DESKRIPSI JUDUL Pada pembelajaran IdentifikasiMikroba meliputi 5
modul, dimana modul 4 berisi tentang Pertumbuhan, Pembiakan dan
Isolasi Mikroba yang harus dikuasai oleh siswa tingkat II semester
3 baik siswa Jurusan Kimia Industri maupun Kimia analisa. Modul ini
membahas tentang Pertumbuhan mikroba dan faktor-faktor yang
mempengaruhi, Pembiakan mikroba dan metode-metodenya serta isolasi
mikroba dengan cara-cara isolasinnya. Disamping mengenai
konsep-konsep juga disajikan lembar kegiatan untuk memahami konsep
tersebut.
PETUNJUK PENGGUNAAN MODUL 1. Pelajarilah materi dalam modul ini
sehingga benarbenar paham dan mengerti. 2. Jawablah latihan-latihan
yang ada, kemudian cocokan hasil latihan anda dengan kunci jawaban.
3. Ukurlah kemampuan anda dengan mengerjakan evaluasi, bila jawaban
anda banyak yang salah ( < 75 % ) pelajari modul sekali lagi. 4.
Bila mengalami kesulitan dengan modul ini mintalah bimbingan
guru.
TUJUAN 1. Tujuan Akhir Setelah mempelajari modul ini anda
diharapkan dapat memahami faktor faktor yang mempengaruhi
pertumbuhan mikroba, Metode membuat biakan mikroba dan
mengisolasikan mikroba. 2. Tujuan Antara Setelah mempelajari modul
ini siswa dapat : a. Mendeskripsikan Faktor-faktor yang
mempengaruhi pertumbuhan mikroba b. Membuat biakan murni untuk
keperluan mikrobiologi c. Mengisolasikan mikroba untuk keperluan
mikrobiologi
LEMBAR KEGIATAN PERTUMBUHAN, PEMBIAKAN DAN ISOLASI MIKROBA
Tujuan : 1. Mendeskripsikan Faktor-faktor yang mempengaruhi
pertumbuhan mikroba 2. Membuat biakan murni untuk keperluan
mikrobiologi 3. Mengisolasikan mikroba untuk keperluan mikrobiologi
Lembar Informasi PERTUMBUHAN MIKROBA Pertumbuhan mikroba adalah
pertambahan susunan kimia yang teratur dari suatu mikroba. Secara
normal pertumbuhan adalah hasil penggadaan sel. Pada mikroba multi
sel pertumbuhannya ditunjukan dengan bertambah besarnya sel, sedang
pada sel tunggal pertumbuhannya ditunjukan dengan bertambah
banyaknya sel. Pengukuran Pertumbuhan Pada pengukuran pertumbuhan
mikroba, untuk sel tunggal dapat dilakukan dengan cara mengukur
massa sel dan jumlah sel. Kedua pengukuran ini dapat dinyatakan
dalam volume. Perlu diingat bahwa massa sel dan jumlah sel tidak
setara. Massa sel berbanding lurus dengan waktu jika pertumbuhannya
teratur ( terus-menerus ). Tetapi jika pertumbuhannya tidak teratur
massa sel diukur pada waktu tertentu. Karena massa sel sangat kecil
maka pengukurannya tidak mungkin dengan menimbang satu mikroba,
kita dapat mengukur massa mikroba secara tidak langsung. Misalnya
dengan mengukur kecepatan perubahan gula menjadi asam laktat pada
proses fermentasi dapat ditentukan banyaknya bakteri asam laktat.
Pengukuran kecepatan perubahan gula dengan jalan mengukur pembauran
cahaya dalam seuspensi sel. Untuk pengukuran banyaknya mikroba
dapat dilakukan dengan menggunakan mikroskop. Pengukuran ini
dilakukan pada volume yang terkecil
(1ml) perhitungan ini dibantu dengan alat yang dinamakan ruang
penghitung (counting Chamber). Mikroba dengan banyak minimal 10
juta per ml dapat dilihat dengan alat ini. Coulter counter adalah
alat penghitung mikroba yang didasarkan pada daya hantar listrik.
Dari besarnya hantaran listrik diketahui banyaknya mikroba, namun
alat ini hanya dapat digunakan untuk mengukur protozoa dan alga.
Kurva Pertumbuhan Pertumbuhan secara matematik Kalau kondisi baik
mikroba satu sel alkan berlipat dua kali pada massa tertentu.
Karena itu pertumbuhan mikroba bersifat bilangan berpangkat (
exponen ), pertumbuhan mikroba bersifat logaritmis karena akan
membentuk kurva linier. Pertumbuhan mikroba dapat dirumuskan dengan
persamaan : N1 : 2 N Nn : 2n N Bilangan tetap Pertumbuhan Seperti
diketahui pada turunan tertentu didapat jumlah mikroba tertentu.
