FLUJO DE INFORMACIÓN GENÉTICAFLUJO DE INFORMACIÓN GENÉTICA

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NIVEL INTRACELULAR• Replicación• Transcripción• Traducción

NIVEL INTERCELULAR• Conjugación• Transformación• Transducción

NIVEL INTRACELULAR• Replicación• Transcripción• Traducción

NIVEL INTERCELULAR• Conjugación• Transformación• Transducción

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ReplicaciónReplicación

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TranscripciónTranscripción

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TraducciónTraducción

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Transferencia genética extracelular

Transferencia genética extracelular

• Transducción• Transducción

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Tipos de transducciónTipos de transducción

• Lítica (destrucción celular)

• Lisogénica (no hay destrucción celular)

• Lítica (destrucción celular)

• Lisogénica (no hay destrucción celular)

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ConjugaciónConjugación

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TransformaciónTransformación

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Técnicas utilizadasTécnicas utilizadas

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Enzimas utilizados en la tecnología del DNA recombinante

Enzimas utilizados en la tecnología del DNA recombinante

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Existen más de 90 enzimas de restricción purificadas ycaracterizadas.Nombre: abreviatura tres letras que se refiere alorganismo, seguida de un número romano

• EcoRI Escherichia coli• HindIII Haemophilus influenzae• HaeIII Haemophilus aegyptius

FRAGMENTO DE RESTRICCIÓN: Fragmentos de ADNgenerados por una determinada enzima de restricción.

Mapa derestricción

Existen más de 90 enzimas de restricción purificadas ycaracterizadas.Nombre: abreviatura tres letras que se refiere alorganismo, seguida de un número romano

• EcoRI Escherichia coli• HindIII Haemophilus influenzae• HaeIII Haemophilus aegyptius

FRAGMENTO DE RESTRICCIÓN: Fragmentos de ADNgenerados por una determinada enzima de restricción.

Mapa derestricción

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Endonucleasas de restricción tipo IIEndonucleasas de restricción tipo II

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ROTURA DE MOLÉCULAS DE DNA EN FRAGMENTOSREPRODUCIBLES MEDIANTE ENDONUCLEASAS DE RESTRICCIÓN

ROTURA DE MOLÉCULAS DE DNA EN FRAGMENTOSREPRODUCIBLES MEDIANTE ENDONUCLEASAS DE RESTRICCIÓN

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Las enzimas de restricción sólo reconocen y cortan secuencias específicas.Generan extremos cohesivos (con monocadenas) o extremos romos.La rotura del DNA produce una serie característica de fragmentos, y estos se pueden ligar a otros DNA, como el vector de clonación cortado (plásmido). La reacción de ligación está facilitada por el apareamiento de extremos cohesivoscomplementarios, y los fragmentos de DNA con extremos cohesivos diferentes (no complementarios) no suelen ligarse.

POLICONECTORPOLICONECTOR

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Separación de DNA de diferentes tamaños

Separación de DNA de diferentes tamaños

Electroforesis en gel• Poliacrilamida fragmentos menores de 500 pb• Diluciones diluidas agarosa• Electroforesis en gel de campo pulsante

Visualización• Colorante bromuro de etidio• Marcaje radiactivo (32P) antes de electroforesis

Electroforesis en gel• Poliacrilamida fragmentos menores de 500 pb• Diluciones diluidas agarosa• Electroforesis en gel de campo pulsante

Visualización• Colorante bromuro de etidio• Marcaje radiactivo (32P) antes de electroforesis

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Determinación de la secuenciaexacta de un ácido nucleico

• A. Maxam y W. Gilber Por hidrólisis química específica

Hebra de DNA marcada en el extremo 5’ con 32P

Determinación de la secuenciaexacta de un ácido nucleico

• A. Maxam y W. Gilber Por hidrólisis química específica

Hebra de DNA marcada en el extremo 5’ con 32P

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Secuenciación del DNASecuenciación del DNA’

5’-32P-GCTACGTA-3’

Secuenciación DNA método Sanger

Secuenciación DNA método Sanger

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Hibridación de ácidos nucleicos

Hibridación de ácidos nucleicos

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Método de transferencia Southern aplicado a la determinación de la huella dactilar de DNAMétodo de transferencia Southern aplicado a la determinación de la huella dactilar de DNA

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Clonación de DNAClonación de DNA

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Tipos de vectores de clonación utilizados en E. coli

Tipos de vectores de clonación utilizados en E. coli

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PlásmidosPlásmidos

Moléculas de DNA circular que se replican aparte del

cromosoma bacteriano

Moléculas de DNA circular que se replican aparte del

cromosoma bacteriano

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El plásmido es una molécula circular de DNA que tiene una existencia independiente en la célula.

Los plásmidos son muy abundantes en las bacterias, y mas escasos en las células eucariotas.

Llevan en su seno varios genes, a menudo responsables de características útiles para la célula. Por ejemplo, la capacidad para soportar concentraciones tóxicas de un antibiótico, como el cloranfenicol o la ampicilina.

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Tamaño y número de copiaTamaño y número de copia

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El tamaño de un plásmido es variable. Pueden tener desde 1 kb hasta 250kb. Como vector, es deseable que su tamaño no sobrepase 10kb.Ejemplos:PUC8 2,1kb E. coli ColE1 6,4kb E. coliF 95 E. coli

ConjugaciónConjugación

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Los plásmidos se pueden clasificar en dos grupos: conjugativos y no conjugativos.Los conjugativos tienen la capacidad de promover la conjugación.El plásmido F de E. coli es capaz de integrarse en el cromosoma. Cuando la conjugación tiene lugar en esta situación, parte del cromosoma se transfiere a la cepa F-.Solo los plásmidos conjugativos tienen la capacidad de ser transferidos en la conjugación. A veces, en presencia de un plásmido conjugativo, otro plásmido puede transferirse.

