Upload
dangkhue
View
246
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
Elektroforéza sérových bielkovín laboratórna prax a klinický
význam
Hunáková A., Kabelíková Z., Štefanec F., Oddelenie klinickej biochémie a hematológie
Nemocnice s poliklinikou Skalica
Kleiblove lekárske dni, Skalica, 2008
�Laboratórna prax pri elektroforéze sérových bielkovín – technické prevedenie a zhodnotenie vyšetrenia
�Klinický význam – prípady patologických obrazov elektroforetických typov v našom laboratóriu
�Pozoruhodné čísla– štatistické zhodnotenie záchytu paraproteínov v našom laboratóriu
Obsah
Princíp elektroforetického delenia bielkovín
� elektroforéza je pohyb elektricky nabitých častíc (iónov, molekúl) v poli jednosmerného elektrického prúdu.
� pohyb jednotlivých bielkovín v elektrostatickom poli určuje ich
výsledný elektrický náboj:
• katodický pohyb
• anodický pohyb
veľkosť molekuly – čím je molekula menšia, tým je pohyb rýchlejší
Technické vybavenie – modulárny ELFO systém sebia – hydragel protein K20
�Systémový aplikátor K20- umožňuje kvalitnú aplikáciu vzoriek biologického materiálu do nosiča - agarózového gélu – rozhodujúci význam na kvalitu delenia
�ELFO - komora K20 – separácia bielkovín na agarózových géloch v alkalickom tlmivom roztoku (pH 8,5)
� programovateľný zdroj MG 300–zdroj jednosmerného elektrického prúdu definovaných podmienok
�Počítačový program Phoresis- pre svoju činnosť potrebuje program bežný počítača skener EPSON PRO1680
Schéma rozdelenia sérových bielkovín v agarózovom géle
Frakcie, okrem albumínovej, sú zmesou rozličných bielkovín – spoločný majú iba elektroforetický pohyb
Alb
α1
α2
β1β2
γ
Alb
α1
α2
β1β2
γ
Softwarové denzitometrické vyhodnotenie elektroforézysérových bielkovín pomocou programu Phoresis firmy sebia.
Pre svoju činnosť potrebuje program bežný počítač a skener EPSON PRO 1680
Elektroforetická pohyblivosť sérových bielkovínfrakcie – denzitometrický záznam
Prednosti používaného elektroforetického systému
� Vysoká kvalita separácie sérových bielkovín
� Vysoká reprodukovateľnosťvýsledkov
� Rýchlosť vyšetrení(14 vzoriek do 2 hodín)
� Efektívne zhodnotenievýsledkov� kvalitatívne� kvantitatívne
Elektroforéza sérových bielkovínKlinický význam
� Patologické stavy • nárast podielu niektorej frakcie • pokles podielu frakcie resp. jej vymiznutie• nová frakcia s atypickou pohyblivosťou
� Klinická interpretácia výsledkov vyšetrenia je daná dlhoročnými skúsenosťami s klasickými elektroforetickými frakciami (Alb, α1,α2, β a γ)
� Elektroforetické typy
charakteristické zmeny podielu elektroforetických frakcií priradené ur čitým chorobným stavom na základe dlhoročnej empírie
• poukazujú obvykle na skupinu chorôb alebo stav spoločný väčšiemu počtu nozologických jednotiek
Elektroforetický gél po separácii sérových bielkovín
1 2 3 4 5 6 7
Polyklonálna gamapatia
Monoklonálna gamapatia
akútna fáza zápalu, zvýšené α1, α 2, znížený albumín
Hypogamaglo-bulinémia
Elektroforetický profil sérových bielkovínu zdravého človeka
Elektroforetický profil sérových bielkovín u pacienta snefrotickým syndrómom
Elektroforetický profil sérových bielkovín u pacienta sakútnym zápalom
Elektroforetický profil sérových bielkovín u pacienta shypogamaglobulinémiou
Elektroforetický profil sérových bielkovín u pacienta schronickou hepatitídou – polyklonálna gamapatia
Elektroforetický profil sérových bielkovín u pacienta scirhózou pečene – polyklonálna gamapatia
β - γ mostík
Elektroforetický profil sérových bielkovín u pacienta splazmocytómom – monoklonálna gamapatia
Elektroforetický profil sérových bielkovín u pacienta smonoklonálnou gamapatiou
najvyššia doposiaľ detegovaná koncentrácia paraproteínu
Elektroforetický profil sérových bielkovín pribiklonálnej gamapatii
Laboratórny postup pri detekcii paraproteínu v elektroforetickom profile bielkovín
1. jednoznačná prítomnosť paraproteínu (vyššie
koncentrácie), resp.podozrenie na jeho prítomnosť (nízke koncentrácie v oblasti γ, resp. podozrenie na prítomnosť vo frakcii β, resp. vzácne v α2)
2. Stanovenie koncentrácie imunoglobulínov v sére(IgG, IgM, IgA) – zvyčajne výraznejší nárast koncentrácie jedného z imunoglobulínov a pokles (až vymiznutie) iného (nie vždy)
3. Imunofixácia – potvrdenie prítomnosti paraproteínu a určenie typu paraproteínu(metóda je založená na princípe imunoprecipitačnej reakcie elektroforeticky rozdelených bielkovín s antisérami s rozdielnou špecificitou (anti-IgG, anti IgM, anti-IgA a anti kappa a anti lambda ťažkým a ľahkým reťazcom)
IgG - kappa Paraproteín neprítomný
Imunofixácia potvrdenie prítomnosti paraproteínu – určenie typu
Imunofixácia potvrdenie prítomnosti paraproteínu – určenie typu
IgM - kappa IgG - lambda
Paraproteíny - počet záchytov v rokoch 2005 – 2007podľa tried
6
23
3 2
0
5
10
15
20
25
IgM IgG IgA IgG + IgM
12
22
0
5
10
15
20
25
do 60r nad 60r
Paraproteíny - počet záchytov v rokoch 2005 – 2007podľa veku
muži53%
ženy47%
Paraproteíny - počet záchytov v rokoch 2005 – 2007v populácii mužov a žien
Náhodné záchyty
71%
"Očakávané" záchyty
29%
Paraproteíny - počet záchytov v rokoch 2005 – 2007„očakávané“ a náhodné záchyty
potvrdené po čase
eliminované11%
potvrdené74%
(podozrenie) nepotvrdené
15%
Paraproteíny v roku 2007 – imunofixácioupotvrdené, nepotvrdené a eliminované
Elektroforéza sérových bielkovín v súčastnosti:
Atribúty:
�kvalita
�reprodukovateľnosť
�rýchlosť
Klinický význam:
�elektroforetické typy
• priradené určitým chorobným stavom na základe dlhoročnej empírie
�významné skríningové vyšetrenie
• prítomnosť paraproteínu v sére
„Ak chceme objaviť nové krajiny, musíme najprv sústredene veľmi dlhý čas pozorovať pobrežie a vnímať aj jeho
najjemnejšie zákonitosti“
Ďakujem za pozornosť
Kleiblove lekárske dni, Skalica, 23.1.2008