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Rev.3 Noviembre 2002

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GUIA PARA LA ACREDITACINDE LABORATORIOS QUE

REALIZAN ANLISISMICROBIOLGICOS

REVISIN N FECHA MODIFICACIONES1 Marzo 1993 Nueva elaboracin

2 Marzo 1997 Revisin de la Comisin Sectorial Agroalimentaria

3 Noviembre 2002 Adaptacin norma ISO/IEC 17025. Traduccin del documento EA

EA-4/10rev02: Accreditation for Microbiological Laboratories

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ndice

Seccin Pgina

Presentacin 31 Introduccin y contenido del documento 32 Personal 43 Condiciones ambientales 53.1 Locales 53.2 Condiciones ambientales 73.3 Higiene 7

4 Validacin de mtodos de ensayo 75 Incertidumbre de medida 86 Equipos mantenimiento, calibracin y verificacin de su funcionamiento 96.1 Mantenimiento 96.2 Calibracin y verificacin de equipos 107 Reactivos y medios de cultivo 137.1 Reactivos 137.2 Medios preparados internamente 137.3 Medios listos para su uso 137.4 Etiquetado 148 Materiales de referencia y cepas de referencia 148.1 Materiales de referencia 14

8.2 Cepas de referencia 159 Muestreo 1510 Manipulacin e identificacin de muestras 1611 Eliminacin de residuos contaminados 1612 Aseguramiento de la calidad de los resultados/control de calidad 1712.1 Control de calidad interno 1712.2 Control de calidad externo (ensayos de aptitud) 1713 Informes de los ensayos 17Anexo I Glosario de trminosAnexo II Referencias bibliogrficasAnexo III Utilizacin de cepas de referenciaAnexo IV Directrices para la calibracin y los controles de calibracin

Anexo V Directrices para la validacin y verificacin de equiposAnexo VI Directrices para el mantenimiento de equipos

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PRESENTACIN

Esta gua es la traduccin literal del documento EA-4/10 Accreditation for microbiologicalLaboratories conjuntamente por EURACHEM y EA y aprobado en ambas organizaciones.

Los laboratorios de anlisis microbiolgicos que deseen ser acreditados, debern cumplir los requisitosgenerales establecidos en la norma UNE EN ISO/IEC 17025 y los criterios establecidos en eldocumento CGA-ENAC-LEC Criterios generales para la acreditacin de laboratorios de ensayo ycalibracin segnla norma UNE EN ISO/IEC 17025. As mismo, el laboratorio deber tener encuenta las directrices contenidas en el presente documento.

Esta gua revisa y sustituye a la gua G-ENAC-04 Rev. 2 de marzo de 97.

1. INTRODUCCIN Y CONTENIDO DEL DOCUMENTO

1.1 Los requisitos generales para la acreditacin aparecen definidos en la NormaInternacional Requisitos generales para la competencia de laboratorios de ensayo ycalibracin (ISO/IEC 17025 1 ed., 1999), en lo sucesivo la norma ISO 17025. Todosesos requisitos deben ser cumplidos por los laboratorios que deseen ser acreditados.

1.2 El presente documento complementa los requisitos establecidos en la norma ISO 17025con directrices especficas tanto para los auditores como para los laboratorios que realizananlisis microbiolgicos. Proporciona directrices detalladas para la interpretacin de lanorma ISO 17025 por todos aquellos que realizan anlisis de materiales, productos ysubstancias. Estas directrices son aplicables a todo tipo de mediciones objetivas, ya sean o

no rutinarias, o como parte de actividades de investigacin y desarrollo. Aunque se hanescrito pensado especialmente en anlisis microbiolgicos de alimentos y medioambiente, los principios generales pueden aplicarse tambin a otras reas. La norma ISO17025 sigue siendo el documento que prevalece y, en caso de conflicto constituir la basepara su resolucin por parte de ENAC. Las directrices contenidas en el presentedocumento pueden utilizarse tambin por aquellos laboratorios que trabajan con otrasnormas de calidad, como BPL, BPF o BPC.

1.3 El presente documento puede considerarse como un Documento de aplicacin para losanlisis microbiolgicos segn se establece en el Anexo B de la norma ISO 17025. Estedocumento ha sido elaborado conjuntamente por EURACHEM y EA como forma depromover un enfoque armonizado para la acreditacin de laboratorios entre los

organismos miembros de EA y, en particular, entre los que han suscrito el AcuerdoMultilateral de EA.

1.4 Se considera que los anlisis microbiolgicos incluyen pruebas de esterilidad, deteccin,aislamiento, recuento e identificacin de microorganismos (virus, bacterias, hongos yprotozoos) y sus metabolitos en diferentes materiales y productos, o cualquier tipo deensayo en el que se utilicen microorganismos como parte de un sistema de deteccin, ascomo la utilizacin de microorganismos para ensayos ecolgicos. De ah se deduce quealgunas de las directrices contenidas en el presente documento, como las referentes a labioseguridad de los laboratorios, tendrn que ser interpretadas en consecuencia. Estedocumento puede servir tambin de orientacin para los laboratorios que utilizan tcnicas

en reas relacionadas con la microbiologa, como bioqumica, biologa molecular ycultivos celulares, aunque esos laboratorios pueden tener que cumplir otros requisitosadicionales.

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1.5 El presente documento trata sobre la calidad de los resultados de los ensayos, sin abordarespecficamente aspectos relacionados con la salud y la seguridad. No obstante, las

prcticas de los laboratorios deben cumplir la legislacin nacional vigente en materia desalud y seguridad. Es importante recordar que, en algunos casos, las cuestionesrelacionadas con la salud y la seguridad pueden influir en la calidad de los ensayos y ellaboratorio tiene que tener este hecho en cuenta.

1.6 En el Anexo I puede encontrarse un glosario con las definiciones de los trminosutilizados en este documento.

2. PERSONALISO 17025, apartado 5.2

2.1 Los anlisis microbiolgicos deben ser realizados o supervisados por una persona conexperiencia y con titulacin superior en microbiologa o equivalente. Se admitirn otrastitulaciones siempre que el personal tenga una amplia experiencia relacionada con elalcance de acreditacin del laboratorio. El personal debe tener la necesaria experienciaprofesional prctica para que se le permita realizar sin supervisin trabajos cubiertos porel alcance de la acreditacin o se considere que tiene experiencia suficiente como parasupervisar el trabajo acreditado. Algunas disposiciones especficas de la legislacinnacional pueden sobrepasar las directrices contenidas en este documento.

2.2 Si el laboratorio incluye opiniones e interpretaciones de los resultados de los ensayos ensus informes, stas deben ser realizadas por personal autorizado con experienciasuficiente y con conocimientos relacionados con la aplicacin especfica, incluyendo, por

ejemplo, requisitos legislativos y tecnolgicos y criterios de aceptabilidad.

2.3 La direccin del laboratorio debe asegurar que todo el personal haya recibido formacinadecuada para que sean competentes en la realizacin de los ensayos y en el manejo delos equipos. Dicha formacin incluir entrenamiento en tcnicas bsicas, comopreparacin de placas, recuento de colonias, tcnicas aspticas, etc., y la aceptabilidad sedeterminar aplicando criterios objetivos. El personal slo podr realizar anlisis demuestras cuando se haya reconocido su competencia para hacerlo, o cuando lo haga bajola supervisin adecuada. Se comprobar con criterios objetivos que el personal siguesiendo competente y se proporcionar de nuevo formacin siempre que sea necesario.Cuando un mtodo o tcnica no se utilice de manera regular, puede que sea necesarioverificar la competencia del personal antes de realizar el ensayo. Se establecer y

documentar el intervalo crtico entre la realizacin de sucesivos ensayos. Lainterpretacin de los resultados de los ensayos para la identificacin y verificacin demicroorganismos depende en gran medida de la experiencia del analista que realiza elensayo y debe vigilarse peridicamente con cada analista.