Dengan persamaan : Nt : 2kt N k : bilangan tetap pertumbuhan t :
waktu kalau digunakan bilangan pokok 10 maka didapat : log Nt log N
k : 0,3010 t Kalau pertumbuhan mikroba secara bilangan berpangkat
dan waktu turunannya 20 menit maka setelah 48 jam akan menjadi 2144
sel atau 2,2 . 1043 sel. Tetpi kenyataannya tidak demikian karena
adanya racun yang menghambat pertumbuhan sehingga banyak yang mati.
Pertumbuhan mikroba dapat dilukiskan dengan kurva pertumbuhan yang
dibagi menjadi 6 fase, sbb : (untuk satu generasi ) ( untuk n
turunan )
1. Fase Persiapan ( lag phase ) A B Pada fase ini tidak ada
pertumbuhan, hal ini terjadi bila mikroba yang ditularkan dalam
keadaan tua sehingga mengalami masa tenang (stasionary phase) Jika
mikroba yang ditularkan dalam keadaan fase tumbuh ( fase logaritmis
) maka kurva yang ditimbulkan juga tampak logaritmis. Dalam masa
persiapan ini terjadi enzim dan protoplasma baru, lamanya
tergantung keadaan lingkungannya. 2. Fase Percepatan Pertumbuhan (
Acclelerated growth phase ) B C Phase ini terjadi pada akir masa
persiapan dimana mikroba mulai tumbuh, tetapi karena tidak semua
mikroba selesai mengalami fase persiapan maka kenaikannnya tidak
sampai logaritmis benar. 3. Fase Logaritmis ( Log Phase ) C D Phase
yang terjadi jika kecepatan pertumbuhan mikroba telah mencapai
harga yang tetap. Selama pertumbuhan, pertambahan massa mikroba
berbanding lurus dengan pertambahan mikroba. Tetapi kecepatan
pertumbuhan mikroba dipengaruhi oleh genetika dan lingkungan.
Potensi reproduksi maksimal mikroba pada lingkungan yang optimal
tergantung dari species mikroba yang bersangkutan.
4. Fase Reda ( D E ) Phase ini terjadi jika zat makanan habis
atau terjadi racun setelah jumlah mikroba maksimum maka pertumbuhan
mikroba menjadi lambat dan akirnya berhenti. 5. Fase Tetap (
Stasionary phase ) E F Phase ini terjadi jika jumlah pertumbuhan
mikroba berbanding lurus dengan jumlah kematian. 6. Fase Kematian (
F G ) Phase ini terjadi jika jumlah kematian mikroba lebih besar
dibandingkan jumlah pertumbuhan mikroba, sehingga jumlah mikroba
berkurang. Fase ini terjadi setelah fase tetap. PEMBIAKAN MIKROBA
Di alam sebenarnya terdapat banyak sekali mikroba dalam bentuk
populasi campuran dari berbagai jenis mikroba yang berbeda. Bila
campuran mikroba ini diambil dan dibiakan (kulturisasi) maka akan
didapat biakan campuran ( Mix Culture ), tetapi bila dari biakan
campuran ini diambil/dipisahkan ( di-isolasi ) satu jenis dan
ditanamkan ( inokulasi ) dalam media selektif maka akan didapat
biakan murni ( Pure Culture ). Untuk membuat biakan murni
dibutuhkan tiga tahapan pekerjaan yaitu : 1. Membuat media yang
cocok untuk mikroba yang akan dibiakan 2. Melakukan isolasi mikroba
yang dimaksud dari biakan campuran 3. Menyimpan biakan itu pada
kondisi yang sesuai untuk mikroba yang bersangkutan. Untuk
menumbuhkan biakan mikroba dalam suatu media steril sejumlah selsel
inokulum harus dilakukan dengan perlakuan kusus untuk
mempertahankan kemurnian dari biakan. Dalam modul ini yang akan
kita bahas hanya bagaimana menumbuhkan mikroba anaerob dan
aerob.
MEMBIAKAN MIKROBA AEROB Berdasarkan bentuk media dan cara
membiakan mikroba aerob dapat dibedakan menjadi 3 macam biakan
yaitu : Biakan cair ( Broth culture ) Biakan agar miring ( agar
slant culture ) Biakan agar tegak ( agar deep culture )
Biakan Cair Biakan cair adalah biakan mikroba yang dibiakan
dalam media cair di dalam tabung reaksi. Ada bermacam-macam media
cair yang dapat digunakan tergantung dari jenis bakteri dan tujuan
pembiakan. Semua media cair termasuk zat-zat hara yang
dikandungnya, ahrus memberikan lingkungan yang cocok secara fisik
dan kimia bagi mikroba yang akan dibiakan. Pertumbuhan mikroba
dalam media cair berbeda-beda dan hal ini dapat dilihat dari hasil
yang nampak, seperti adanya : 1. Kekeruhan cairan ( seperti
terbentuk awan ) 2. Pembentukan selaput ( Ada sekumpulan sel yang
mengapung pada permukaan media ) 3. Sedimen ( ada timbunan/endapan
sel dibagian bawah biakan cair, tetapi akan berputar bila tabung
diketuk perlahan-lahan. Biakan Agar Miring Agar Miring ( slant agar
) adalah media agar dalam tabung reaksi yang diletakan miring dalam
proses pendinginan. Isi tabung yang demikian akan mengeras dengan
permukaan miring, sehingga mempermudah proses inokulasi dengan ose.
