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8/20/2019 Fundamento de Hematoxilina y Eosina
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FUNDAMENTO DE HEMATOXILINA Y EOSINA
La Hematoxilina es un compuesto que se obtiene de la planta leguminosa
Haematoxylum campechianum, conocida también con el nombre de palo de
Campeche. Es un producto natural que al ser oxidado constituye una substancia de
color morado oscuro denominada hemateina.
Se utiliza en histología para teir los componentes ani!nicos "#cidos$ de los te%idos, a
los que da una coloraci!n &ioleta. 'ie intensamente los n(cleos de las células, dado
que estos contienen #cidos nucleicos ricos en radicales #cidos.
'al como se obtiene de la planta e incluso luego de su)rir el proceso de oxidaci!n, su
capacidad de tinci!n es muy limitada. *or lo tanto, debe combinarse con iones
met#licos, especialmente las sales de hierro "+++$ o aluminio "++$, que act(an como
mordientes.
Si bien la hematoxilina es una sal neutra, suele ser denominada como un coloranteb#sico, ya que el componente crom!geno reside en el comple%o cati!nico "b#sico$ de
la misma. Es de notar que la tinci!n histol!gica por hematoxilina no indica tanto la
constituci!n química de los componentes celulares, sino la densidad de cargas
eléctricas negati&as de los mismos
La mayoría de las células y matrices extracelulares no poseen un color propio por lo
que su obser&aci!n directa al microscopio !ptico no permite obser&ar sus
características mor)ol!gicas. *ara poder obser&arlos se emplean colorantes,
sustancias dotadas de color que se unen de manera m#s o menos especí)ica a
determinadas estructuras del te%ido.
Las tinciones generales se usan habitualmente en los laboratorios de histología paraobtener una &isi!n general de las muestras de te%ido. ormalmente combinan m#s de
un colorante. La tinci!n m#s com(n es la que combina una sustancia como la
hematoxilina y el colorante #cido eosina.
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TIPOS DE FIJADORES
La )i%aci!n se utiliza para- bolir el metabolismo celular, impedir la degradaci!n
enzim#tica de las células y los te%idos por aut!lisis "autodigesti!n$, destruir los
microorganismos pat!genos como las bacterias, los hongos o los &irus, endurecer el
te%ido como consecuencia de la )ormaci!n de enlaces cruzados o la desnaturalizaci!n
de las moléculas proteicas.
El )i%ador de uso m#s com(n es la )ormalina, una soluci!n acuosa de )ormaldehído al
/01, en diluciones &ariadas y en combinaci!n con otras sustancias químicas y
amortiguadores "bu))ers$. El )ormaldehído preser&a la estructura general de la célula y
de los componentes extracelulares al reaccionar con los grupos amino de las proteínas
"con mucha )recuencia )orma enlaces cruzados entre residuos de lisina$. 2ado que el
)ormaldehído no altera en )orma signi)icati&a su estructura tridimensional, las proteínas
mantienen su capacidad de reaccionar con anticuerpos especí)icos. Esta propiedad es
importante en los métodos de tinci!n inmunocitoquímica.
La soluci!n comercial est#ndar de )ormaldehído amortiguado con )os)atos "pH 0$ act(a
con bastante lentitud pero penetra bien en el te%ido. Sin embargo, el )ormaldehído no
reacciona con los lípidos y, por lo tanto, es un mal )i%ador de las membranas.
FIJACION
Es un procedimiento cuya )inalidad, al aplicarlo es detener la &ida de las células e
impedir las modi)icaciones post morten que pueda su)rir la célula "procesos
autolíticos$, manteniendo la estructura mor)ol!gica de células y te%idos sin que ocurran
cambios notables en ellos.
Esto se consigue inmo&ilizando "por coagulaci!n o precipitaci!n$ las moléculas
proteínicas e inhibiendo principalmente las enzim#ticas haciéndolas insolubles. Esta
acci!n garantiza la integridad de las células y te%idos3 se e)ect(a por mediante agentesquímicos denominados )i%adores.
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LOS FIJADORES SE CLASIFICAN EN DOS GRANDES GRUPOS:
a) Oxidantes: el tetra!xido de osmio "#cido !smico$, el bicromato de potasio, #cido
cr!mico, bicloruro de mercurio o 4sublimado corrosi&o5, #cido pícrico, #cido acético.
) Red!"t#$es: el )ormaldehído, el glutaraldehído, el alcohol etílico, el alcohol metílico.
La acci!n oxidante o reductora de los )i%adores le con)ieren a las células ciertas
condiciones que posibilitan una me%or aplicaci!n de las sustancias colorantes, por
e%emplo- el alcohol etílico absoluto conser&a el gluc!geno, el bicloruro de mercurio
pro&oca que las anilinas coloreen de manera m#s brillante a las )ibras col#genas, el
bicromato de potasio )acilita la coloraci!n de las mitocondrias, el #cido acético permite
una me%or tinci!n de los n(cleos, el cloruro de calcio conser&a e insolubiliza
parcialmente a los lípidos.
