GENÈTICA HUMANA

GENÈTICA HUMANA: Un cas d’homocistinúria clàssica

TREBALL DE RECERCA Júlia Domingo i Espinós

GENÈTICA HUMANA

Un cas d’homocistinúriaclàssica



ESTRUCTURA DEL TREBALL

• PART I: Introducció a la genètica humana

• PART II: Homocisteïna i malaltia: Homocistinúria clàssica

• PART III: Part experimental: Un cas d’Homocistinúria clàssica



DNA

MUTACIONS

RNA

GÈNETICADuplicació

Transcripció

Traducció

Proteïnes



MUTACIONS

GÈNIQUES

CROMOSÒMIQUES

GENÒMIQUES

Pèrdua o inserció de nucleòtids

Substitució de base

CLASSIFICACIÓ DE LES MUTACIONS



CONSEQÜÈNCIES DE LES MUTACIONS GÈNIQUES EN LES PROTEÏNES



HOMOCISTIEÏNA I EL SEU METABOLIME

Hcy

Cys

Met

CBS

Cicle de la metionina

Transulfuració

MS MTs



ENZIM I GEN CBS

GEN CBS

ENZIM CBS



HOMOCISTINÚRIA CLÀSSICA

SIMPTOMES:

• Sistema ossi: Pectus excabatum, aracnodactilia, osteoporosi.

• Sistema ocular: Luxació del cristal·lí, miopia.

• Sistema nerviós: Retràs mental

• Sistema vascular: Complicacions cardiovasculars



A la universitat va arribar el material genètic d’un pacient (al que vam anomenar pacient 94) el qual patia els símptomes de la malaltia Homocistinúria Clàssica. Als laboratoris es va dur a terme un seguit de tècniques en que es va seqüenciar el gen CBS i van descobrir que, efectivament, el pacient 94 era afecte i es tractava d’un heterozigot que era portador de les dues mutacions següents: la T191M (exó 4-6) i la I278S (exó 8).

PRESENTACIÓ EXPERIMENT





QUADRE FAMILIAR (Familia 94)

94p 94m

94 T191M/I278S

94h

?/? ?/ ?

?/?



QÜESTIÓ I HIPÒTESI DE L’EXPERIMENT

“A partir de les dades obtingudes del pacient 94, quin serà el patró genètic de la seva família?”

Basant-nos en que la Homocistinúria Clàssica és una malaltia recessiva hereditària, ambdós pares haurien de ser portadors de alguna de les mutacions (una el pare i l’altre la mare), i la germana tindria un 25% de probabilitat de ser portadora de les dues mutacions, un 50% a presentar la mutació però no expressar-la i un 25% a no tenir cap de les mutacions.

QÜESTIÓ

HIPÒTESI



ELS OBJECTIUS

OBJECTIU GENERAL:

• Trobar el patró genètic de la família a partir de les mutacions

que presenta el fill

OBJECTIUS ESPECÍFICS:

• Averiguar quina mutació presenta el pare i quina la mare

• Mirar si la germana presenta alguna de les mutacions o si

pateix Homocistinúria Clàssica.



DISSENY DE L’EXPERIMENT

DNA

PCR d’amplificació

DIGESTIÓ (Enzims de restricció)

ELECTROFORESI (Gel d’Agarosa)

METODOLOGIA PREPARACIÓ DE L’EXPERIMENT

DNA (94)

PCR de seqüenciació

Seqüència del DNA i detecció de

les mutacions



SEQÜENCIACIÓ DEL GEN CBS

WT

94



LA PCRPolymerase Chain Reaction

Material: DNA motlle, dNTPs, els “primers”, Magnesi, el “Buffer”, la Taq DNA polimerasa, H2Od, tubs eppendorf i el termociclador.

Cicle de 3 fases:• Desnaturalització del DNA motlle• Alineació dels “primers”• Extenció del nou DNA

Repetició del cicle



PCRs SENSE DIGERIR

Marcador pUC

Mutació T191MMutació I278S



DIGESTIÓ AMB ENZIMS DE RESTRICCIÓ

Material: DNA amplificat, enzims de restricció, H2Od, “Buffer”, incubadora.

Enzims de restricció

Tsp RI Hsp 925' ..3' ..

CG

AT

SS

TA

GC

3' ..5' ..

5' ..3' ..

CG

AT

TA

G

C3' ..5' ..



ELECTROFORESI AMB GEL D’AGAROSA

Gel agarosa: TBE x1, Agarosa, Bromur d’Etidi, base, peinetes.



PCRs DIGERIRIDES

Marcador Ф-Hae III

Exó 8 (mutació I278S) Exó 4-6 (mutació T191M)



RESULTATS

Exó 8 (mutació I278S) Exó 4-6 (mutació T191M)

MUTACIÓ I278S

Al·lels possibles Pacients que ho presenten

I278S/X 94

I278S/WT 94m

WT/WT 94h, 95p

MUTACIÓ T191M

Al·lels possibles Pacients que ho presenten

T191M/X 94

T191M/ T191M 64

T191M/WT 94h, 95p

WT/WT 94m



CONCLUSIONS

• Com que la malaltia Homocistinúria Clàssica és una malaltia

autosòmica recessiva hereditària cada un dels pares del pacient

94 són portadors de una mutació diferent. El pare (94p) és

portador de la mutació T191M i la mare (94m) és portadora de

la mutació I278S. Cap dels dos l’expressa ja que es comporta de

manera recessiva.

• La germana (94h) no presenta la malaltia però, com era més

probable (amb un 50% de probabilitat), si que és portadora de

una de les mutacions, la T191M.



QUADRE FAMILIAR COMPLET (família 94)

94p 94m

94

T191M/I278S

94h

T191M/WT I278S/WT

T191M/WT



GENÈTICA HUMANA

Un cas d’homocistinúriaclàssica

Documents

GENÈTICA HUMANA