Agar miring ini merupakan salah satu cara yang mudah untuk
kulturisasi mikroba, terutama yang bersifat aerob dan fakultatif
aerob. Ciri-ciri khas dari biakan, seperti pembentukan pigmen akan
segera terlihat pada biakan miring. Biakan Agar Tegak Agar tegak (
deep agar ) adalah media agar dalam tabung reaksi yang diletakan
tegak dalam proses pendinginan, sehingga isi tabung akan mengeras
dengan permukaan tegak.
Beberapa hal yang harus diperhatikan dalam proses pengamatan
biakan murni : 1. Media Nutrien Agar Tegak. Gambar dan beri
keterangan tentang : Pertumbuhan : Merata atau tidak merata; pada
bagian permukaan atau dasar. Bentuk pertumbuhan pada bekas tusukan
: filiform, echinulate, bead, villous, rhizoid, arborescent. 2.
Media Nutrien Agar Miring. Gambar dan beri keterangan tentang :
Pertumbuhan : tipis, sedang, lebat, tidak ada. Bentuk pertumbuhan
pada bekas goresan : filiform, echinulate, bead, villous, rhizoid,
arborescent, plumose. Elevasi : flat, effuse, raised, convex.
Pengkilat ( luster ) : mengkilat, tidak mengkilat, cretaceous.
Bentuk permukaan ( topografi ) : licin, tidak teratur,
bergelombang, contoured, kusut ( wrinkled ), verrucose. Warna (
chromogenesis ) : merah, kuning, hijau, coklat fluorecent.
Ciri-ciri optik : opaque, translucent, opalescent, iridescent. Bau
: berbau seperti.., tidak berbau. Konsistensi : slimy, butyrous,
viscid, membranous, brittle. Warna medium : menjadi abu-abu,
coklat, merah, biru, hijau, tak terjadi perubahan warna. 3. Media
Nutrien-Gelatin Tegak Gambar dan beri keterangan tentang :
Pertumbuhan : merata atau tidak merata, tumbuh dipermukaan atau
dasar. Bentuk pertumbuhan pada bekas tusukan : filform, beaded,
papillate, villous, plumose, arborescent. Bentuk pencairan gelatin
: crateriform, napiform, infundibuliform, saccate, srtatiform,
tidak terjadi pencairan, pencairan lambat, pencairan cepat. Warna
media : fluorecent, coklat, tidak terjadi perubahan.
4. Media Nutrien-cair Gambar dan beri keterangan tentang :
Pertumbuhan pada permukaan : ring, pellicle, flucullent,
membranous, tidak membentuk selaput. Kekeruhan : sedikit, sedang,
hebat. Bau : tidak berbau, berbau seperti. Endapan : kompak, bentuk
dan ukuranya tidak tertentu, butir-butir (granular), berlapis-lapis
(flaky), kental, banyak sekali, sedikit, tidak ada endapan. 5.
Media Nutrien-agar secara Taburan Gambar dan beri keterangan
tentang : Pertumbuhan : tumbuh koloni di permukaan atau di dasar
medium. Bentuk koloni : punctiform, circular, filamentous,
irregular, curled, amoeboid, rhizoid. Permukaan : licin, kasar,
membentuk lingkaran yang konsentrik, seperti sisir yang radier (
radiate ). Elevasi : flat, effuse, raised, convex, umbonate. Bentuk
tepi : entire, undulate, lobate, erose, filamentous, curled. Bentuk
struktur dalam : amorf, butir-butir halus atau kasar, berfilament,
curled, konsentrik. 6. Media Nutrien-gelatin secara Bertaburan
Pengamatannya sama seperti media agar secara taburab diatas dengan
tambahan pencairan gelatin : cup, saucer, merata.
MEMBIAKAN MIKROBA ANAEROB Oksigen dari udara merupakan racun
bagi mikroba anaerob, sehingga oksigen tersebut harus dikeluarkan
dari dalam media. Ada bebrapa cara untuk menumbuhkan mikroba
anaerob, antara lain : 1. Menggunakan media yang diperkaya 2.