2.4 En algunos casos, puede que sea ms apropiado relacionar la competencia con unatcnica o instrumento en particular, ms que con mtodos.

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3. CONDICIONES AMBIENTALES

ISO 17025, apartado 5.33.1 Locales

3.1.1 Un laboratorio suele tener reas de ensayo (dnde se realizan anlisismicrobiolgicos especficos y actividades relacionadas) y reas auxiliares(recepcin, pasillos, oficinas de administracin, guardarropas y aseos,almacenes, archivos, etc.). En general, existen requisitos ambientalesespecficos para las reas de ensayo.

Dependiendo del tipo de ensayos que se realicen, el acceso al laboratoriomicrobiolgico debe restringirse al personal autorizado. Cuando existan este

tipo de restricciones, el personal debe conocer:

(a) el uso restringido de una determinada rea;

(b) las restricciones impuestas al trabajo que puede realizarse en dichas reas;

(c) las razones para imponer esas restricciones;

(d) los niveles de contaminacin apropiados.

3.1.2 El laboratorio debe tomar las medidas necesarias para reducir al mnimo elriesgo de contaminacin cruzada, siempre que dicho riesgo sea importante por

el tipo de ensayos realizados. Este objetivo puede conseguirse, por ejemplo,mediante la adopcin de las siguientes medidas:

(a) construir el laboratorio conforme a un diseo 'sin camino de regreso;

(b) realizar los procedimientos de una manera secuencial utilizando medidasapropiadas para asegurar la integridad de los ensayos y las muestras (porejemplo, utilizando recipientes hermticos);

(c) separar las actividades en el tiempo o en el espacio.

3.1.3 En general, es conveniente que existan reas separadas o claramente designadaspara las siguientes actividades:

recepcin y almacenamiento de muestras;

preparacin de muestras (por ejemplo, debe utilizarse un rea separada para lapreparacin de productos en polvo que pueden estar muy contaminados);

examen de muestras, incluyendo su incubacin; mantenimiento de microorganismos de referencia;

preparacin de medios y equipos, incluyendo su esterilizacin;

verificacin de la esterilidad;

descontaminacin.

El rea de lavado (despus de la descontaminacin) puede compartirse con otraspartes del laboratorio siempre que se adopten las debidas precauciones paraevitar la transferencia de trazas de substancias que podran afectar

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negativamente al crecimiento microbiano. La necesidad de una separacin fsic adebe juzgarse considerando las actividades especficas del laboratorio (por

ejemplo, nmero de ensayos realizados, tipo de ensayos, etc.)

Los equipos del laboratorio no deben moverse habitualmente entre las distintasreas, para evitar una contaminacin cruzada accidental. En el laboratorio debiologa molecular debe disponerse de pipetas, puntas, centrifugadoras, tubos,etc. de uso exclusivo para cada rea de trabajo (reas de trabajo con una cargabaja-media-alta de ADN).

3.1.4 Las reas de trabajo deben ser suficientemente espaciosas como para podermantenerse limpias y ordenadas. El espacio requerido depender del volumende anlisis realizados y de la organizacin interna del laboratorio. Dicho espaciotendr que cumplir los requisitos de la legislacin nacional, siempre que sta

exista.

3.1.5 Las reas de trabajo deben estar debidamente ventiladas y mantenidas a unatemperatura adecuada. Esto puede conseguirse con ventilacin natural oforzada, o mediante el uso de aire acondicionado. Cuando se utilice aireacondicionado, se emplearn unos filtros adecuados, que tendrn queinspeccionarse, mantenerse y reponerse segn el tipo de trabajo realizado.

3.1.6 La contaminacin puede reducirse adoptando las siguientes medidas:

superficies lisas en paredes, techos, suelos y mesas de trabajo (se consideraque una superficie es lisa cuando puede limpiarse fcilmente). No se

recomienda el empleo de madera como material de revestimiento; uniones cncavas entre suelos, paredes y techos;

apertura mnima de ventanas y puertas mientras se estn realizando losensayos;

instalacin de persianas externas;

fcil acceso para la limpieza de las persianas internas cuando sea imposibleinstalarlas en el exterior;

las tuberas que transportan lquidos no deben pasar por encima de lassuperficies de trabajo salvo que estn provistas de un revestimientohermticamente sellado;

filtros para el polvo en las entradas de aire del sistema de ventilacin;

instalaciones de lavamanos de accionamiento no manual;

armarios hasta el techo; evitar las maderas rugosas y sin revestir;

superficies de madera de instalaciones y accesorios debidamente selladas;

materiales y equipos colocados de forma que se facilite su limpieza;

ausencia de mobiliario, documentos u objetos que no sean los estrictamentenecesarios para la realizacin de los ensayos.

Esta lista no es exhaustiva, y no todos los ejemplos podrn aplicarse en todas lassituaciones.

Lo ideal es que los techos sean lisos y con iluminacin empotrada. Cuando estono sea posible (como ocurre con techos suspendidos e iluminacin colgante), ellaboratorio debe disponer de evidencias documentadas demostrando que

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controla cualquier riesgo para la higiene y que dispone de medios eficaces parasuperar esos riesgos, por ejemplo en el programa de limpieza e inspeccin.

3.1.7 Cuando los laboratorios estn situados en fbricas, el personal debe serconsciente del peligro de contaminacin de las reas de produccin y demostrarque se han adoptado las medidas apropiadas para evitar que eso ocurra.

3.2 Condiciones ambientales

3.2.1 El laboratorio debe establecer un programa adecuado de vigilancia de lascondiciones ambientales que incluya, por ejemplo, el uso de placas desedimentacin y frotis de superficies. Se asignarn unos recuentos mximos demicroorganismos que se consideran aceptables y existir un procedimiento

documentado en el que se describirn las medidas a tomar para corregir lassituaciones en que se sobrepasen dichos lmites. El anlisis de los datos debedetectar tendencias en los niveles de biocontaminacin.

3.3 Higiene

3.3.1 El laboratorio debe establecer un programa documentado de limpieza para lasinstalaciones, los equipos y las superficies, teniendo en cuenta los resultados dela vigilancia de las condiciones ambientales y la posibilidad de contaminacincruzada. Asimismo, debe disponer de un procedimiento para el tratamiento devertidos accidentales.

3.3.2 El laboratorio debe adoptar medidas para evitar la acumulacin de polvo,disponiendo de espacio suficiente para fines de almacenamiento, reduciendo almnimo el trabajo con papeles en el laboratorio y no permitiendo la presencia deplantas y objetos personales innecesarios en el rea de trabajo del laboratorio.

