Echchgadda Thym CIPAM Mohamadia2011

5/13/2018 Echchgadda Thym CIPAM Mohamadia2011 - slidepdf.com

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Screening de l’activité bionématicide

de différents extraits deThym

(Thymus zygis )

Pr. Ghizlane EchchgaddaDépartement de Protection des Plantes et de

l’Environnement, ENA-Meknès, Maroc



Lutte

chimique

Plusieurs molécules actives ont été mises en

évidence telles que les composés phénoliques

extraites de plantes comme les Tagète, Neem,

Acacia…

Menace de pollution de l’environnement

Augmenter les possibilités naturelles comme

alternative à la lutte chimique contre les nématodes

notamment les plantes à effet nématicide



Evaluation de l'activité bionématicide de

différents extraits de Thymus zygis contre les nématodes à galles ;

Meloidogyne ssp.

Objectifs



Effectuer une caractérisation chimique des différents

extraits aqueux, méthanolique, éthanolique et l’huile

essentielle

Tester in vitro et in vivo l’effet nématicide de ces

quatre extraits



Séchage à l’ombre pendant une semaine

peuplements spontanés de la région d’Azrou

Source du matériel

végétal

Extractions



Stockage à 4 °C en présence de

Na2SO4

Extraction de l’HE hydrodistillation pendant

3h dans un Clevenger

Préparation des extraits



Extrait aqueux préparé en transférant 100g de

poudre de feuilles dans un montage à reflux

pendant 2h

Centrifugation à 2000 rpm pendant 10 minutes et filtration

Déshydratation dans un rotavapor à 105°C

Stockage à 4°C



Extrait éthanolique préparé par macération avec

agitation pendant une heure à la température

ambiante de l’extrait 1/5 de poudre de feuilles et

d’éthanol 96%

Solvant éliminé dans un Rotavapor à 60°C

Extrait sec stocké à 4°C



Extrait méthanolique préparé par un appareil Soxhlet

à chaud en utilisant 30g de poudre de feuilles avec le

méthanol comme solvant pendant 10 h

Solvant éliminé dans un Rotavapor à 40°C

Récupération de l’extrait sec et stockage à 4°C

Analyse de la composition par CPG-MS



Préparation des émulsions

bionématicides

Extrait Adjuvant Concentrations utilisés

Essai in vitro Essai in vivo

Extrait aqueux Éthanol 5% 20 µg/ml50 µg/ml

100 µg/ml

5%7,5%

10%Extrait éthanolique Éthanol 5% 20 µg/ml

50 µg/ml100 µg/ml

5%7,5%10%

Extrait méthanolique Méthanol 5% 20 µg/ml

50 µg/ml100 µg/ml

5%

7,5%10%

Huile essentielle Tween 80 (0,2%) 20 ppm50 ppm100ppm

500µl/l1ml/l1,5ml/l



Essai Bionématicide

Essai in vitro

100 ± 4 J2 9 ml d’eau (10 ml pour le témoin)

1 ml de l’extrait

3 répétitions

Incubation à la température ambiante (28 °C ± 2)pendant 72 h

Le taux de mortalité (Tm) des juvéniles J2 a été rapportéchaque 8 heures

Tm = (100% * (Pmtr - Pmtm)) / (100- Pmtm) (Abbott, 1925)

Pmtr : Pourcentage de juvéniles morts en traitement.Pmtm. : Pourcentage de juvéniles morts en témoin

Dispositif expérimental



Essai in vivo

Plants de tomate, variété « Daniella »

Entretien jusqu’au moment de l’inoculation à 2 mois et demi d’âge

Inoculation par 1200 J2 pour chaque plant de tomate

Application de 300 ml de la solution biocide

Plants de tomate à 2 mois et demi d’âge



Résu tats

Composition de l’Huile Essentielle

Carvacrol

p-Cymène

Thymol

γ-Terpinène

Chromatogramme de l’HE



Composition de l’extrait aqueux

RT: 4.00 - 44.15 SM: 15G

5 10 15 20 25 30 35 40

Time (min)