Menghilangkan oksigen bebas dengan pembakaran 3. Absorpsi oksigen
secara kimia 4. Mendesak oksigen dengan gas-gas yang tidak turut
bereaksi ( inert ) 1. Menggunakan media yang diperkaya Cara ini
adalah yang paling sederhana dan paling banyak digunakan. Media
diperkaya yang dapat digunakan adalah thioglycollate-cair,
thyoglycollate-agar, glukosa-otak, dll. Media-media tersebut
mengandung bahan yang dapat menyerap oksigen, sehingga suasana di
dalam media menjadi anaerob. Contohnya media thioglycollate-agar
dalam cawan petri yang ditutup dengan penutup Brewer. Penutup
brewer dibuat sedemikian rupa sehingga menyinggung permukaan agar
pada bagian tepinya dan memisahkan memisahkan sebagian kecil udara
kurang dari 1 mm tebalnya diatas permukaan agar. Dalam media
tersebut terdapat bahan-bahan perekduksi yang dapat menghisap
seluruh oksigen dari udara yang tertutup itu dan menyebabkan
suasana anaerob. Bagian tepi dari penutup membentuk semacam cincin
dengan bagian agar. Dalam media terdapat methylen biru yang
berfungsi sebagai indikator, bagian tengah media yang anaerob
menjadi tidak berwarna, sedangkan bagian tepi yang berhubungan
dengan udara luar ( kira-kira 5 mm ) tetap berwarna biru.
2 3 1 Cawan petri dengan penutup Brewer
1. Cawan petri 2. Penutup brewer 3. Media 4. Ruangan udara
2. Menghilangkan Oksigen dengan cara Pembakaran. Untuk cara ini
dibutuhkan suatu penyungkup yang dapat ditutup rapat misalnya
eksikator. Kedalam eksikator tersebut ditambahkan fosfor murni,
selama ada oksigen fosfor akan teroksidasi dan membentuk fosfor
pentaoksida, untuk mencegah terjadinya keracunan posfor maka pada
dasar eksikator ditambahkan air yang menyerap atau melarutkan
posfor pentaoksida tsb. Cara yang banyak dilakukan adalah dengan
menggunakan alat khusus yang dilengkapi dengan katalisator platina
asbes yang dipanaskan sehingga reaksi antara hidrogen dengan
oksigen dipercepat. 3. Absorpsi Oksigen secara Kimia Untuk cara ini
diperlukan eksikator, asam piragalol dan alkali ( KOH ). Untuk
setiap liter eksikator ditambahkan 12,5 ml KOH 20 % dan 10 ml
larutan asam pirogalol 40 %. Mula-mula kedua larutan tersebut
ditempatkan secara terpisah pada dasar eksikator, setelah biakan
murni mikroba dimasukan dan eksikator ditutup, eksikator tersebut
dimiringkan sehingga kedua larutan bercampur, warna campuran akan
berubah menjadi coklat hitam. Campuran tersebut akan menyerap
oksigen yang terdapat di dalam ruangan eksikator sehingga
keadaannya menjadi anaerob. 4. Mendesak oksigen dengan Gas-gas
Inert Oksigen di dalam ruangan yang akan digunakan untuk menyimpan
mikroba anaerob dapat dikeluarkan dengan cara mekanik dengan gas
hidrogen atau nitrogen. Untuk cara ini digunakan alat Novy. Untuk
membuktikan keadaan yang anaerob dalam bejana penyimpanan digunakan
suatu indikator campuran NaOH 1/160 N, Methylen blue 0.015 %, dan
larutan glukosa 6 % dengan perbandingan volume yang sama.
ISOLASI MIKROBA Pripsip dari isolasi mikroba adalah pemisahan
satu jenis mikroba dari campuran bermasam-masam mikroba. Hal ini
dapat dilakukan dengan menumbuhkan dalam media padat, karena dalam
media padat sel-sel mikroba akan membentuk suatu koloni yang tetap
pada tempatnya. Jika sel-sel tersebut tumbuh dalam media padat pada
beberapa tempat yang terpisah, maka setiap sel/kumpulan sel akan
membentuk suatu koloni yang terpisah satu dengan lainya sehingga
memudahkan untuk pemisahan selanjutnya. Jika digunakan media cair,
sel-sel mikroba sulit dipisahkan secara individu karena terlalu
kecil dan tidak tetap tinggal pada tempatnya karena mikroba dalam
media cair tidak akan membentuk kumpulan koloni yang terpisah.
Media cair hanya digunakan untuk pengenceran mikroba kemudian
ditumbhkan dalam media padat dan dibiarkan membentuk koloni. Metode
isolasi bertujuan untuk memisahkan mikroba dari campuranya sehingga
diperoleh biakan murni (pure culture). Beberapa metoda isolasi
mikroba yang sering dilakukan : 1. Metoda Penggoresan Pada metoda
ini campuran mikroba diambil sedikit contoh (speciment) dengan
menggunakan ose, kemudian ditempatkan dalam media agar-agar dengan
cara digoreskan pada permukaan agar dengan batang gelas bengkok
yang steril. Dengan cara ini diharapkan mirkoba yang diinginkan
akan terpisah dari yang lain, mikroba yang terpisah diambil dan
ditaruh pada media yang cocok di dalam tabung reaksi sebagai biakan
murni. Setelah masa inkubasi kemudian diadakan pemeriksaan secara
mikroskopis untuk mengetahui biakan yang dihasilkan sudah cukup
murni atau belum, jika belum maka pekerjaan diatas harus diulang.