3.3.3 En el laboratorio microbiolgico se utilizar una indumentaria apropiada para eltipo de ensayos que se realicen (en caso necesario, con protectores del pelo,barba, manos, pies, etc.). El personal se despojar de dicha indumentaria antesde abandonar el rea. Esto es especialmente importante en el laboratorio debiologa molecular, donde, por ejemplo, el paso de un rea con una elevadacarga de ADN a otra con una baja carga de ADN puede producir sin querer

contaminacin cruzada. En muchos casos ser suficiente con utilizar una bata delaboratorio.

3.3.4 Existirn instalaciones adecuadas para lavarse las manos.

4. VALIDACIN DE LOS MTODOS DE ENSAYOISO 17025, apartado 5.4.5

4.1 La validacin de los mtodos de ensayo debe reflejar las condiciones reales de ensayo.Esto puede conseguirse utilizando productos contaminados naturalmente o productos

inoculados con un nivel conocido de microorganismos contaminantes. El analista debeser consciente que la inoculacin de una matriz con microorganismos contaminantesimita tan slo de una manera superficial la presencia de contaminantes naturales. No

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obstante, a menudo es la mejor y la nica solucin disponible. La extensin de lavalidacin necesaria depender del mtodo y su aplicacin.

El laboratorio debe validar los mtodos normalizados aplicados a matrices que no seespecifiquen en el procedimiento normalizado.

4.2 Los mtodos de ensayo microbiolgicos cualitativos, tales como los que el resultado seexpresa en trminos de detectado/no detectado, y los procedimientos de confirmacin eidentificacin, deben ser validados estimando, cuando sea apropiado, su especificidad,exactitud relativa, desviacin positiva, desviacin negativa, lmite de deteccin, efectomatricial, repetibilidad y reproducibilidad (vase en el Anexo I las definiciones).

4.3 En el caso de ensayos microbiolgicos cuantitativos, debe considerarse la espe cificidad,sensibilidad, exactitud relativa, desviacin positiva, desviacin negativa, repetibilidad,

reproducibilidad y el lmite de cuantificacin dentro de una variabilidad establecida y, encaso necesario, determinar cuantitativamente estos parmetros. Las diferencias debidas alas matrices deben tenerse en cuenta al analizar diferentes tipos de muestras. Losresultados deben evaluarse utilizando mtodos estadsticos apropiados.

4.4 Los laboratorios deben mantener los datos sobre validacin de los sistemas de ensayocomerciales (kits) que utilicen. Estos datos pueden obtenerse de ejercicios deintercomparacin o de datos sobre validacin remitidos por los fabricantes y sujetos a laevaluacin de una tercera parte (p. ej., AOAC). Si no se dispone de datos sobre validacino si stos no son plenamente aplicables, el laboratorio ser responsable de completar lavalidacin del mtodo.

4.5 Para demostrar que una versin modificada de un mtodo cumple las mismasespecificaciones que el mtodo original, deben realizarse comparaciones utilizandoreplicados. El diseo experimental y el anlisis de los resultados tienen que serestadsticamente vlidos.

4.6 Incluso cuando se haya realizado la validacin, el laboratorio tendr que verificarperidicamente que se cumplen los parmetros documentados, utilizando, por ejemplo,muestras inoculadas o materiales de referencia incorporados a las matrices msrepresentativas.

5. INCERTIDUMBRE DE MEDIDAISO 17025, apartado 5.4.6

5.1 La definicin internacional de la incertidumbre de medida puede encontrarse en ISOVocabulario internacional de trminos bsicos y generales en metrologa: 1993 (vase elAnexo II). La forma general de evaluar y expresar la incertidumbre en los ensayos queesperan los organismos europeos de acreditacin se basa en las recomendacionespublicadas por la Comisin Internacional de Pesos y Medidas (CIPM), segn se describeen la Gua para la expresin de la incertidumbre de medida, 1995, ISO Ginebra.

5.2 Los anlisis microbiolgicos se encuadran en la categora de los ensayos que no permitenrealizar un clculo riguroso, metrolgica y estadsticamente vlido de la incertidumbre de

medida. En general, puede ser apropiado basar la estimacin de la incertidumbre en datossobre la repetibilidad y la reproducibilidad exclusivamente, aunque lo ideal es incluir lossesgos (p. ej., los sesgos detectados como resultado de la participacin en ensayos deaptitud). Los distintos componentes individuales de la incertidumbre deben identificarse y

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demostrar que estn bajo control y evaluar su contribucin a la variabilidad de losresultados. Algunos componentes (como los efectos del pipeteado, el pesado y las

diluciones) pueden medirse directamente y evaluarse fcilmente para demostrar querealizan una contribucin insignificante a la incertidumbre global. Otros componentes(como la estabilidad y preparacin de las muestras) no pueden medirse directamente y sucontribucin tampoco puede evaluarse por mtodos estadsticos, pero su importancia enla variabilidad de los resultados debe ser tambin considerada.

5.3 Se espera que los laboratorios acreditados que realizan anlisis microbiolgicos conozcanla distribucin de microorganismos en las matrices que utilizan para sus ensayos y tenereso en cuenta a la hora de obtener submuestras. Ahora bien, no se recomienda que estacomponente de la incertidumbre se incluya en las estimaciones salvo que las necesidadesdel cliente dicten lo contrario. El principal motivo de esto es que la incertidumbreasociada a la distribucin de microorganismos en la matriz del producto no depende de la

actuacin del laboratorio pudiendo depender exclusivamente de las propias muestrasanalizadas. Adems, los mtodos de ensayo deben especificar el tamao de la muestraque debe utilizarse teniendo en cuenta la escasa homogeneidad de la misma.

5.4 El concepto de incertidumbre no puede aplicarse directamente a los resultados de losensayos cualitativos como los obtenidos en los anlisis de deteccin o en los dedeterminacin de atributos para fines de identificacin. No obstante, deben identificarselas distintas fuentes de variabilidad, como la homogeneidad de los reactivos y lainterpretacin de los analistas, y demostrar que se controlan dichas fuentes. Adems, enlos ensayos donde el lmite de deteccin es un importante indicador de la validez delmtodo, la incertidumbre asociada al inculo empleado para determinar el lmite debe serestimada y su importancia evaluada. Los laboratorios deben conocer tambin la

incidencia de resultados falsos positivos y falsos negativos asociada a los ensayoscualitativos que realizan.

6. EQUIPOS MANTENIMIENTO, CALIBRACIN Y VERIFICACIN DE SUFUNCIONAMIENTOISO 17025, apartado 5.5

Como parte de su sistema de calidad, el laboratorio debe documentar e implantar un programa demantenimiento, calibracin y verificacin del funcionamiento de sus equipos.

6.1 Mantenimiento(En la norma ISO 7218 se facilitan directrices sobre el mantenimiento de los equipos).

6.1.1 El mantenimiento de los equipos esenciales debe realizarse a los intervalosespecificados dependiendo de factores tales como la frecuencia de uso. Semantendr un registro detallado de todas las operaciones realizadas. En elAnexo VI pueden encontrarse ejemplos del mantenimiento de los equipos y dela frecuencia del mismo.

6.1.2 El laboratorio debe adoptar medidas para evitar la contaminacin cruzadacausada por los equipos, como las siguientes:

el material desechable debe estar limpio o estril, en funcin de su uso; el material de vidrio reutilizable debe estar debidamente limpio o estril, en

funcin de su uso;

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lo ideal es que los laboratorios dispongan de un autoclave especfico para

descontaminacin. No obstante, se podr utilizar un nico autoclave siempreque se tomen las debidas precauciones para separar las cargas dedescontaminacin y esterilizacin, y siempre que exista un programadocumentado de limpieza para controlar las condiciones ambientales tantointernas como externas del autoclave.

