producción de N inorgánico de los AV/AO con las etapas

fenológicas de mayor requerimiento de N por parte de los cultivos.

Se recomienda sembrar los AV/AO en asociación con un cultivo principal generador

de ingresos o alimentos de autoconsumo para mejorar la eficiencia en el uso de la

tierra y productividad del agroecosistema.

Utilizar los AV/AO en mezclas de especies leguminosas con gramíneas para

aumentar la relación C:N y de esta forma disminuir la velocidad de mineralización

en los residuos con el fin de mermar las pérdidas de nutrimentos del sistema suelo-

planta y con ello la contaminación ambiental.

Acompañar la aplicación de materiales orgánicos de alta calidad (AV/AO) en el suelo

con otras formas de fertilización orgánica o inorgánica en épocas que se consideran

críticas para el rendimiento de los cultivos.

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10. ANEXOS

Anexo 1. Determinaciones, métodos y referencias utilizadas de caracterización previa al ensayo.

Determinaciones Métodos Referencia

pH Potenciometría. En agua 1:1 CIAT, 2006

CO (g kg-1) Walkley-Black: Volumetría Espectrometría molecular Autoanalizador. CIAT, 2006

N total (mg kg-1) Colorimetría Espectrofotómetro en KCL 1M. CIAT, 2006

NH4+ y NO3- (mg kg-1) Colorimetría Espectrofotómetro en KCL 1M. CIAT, 2006

P-Bray II (mg kg-1) Espectrometría molecular, Autoanalizador Murphy-Riley. CIAT, 2006

S (mg kg-1) Azufre Extractable (Fosfato Ca) Turbidimetria CIAT, 2006

B (mg kg-1) Boro en Agua Caliente (Espectromet. Azometina) CIAT, 2006

Micronutrientes: Cu, Zn, Mn, Fe) (mg kg-1)

Espectrometría de absorción atómica. En doble acido. CIAT, 2006

Cationes intercambiables: K, Ca, Mg y Na (Cmolc kg-1)

Espectrometría de emisión atómica. CIAT, 2006

CIC (Cmolc kg-1) Volumetría (NaOH 0.1N). En acetato de amonio 1N. CIAT, 2006

Densidad aparente (g cm3)

Cilindro biselado Jaramillo,

2002

Densidad real (g cm3) Picnómetro Montenegro y

Malagón, 1990

Porosidad total (%) Formula Jaramillo,

2002

Clase Textural Pipeta de Robinson´s. SSEW, 1982

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Anexo 2. Análisis de varianza (P<0.05) para las fracciones de C y N del suelo y planta.