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

70

75

80

85

90

95

100

RT: 14.83

RT: 9.14

12.2217.18

6.95 42.3726.73 31.04

NL:1.45E8

TIC F: MSF346GC02

Phenol, 5-methyl

Benzene,

1-methyl

Chromatogramme de l’EA



Composition de l’extrait éthanolique

RT: 4.00 - 44.16 SM: 15G

5 10 15 20 25 30 35 40

Time (min)

0

5

10

15

20

25

3035

40

45

50

55

60

65

70

75

80

85

90

95

100

RT: 14.98

RT: 9.89

17.1912.22 42.486.96 20.04 24.85 29.97

NL:7.39E7

TIC F: MSF346GC03

Phenol,

2-methyl

3-Carene

Chromatogramme de l’EEt



Composition de l’extrait méthanolique

1-Cyclopropene-1-pentanol

[1,1'-Bicyclopropyl]-2-octanoic acid

Methyl 2-heptanol

Chromatogramme de l’ES



Essai Bionématicide

Essai in vitro



Essai in vivo

Femelle de Meloidogyne à l’intérieur des racines

après une semaine d’infestation



Essai in vivo

Indice de galle

Traitements Concentrations Indice de galles

Huile Essentielle

500 µl/l 2,3333 b

1 ml/l 0,00 a

1,5 ml/l 0,00 a*

Extrait Aqueux

5% 3,125 c

7,5% 1,5833 b

10% 0,00 a

Extrait Ethanolique

5% 2,875 c

7,5% 2,5417 b

10% 1,00 a

Extrait Soxhlet

5% 3,125 c

7,5% 1,6667 b

10% 0,00 a

Tween 0,2% 3,125 a

Méthanol 5% 3,250 a

Ethanol 5% 3,250 a

Témoin - 3,2038 a

Aspect des racines avec les traitements et concentrations donnant le meilleur résultat

Essai in vivo

M d i di d ll l diffé t t it t



Traitements Concentrations Indice de galles Poids frais racinaire Poids de la matière

fraiche aérienne Nb J2/100 g de sol

Huile Essentielle

500 µl/l 2,3333 b 19,5900 c 12,5500 c 89,71 c

1 ml/l 0,00 a 13,025 b 25,5562 b 52,8 b

1,5 ml/l 0,00 a 8,775 a 38,775 a 11, 5 a

Extrait Aqueux

5% 3,125 c 19,7543 c 11,5240 c 93,50 c

7,5% 1,5833 b 13,3167 b 25,3375 b 65,3 b

10% 0,00 a 11,3417 a 40,4000 a 14,3 a

Extrait Ethanolique

5% 2,875 c 18,6300 b 12,0120 b 91,75 b

7,5% 2,5417 b 17,0750 b 10,6450 b 88,0 b

10% 1,00 a 14,7152 a 34,2656 a 35,5 a

Extrait methanolique

5% 3,125 c 20,0123 c 09,9436 c 91,25 c

7,5% 1,6667 b 14,0230 b 27,3230 b 67,75 b

10% 0,00 a 10,5167 a 41,0583 a 11,0 a

Tween 0,2% 3,125 a 19,7000 a 10,8750 a 90,75 a

Méthanol 5% 3,250 a 20,9500 a 11,5000 a 91, 00 a

Ethanol 5% 3,250 a 19,7250 a 11,2250 a 91,25 a

Témoin - 3,2038 a 19,6750 a 10,4750 a 95,50 a

Moyenne des indices de galles pour les différents traitementset concentrations.



Conclusion

Nos résultats ont démontré les propriétés

nématicides des divers extraits de T. zygis

qui se révèlent prometteuses, toutefois,

d’autres investigations sont nécessairespour déterminer les concentrations les plus

appropriées pour une meilleurs efficacité

ainsi que leur faisabilité pour une utilisation

en plein champs tout en évaluant lesaspects économique.



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