Embed Size (px)
DESCRIPTION
O
Citation preview
ELEKTROFORENSIS
Medan listrik dialirkan
pada suatu medium yang
mengandung sampel yang akan dipisahkan.
Medan listrik dialirkan
pada suatu medium yang
mengandung sampel yang akan dipisahkan.
Elektroforensis adalahteknik pemisahankomponen atau molekulbermuatan berdasarkan berbedaan tingkat migrsinya dalam sebuah listrik.
Elektroforensis adalahteknik pemisahankomponen atau molekulbermuatan berdasarkan berbedaan tingkat migrsinya dalam sebuah listrik.
Apa itu ELEKTROFORENSIS??
Apa itu ELEKTROFORENSIS??
Teknik ini dapat digunakan dengan
memanfaatkan muatan listrik
yang ada pada makromolekul,
misalnya DNA yang
bermuatan negatif (-)
Teknik ini dapat digunakan dengan
memanfaatkan muatan listrik
yang ada pada makromolekul,
misalnya DNA yang
bermuatan negatif (-)
Jika molekul yang bermuatan negatif dilewatkan melalui suatu medium, misalnya gel agarosa, kemudian dialiri arus listrik dari satu kutub ke kutub yang berlawanan muatannya,maka molekul tersebut akan bergerak dari kutub negatif ke kutub positif
Jika molekul yang bermuatan negatif dilewatkan melalui suatu medium, misalnya gel agarosa, kemudian dialiri arus listrik dari satu kutub ke kutub yang berlawanan muatannya,maka molekul tersebut akan bergerak dari kutub negatif ke kutub positif
Elektroforesis kertas Elektroforesis kertas Elektroforesis gel Elektroforesis gel
Jenis-jenis ELEKTROFORENSIS
Jenis-jenis ELEKTROFORENSIS
• Elektroforesis kertas adalah jenis elektroforesis yang terdiri dari kertas sebagai fase diam dan partikel bermuatan yang terlarut sebagai fase gerak, terutama ialah ion-ion kompleks.
• Pemisahan ini terjadi akibat adanya gradasi konsentrasi sepanjang sistem pemisahan.
• Pergerakan partikel dalam kertas tergantung pada muatan atau valensi zat terlarut, luas penampang, tegangan yang digunakan, konsentrasi elektrolit, kekuatan ion, pH, viskositas, dan adsorpsivitas zat terlarut.
Elektroforesis kertas
Elektroforesis kertas
Elektroforesis gel
Elektroforesis gel
• Elektroforesis gel ialah elektroforesis yang menggunakan gel sebagai fase diam untuk memisahkan molekul-molekul.
• Biasanya dilakukan untuk tujuan analisis, namun dapat pula digunakan sebagai teknik preparatif untuk memurnikan molekul sebelum digunakan dalam metode-metode lain seperti spektrometri massa, PCR, kloning, sekuensing DNA, atau immuno-blotting yang merupakan metode-metode karakterisasi lebih lanjut.
Elektroforesis gel
Elektroforesis gel
Elektroforesis kertas
Elektroforesis kertas
Pemisahan sempurna suatu campuran dapat terjadi efektif dalam zona tertentu
Efek penguapan juga dapat diturunkan minimal jika elektroforesidilakukan di medium pendukung yang dicelupkan dengan larutan buffer.
Gel poliakrilamid dan agarosa merupakan medium pendukung yang banyak dipakai untuk separasi protein dan asam nukleat.
Elektroforesis untuk makromolekul memerlukan medium pendukung untuk mencegah terjadinya
difusi karena timbulnya panas dari arus listrik yang digunakan
MediumPendukun
g
MediumPendukun
g
Jenis medium pendukung :Jenis medium pendukung :
Cellulose asetat Cellulose asetat
Medan elektrik Medan elektrik
Larutan Buffer Larutan Buffer
Cellulose asetat
Cellulose asetat
Larutan Buffer
Larutan Buffer
Medan elektrik Medan elektrik
Proses elektroforesis memerlukan media sebagai tempat bermigrasinya partikel. Terdapat bermacam-macam media yang dapat digunakan bergantung pada tujuan dan bahan yang akan dianalisis. Kertas selulosa asetat merupakan salah satu media yang sering digunakan dalam analisis komponen dalam persenyawaan campuran pada beberapa pigmen daam tinta, indikator, dan zat warna. Apabila arus listrik dialirkan pada suatu media yang telah berisi partikel, maka komponen molekul-molekul tersebut akan mulai bermigrasi (Pratiwi 2001)
Cellulose asetat
Cellulose asetat
Medan elektrik Medan elektrik
Larutan Buffer
Larutan Buffer
• Larutan buffer (penyangga) ini menstabilkan pH medium pendukung. Buffer juga dapat mempengaruhi kecepatan gerak senyawa karena beberapa hal, yaitu :
Buffer harus tidak mengikat senyawa yang dipisahkan karena akan mempengaruhi kecepatan gerak. Buffer borat dipakai untuk memisahkan karbohidrat, karena dapat membentuk gabungan yang bermuatan listrik dengan karbohidrat.
Dengan naiknya kekuatan Ion buffer, jumlah arus listrik yang terbawa meningkat dan bagian aliran yang dibawa sampel menurun, sehingga memperlambat geraknya. Kekuatan ion tinggi dalam buffer akan Meningkatkan arus keseluruhan sehingga panas juga meningkat,biasanya dipilih 0,05 -0,10M.
Tingkat ionisasi asam-asam organik akan bertambah apabila pH bertambah, sebaliknya untuk basa-basa organik,oleh sebab itu tingkat kecepatan geraknya juga terpengaruh oleh pH. Kedua pengaruh dapat terjadi pada senyawa seperti asam aminoyang memiliki sifat asam dan basa
Komposisi Konsentrasi pH
• Apabila voltase diberikan diantara dua elektroda, arus ditentukan oleh tahanan dalam medium.
Cellulose asetat
Cellulose asetat
Larutan Buffer
Larutan Buffer
Medan elektrik Medan elektrik
Apabila jarak antara dua elektroda adalah 1 meter dan perbedaan potensial antara keduanya adalah V volt sehingga gradient potensialnya adalah V/1m. Kenaikan gradient potensial akan menyebabkan kecepatan gerak ion.
Arus aliran listrik dalam larutan antara dua elektroda disebabkan umumnya oleh ion buffer dan sedikit oleh ion dalam sampel. Kenaikan voltase akan meningkatkan jumlah muatan yang dipindahkan setiap detik kearah elektroda. Jarak yang ditempuh ion akan sebanding dengan waktunya.
Medium elektroforesa menimbulkan aliran ion sebanding dengan jenis medium, jenis buffer dan konsentrasinya. Tahanan akan meningkat dengan bertambahnya jarak antara elektroda, namun berkurang dengan bertambahnya luas permukaan elektroda dan konsentrasi ion dalam buffer.
VoltaseAliran Listrik
Tahanan
•Elektroforesis merupakan metode yang digunakan untuk penentuan kadar kemurnian suatu protein, menganalisis protein plasma, juga dapat digunakan untuk memperkirakan berat molekul protein yang belum di ketahui.
• Elektroforesis mempunyai berbagai tipe, antara lain: Elektroforesis Gel dan Elektroforesis Paper
KESIMPULAN….
TERIMA KASIH