A- Carbono orgánico

Carbono orgánico - Floración

Fuente DF Tipo III SS CM F-

Valor Pr > F

REP 2 2.963 1.481 0.33 0.7235

TRAT 10 67.812 6.781 1.51 0.2089

CV= 12.48; Media= 16.99; R2= 0.44

Carbono orgánico - Llenado de grano

Fuente DF Tipo III SS CM F-

Valor Pr > F

REP 2 6.354 3.177 1.34 0.2855

TRAT 10 17.256 1.725 0.73 0.6926

CV= 11.83; Media= 13.03; R2= 0.33

Fuente DF Tipo III SS CM F-

Valor Pr > F

época 1 258.11 258.11 110.8 0.0005

B- Nitrógeno total

N total - Floración

Fuente DF Tipo III SS CM F-

Valor Pr > F

REP 2 17213.39 8606.69 0.21 0.8114

TRAT 10 679703.01 67970.30 1.67 0.1585

CV= 12.88; Media= 1566.37; R2= 0.46

N total - Llenado de grano

Fuente DF Tipo III SS CM F-

Valor Pr > F

REP 2 1598466..630 799233..315 5.03 0.0170

TRAT 10 1142375..119 114237..512 0.72 0.6979

CV= 27.37; Media= 1456.09; R2= 0.46

Fuente DF Tipo III SS CM F-

Valor Pr > F

época 1 200652.25 200652.25 0.50 0.52

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C- Amonio

Amonio - Floración

Fuente DF Tipo III SS CM F-

Valor Pr > F

REP 2 3.928 1.964 0.58 0.5697

TRAT 10 55.047 5.504 1.62 0.1713

CV= 59.58; Media= 3.09; R2= 0.46

Amonio - Llenado de grano

Fuente DF Tipo III SS CM F-

Valor Pr > F

REP 2 706.108 353.054 7.45 0.0038

TRAT 10 365.300 36.53 0.77 0.6545

CV= 35.40; Media= 19.44; R2= 0.53

Fuente DF Tipo III SS CM F-

Valor Pr > F

época 1 4410.33 4410.33 24.85 0.0076

D- Nitrato

Nitrato - Floración

Fuente DF Tipo III SS CM F-

Valor Pr > F

REP 2 9.998 4.999 3.75 0.0414

TRAT 10 23.129 2.312 1.74 0.1412

CV= 37.29; Media= 3.09; R2= 0.55

Nitrato - Llenado de grano

Fuente DF Tipo III SS CM F-

Valor Pr > F

REP 2 1.436 0.718 0.02 0.9762

TRAT 10 228.393 22.839 0.77 0.6590

CV= 62.07; Media= 8.79; R2= 0.27

Fuente DF Tipo III SS CM F-

Valor Pr > F

época 1 536.31 536.321 187.59 0.0002

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E- N inorgánico (Amonio + nitrato)

N inorgánico – Floración

Fuente DF Tipo III

SS CM

F-Valor

Pr > F

REP 2 26.373 13.186 3.68 0.0436

TRAT 10 43.091 4.309 1.20 0.3467

CV= 30.60; Media= 6.18; R2= 0.49

N inorgánico - Llenado de grano

Fuente DF Tipo III

SS CM

F-Valor

Pr > F

REP 2 651.831 325.915 11.04 0.0006

TRAT 10 392.936 39.293 1.33 0.2803

CV= 19.24; Media= 28.23; R2= 0.63

Fuente DF Tipo III

SS CM

F-Valor

Pr > F

época 1 8022.56 8022.56 47.32 0.0023

F- Carbono en hojas de soya

Carbono Soya – Floración

Fuente DF Tipo III SS CM F-Valor Pr > F

REP 2 3069.95 1534.97 2.75 0.0910

TRAT 9 2894.73 321.63 0.58 0.8000

CV= 4.54; Media= 519.83; R2= 0.37

Carbono Soya - Llenado de grano

Fuente DF Tipo III SS CM F-Valor Pr > F

REP 2 148099.54 74049.77 5.60 0.0129

TRAT 9 137258.05 15250.89 1.15 0.3787

CV= 30.08; Media= 382.22; R2= 0.54

Fuente DF Tipo III SS CM F-Valor Pr > F

época 1 252884.43 252884.43 8.42 0.04

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G- Nitrógeno en hojas de soya