2. Metoda Penuangan / Penaburan Dasar dari metoda ini adalah
pengenceran secara steril, kemudian dituangkan diatas cawan steril
juga.
Contoh dari biakan campuran mikroba dimasukan dalam tabung
reaksi berisi media agar cair dan dingin ( 45o), kemudian dilakukan
pengenceran secara bertingkat agar sel-sel mikroba cukup terpisah.
Kemudian tabung-tabung tersebut diinkubasi agar pertumbuhannya
homogen/merata, kemudian masing-masing tabung dituangkan didalam
cawan petri dan dibiarkan membeku agar mikroba tumbuh, kemudian
dialakukan pemeriksaan secara mikroskopis, mikroba yang tumbuh
dalam media yang cukup terpisah kemudian diambil untuk dipindahkan
ke media khusus yang telah disiapkan. 3. Metoda Diperkaya Metoda
ini terutama digunakan untuk mengisolasi bakteri yang jumlahnya
relatif kecil dibandingkan dengan jumlah bakteri lain dan
pertumbuhannya sangat lambat. Pada metoda ini sebelum dilakukan
isolasi secara penggoresan maka mikroba ditumbuhkan terlebih dahulu
dalam media khusus yang sesuai dengan sifat dan jenis mikroba yang
bersangkutan, agar mikroba tersebut dapat tumbuh dengan baik
sedangkan mikroba lain yang tidak dikehendaki akan mati. Sebagi
contoh adalah jika kita ingin memisahkan bakteri tanah yang
menggunakan conidendron ( bagian akar tumbuh-tumbuhan), karena
bakteri tersebut sangat sedikit sedang bakteri lainya sangat
banyak. Caranya : ambil sedikit campuran bakteri dan tumbuhkan
dalam media yang terbuat dari : garam organik, senyawa nitrogen
organik dan conidendron sebagai satu-satunya sumber karbon. Dengan
demikian mikroba lain yang tidak dapat menggunakan conidendron akan
mati, selanjutnya biakan diinkubasi beberapa hari kemudian
dipindahkan ke media baru yang sama komposisinya. Kemudian
dilakukan isolasi dengan cara penggoresan pada media yang sama cuma
ditambah agar supaya padat. Kadang isolasi ini dilakukan bebrapa
kali agar bakteri yang dimaksud diperoleh dalam jumlah banyak.
4. Metoda Pengenceran Metoda ini dilakukan jika mikroba yang
akan di isolasikan terdapat dalam jumlah yang banyak. Mikroba yang
akan diisolasikan ditumbuhkan dalam media cair khusus yang cocok
dalam tabung reaksi, selanjutnya diadakan pengenceran bertingkat
sehingga akirnya hanya terdapat satu macam mikroba, kemudian
dilanjutkan isolasi dengan cara penggoresan atau penuangan. Cara
lain adalah dengan menggunakan alat yang disebut mikro manipulator.
Dengan alat ini mikroba dapat dipisahkan secara langsung dari
campuranya, sehingga hanya diperoleh satu macam mikroba saja.
LEMBAR KEGIATAN Kegiatan 1 ( Membiakan Mikroba pada Media Cair )
Alat : Bahan : Biakan murni Eschericia colli dalam media nutrien
cair berumur 24 jam Medium nutrien cair Cara Kerja : 1. Siapkan
tabung reaksi bertutup steril dan isi dengan media nutrien cair 2.
Pijarkan ose diatas api dan biarkan dingin 3. Beri tanda kontrol
pada salah satu tabung reaksi yang berisi media nutrien cair dan
biarkan tidak terinokulasi. 4. Ambil biakan murni E. Colli dengan
ose, lakukan inokulasi ke permukaan media nutrien cair dalam 3
tabung reaksi. ( cara membuka dan menutup kapas dari tabung reaksi
tanyakan pada guru pembimbing) 5. Pijarkan ose setelah digunakan.