6.1.3 En general, el mantenimiento de los siguientes equipos consistir en limpieza yrevisin, inspeccin de daos, verificacin general y, si procede, esterilizacin:

equipos de uso general aparatos de filtracin, recipientes de vidrio o plstico(matraces, tubos de ensayo), placas Petri de cristal o plstico, instrumentos demuestreo, asas de siembra de platino, nquel/cromo o material de plstico

desechable;

baos termostticos, estufas, cabinas de seguridad microbiolgica, autoclaves,homogeneizadores, refrigeradores, congeladores;

material volumtrico, como pipetas, dispensadores automticos, sembradoresen espiral;

instrumentos de medida, como termmetros, cronmetros, balanzas, pH-metros, contadores de colonias.

6.2 Calibracin y verificacin de equipos

6.2.1 El laboratorio debe establecer un programa de calibracin y verificacin de losequipos que puedan influir directamente en los resultados de los ensayos. Lafrecuencia de esas calibraciones y verificaciones se establecer en funcin de laexperiencia documentada y depender del uso, el tipo y el funcionamientoprevio de los equipos. Los intervalos entre sucesivas calibraciones yverificaciones sern ms cortos que el perodo de tiempo durante el cual se hanobservado desviaciones de los equipos fuera de los lmites aceptables. En losAnexos D y E pueden encontrarse ejemplos de los intervalos de calibracin ylas verificaciones tpicas de las caractersticas tcnicas para diferentes

instrumentos de laboratorio.

6.2.2 Equipos para medir la temperatura

(a) Cuando la temperatura tenga un efecto directo en el resultado de un anlisis o seacrtica para el correcto funcionamiento de un equipo, los equipos utilizados paramedir la temperatura, como termmetros de columna lquida, termopares ytermomtros de resistencia de platino (TRP) utilizados en estufas y autoclaves,tendrn que ser de una calidad apropiada para conseguir la precisin requerida.

(b) La calibracin de estos equipos debe ser trazable a patrones nacionales ointernacionales de temperatura. Cuando la precisin lo permita, podrn utilizarse

instrumentos que puedan demostrar el cumplimiento de especificaciones defabricacin apropiadas y aceptadas en el mbito nacional o internacional (por ejemplola norma ISO 1770 para los termmetros de columna lquida). Estos instrumentos

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pueden utilizarse, por ejemplo, para controlar la temperatura de frigorficos ycongeladores, y tambin de estufas y baos termostticos cuando lo permita la

tolerancia admitida en torno a la temperatura definida. El laboratorio debe verificar elcorrecto funcionamiento de estos instrumentos.

6.2.3 Incubadores, baos termostticos, estufas

El laboratorio debe establecer inicialmente y documentar la estabilidad de la temperatura,la uniformidad de su distribucin y el tiempo necesario para conseguir las condiciones deequilibrio en incubadores, baos termostticos, estufas y salas con temperaturacontrolada, en particular con respecto a los usos tpicos (por ejemplo, posicin, espacioentre y altura de las pilas de placas Petri). La constancia de las caractersticas registradasen la validacin inicial de los equipos debe verificarse y registrarse despus de cualquier

reparacin o modificacin importante. Los laboratorios deben controlar la temperatura defuncionamiento de este tipo de equipos y conservar registros.

6.2.4 Autoclaves, incluidos los preparadores de medios

A continuacin se resume el procedimiento ms habitual para la calibracin, verificacininicial y control del funcionamiento de estos equipos. No obstante, se reconoce que losanlisis cuantitativos de materiales y especmenes procesados en el autoclave capaces dedemostrar una variacin aceptable dentro de un lote y entre diferentes lotes puedenproporcionar una garanta de calidad equivalente.

(a) Los autoclaves deben cumplir las tolerancias de tiempo y temperatura especificadas.

No es aceptable la utilizacin de autoclaves provistos slo de un manmetro. Lossensores utilizados para controlar o vigilar los ciclos tienen que ser calibrados,adems de verificar el correcto funcionamiento de los cronmetros.

(b) La validacin inicial debe incluir estudios de funcionamiento (estudios de ladistribucin espacial de la temperatura) para los distintos ciclos y las distintasconfiguraciones de la carga que se utilicen en la prctica. Este proceso tiene querepetirse despus de cada reparacin o modificacin importantes (como sustitucindel termostato o programador, disposicin de la carga, ciclo de operacin) o cuandoas lo indiquen los resultados de los controles de calidad realizados a los medios.Debe colocarse un nmero suficiente de sensores de temperatura dentro de la carga(p. ej., en recipientes llenos de lquido o medio) para poder demostrar diferencias

segn la colocacin. En el caso de preparadores de medios, cuando no se puedademostrar un calentamiento uniforme de otra manera, en general es necesario utilizardos sensores, uno colocado al lado del sensor de temperatura y el otro lejos de l.Tanto en la validacin inicial como en las validaciones posteriores debe considerarsela idoneidad de los tiempos de subida y bajada de la temperatura, as como el tiempoque se mantiene la temperatura de esterilizacin.

(c) El laboratorio debe establecer instrucciones claras de funcionamiento basndose enlos perfiles de calentamiento determinados para los usos tpicos durante la validacininicial y las posteriores. Debe establecer criterios de aceptacin/rechazo y mantenerun registro de las operaciones del autoclave, incluida la temperatura y el tiempo, para

cada ciclo.

(d) El control puede realizarse mediante una de las siguientes formas:

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(i) utilizando un termopar y un aparato registrador para obtener un grfico impreso;

(ii) por observacin directa y registro de la temperatura mxima alcanzada y el tiempoque se mantiene esa temperatura.

Adems de controlar directamente la temperatura del autoclave, puede comprobarse laeficacia de su funcionamiento durante cada ciclo mediante la utilizacin de indicadoresqumicos o biolgicos para fines de esterilizacin y descontaminacin. La cinta deautoclave o las tiras indicadoras deben utilizarse slo para distinguir que una carga hasido procesada, pero no para demostrar que ha finalizado un ciclo aceptable.

6.2.5 Pesas y balanzas

Las pesas y balanzas deben calibrarse a intervalos regulares, demostrando su trazabilidad

(de acuerdo al uso previsto).

6.2.6 Material volumtrico

(a) Los laboratorios de microbiologa pueden utilizar material volumtrico comodispensadores automticos, dispensadores/diluidores, pipetas manuales o automticasy pipetas desechables. Los laboratorios deben realizar una verificacin inicial delmaterial volumtrico y, a partir de ah, controles peridicos para garantizar que losequipos cumplen en todo momento las especificaciones requeridas. Dichaverificacin no ser necesaria con el material de vidrio que haya sido certificado parauna tolerancia especfica. En los equipos se verificar la exactitud del volumendispensado frente al volumen prefijado (para varios volmenes cuando se trate de

instrumentos de volumen variable) y se determinar la precisin de los volmenesdispensados repetidas veces.

(b) Es conveniente que el material volumtrico desechable de un solo uso seasuministrado por empresas con un sistema de calidad reconocido y relevante.Despus de la validacin inicial de la idoneidad del material, se recomienda realizarcontroles aleatorios de su exactitud. Si la empresa proveedora no tiene un sistema decalidad reconocido, el laboratorio debe verificar cada lote de material.