Plásmido pBR322Plásmido pBR322

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Clonación de un DNA foráneo en E. coli con pBR322

Clonación de un DNA foráneo en E. coli con pBR322

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Vectores de clonación del bacteriófago λVectores de clonación del bacteriófago λ

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Clonación con cósmidosClonación con cósmidos

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GLOSARIO GLOSARIO • Bacteriófago: Virus que infecta a Bacterias.

También llamado fago.• Cebador o primer: Molécula de ácido nucleico,

de cadena simple, que hibrida a una hebra molde de tal manera que su extremo 3’ queda disponible para servir como inicio de la síntesis de la nueva hebra de ADN complementario al molde. Es necesario para la síntesis de ADN por las enzimas polimerasas.

• Codón: Triplete de bases que específica un aminoácido.

• Codón de iniciación: Codón en el ARN mensajero que indica que indica al ribosoma el lugar donde debe comenzar la síntesis de la proteína. Comúnmente es 5’ AUG 3’.

• Codón de terminación: Uno de los tres codones en el ARN mensajero que causa una terminación de la síntesis de proteínas.

• Bacteriófago: Virus que infecta a Bacterias. También llamado fago.

• Cebador o primer: Molécula de ácido nucleico, de cadena simple, que hibrida a una hebra molde de tal manera que su extremo 3’ queda disponible para servir como inicio de la síntesis de la nueva hebra de ADN complementario al molde. Es necesario para la síntesis de ADN por las enzimas polimerasas.

• Codón: Triplete de bases que específica un aminoácido.

• Codón de iniciación: Codón en el ARN mensajero que indica que indica al ribosoma el lugar donde debe comenzar la síntesis de la proteína. Comúnmente es 5’ AUG 3’.

• Codón de terminación: Uno de los tres codones en el ARN mensajero que causa una terminación de la síntesis de proteínas.

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• Conjugación: Transferencia de material genético de una bacteria a otra mediante contacto físico entre las células. En Escherichia coli, el contacto ocurre mediante una estructructura especial denominada pilus.

• Cromosomas: Componentes de las células que contienen la información genética. Cada cromosoma tiene numerosos genes. Siempre se presentan en pares, uno proviene del padre y el otro de la madre. Los cromosomas de pares diferentes son a menudo visiblemente distintos entre ellos.

• Conjugación: Transferencia de material genético de una bacteria a otra mediante contacto físico entre las células. En Escherichia coli, el contacto ocurre mediante una estructructura especial denominada pilus.

• Cromosomas: Componentes de las células que contienen la información genética. Cada cromosoma tiene numerosos genes. Siempre se presentan en pares, uno proviene del padre y el otro de la madre. Los cromosomas de pares diferentes son a menudo visiblemente distintos entre ellos.

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• Electroforesis en gel: Proceso para separar moléculas forzándolas a migrar a través de un material semisólido (gel) bajo la influencia de un campo eléctrico.

• Electroporación: Técnica que emplea una corriente eléctrica para crear poros transitorios en una menbrana celular por los cuales puede introducirse el ADN.

• Endonucleasa: Enzima que rompe un ácido nucleico en una unión fosfodiéster no terminal. Un tipo de endonucleasas, las enzimas de restricción, reconocen secuencias específicas de bases a lo largo de una molécula de ADN y la rompen después del reconocimiento.

• Electroforesis en gel: Proceso para separar moléculas forzándolas a migrar a través de un material semisólido (gel) bajo la influencia de un campo eléctrico.

• Electroporación: Técnica que emplea una corriente eléctrica para crear poros transitorios en una menbrana celular por los cuales puede introducirse el ADN.

• Endonucleasa: Enzima que rompe un ácido nucleico en una unión fosfodiéster no terminal. Un tipo de endonucleasas, las enzimas de restricción, reconocen secuencias específicas de bases a lo largo de una molécula de ADN y la rompen después del reconocimiento.

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• Enzima: Proteína que acelera la velocidad de una reacción química. Las enzimas son catalizadores que promueven reacciones repetidamente sin sufrir ningún cambio.

• Enzimas de restricción: Enzima que reconoce una secuencia específica de bases en el ADN y rompe la molécula en esa secuencia o en un sitio cercano a ella. La secuencia de reconocimiento se denomina sitio de restricción. Diferentes enzimas de restricción reconocen diferentes sitios de restricción. Se denominan también endonucleasas de restricción.

• Enzimas reparadoras de ADN: Proteínas que reconocen y reparan anormalidades en el ADN.

• Enzima: Proteína que acelera la velocidad de una reacción química. Las enzimas son catalizadores que promueven reacciones repetidamente sin sufrir ningún cambio.

• Enzimas de restricción: Enzima que reconoce una secuencia específica de bases en el ADN y rompe la molécula en esa secuencia o en un sitio cercano a ella. La secuencia de reconocimiento se denomina sitio de restricción. Diferentes enzimas de restricción reconocen diferentes sitios de restricción. Se denominan también endonucleasas de restricción.

• Enzimas reparadoras de ADN: Proteínas que reconocen y reparan anormalidades en el ADN.

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• Gen: Unidad de información hereditaria. Sección de una molécula de ADN que especifica la producción de una proteína particular.

• Genoma: El total del material hereditario de una célula.

• Gen: Unidad de información hereditaria. Sección de una molécula de ADN que especifica la producción de una proteína particular.

• Genoma: El total del material hereditario de una célula.

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GRACIASGRACIAS

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