6. Beri etiket pada tabung reaksi, tuliskan nama bakteri dan
tanggal inokulasi. 7. Inkubasikan biakan dalam inkubator pada suhu
30oC selama 24 48 jam. 8. Periksa biakan yang dihasilkan
berdasarkan pada proses pengamatan biakan murni, jangan sekali-kali
mengocok tabung sebelum selesai pengamatan. Ose Tabung reaksi
bertutup Pemanas Inkubator
9. Catat dan laporkan pada guru pembimbing berdasarkan cara
pengamatan. Kegiatan 2 ( Membuat Biakan Agar Miring ) Alat dan
Bahan : Biakan murni E-Colli, Bacillus subtilis dalam media nutrien
cair berumur 24 jam Media nutrien agar miring dalam 4 tabung reaksi
Ose Pemanas Inkubator
Cara Kerja : 1. Lakukan percobaan dari no 1 3 seperti kegiatan 1
2. Inokulasikan biakan murni E-Colli dengan kawat ose dalam media
nutrien agar miring dengan cara gerakan perlahan-lahan seperti
gerakan ular (zig-zag) dimulai dari bagian bawah tabung keatas,
hatihati jangan sampai mencokel agar. 3. Selanjutnya lakukan
seperti kegiatan 1 mulai percobaan no 5 9 Kegiatan 3 ( Mengenal
bentuk-bentuk koloni bakteri dalam macam Media ) Alat dan Bahan :
Biakan bakteri dalam media nutrien agar miring berumur 24 jam (
Bacillus subtilis, Eschericia colli, Streptococcus lactis ) Media
nutrien agar miring Media nutrien agar tegak Media nutrien cair
Media nutrien gelatin tegak Cawan petri steril Ose bermacam-
Cara Kerja :
1. Inokulasikan secara aseptik kedalam media nutrien agar tegak
dan nutrien gelatin tegak menggunakan ose/jarum inokulasi biakan
murni bakteri dengan cara tusukan sampai ke dasar tabung. 2.
Inokulasikan ke dalam media nutrien agar miring secara aseptik dari
biakan murni bakteri memakai ose dengan cara goresan lurus pada
permukaan media. 3. Inokulasikan ke dalam media nutrien cair secara
aseptik dari biakan murni bakteri menggunakan ose. untuk membuat
biakan murni dengan cara penuangan. Cairkan media nutrien agar dan
dinginkan hingga suhu 50oC kemudian inokulasikan biakan murni
bakteri secara aseptik selanjutnya tabung dikocok dan tuangkan
media agar kedalam cawan petri. 4. Semua media yang telah
diinokulasikan bakteri di inkubasi dengan inkubator pada suhu 37oC
selama 48 jam atau lebih. Untuk media gelatin diinkubasi pada suhu
20oC. 5. Catat dan laporkan pada guru pembimbing berdasarkan cara
pengamatan.
Kegiatan 4 ( Membiakan bakteri anaerob ) Alat dan Bahan : Biakan
murni Clostridium sporogenes ) dalam media thioglycollatecair
berumur 48 jam Media thioglycollate-cair Media thioglycollate-agar
Media glukosa otak Cawan petri steril Cawan petri yang
berlubang-lubang kecil steril Penutup brewer anaerob steril Pipet 1
ml steril
-
Penangas air / arnold steam sterilizer
Cara Kerja : Dalam Media Thioglycollate cair : 1. Panaskan
tabung reaksi yang berisi thioglycollate cair dalam arnold steam
sterilizer selam 10 menit 2. Ambil tabung dan dinginkan sampai suhu
50oC 3. Inokulasikan dengan ose satu biakan murni clostridium
sporogenes, inkubasikan pada suhu 37oC selama 24 48 jam. ( adanya
Nathioglycollate akan menyerap oksigen sehingga media bersifat
anaerob) 4. Buat preparat dengan pewarnaan gram dan periksa di
bawah mikroskop dengan perbesaran kuat. Dalam Media
Thioglycollate-agar : 1. Cairkan media thioglycollate agar dalam
alat arnold steam sterilizer 2. Dinginkan sampai suhu 50oC,
tuangkan media tersebut dalam cawan petri steril biarkan hingga
memadat. Agar hasilnya lebih baik gunakan tutup cawan petri berpori
untuk mendapatkan permukaan agar yang kering. 3. Buat goresan pada
permukaan agar dengan 1 ose biakan murni Clostridium S. 4. Ganti
tutup cawan petri dengan penutup brewer anaerob steril 5.
Inkubasikan pada suhu 37oC selam 48 jam 6. Buat preparat dengan
pewarnaan gram dengan perbesaran kuat. Dalam Media Glukosa Otak :
1. Panaskan tabung yang berisi media glukosa otak dalam alat ASS
selam 10 menit.