6.2.7 Otros equipos

Los conductivmetros, los medidores de oxgeno, los pH-metros y otros instrumentos

similares deben verificarse peridicamente o antes de cada uso. Los tampones utilizadosen estas verificaciones deben conservarse en condiciones apropiadas y marcarse con lafecha de caducidad.

Si la humedad influye en el resultado del ensayo, los higrmetros debern calibrarse,siendo la calibracin trazable a patrones nacionales o internacionales.

Los cronmetros, incluido los de los autoclaves, deben verificarse utilizando uncronmetro calibrado o la seal horaria nacional.

Cuando se utilizan centrifugadoras en los procedimientos de ensayo, debe evaluarse si la

fuerza centrfuga se puede considerar crtica. En el caso de que sea crtica, lacentrifugadora tendr que ser calibrada.

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7. REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVOISO 17025, apartados 4.6 y 5.5

7.1 Reactivos

El laboratorio debe asegurarse de que la calidad de los reactivos utilizados sea apropiada paralos ensayos realizados. Debe verificar la idoneidad de cada uno de los lotes de reactivos crticospara el ensayo, al inicio y durante su perodo de validez, utilizando microorganismos de controlpositivo y negativo que sean trazables a colecciones de cultivos nacionales o internacionalesreconocidas.

7.2 Medios preparados internamente

7.2.1 Siempre que sea necesario, se verificar que los medios de cultivo, diluyentes y

otras suspensiones preparadas internamente tengan las caractersticasadecuadas con respecto a:

recuperacin o supervivencia de los microorganismos de inters,

inhibicin o supresin de los microorganismos no deseados,

propiedades bioqumicas (diferenciales y diagnsticas),

propiedades fsicas (por ejemplo, pH, volumen y esterilidad).

Para la evaluacin de la recuperacin o la supervivencia son preferibles losprocedimientos cuantitativos (vase tambin ISO 11133 Partes 1 y 2).

7.2.2 Los materiales de partida (tanto formulaciones comerciales deshidratadas comolos componentes individuales) deben conservarse en las condicionesapropiadas; por ejemplo, en un lugar fresco, seco y oscuro. Todos losrecipientes, especialmente los que contengan medios deshidratados, deben estarhermticamente cerrados. No deben utilizarse medios deshidratados quepresenten apelmazamiento o un cambio de color. Para la preparacin de mediosdebe utilizarse agua destilada, desionizada o de smosis inversa, libre desubstancias bactericidas, inhibidoras o interferentes, salvo que el mtodo delensayo especifique otra cosa.

7.2.3 Debe determinarse y verificarse el perodo de validez de los medios preparadosen las condiciones de conservacin especificadas.

7.3 Medios listos para su uso7.3.1 Todos los medios (y diluyentes y otras suspensiones) que se suministren en una

forma directamente utilizable o parcialmente completa deben ser validadosantes de su utilizacin. La evaluacin de su efecto en la recuperacin osupervivencia de los microorganismos de inters y la inhibicin o supresin delos microorganismos no deseados tiene que ser plenamente cuantitativa; losatributos (por ejemplo, propiedades fsicas y bioqumicas) deben evaluarseutilizando criterios objetivos.

7.3.2 Como parte de la validacin, el laboratorio tiene que estar debidamenteinformado de las especificaciones de calidad del fabricante, que como mnimo

incluirn lo siguiente:

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Nombre de los medios y lista de componentes, incluido cualquier suplemento

Perodo de validez y criterios de aceptabilidad aplicados Condiciones de conservacin

Plan y frecuencia de muestreo

Control de esterilidad

Control del crecimiento de los microorganismos de inters y de losmicroorganismos no deseados (con referencias a sus colecciones de cultivos) ycriterios de aceptabilidad

Controles fsicos y criterios de aceptabilidad aplicados

Fecha de emisin de las especificaciones

7.3.3 Los lotes de medios deben estar debidamente identificados. Cada lote recibidodebe ir acompaado de evidencias del cumplimiento de las especificaciones decalidad. El laboratorio debe asegurarse de que el fabricante notifique cualquiercambio en las especificaciones de calidad.

7.3.4 Cuando el fabricante del medio suministrado en (una forma directamenteutilizable) o parcialmente completa disponga de un sistema de calidadreconocido (por ejemplo, certificacin segn ISO 9000), el laboratorio podrverificar en la validacin inicial que el material suministrado cumple lasespecificaciones establecidas, partiendo del supuesto de que dicho material eshomogneo. En otras circunstancias, ser necesario realizar controles adecuadosde cada lote recibido.

7.4 EtiquetadoEl laboratorio debe asegurarse de que todos los reactivos (incluidas las soluciones de reserva),medios, diluyentes y otras suspensiones estn debidamente etiquetados, indicando, segn seaapropiado, identidad, concentracin, condiciones de conservacin, fecha de preparacin, fechade caducidad validada y/o perodos recomendados de almacenamiento. Asimismo, los registrosdeben permitir la identificacin de la persona responsable de la preparacin.

8. MATERIALES DE REFERENCIA Y CEPAS DE REFERENCIAISO 17025, apartado 5.6.3

8.1 Materiales de referencia

Los materiales de referencia y los materiales de referencia certificados (vase la definicin en elAnexo I) proporcionan la trazabilidad esencial en las mediciones y son utilizados, por ejemplo,para

demostrar la exactitud de los resultados,

calibrar equipos,

controlar la calidad del laboratorio,

validar mtodos, y

permitir la comparacin de mtodos.

Siempre que sea posible, los materiales de referencia deben utilizarse con matrices apropiadas.

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8.2 Cepas de referencia

8.2.1 Las cepas de referencia son necesarias para demostrar que los medios (incluidoslos kits de anlisis) poseen unas caractersticas aceptables, para validar mtodosy para controlar que se mantienen sus caractersticas. La trazabilidad esnecesaria, por ejemplo, al establecer las caractersticas de los medios utilizadosen kits de anlisis y validaciones de mtodos. Para demostrar la trazabilidad, ellaboratorio debe utilizar cepas de referencia de microorganismos obtenidosdirectamente de una coleccin nacional o internacional reconocida, cuandoexista alguna. Alternativamente tambin podran utilizarse cepas comercialessiempre que el laboratorio pueda demostrar en el momento de su uso que todaslas propiedades relevantes son equivalentes.

8.2.2 Segn establecen las directrices contenidas en la norma ISO 11133-1, las cepasde referencia podrn ser subcultivadas una vez para obtener cepas de reserva,realizando en paralelo los controles de pureza y ensayos bioqumicos que seannecesarios. Se recomienda conservar las cepas de reserva en alicuotasultracongeladas o liofilizadas (vase en el Anexo III la preparacin de cepas detrabajo). Si las cepas de reserva se han descongelado, no deben volver acongelarse y reutilizarse.

8.2.3 Las cepas de trabajo no deben ser subcultivadas salvo que as se requiera y sedefina en un mtodo normalizado o que el laboratorio pueda aportar evidenciasdocumentadas de que no se ha producido ningn cambio en ninguna propiedadimportante.

Las cepas de trabajo no deben ser subcultivadas para sustituir las cepas dereserva. Los derivados comerciales de las cepas de referencia pueden utilizarseslo como cepas de trabajo.