Nitrógeno Soya - Floración

Fuente DF Tipo III SS CM F-Valor Pr > F

REP 2 36.238 18.119 1.64 0.2213

TRAT 9 148.473 16.497 1.50 0.2232

CV= 9.37; Media= 35.42; R2= 0.48

Nitrógeno Soya - Llenado de grano

Fuente DF Tipo III SS CM F-Valor Pr > F

REP 2 0.473 0.236 0.10 0.9023

TRAT 9 44.309 4.923 2.15 0.0798

CV= 4.76; Media= 31.78; R2= 0.52

Fuente DF Tipo III SS CM F-Valor Pr > F

época 1 137.12 137.12 14.57 0.02

J- Carbono en hojas de maíz

Carbono maíz – Floración

Fuente DF Tipo III SS CM F-Valor Pr > F

REP 2 19.073.477 953.673 7.64 0.0040

TRAT 9 5.244.505 582.722 4.67 0.0027

CV= 2.52; Media= 442.24; R2= 0.76

Carbono maíz - Llenado de grano

Fuente DF Tipo III SS CM F-Valor Pr > F

REP 2 204.482 102.241 2.13 0.1482

TRAT 9 319.578 35.508 0.74 0.6703

CV= 1.60; Media= 431.27; R2= 0.37

Fuente DF Tipo III SS CM F-Valor Pr > F

época 1 2133.82 2133.82 4.04 0.11

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K- Nitrógeno en hojas de maíz

Nitrógeno maíz - Floración

Fuente DF Tipo III SS CM F-Valor Pr > F

REP 2 205.240 102.620 20.59 <.0001

TRAT 9 29.188 3.243 0.65 0.7408

CV= 8.52; Media= 26.19; R2= 0.72

Nitrógeno maíz - Llenado de grano

Fuente DF Tipo III SS CM F-Valor Pr > F

REP 2 7.671 3.835 1.29 0.2983

TRAT 9 43.291 4.810 1.62 0.1823

CV= 9.84; Media= 17.48; R2= 0.48

Fuente DF Tipo III SS CM F-Valor Pr > F

época 1 992.44 992.44 18.65 0.01

Anexo 3. Análisis de varianza (P<0.05) para las variables asociadas a la actividad de las bacterias nitrificantes en el suelo.

A- Bacterias oxidantes de amonio (BOA)

Floración Fuente DF Tipo III SS CM F-Valor Pr > F

REP 2 9,02E+27 4,51E+27 4.04 0.0336

TRAT 10 1,14E+28 1,14E+27 1.02 0.4614

CV= 42.90; Media= 2.4629E10; R2= 0.47

BOA - Llenado de grano Fuente DF Tipo III SS CM F-Valor Pr > F

REP 2 1,26E+26 6,28E+25 1.50 0.2470

TRAT 10 2,12E+26 2,12E+25 0.51 0.8660

CV= 54.89; Media= 3.73E+09; R2= 0.28 Fuente DF Tipo III SS CM F-Valor Pr > F

época 1 7,21E+21 7,21E+21 31.52 0.005

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136

B- Nitrato

Nitrato - Floración

Fuente DF Tipo III SS CM F-

Valor Pr > F

REP 2 9.998 4.999 3.75 0.0414

TRAT 10 23.129 2.312 1.74 0.1412

CV= 37.29; Media= 3.09; R2= 0.55

Nitrato - Llenado de grano

Fuente DF Tipo III SS CM F-

Valor Pr > F

REP 2 1.436 0.718 0.02 0.9762

TRAT 10 228.393 22.839 0.77 0.6590

CV= 62.07; Media= 8.79; R2= 0.27

Fuente DF Tipo III SS CM F-

Valor Pr > F

época 1 536.31 536.321 187.59 0.0002

C- Humedad volumétrica del suelo

Humedad del suelo - Floración Fuente DF Tipo III SS CM F-Valor Pr > F

REP 2 10.621 5.310 0.57 0.5761

TRAT 10 1.608.420 16.084 1.72 0.1456

CV= 11.31; Media= 27.04; R2=0.47

Humedad del suelo - Llenado de grano Fuente DF Tipo III SS CM F-Valor Pr > F

REP 2 13.644 6.822 1.23 0.3129

TRAT 10 142.785 14.278 2.58 0.0342

CV= 9.13; Media= 25.75; R2= 0.58 Fuente DF Tipo III SS CM F-Valor Pr > F

época 1 27.29 27.29 3.95 0.05

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D- Temperatura del suelo

Temperatura – Floración

Fuente DF Tipo III

SS CM F-Valor Pr > F

REP 2 0.220 0.110 1.10 0.3519

TRAT 10 1.317 0.131 1.32 0.2867

CV= 1.29; Media= 24.42; R2= 0.43

Temperatura - Llenado de grano

Fuente DF Tipo III

SS CM F-Valor Pr > F

REP 2 1.150 0.575 1.06 0.3646

TRAT 10 50.655 5.065 9.34 <.0001

CV= 2.71; Media= 27.08; R2= 0.82

Fuente DF Tipo III

SS CM F-Valor Pr > F

época 1 117.33 117.33 174.09 <.0001

Anexo 4. Correlación de Pearson entre las variables asociadas a la actividad de bacterias nitrificantes en el suelo.