2. Dinginkan hingga suhu 50oC 3. Inokulasikan dalam media
tersebut biakan murni Clostridium S. dengan menggunakan pipet
steril 1 ml masukan hingga bagian dasar. 4. Inkubasikan dalam
inkubator pada suhu 37oC selam 24-48 jam 5. Bakteri akan berkembang
biak dalam media glukosa otak, mula-mula di bagian paling bawah,
glukosa akan difermentasikan dengan cepat menghasilkan gas dan
asam. Adanya gas-gas ini akan menyebabkan media dalam keadaan
anaerob 6. Buat preparat dengan pewarnaan gram dengan perbesaran
kuat. 7. Bandingkan apakah mikroba yang ditumbuhkan dalam ketiga
media tersebut berbeda penampakannya di bawah mikroskop
I
II
III
Kegiatan 5 ( Isolasi Mikroba dengan cara Penggoresan ) Alat dan
Bahan : Media nutrien-agar Biakan campuran bermacam-macam mikroba
Jarum inokulasi/ose 4 Cawan petri steril Inkubator
Cara Kerja : 1. Siapkan 4 buah cawan petri steril yang elah
diisi dengan media nutrien agar
2. Biarkan satu cawan tetap steril sebagai kontrol, dalam
keadaan tetap tertutup. 3. Pijarkan jarum inokulasi dan biarkan
dingin 4. Inokulasikan biakan campuran dengan cara penggoresan
menggunakan jarum inokulasi /ose dalam 3 buah media nutrien agar
dengan cara lurus, zigzag, taupun menurut caramu. Gambarkan tapak
jalan goresan pada sisi bawah cawan dengan pensil untuk membantu
orientasi terhadap goresan yang telah dibuat. 5. Inkubasikan cawan
petri tersebut ke dalam inkubator dengan posisi terbalik pada suhu
30oC selam 48 jam. Catatan : selalu beri tanda semua cawan petri
dengan nama yang mengerjakan, tanggal dan identifikasi dari isi
cawan Setelah inkubasi pelajari pertumbuhan, catat perbedaan,
ukuran koloni, bentuk dan kenampakannya berdasarkan cara
pengamatan. Cawan kontrol menunjukan sterilitas dari media dan
harus tidak ada pertumbuhan koloni. Gambar penampakan pada cawan
petri :
1
2
3
4
Kegiatan 6 ( Isolasi Mikroba dengan cara Penuangan/penaburan)
Alat dan Bahan : Media nutrien agar dalam 3 tabung reaksi steril
Biakan campuaran bermacam-macam mikroba dalam bentuk suspensi
Ose
-
Pemanas Inkubator Cairkan ketiga tabung yang berisi media
nutrien agar, kemudian dinginkan hingga 45oC
Cara Kerja :1.
2. Pindahkan secara aseptik dengan ose steril satu ose biakan
campuran kedalam tabung reaksi 1 yang berisi media nutrien agar
cair. Campur baik-baik dengan cara mengetuk tabung dengan jari
telunjuk sampai homogen ( Keberhasilan cara ini tergantung pada
pengadukan dan penyebaran sel yang baik.) 3. Pindahkan 2 ose dari
tabung 1 ke dalam tabung ke 2 yang berisi media nutrien agar cair,
campurkan dengan cara sama seperti percobaan 2. 4. Pindahkan 3 ose
dari tabung ke dua ke tabung ke 3 , campurkan dengan cara yang
sama. Catatan : Oleh karena turunya suhu media dari 45oC ke suhu
42oC cepat, maka langkah-langkah diatas harus dilakukan cepat untuk
mencegah pembekuan agar dalam media. 5. Tuangkan setiap tabung ke
dalam 3 cawan petri steril, putar cawancawan tersebut untuk
memperoleh penyebaran yang merata, kemudian dinginkan.6.
Inkubasikan cawan-cawan tersebut pada suhu 30oC di inkubator
selama 24 48 jam
7. Periksa koloni yang terbentuk terlalu padat, sedang atau
sedikit, gambar dan laporkan pada Guru pembimbing. 1 ose 2 ose 3
ose
biakan murni
tbg 1
Tbg 2
Tbg 3
N-agar cair 45oC
N-agar cair 45oC
N-agar cair 45oC
Pengenceran 1
pengenceran 2 LATIHAN
pengenceran 3
1. Apakah yang dimaksud dengan pertumbuhan mikroba ? 2. Dalam
kurva pertumbuhan mikroba dibagi menjadi 6 fase, jelaskan ! 3.
Apakah yang dimaksud biakan murni ? 4. Untuk membuat biakan murni
dibutuhkan 3 tahapan pekerjaan, sebutkan ! 5. Sebutkan 4 cara yang
dapat digunakan untuk menumbuhkan mikroba anaerob 6. Sebutkan
tujuan dari isolasi mikroba ! 7. Ada berapa metoda untuk
mengisolasikan mikroba, sebutkan !
LEMBAR EVALUASI SOAL PILIHAN GANDA 1. Untuk menghitung jumlah
koloni mikroba dapat dilakukan dengan menggunakan mikroskop dengan
bantuan ruang penghitung yang disebut a. Counting Chamber b. Coloni
Chamber c. Counting Coloni d. Coulter Counter e. Coloni Counter 2.
Alat penghitung mikroba yang didasarkan atas daya hantar listrik
disebut a. Counting Chamber b. Coloni Chamber c. Counting Coloni d.