9. MUESTREOISO 17025, apartado 5.7

9.1 En muchos casos, los laboratorios de ensayo no son responsables del muestreo inicialpara obtener los especmenes del ensayo. En el caso de que lo sean, es muy recomendableque el muestreo est cubierto por un sistema de aseguramiento de la calidad, e

idealmente, por una acreditacin.

9.2 El transporte y conservacin de las muestras deben hacerse en unas condicionesapropiadas para mantener su integridad (por ejemplo, refrigeradas o congeladas, segnsea necesario). Dichas condiciones deben ser controladas, manteniendo un registro de lasmismas. Cuando sea apropiado, se documentar claramente quin es el responsable deltransporte, la conservacin de las muestras entre el muestreo y su entrega al laboratoriode ensayo. Una vez obtenidas, las muestras se analizarn lo antes posible.

9.3 El muestreo debe ser realizado nicamente por personal debidamente cualificado. Elmuestreo se efectuar en condiciones aspticas utilizando material estril. Cuando sea

aplicable, las condiciones ambientales, como la contaminacin atmosfrica y latemperatura, se vigilarn y registrarn en el lugar del muestreo. Asimismo, se registrar lahora en que se realiza el muestreo.

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10. MANIPULACIN E IDENTIFICACIN DE MUESTRAS

ISO 17025, apartados 5.7 y 5.810.1 Hay que tener en cuenta que la flora microbiana puede ser sensible a factores tales como

temperatura o duracin del almacenamiento y transporte, por lo que es importanteverificar y registrar el estado de la muestra cuando se recibe en el laboratorio.

10.2 El laboratorio debe disponer de procedimientos para la entrega e identificacin demuestras. Si la muestra es insuficiente o se encuentra en mal estado por deterioro fsico,temperatura inapropiada, envase roto o etiquetado defectuoso, el laboratorio debeconsultar con el cliente antes de decidir si analiza o rechaza la muestra. En cualquier caso,debe indicar su estado en el informe del ensayo.

10.3 El laboratorio debe registrar toda la informacin relevante y, en particular, lo siguiente:(a) fecha y, cuando sea oportuno, hora de la llegada de la muestra;(b) estado de la muestra en el momento de su entrega y, cuando sea necesario,

temperatura;(c) caractersticas de la operacin de muestreo (fecha de muestreo, condiciones de

muestreo, etc.).

10.4 Las muestras que se encuentren a la espera de ser analizadas deben almacenarse encondiciones adecuadas para reducir al mnimo cualquier modificacin en la poblacinmicrobiana presente. El laboratorio debe definir y registrar dichas condiciones deconservacin.

10.5 El envase y etiquetado de las muestras puede estar altamente contaminado y las muestrasdeben manipularse y almacenarse con precaucin para evitar que se propague lacontaminacin.

10.6 El submuestreo realizado por el laboratorio inmediatamente antes del ensayo se consideraparte del mtodo de ensayo y debe efectuarse conforme a normas nacionales ointernacionales, si es que existen, o a mtodos internos validados. Los procedimientos desubmuestreo deben disearse teniendo en cuenta la distribucin heterognea de losmicroorganismos (en ISO 6887 y ISO 7218 pueden encontrarse directrices generales).

10.7 Debe existir de un procedimiento documentado para la conservacin y eliminacin demuestras. Las muestras deben conservarse hasta que se hayan obtenido los resultados del

ensayo, o ms tiempo segn sea necesario. Cuando se sepa que algunas porciones demuestras de ensayo del laboratorio estn altamente contaminadas, deben descontaminarseantes de su eliminacin (vase 11.1).

11. ELIMINACIN DE RESIDUOS CONTAMINADOS

11.1 La correcta eliminacin de materiales contaminados puede no afectar directamente a lacalidad de los anlisis de las muestras, aunque los procedimientos deben disearse parareducir al mnimo la posibilidad de contaminacin del lugar donde se realiza el ensayo olos materiales utilizados en el mismo. No obstante, es un aspecto de la correcta gestin de

un laboratorio y debe respetarse la legislacin nacional e internacionales sobre medioambiente, salud y seguridad (vase tambin ISO 7218).

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12. ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD DE LOS RESULTADOS/CONTROL DECALIDAD

ISO 17025, apartado 5.912.1 Control de calidad interno

12.1.1 El control de calidad interno consiste en todos los procedimientos realizados porun laboratorio para la evaluacin continua de su trabajo. El principal objetivo esasegurar la coherencia de los resultados obtenidos diariamente y elcumplimiento de los criterios establecidos.

12.1.2 Un programa de controles peridicos es necesario para demostrar que controlala variabilidad (por ejemplo, entre analistas y entre equipos o materiales, etc.).Dicho programa debe abarcar todos los ensayos incluidos en el alcance de

acreditacin del laboratorio. El programa puede incluir:

el uso de muestras inoculadas

el uso de materiales de referencia (incluidos los materiales utilizados enensayos de aptitud)

uso de replicados

recuentos cruzados entre analistas

El intervalo entre estos controles depender del diseo del programa y delnmero de ensayos realizados. Es recomendable que, en la medida de loposible, los ensayos incluyan controles para evaluar sus resultados.

12.1.3 En circunstancias especiales, un laboratorio puede estar acreditado para realizarun ensayo que rara vez se demanda. Se reconoce que, en tales casos, unprograma continuo de control interno de la calidad no siempre ser apropiado,siendo preferible un sistema que se realice en paralelo al ensayo y quedemuestre que los resultados son satisfactorios.

12.2 Control de calidad externo (ensayos de aptitud)

12.2.1 Los laboratorios deben participar regularmente en ensayos de aptitudrelacionados con el alcance de su acreditacin, dando preferencia a los

programas de ensayos de aptitud que utilicen matrices apropiadas. En algunoscasos concretos, esta participacin puede ser obligatoria.

12.2.2 Los laboratorios deben utilizar el control externo de la calidad no slo paradetectar desviaciones en los resultados obtenidos, sino tambin para verificar lavalidez de todo el sistema de calidad.

13. INFORMES DE LOS ENSAYOSISO 17025, apartado 5.10

13.1 Si el resultado del recuento es negativo, debe expresarse como no detectado para una

unidad definida o por debajo del lmite de deteccin para una unidad definida. Elresultado no debe expresarse como cero para una unidad definida salvo que sea unrequisito reglamentario. Los resultados de los anlisis cualitativos deben expresarse como

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detectado/no detectado en una cantidad o volumen definidos. Tambin puedenexpresarse como por debajo de un nmero especificado de microorganismos para una

unidad definida, cuando el nmero especificado de microorganismos sobrepase el lmitede deteccin del mtodo y as se haya acordado con el cliente.

13.2 Cuando en el informe de un ensayo se exprese una estimacin de la incertidumbre, tendrque indicarse claramente al cliente cualquier limitacin existente (especialmente si laestimacin no incluye la contribucin de la distribucin de microorganismos dentro de lamuestra).

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Anexo I al G-ENAC-04

Rev.3 Noviembre de 2002Glosario de Trminos

Hoja 1 de 2

GLOSARIO DE TRMINOS

Calibracin Conjunto de operaciones que permiten establecer, en condicionesespecficas, la relacin existente entre los valores indicados por uninstrumento de medida o un sistema de medida, o los valores representadospor una medida material o un material de referencia, y los valorescorrespondientes obtenidos mediante un patrn de referencia.NOTAS1 El resultado de una calibracin permite asignar valores de mesurandos alas marcas de escalas arbitrarias o estimar los errores de indicacin de losinstrumentos de medida.