Etapa fenológica Expresión r Significancia

Floración

BOA/NO3- 0.13 ns

BOA/Hum. Vol. -0.11 ns

BOA/Temp. Suelo 0.13 ns

NO3-/ Hum. Vol. -0.15 ns

NO3-/Temp. Suelo -0.21 ns

Hum. Vol./Temp. Suelo -0.22 ns

Llenado de grano

BOA/ NO3- 0.13 ns

BOA/Hum. Vol. 0.02 ns

BOA/Temp. Suelo 0.23 ns

NO3-/ Hum. Vol. 0.39 ns

NO3-/Temp. Suelo -0.03 ns

Hum. Vol./Temp. Suelo -0.34 ns

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Anexo 5. Análisis de varianza (P<0.05) para las variables asociadas al flujo de GEI en el suelo.

A- CO2

Fuente DF Tipo III SS CM F-Valor Pr > F

REP 2 0.0046 0.0023 1.36 0.28

TRAT 10 0.0514 0.0051 3.05 0.02

CV= 24.73; Media= 0.16; R2= 0.62

B- CH4

Fuente DF Tipo III SS CM F-Valor Pr > F

REP 2 8.82 4.41 0.34 0.716

TRAT 10 17366.78 1736..678 133.45 0.0001

CV= 143.7; Media= 2.51; R2= 0.98

C-N2O

Fuente DF Tipo III SS CM F-Valor Pr > F

REP 2 9.275 4.63 1.86 0.181

TRAT 10 607.123 60.71 24.36 0.0001

CV= 23.57; Media= 6.69; R2= 0.92

D-PPA

Fuente DF Tipo III SS CM F-Valor Pr > F

REP 2 86.03 43.01 3.01 0.071

TRAT 10 107.125 10.71 0.75 0.67

CV= 7.72; Media= 48.91; R2= 0.40

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Anexo 6. Correlación de Pearson entre las variables asociadas al flujo de GEI.

Expresión r Significancia

CO2/CH4 0.02 ns

CO2/N2O 0.30 ns

CO2/PPA 0.31 ns

CO2/Hum. vol. 0.30 ns

CO2/Poro. Total 0.10 ns

CO2/Da -0.28 ns

CO2/Temperatura suelo -0.47 ns

CH4/N2O 0.04 ns

CH4/PPA -0.15 ns

CH4/Hum. vol. -0.08 ns

CH4/Poro. total 0.09 ns

CH4/Da 0.18 ns

CH4/Temperatura suelo -0.2 ns

N2O/PPA 0.002 ns

N2O/Da 0.08 ns

N2O/Poro. total 0.008 ns

N2O/Hum. vol. 0.007 ns

N2O/Temperatura suelo -0.47 ns

Anexo 7. Análisis de varianza (P<0.05) para el rendimiento de los cultivos.

A-Soya

Fuente DF Tipo III SS CM F-Valor Pr > F

REP 2 1.973 0.986 0.57 0.57

TRAT 9 30.224 3.358 1.93 0.11

CV= 28.70; Media= 4.59; R2= 0.50

B- Maíz

Fuente DF Tipo III SS CM F-Valor Pr > F

REP 2 5.10 2.55 1.46 0.25

TRAT 9 13.53 1.50 0.86 0.57

CV= 27.61; Media= 4.78; R2= 0.37