Coulter Counter f. Coloni Counter 3. Phase dimana mikroba mulai
tumbuh tetapi pertumbuhannya belum logaritmis disebut a. Lag phase
b. Acclelerated growth phase c. Log phase d. Fase reda e.
Stasionary phase 4. Sedang phase dimana jumlah pertumbuhan mikroba
sebanding dengan kematiannya disebut a. Lag phase b. Acclelerated
growth phase
c. Log phase d. Fase reda f. Stasionary phase 5. Phase yang
terjadi karena adanya racun atau zat makanan mulai habis sehingga
pertumbuhannya mulai lambat disebut a. Lag phase b. Acclelerated
growth phase c. Phase reda d. Phase kematian d. Stasionary phase 6.
Media yang sering digunakan untuk membiakan mikroba anaerob adalah
a. Nutrien cair b. Nutrien agar c. Nutrien gelatin d. Diperkaya e.
Selektif 7. Methylen biru yang ditambahkan dalam media diperkaya
bertujuan sebagai a. Makanan tambahan b. Pengawet media c.
Indikator media d. Unsur hara media e. Pewarna media 8. Metoda yang
digunakan untuk isolasi mikroba berdasarkan jumlah mikroba yang
terlalu sedikit dan pertumbuhannya lambat disebut a. Metoda
diperkaya b. Metoda penggoresan c. Metoda penuangan d. Metoda
pengenceran e. Metoda penaburan 9. Metoda yang digunakan untuk
isolasi mikroba berdasarkan jumlah mikroba yang akan diisolasi
terlalu banyak disebut
a. Metoda diperkaya b. Metoda penuangan c. Metoda penggoresan d.
Metoda penaburan e. Metoda pengenceran 10. Yang tidak termasuk
tanda-tanda yang nampak dalam menumbuhkan mikroba di media cair
adalah a. Terjadi kekeruhan cairan b. Perubahan kekentalan cairan
c. Pembentukan selaput cairan d. Pembentukan sedimen/endapan cairan
e. Terbentuknya awan cairan
KUNCI JAWABAN LEMBAR EVALUASI 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. A D
B E C D C A E B
PRASYARAT Untuk mempelajri modul ini anda terlebih dahulu harus
menguasai pengetahuan tentang sterilisasi dan pembuatan media yang
telah dipelajari dalam sebelumnya. PERISTILAHAN / GLOSARY Amoeboid
Arborescent Beaded Brittle Butyrous Chromogenesis Convex
Crateriform Curled Echinulate Effuse Entire Erose Filamentous
Filiform Flat Bentuk seperti amoeba Menyerupai pohon yang
bercabang-cabang Seperti rangkaian mutiara Pertumbuhan yang kering
dan mudah pecah bila disentuh Konsistensi bakteri yang menyerupai
mentega Pembentukan senyawa berwarna oleh mikroba Permukaan cembung
Pencairan media gelatin menyerupai piring Keriting, berkerut
seperti rantai sejajar bergelombang Pertumbuhan
bergerigi/berbintik-bintik Pertumbuhan tipis dan rata Rata Seperti
potongan-potongan tidak teratur Bentuk menyerupai benang-benang
Pertumbuhan sepanjang bekas inokulasi merata Rata, datar
Flocculent Flourescent Infundibuliform Lobate Membranous
Napiform Opalescent Opaque Papillate Pelicle Plomuse Punctiform
Raised Rhizoid Ring Saccate Slimy Stratiform Translucent Umbonate
Undulate Villous
Bahan yang terapung dengan berbagai ukuran dan bentuk Berwarna
jika terkena sinar Bentuk menyerupai cerobong Bentuk seperti
telinga Pertumbuhan menyerupai membran Bentuk seperti buah lobak /
wortel Putih seperti susu menyerupai batu oval Tidak tembus cahaya
Bentuk cembung dengan tonjolan tumpul Pertumbuhan (selaput)
Pertumbuhan menyerupai bulu Kecil sekali seperti titik Pertumbuhan
tebal dengan tepi yang kasar Pertumbuhan dengan cabang tidak
teratur seperti akar Pertumbuhan pada tepi permukaan medium cair
melekat pada gelas seperti cincin Pencairan pada medium gelatin
dengan bentuk seperti kantung panjang, silinder atau tabung Seperti
lendir Pencairan pada medium gelatin secara horizontal dimulai dari
atas dekat dinding terus ke bawah Meneruskan sinar meskipun benda
di bawahnya tidak semua terlihat jelas Pertumbuhan tebal dengan
tonjolan tumpul Bergelombang Bentuknya pendek, tebal dan
permukaannya seperti rambut pada permukaan medium cair
Viscid
Pertumbuhan yang menunjukan gejal seperti benang (mulur)
MIKROBIOLOGI
IDENTIFIKASI MIKROBAMODUL 5
PERHITUNGAN JUMLAH SEL MIKROBA
( 24 Jam )
PETA KEDUDUKAN MODUL