2 Una calibracin permite tambin determinar otras propiedades

metrolgicas, como el efecto de las magnitudes de influencia.

3 El resultado de una calibracin puede registrarse en un documento, enocasiones denominado certificado de calibracin o informe de calibracin.

[VIM: 1993 ISO Vocabulario internacional de trminos bsicos y generalesen metrologa]

Material dereferenciacertificado

Material de referencia, acompaado de un certificado, en el cual uno o msvalores de sus propiedades han sido certificados mediante un procedimientoque establece su trazabilidad a una realizacin exacta de la unidad en la quese expresan los valores de dichas propiedades. Cada valor certificado seacompaa de una incertidumbre y el nivel de confianza correspondiente.

[Gua ISO 30:1992]

Lmite decuantificacin

Aplicado a anlisis microbiolgicos cuantitativos Nmero mnimo demicroorganismos dentro de una variabilidad definida que puededeterminarse en las condiciones experimentales del mtodo evaluado.

Lmite de deteccin Aplicado a anlisis microbiolgicos cualitativos Nmero mnimo demicroorganismos que pueden ser detectados, pero en cantidades que nopueden estimarse con precisin.

Desviacin negativa Ocurre cuando el mtodo alternativo da un resultado negativo sinconfirmacin y el mtodo de referencia da un resultado positivo. Estadesviacin se convierte en un resultado negativo falso cuando puededemostrarse que el resultado verdadero es positivo.

Desviacin positiva Ocurre cuando el mtodo alternativo da un resultado positivo sinconfirmacin y el mtodo de referencia da un resultado negativo. Estadesviacin se convierte en un resultado positivo falso cuando puededemostrarse que el resultado verdadero es negativo.

Cultivos dereferencia

Trmino colectivo que se refiere a cepas de referencia, cepas de reserva ycultivos de trabajo.

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Anexo I al G-ENAC-04

Rev.3 Noviembre de 2002Glosario de Trminos

Hoja 2 de 2

Cepas de referencia Microorganismos definidos por lo menos al nivel de gnero y especie,catalogados y descritos segn sus caractersticas y preferiblemente de origen

conocido.[ISO 11133-1:2000] Normalmente obtenidos de una coleccin nacional ointernacional reconocida.

Material dereferencia

Material o substancia uno o ms de cuyas propiedades tienen valoressuficientemente homogneos y claramente establecidos como para poder serutilizados en la calibracin de un aparato, la evaluacin de un mtodo demedida o la asignacin de valores a materiales.[Gua ISO 30:1992]

Mtodo dereferencia

Mtodo investigado a fondo, que describe con claridad y exactitud lascondiciones y los procedimientos necesarios para medir los valores de una o

ms propiedades y que ha demostrado tener una exactitud y una precisinapropiadas para el uso que pretende hacerse del mismo, de manera quepuede utilizarse para evaluar la exactitud de otros mtodos empleados pararealizar la misma medicin y, en particular, para caracterizar un material dereferencia. En general se trata de un mtodo normalizado nacional ointernacional.

Cepas de reserva Cepas idnticas obtenidas mediante un nico subcultivo de una cepa dereferencia. [ISO 11133-1:2000]

Exactitud relativa Grado de concordancia entre los resultados del mtodo evaluado y losobtenidos utilizando un mtodo de referencia reconocido.

Repetibilidad Grado de concordancia entre los resultados de sucesivas mediciones delmismo mesurando realizadas en las mismas condiciones de medicin.[VIM: 1993 ISO Vocabulario internacional de trminos bsicos y generalesde metrologa]

Reproducibilidad Grado de concordancia entre los resultados de mediciones del mismomesurando realizadas en diferentes condiciones de medicin.[VIM: 1993 ISO Vocabulario internacional de trminos bsicos y generalesde metrologa]

Sensibilidad Fraccin del nmero total de cultivos o colonias positivos que son asignados

correctamente con el mtodo utilizado. [ISO 13843:2000]Especificidad Fraccin del nmero total de cultivos o colonias negativos que son asignados

correctamente con el mtodo utilizado. [ISO 13843:2000]

Cultivo de trabajo Subcultivo primario obtenido de una cepa de reserva. [ISO 11133-1:2000]

Validacin Confirmacin, mediante la aportacin de pruebas objetivas, de que se hancumplidos los requisitos para el uso pretendido o una aplicacin especfica.[ISO 9000: 2000]

VerificacinConfirmacin, mediante la aportacin de pruebas objetivas, de que se hancumplido los requisitos establecidos. [ISO 9000:2000]

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Anexo II al G-ENAC-04

Rev.3 Noviembre de 2002Referencias Bibliogrficas

Hoja 1 de 1

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

1. ISO/IEC 17025, Requisitos generales para la competencia de laboratorios de ensayo y calibracin.

2. ISO 7218, Microbiologa de alimentos y piensos animales Directrices generales para los anlisismicrobiolgicos.

3. ISO 6887-1, Preparacin de diluciones.

4. Gua ISO 30, Trminos y definiciones utilizados en relacin con los materiales de referencia.

5. ISO 9000, Sistemas de gestin de la calidad fundamentos y vocabulario.

6. VIM: 1993, ISO Vocabulario internacional de trminos bsicos y generales en metrologa.

7. ISO (CIPM):1995, Gua para la expresin de la incertidumbre de medida.

8. Borrador ISO/DIS 16140, Microbiologa de los alimentos. Protocolo para la validacin demtodos alternativos.

9. ISO 13843, Calidad del agua Gua para la validacin de mtodos microbiolgicos.

10. ISO 11133-1, Microbiologa de alimentos y piensos animales. Directrices para la preparacin y

produccin de medios de cultivo. Parte 1 Directrices generales para el aseguramiento de lacalidad en la preparacin de medios en el laboratorio.

11. Borrador ISO/FDIS 11133-2, Microbiologa de alimentos y piensos animales. Directrices para lapreparacin y produccin de medios de cultivo. Parte 2 Directrices prcticas para el anlisis delas propiedades de los medios de cultivo.

12. EN 12741, Biotecnologa- Laboratorios de investigacin, desarrollo y anlisis Directrices paralas actividades de los laboratorios de biotecnologa.

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Anexo III al G-ENAC-04

Rev.3 Noviembre 2002Utilizacin general de cepas de referencia

Hoja 1 de 1

UTILIZACIN GENERAL DE CEPAS DE REFERENCIA

Cepas de referencia

Sub-cultivada una sola vez

*

Cepas de reserva

(liofilizacin, nitrgeno lquido, ultracongelacin rpida , etc)Especificar tiempo y condiciones de almacenamiento

*

Mantener en las condiciones especficas

Descongelacin / reconstitucin

*

Cepa de trabajo

Especificar tiempo y condiciones de almacenamiento

Uso rutinario

* Deben realizarse los controles paralelos de pureza y los ensayos bioqumicos que

sean necesarios

Todas las fases del proceso han de estar perfectamente documentadas y debe

mantenerse un registro detallado de todas las operaciones realizadas

No permitido

Sub-cultivada una sola vez

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Anexo IV al G-ENAC-04

Rev.3 Noviembre de 2002Directrices para la calibracin y los controles de calibracin

Hoja 1 de 1

DIRECTRICES PARA LA CALIBRACIN Y LOS CONTROLES DE CALIBRACIN

La informacin que se facilita es meramente orientativa. La frecuencia depender del uso, tipo yresultados previos de cada equipo.