LOS FIJADORES SON:
a) Gase#s#s: como el )ormaldehído
) %&'!id#s: como el #cido acético, al alcohol etílico, la acetona, etc.
") s(%id#s: como el bicloruro de mercurio, el bicromato de potasio, etc.
FIJADOR SIMPLE
FORMOL O FORMALINA.6 Est# considerado como la sustancia )i%adora de mayor uso
en los laboratorios que realizan técnica histol!gica. El )ormol comercial consiste en
una soluci!n acuosa del gas )ormaldehido al /7 6 891. Se presenta como un líquido
claro, incoloro, que emite &apores sumamente irritantes para las con%unti&as y la
mucosa respiratoria. Su acci!n )i%adora se e%erce coagulando las proteínas.
Es un )i%ador que posee un buen poder de penetraci!n y di)usi!n. :antiene de manera
adecuada la estructura y )acilita la coloraci!n posterior de los componentes celulares y
tisulares. Endurece bien las muestras. Conser&a bastante bien a las grasas.
El tiempo de )i%aci!n de las muestras, dependiendo del tamao de ellas, debe ser de
;8 a 8< horas como mínimo y si es posible, en re)rigeraci!n.
FIJADORES COMPUESTOS.
=na sola sustancia )i%adora di)ícilmente re(ne todas las condiciones para e%ercer una
buena )i%aci!n, por lo tanto es aconse%able usar mezclas )i%adoras a tra&és de las
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cuales se acrecientan las cualidades de un )i%ador y se aten(an sus de)ectos y
des&enta%as.
FORMOL FOSFATO *FORMOL TAMPONADO)
6 soluci!n de )ormaldehído "/01 a 891$ >99
ml
6 agua destilada 799
ml
6 )os)ato de sodio monob#sico "aH;*?8 6 H;?$ 8.9 gr
6 )os)ato de sodio dib#sico "a;H*?8$ @.A gr
Suele emplearse como un )i%ador de rutina, al igual que el )ormol
al >91. *osee un pH de @.< a 0.9 aproximadamente. Es ligeramente hipot!nico.
FORMOL +ICLORURO DE MERCURIO
6 soluci!n de )ormaldehído "/01 a 891$ >A9 ml
6 agua destilada <A9 ml
6 bicloruro de mercurio A9 gr
Es recomendable usarlo para )i%ar te%idos hematopoyético y
lin)#tico reticular. El material nuclear se )i%a de manera precisa y
nítida. Bacilita la tinci!n de )ibras col#genas y células con%unti&as
mediante el empleo de colorantes que tienen como base a las
anilinas. Se utiliza para los te%idos en los que se aplicar# técnicas
inmunohistoquímicas.
FORMOL CLORURO DE CALCIO
6 soluci!n de )ormaldehido "/01 a 891$ >99 ml
6 cloruro de calcio >9 gr
6 agua destilada 799ml
Se recomienda )i%ar las muestras en esta soluci!n cuando se desean preser&ar lípidos,
especialmente )os)olípidos- ntes de obtener los cortes, las muestras se incluyen en
gelatina o se congelan directamente para seccionarlas con empleando micr!tomos decongelaci!n o el criostato.
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L,-UIDO FIJADOR DE +O.IN
6 soluci!n acuosa saturada de #cido pícrico 0A9 ml
6 soluci!n de )ormaldehido "/01 a 891$ ;A9 ml
6 #cido acético glacial A9 ml
Es un buen )i%ador de uso rutinario. 'iene un buen poder de
penetraci!n y de di)usi!n. ?)rece resultados satis)actorios con
ciertos tricr!micos como el de :asson. *ueden )i%arse piezas deun centímetro de grosor y dos o tres centímetros de longitud. Se le
emplea con resultados !ptimos en la )i%aci!n de embriones y )etos
pequeos pues e%erce cierto poder descalci)icante.
L,-UIDO FIJADOR DE HELLY
6 soluci!n madre "stoc$ de Dener 79 ml
6 soluci!n de )ormaldehido "/01 a 891$ >9 ml
El )ormol se debe agregar antes de usar la mezcla, pues la acci!n reductora del )ormolinhibe la acti&idad )i%adora del bicromato de potasio. Las muestras deben ser pequeas
y )i%arse por un lapso no mayor de ;8 horas, porque se endurecen en exceso, se
disminuye la baso)ilia de los n(cleos y se incrementa la acido)ilia del citoplasma. 'iene
una &enta%a- preser&a muy bien a los eritrocitos y a los gr#nulos de las células de
gl#ndulas endocrinas.
FIJADOR DE CARNOY
6 alcohol etílico absoluto @9 ml
6 cloro)ormo /9 ml
6 #cido acético glacial >9 ml
*osee un excelente poder de penetraci!n y de di)usi!n. Las
muestras delgadas de te%idos y !rganos se )i%an en dos o tres
horas. *roduce lisis de los eritrocitos. Es el )i%ador adecuado
cuando se desea demostrar gluc!geno y la tinci!n de n(cleos y
especialmente cromosomas.