Tipo de aparato Requisitos Frecuencia sugerida

Termmetros dereferencia (columnalquida)

Recalibrado plenamente trazablePunto nico(p. ej., punto de congelacin)

Cada 5 aosAnualmente

Termopares de referencia Recalibracin plenamente trazableVerificar frente a termmetro de

referencia

Cada 3 aosAnualmente

Termmetros de trabajoTermopares de trabajo

Verificar frente a termmetro dereferencia en punto de congelacin y/orango de temperaturas de trabajo

Anualmente

Balanzas Calibracin plenamente trazable Anualmente

Pesas de calibracin Calibracin plenamente trazable Cada 5 aos

Pesa(s) de control Verificar frente a pesa calibrada overificar en la balanza inmediatamentedespus de la calibracin trazable

Anualmente

Material volumtrico decristal

Calibracin gravimtrica a la toleranciarequerida

Anualmente

Microscopios Calibracin trazable del micrmetro delportaobjetos (cuando sea necesario)

Inicialmente

Higrmetros Calibracin trazable Anualmente

Centrifugas Calibracin trazable o verificar frente atacmetro independiente, segn seaapropiado

Anualmente

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Anexo V al G-ENAC-04

Rev.3 Noviembre de 2002Directrices para la validacin y verificacin de equipos

Hoja 1 de 2

DIRECTRICES PARA LA VALIDACIN Y VERIFICACIN DE EQUIPOS

La informacin que se facilita es meramente orientativa. La frecuencia depender del uso, tipo yresultados previos de cada equipo.

Tipo de aparato Requisito Frecuencia sugerida

Aparatos contemperatura controlada(incubadores, baos,refrigeradores,congeladores)

(a) Verificar la estabilidad yuniformidad de la temperatura

(b) Verificar la temperatura

(a) Inicialmente, cada 2 aos ydespus de unareparacin/modificacin

(b) Diariamente/con cada uso

Estufas de esterilizacin (a) Verificar la estabilidad/uniformidad

de la temperatura

(b) Verificar la temperatura

(a) Inicialmente, cada 2 aos y

despus de unareparacin/modificacin


Autoclaves (a) Verificar las caractersticas paracargas/ciclos

(b) Verificar la temperatura/tiempo

(a) Inicialmente, cada 2 aos ydespus de unareparacin/modificacin

(b) Con cada uso

Cabinas de seguridad (a) Verificar las caractersticas tcnicas

(b) Control microbiolgico(c) Verificar la velocidad del aire

(a) Inicialmente, todos los aosy despus de unareparacin/modificacin

(b) Semanalmente(c) Con cada uso

Cabinas de flujo laminar (a) Verificar las caractersticas tcnicas

(b) Verificar la esterilidad

(a) Inicialmente, y despus deuna reparacin /modificacin

(b) Semanalmente

Cronmetros Verificar frente a seal horaria nacional Anualmente

Microscopios Verificar alineacin Diariamente/con cada uso

pH metros Ajustar utilizando como mnimo dostampones de la calidad adecuada

Diariamente/con cada uso

Balanzas Ajustar el cero y verificar con la pesade control

Diariamente/con cada uso

Desionizadores yunidades de smosisinversa

(a) Verificar la conductividad(b) Verificar la contaminacin

microbiana

(b) Semanalmente(b) Mensualmente

Diluidores gravimtricos (a) Verificar el peso del volumendistribuido

(b) Verificar el coeficiente de dilucin

(a) Diariamente

(b) Diariamente

Distribuidores de medios Verificar el volumen distribuido Con cada ajuste o reposicin

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Anexo V al G-ENAC-04

Rev.3 Noviembre de 2002Directrices para la validacin y verificacin de equipos

Hoja 2 de 2


Pipetas automticas Verificar la exactitud y precisin delvolumen distribuido Peridicamente (depender dela frecuencia y naturaleza deluso)

Sembradores en espiral (a) Verificar frente a mtodoconvencional

(b) Verificar el estado del punzn ypuntos de inicio y fin

(c) Verificar el volumen distribuido

(a) Inicialmente y anualmente


(c) Mensualmente

Contadores automticosde colonias

Verificar frente al recuento manual Anualmente

Centrifugas Verificar velocidad frente a tacmetrocalibrado e independiente

Anualmente

Jarras deanaerobiosis/incubadores

Verificar frente a indicador deanaerobiosis

Con cada uso

Condiciones ambientalesdel laboratorio

Vigilar la contaminacin microbianadel aire y las superficies utilizando, p.ej., muestreadores del aire, placas desedimentacin, placas de contacto ofrotis

Semanalmente

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Anexo VI al G-ENAC-04

Rev.3 Noviembre de 2002Directrices para el mantenimiento de los equipos

Hoja 1 de 2

DIRECTRICES PARA EL MANTENIMIENTO DE LOS EQUIPOS

La informacin que se facilita es meramente orientativa. La frecuencia depender de la necesidad, eltipo y las caractersticas previas de cada aparato.


(a) Incubadores(b) Refrigeradores(c) Congeladores, estufas

Limpiar y desinfectar las superficiesinternas

(a) Mensualmente(b) Segn sea necesario (p. ej.,

cada 3 meses)(c) Segn sea necesario (p. ej.,

anualmente)

Baos mara Vaciar, limpiar, desinfectar y rellenar Mensualmente, o cada 6 meses

si se utiliza un biocida

Centrifugas (a) Revisar(b) Limpiar y desinfectar

(a) Anualmente(b) Con cada uso

Autoclaves (a) Verificar visualmente la junta,limpiar y drenar la cmara

(b) Revisin completa

(c) Control de seguridad del vaso de

presin

(a) Peridicamente, segn lasrecomendaciones delfabricante

(b) Anualmente o segn lasrecomendaciones delfabricante

(c) Anualmente

Cabinas de seguridadCabinas de flujo laminar

Revisin completa y comprobacinmecnica

Anualmente o segn lasrecomendaciones del fabricante

Microscopios Revisin completa de mantenimiento Anualmente

PH - metros Limpiar electrodos Con cada uso

Balanzas, diluidoresgravimtricos

(a) Limpiar(b) Revisar

(a) Con cada uso(b) Anualmente

Destiladores Limpiar y desincrustar Segn sea necesario (p. ej.,cada 3 meses)

Desionizadores, unidadesde smosis inversa

Sustituir cartucho y membrana Segn las recomendaciones delfabricante

Jarras de anaerobiosis Limpiar y desinfectar Despus de cada uso

Distribuidores de medios,material volumtrico,pipetas, material de usogeneral

Descontaminar, limpiar y esterilizarcuando sea apropiado

Con cada uso

Sembradores en espiral (a) Revisar(b) Descontaminar, limpiar y esterilizar

(a) Anualmente(b) Con cada uso

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Anexo VI al G-ENAC-04

Rev.3 Noviembre de 2002Directrices para el mantenimiento de los equipos

Hoja 2 de 2

Laboratorio (a) Limpiar y desinfectar lassuperficies de trabajo

(b) Limpiar suelos, desinfectardesages y pilas(c) Limpiar y desinfectar otras

superficies

(a) Diariamente, y durante eluso

(b) Semanalmente

(c) Cada 3 meses

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